Oncol16 : 2825-2833)。在166個臨床患者中，6%顯示了完全響應(yīng)，42%顯示了部分響應(yīng)，中值響應(yīng)持 續(xù)時間大約為12個月。曲妥單抗（Herceptin?,Genentech的注冊商標(biāo)），一種用于治療 乳腺癌轉(zhuǎn)移的抗_HER2/neu抗體，具有較低的療效。對222個受試患者使用曲妥單抗的總 響應(yīng)率僅有15%，其中8個完全響應(yīng)，26個部分響應(yīng)，中值響應(yīng)持續(xù)時間和存活時間為9-13 個月（Cobleigh等.，1999,JClinOncol17:2639-2648)。目前對于抗癌治療而言，在死 亡率上任何小的改善都意味著成功。因此，特別需要增強(qiáng)抗體破壞靶癌細(xì)胞的能力。 一種用于增強(qiáng)抗體抗腫瘤效力的有希望的方法是通過增加它們介導(dǎo)諸如ADCC、ADCP和CDC的細(xì)胞毒性效應(yīng)器功能的能力。對于抗體抗癌活性而言，F(xiàn)eYR-介導(dǎo)的效應(yīng)器功 能的重要性已在小鼠中得到證實(shí)（Clynes等.，1998，ProcNatlAcadSciUSA95: 652-656 ;Clynes等.，2000,NatMed6 :443-446)，并在基于細(xì)胞的測定中證實(shí)了與靶細(xì) 胞毒性相關(guān)的Fc與特定FcyR之間相互作用的親和力（Shields等.，2001，JBiolChem 276 :6591-6604 ;Presta等?，2002,BiochemSocTrans30 :487-490;Shields等?，2002,J BiolChem277:26733-26740)。此外，已觀察到人臨床療效與它們的同種異型-FcyRIIIa 的高親和力多態(tài)型（V158)或低親和力多態(tài)型（F158)之間的相互關(guān)系（Cartron等?，2002， Blood99:754-758)。綜合起來，這些數(shù)據(jù)提示了對于與特定FeYR結(jié)合而言，在患者體內(nèi) 具有Fc區(qū)優(yōu)化的抗體能更好地介導(dǎo)效應(yīng)器功能并因此能更有效地破壞癌細(xì)胞。在激活與 抑制受體之間的平衡要得到重點(diǎn)考慮，并應(yīng)由Fc產(chǎn)生最佳的效應(yīng)器功能，對諸如FeYRI、 FeyRIIa/c以及FeyRIIIa的激活受體而言應(yīng)具有增強(qiáng)的親和力，還應(yīng)減少對抑制性受體 FeyRIIb的親和力。此外，因?yàn)镕eyR能介導(dǎo)通過抗原呈遞細(xì)胞的抗原攝入和加工過程，所 以增強(qiáng)Fc/FcYR親和力也能改善抗體治療能力以引發(fā)獲得性免疫應(yīng)答。 為不同目的對Fc進(jìn)行誘變研宄，通常對丙氨酸進(jìn)行取代（稱為丙氨酸掃描）或通 過序列同源性取代指導(dǎo)進(jìn)行取代（Duncan等.，1988，Nature332 :563-564 ;Lund等.， 1991，JTmmun〇 1 147 :2657-2662;Lund等?，1992，MolImmunol29 :53-59;JefTeris等， 1995，ImmunolLett44 :111-117;Lund等?，1995，F(xiàn)asebJ9 :115-119;JefTeris等?， 1996，ImmunolLett54 :101-104;Lund等，1996，JImmunol157 :4963-4969;Armour等， 1999,EurJImmunol29 :2613-2624;Shields等.，2001，JBiolChem276:6591-6604; JefTeris等.，2002,ImmunolLett82 :57-65)(US5,624,821;US5,885,573;PCTTO 00/42072;PCTWO99/58572)。大多數(shù)取代減少或消除了與FcyR的結(jié)合。另一方面，在 獲得具有更高FeYR親和力的Fc變體方面已取得了一些成功（參見例如US5, 624, 821 和PCTWO00/42072)。例如，Winter及其同事在小鼠IgG2b抗體的235位上用人氨基酸 進(jìn)行取代（谷氨酸到亮氨酸突變），該小鼠抗體與人FeYRI的結(jié)合增加了 100倍（Duncan 等.，1988,Nature332 :563-564)(US5, 624, 821)。Shields等使用丙氨酸掃描誘變來定 位對FeYR結(jié)合起重要作用的Fc殘基，然后通過用非丙氨酸突變對所選定的殘基進(jìn)行取代 (Shields等.，2001，JBiolChem276 :6591-6604;Presta等.