一種純化原花青素的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種原花青素的純化方法。
技術(shù)背景
[0002]原花青素是廣泛存在于植物界中的一種多酚類(lèi)物質(zhì)，它是不同數(shù)量的黃烷-3-醇聚合而成的聚合物的總稱(chēng)。大量研究結(jié)果表明，低聚原花青素具有較強(qiáng)的抗氧化、抗輻射、抗過(guò)敏、抗菌抑菌以及預(yù)防心血管疾病、抑制腫瘤的能力，目前研究最多最廣的是葡萄籽原花青素。由于原花青素的諸多生理活性，現(xiàn)已被廣泛用于醫(yī)藥、保健品、食品及化妝品等領(lǐng)域。通?？梢圆捎脗鹘y(tǒng)吸附樹(shù)脂的方法純化得到原花青素產(chǎn)品，但是工藝技術(shù)耗時(shí)長(zhǎng)，同時(shí)純度不高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的在于針對(duì)目前在純化原花青素的過(guò)程中所存在的時(shí)間長(zhǎng)以及純度不高的問(wèn)題，提供一種采用制備液相色譜系統(tǒng)純化高純度原花青素的新方法，該方法包括以下步驟:
a.將原花青素提取粗品溶于水后進(jìn)行過(guò)濾，一般將原花青素粗品配制成飽和溶液，具體實(shí)施時(shí)，可根據(jù)實(shí)際溶解效果進(jìn)行調(diào)整；
b.取配制好的原花青素溶液，用填充好固定相填料的動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱進(jìn)行分離，收集原花青素對(duì)應(yīng)譜帶的餾分；
c.將步驟b中收集的對(duì)應(yīng)譜帶洗脫液中的溶劑蒸干，即可得到色譜純?yōu)?8.5%的原花青素單體。
[0004]本發(fā)明的有益效果是可直接采用提取后的原花青素粗品來(lái)制備，不需要大量的前處理過(guò)程，簡(jiǎn)單、易控制，工藝技術(shù)簡(jiǎn)化，適用于大規(guī)模制備。高效液相色譜測(cè)定中，純度高于98.5%，完全可用于藥物的開(kāi)發(fā)。
【具體實(shí)施方式】
[0005]實(shí)施例1
1.取Ig原花青素粗品溶于水,配制成飽和溶液,置于過(guò)濾裝置中，過(guò)濾除去固體顆粒；
2.將原花青素溶液泵入動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱制備色譜系統(tǒng)，柱填充尺寸為Φ50Χ250πιπι，填料為十八烷基硅膠，粒徑為l(T30um，上樣量lg。流動(dòng)相的體積比為30:70，當(dāng)原花青素洗脫完畢后，流動(dòng)相切換成高比例乙腈，將后端雜質(zhì)沖出，一個(gè)分離周期結(jié)束。采用的紫外可見(jiàn)光度檢測(cè)器的檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm，收集保留時(shí)間在45?47min的餾分，經(jīng)HPLC分析純度彡 98.8%。
[0006]實(shí)施例2
1.取2g原花青素粗品溶于水,配制成飽和溶液,置于過(guò)濾裝置中，過(guò)濾除去固體顆粒；
2.將原花青素溶液注入動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱制備色譜系統(tǒng)，柱填充尺寸為Φ50X250mm，填料為十八烷基硅膠，粒徑為2(T45um，上樣量2g。流動(dòng)相的體積比為25:75，當(dāng)原花青素洗脫完畢后，流動(dòng)相切換成高比例乙腈，將后端雜質(zhì)沖出，一個(gè)分離周期結(jié)束。采用的紫外可見(jiàn)光度檢測(cè)器的檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm，收集保留時(shí)間在55飛8min的餾分，經(jīng)HPLC分析純度彡 98.3%。
[0007] 實(shí)施例3
1.取12g原花青素粗品溶于水,配制成飽和溶液,置于過(guò)濾裝置中，過(guò)濾除去固體顆粒;
2.將原花青素溶液注入動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱制備色譜系統(tǒng)，柱填充尺寸為Φ200 X 250mm，填料為十八烷基硅膠，粒徑為l(Tl5um，上樣量12g。流動(dòng)相的體積比為27:73，當(dāng)原花青素洗脫完畢后，流動(dòng)相切換成高比例乙腈，將后端雜質(zhì)沖出，一個(gè)分離周期結(jié)束。采用的紫外可見(jiàn)光度檢測(cè)器的檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm，收集保留時(shí)間在6(T75min的餾分，經(jīng)HPLC分析純度彡 98.1%。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種原花青素的純化方法，其特征在于包括以下步驟: (1)將原花青素提取粗品溶于水后進(jìn)行過(guò)濾，除去微小的固體不溶物，得到濾液作為分離粗品； (2)將過(guò)濾產(chǎn)物通過(guò)進(jìn)樣泵或者進(jìn)樣閥注入制備色譜系統(tǒng)； (3)采用乙腈/水做流動(dòng)相，洗脫得到原花青素單體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是:所述的原花青素提取粗品為水提取或有機(jī)溶劑沉淀后所得。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征是:所述色譜系統(tǒng)采用動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱，且所填充固定相為十八烷基硅膠填料。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征是:流動(dòng)相中乙腈與水的體積比(V/V)范圍為20:80?40:60，且水中加入乙酸。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)一種原花青素的純化方法，采用原花青素提取粗品為原料，優(yōu)化條件得到合適的柱分離條件，進(jìn)一步放大到動(dòng)態(tài)軸向壓縮工業(yè)制備色譜系統(tǒng)上分離，得到高純度的原花青素。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是，提取后粗品直接使用動(dòng)態(tài)軸向壓縮工業(yè)制備色譜分離即可達(dá)到較好的分離提純效果，操作簡(jiǎn)單，周期短，效率高，純度可達(dá)98.5%以上。
【IPC分類(lèi)】C07D311-62
【公開(kāi)號(hào)】CN104788418
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410027927
【發(fā)明人】張宇, 祁威, 沈健增
【申請(qǐng)人】江蘇漢邦科技有限公司
【公開(kāi)日】2015年7月22日
【申請(qǐng)日】2014年1月22日