一種從火龍果皮提取原花青素的方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明屬于天然產物加工科學領域，特別是一種從火龍果皮提取原花青素的方法。
【背景技術】
[0002]原花青素(Procyanidins，簡稱0PC)又被稱為低聚黃燒酮類，是一種新型高效抗氧化劑，是目前為止所發(fā)現(xiàn)的最強效的自由基清除劑，具有非常強的體內活性。實驗證明，OPC的抗自由基氧化能力是維生素E的50倍，維生素C的20倍，并吸收迅速完全，口服20分鐘即可達到最高血液濃度，代謝半衰期達7小時之久。
[0003]原花青素是植物中廣泛存在的一類多酚類化合物的總稱，具有清除自由基、抗氧化的活性，并且在抗炎癥、抑制腫瘤、保護血管等方面發(fā)揮著重要的作用，其在功能性食品、醫(yī)藥、化妝品行業(yè)具有廣闊的應用前景。
[0004]原花青素是自然界酚類化合物中最豐富的種類，原花青素因在酸介質下發(fā)生典型氧化降解反應產生有色的花青素而得名。在各類原花青素中二聚體是分布最廣、研究最多的一類原花青素。國內外已經報道了很多關于原花青素的藥理學作用，例如清除自由基、強抗氧化性、抗腫瘤以及抗動脈硬化等功能；原花青素也已經用來防止糖尿病患者白內障手術后的并發(fā)癥；此外原花青素在植物防御捕食者和微生物機理方面也起到了重要作用。鑒于原花青素具有如此廣泛的作用，其提取方法也受到了國內外研究人員的極大關注。
[0005]火龍果(Hylocereusundatus)，屬仙人掌科(Cactaceae)量天尺屬(Hylocereus)和蛇鞭柱屬(Selenicereus)植物。原產于巴西、墨西哥等中美洲熱帶沙漠地區(qū)，現(xiàn)人工栽培遍及泰國、越南、中國臺灣、哥倫比亞等20多個國家和地區(qū)。近10年來，我國廣西、貴州、廣東、海南等地火龍果種植面積迅速擴大。火龍果口感清香，甜而不膩，富含糖、有機酸、蛋白質，其中膳食纖維含量2.33%，高于蘋果纖維含量(1.2%)ο常食用可具有降低血糖、膽固醇、血壓、尿酸等功效。
[0006]火龍果皮含有原花青素，本發(fā)明建立火果皮中原花青素的提取純化工藝，分離出具有生物活性的原花青素，這不但在醫(yī)藥和食品行業(yè)有廣闊的應用前景，而且也為當地豐富的火龍果的資源開發(fā)和利用提供一條新途徑，提高火龍果的利用率和經濟效益。

【發(fā)明內容】

[0007]本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有提取方法的不足，提出一種利用酶制劑結合溶劑從火龍果皮中提取原花青素的方法。此方法所得到的原花青素產品可用于醫(yī)藥保健及化妝品等行業(yè)。
[0008]本發(fā)明的一種從火龍果皮提取原花青素的方法，原料為火龍果皮，試劑有果膠酶(30000IU)，纖維素酶(I5000IU)，95%乙醇(食品級)，檸檬酸(食品級)，磷酸氫二鈉(食品級)。
[0009]本發(fā)明的一種從火龍果皮提取原花青素的方法，由以下步驟組成: (1)備料:將火龍果皮進行恒溫減壓干燥，粉碎稱量后，40目過篩，得到原料干粉備用；
(2)配制緩沖溶液:將0.lmol/L檸檬酸溶液與0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液按1:1.5?2的體積比混合，再加水稀釋2倍，配制成緩沖溶液:
(3)配制酶液:混合緩沖溶液、果膠酶和纖維素酶，并充分攪拌使其完全溶解，從而形成均勻的酶液；緩沖溶液的用量按原料干粉重量(kg):緩沖溶液體積(L)=1: 15?30的比例計算果膠酶和纖維素酶的用量為每L的緩沖溶液加入0.1?O: 3g果膠酶與0.1?0.3g纖維素酶；
(4)投料:按原料干粉重量(kg):緩沖溶液體積(L)=1: 15?30的比例，將原料干粉加入酶液中；
(5)酶解:將原料干粉與酶液攪拌均勻后，在50?55°C的恒溫水浴鍋內避光保溫，每30min攪動一次，酶解3-4h，生成酶解液和殘渣的混合物；
(6)提取:按每kg原料干粉加入15?30L的75?95%乙醇的方法，將75?95%乙醇加入上述酶解液和殘渣混合物中，在60?65°C條件下提取2?3h，經過濾，得到提取液；
(7)純化:采用AB-8樹脂對提取液純化，上樣流速I?3mL/min、解吸流速0.5?1..5mL/min、解吸劑體積分數45?55%，得洗脫液；
(8)真空干燥:將洗脫液于冷凍真空干燥后，制得原花青素精制品粉末，冷藏保存。