，2002，BiochemSocTrans 30 :487-490)(PCTWO00/42072)。該研宄公開了一些突變，包括S298A、E333A和K334A，顯 示了與激活受體FeYRIIIa增強(qiáng)的結(jié)合以及減少了與抑制性受體FeYRIIb的結(jié)合。組合 這些突變以獲得雙重和三重突變的變體，在結(jié)合方面其顯示了累加的改善。在該研宄中所 公開的最好的變體是S298A/E333A/K334A三重突變體，其與F158FeYRIIIa的結(jié)合大約增 加了 1.7倍，與FcyRIIb的結(jié)合減少了 5倍，且ADCC增加了 2. 1倍。 使用改造后的糖型（engineeredglycoform)也已實(shí)現(xiàn)了Fc對FeyR增強(qiáng)的親和力，該 糖型產(chǎn)生自工程改造的或變異的細(xì)胞系中抗體的表達(dá)（Umana等.，1999,NatBiotechnol 17 :176-180 ;Davies等，2001，BiotechnolBioeng74 :288-294 ;Shields等.，2002，JBiol Chem277 :26733-26740;Shinkawa等?，2003,JBiolChem278 :3466-3473)。該方法產(chǎn)生 了實(shí)質(zhì)上增加的抗體與FeYRIIIa結(jié)合并介導(dǎo)ADCC的能力。盡管在實(shí)踐中存在諸如在大 規(guī)模生產(chǎn)條件下表達(dá)菌株生長效率的局限性，用于增強(qiáng)Fc/FcYR親和力以及效應(yīng)器功能 的該方法仍然是有前途的。實(shí)際上，對于優(yōu)化效應(yīng)器功能來說，將這些可選的糖型技術(shù)與本 發(fā)明的Fc變體結(jié)合可提供累加效應(yīng)或協(xié)同效應(yīng)。 盡管需要更強(qiáng)的效應(yīng)器功能，對于某些抗體治療劑而言，減少或消除效應(yīng)器功能也許 是其所需的。通常認(rèn)為治療性抗體其作用機(jī)理包括阻斷或拮抗但不殺死具有靶抗原的細(xì) 胞。這樣的話耗盡靶細(xì)胞并不是所需的并認(rèn)為存在著副作用。例如，抗CD4抗體阻斷T細(xì) 胞上CD4受體的能力使其能有效地抗炎，甚至它們招募FeyR受體的能力也可指導(dǎo)免疫系 統(tǒng)攻擊靶細(xì)胞，導(dǎo)致T細(xì)胞損耗（Reddy等?，2000,JImmunol164 :1925-1933)。對于稱 為放射綴合物的放射標(biāo)記的抗體以及稱為免疫毒素的綴合毒素的抗體而言，效應(yīng)器功能也 許是一道難題。這些藥物可用于破壞癌細(xì)胞，但是通過Fc與FeYR相互作用所招募的免 疫細(xì)胞使得健康的免疫細(xì)胞接近致死性的負(fù)載物（放射物或毒素），導(dǎo)致正常淋巴組織連 同革巴癌細(xì)胞一起損耗（Hutchins等?，1995，ProcNatlAcadSciUSA92 :11980-11984 ; White等.，2001，AnnuRevMed52:125-145)。通過使用IgG同種型有可能解決該問題， 該IgG同種型無法充分地招募補(bǔ)體或效應(yīng)細(xì)胞，例如IgG2及IgG4?？蛇x的解決方案是開 發(fā)能減少或消除結(jié)合能力的Fc變體（Alegre等?，1994，Transplantation57 :1537-1543 ; Hutchins等?，1995,ProcNatlAcadSciUSA92 :11980-11984;Armour等?，1999,EurJ Immunol29 :2613-2624;Reddy等?，2000,JImmunol164 :1925-1933;Xu等?，2000,Cell Immunol200 :16-26 ;Shields等?，2001，JBiolChem276 :6591-6604)(US6,194,551;US 5, 885, 573;PCTWO99/58572)。對于減少或消除效應(yīng)器功能而言，主要的考慮是其它重要 的抗體特性不被干擾。應(yīng)改造Fc變體，以不僅消除與FeYR和/或Clq的結(jié)合，而且還能 保持抗體的穩(wěn)定性、可溶性和結(jié)構(gòu)的整體性（integrity)，以及能保持與諸如FcRn和蛋白A 及G的其它重要Fc配體相互作用的能力。 本發(fā)明解決了抗體的另一個主要缺點(diǎn)，即它們過分苛求的生產(chǎn)必備條件（Garber， 2001，NatBiotechnol19 :184-185 ;Dove，2002,NatBiotechnol20:777-779)?？贵w應(yīng) 當(dāng)在哺乳動物細(xì)胞中表達(dá)，且目前市售抗體與其它高度需求的生