[0010]本發(fā)明的一種從火龍果皮提取原花青素的方法，以火龍果皮為主要原料，采用酶制劑結合溶劑提取原花青素，其優(yōu)點是原青花素產品安全性好、質量佳，原青花素提取率較醇提取法高30?40%，酶制劑的用量少，而且工藝簡單，操作方便，效率高，適合工業(yè)化生產。使用果膠酶和纖維素酶可以破壞植物原料中以纖維素為主的細胞壁結構及其細胞間相連的果膠物質，使提取傳質阻力減小，使內容物原青花素成分易于溶出。乙醇溶液作為醇溶性原青花素的提取溶劑。檸檬酸?磷酸緩沖溶液起到調節(jié)溶液PH值的作用。按本發(fā)明的方法配制的緩沖溶液，經檢測其pH=6，可以保證酶制劑作用的最佳效果。純化采用AB-8樹月旨，最佳工藝為上樣流速2 mL/min、解吸流速I mL/min、解吸劑體積分數50%，在此條件下，得到火龍果皮原花青素精制品并通過原花青素反應與HPLC-MS定性分析，證實該精制品中含有的原花青素為兒茶素、表兒茶素和二聚體，且原花青素純度為96.7%。
[0011]具體實施例:為了充分公開本發(fā)明的一種從火龍果皮提取原花青素的方法，下面結合實施例加以說明。
[0012]實施例:一種從火龍果皮提取原花青素的方法取采收期的火龍果皮為原料，提取方法包括以下步驟:
(I)置新鮮的火龍果皮于65°C烘箱中烘干，用高速組織搗碎機粉碎，40日過篩，得到原料干粉備用。
[0013](2)取0.lmol/L檸檬酸溶液160ml，0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液320ml，混合并稀釋定容至1000ml，配制成緩沖溶液。
[0014](3)取250ml的緩沖溶液，加入0.05g果膠酶與0.075g纖維素酶，攪拌使其完全溶解，形成均勻的酶液。
[0015](4)在上述的酶液中加入1g的原料干粉。
[0016](5)攪拌均勻后于50°C的恒溫水浴鍋內避光保溫，每30min攪動一次，酶解3h，生成酶解液和殘渣的混合物。
[0017](6)在酶解液和殘渣的混合物中加入250ml95%乙醇，于60°C條件下提取2h，經過濾得提取液。
[0018](7)采用AB-8樹脂對提取液純化，上樣流速2 mL/min、解吸流速2 mL/min、解吸劑體積分數50%，得洗脫液；
(8)將洗脫液于冷凍真空干燥后，制得原花青素精制品粉末。
[0019]上述得到的原花青素精制品通過原花青素反應與HPLC-MS定性分析，證實該精制品中含有的原花青素為兒茶素、表兒茶素和二聚體，且原花青素純度為96.7%。
【主權項】
1.一種從火龍果皮提取原花青素的方法，其特征在于由以下步驟組成: (1)備料:將火龍果皮進行恒溫減壓干燥，粉碎稱量后，40目過篩，得到原料干粉備用； (2)配制緩沖溶液:將0.lmol/L檸檬酸溶液與0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液按1:1.5?2的體積比混合，再加水稀釋2倍，配制成緩沖溶液； (3)配制酶液:混合緩沖溶液、果膠酶和纖維素酶，并充分攪拌使其完全溶解，從而形成均勻的酶液；緩沖溶液的用量按原料干粉重量(kg):緩沖溶液體積(L)=1: 15?30的比例計算果膠酶和纖維素酶的用量為每L的緩沖溶液加入0.1?O: 3g果膠酶與0.1?0.3g纖維素酶； (4)投料:按原料干粉重量(kg):緩沖溶液體積(L)=1: 15?30的比例，將原料干粉加入酶液中； (5)酶解:將原料干粉與酶液攪拌均勻后，在50?55°C的恒溫水浴鍋內避光保溫，每30min攪動一次，酶解3-4h，生成酶解液和殘渣的混合物； (6)提取:按每kg原料干粉加入15?30L的75?95%乙醇的方法，將75?95%乙醇加入上述酶解液和殘渣混合物中，在60?65°C條件下提取2?3h，經過濾，得到提取液； (7)純化:采用AB-8樹脂對提取液純化，上樣流速I?3mL/min、解吸流速0.5?1..5mL/min、解吸劑體積分數45?55%，得洗脫液； (8)真空干燥:將洗脫液于冷凍真空干燥后，制得原花青素精制品粉末，冷藏保存。2.根據權利要求1所述的一種從火龍果皮提取原花青素的方法，其特征在于由以下步驟組成: (1)置新鮮的火龍果皮于65°C烘箱中烘干，用高速組織搗碎機粉碎，40目過篩，得到原料干粉備用； (2)取0.lmol/L檸檬酸溶液160ml，0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液320ml，混合并稀釋定容至1000ml，配制成緩沖溶液； (3)取250ml的緩沖溶液，加入0.05g果膠酶與0.075g纖維素酶，攪拌使其完全溶解，形成均勻的酶液； (4)在上述的酶液中加入1g的原料干粉； (5)攪拌均勻后于50°C的恒溫水浴鍋內避光保溫，每30min攪動一次，酶解3h，生成酶解液和殘渣的混合物； (6)在酶解液和殘渣的混合物中加入250ml95%乙醇，于60°C條件下提取2h，經過濾得提取液； (7)采用AB-8樹脂對提取液純化，上樣流速2mL/min、解吸流速2 mL/min、解吸劑體積分數50%，得洗脫液； (8)將洗脫液于冷凍真空干燥后，制得原花青素精制品粉末。
【專利摘要】一種從火龍果皮提取原花青素的方法，以火龍果皮為主要原料，采用酶制劑結合溶劑提取原花青素。制備方法包括以下步驟：備料、配制緩沖溶濃、配制酶液、投料、酶解、提取、純化和真空干燥。利用本發(fā)明的方法制備的原花青素，產品安全性好、質量佳，酶制劑的用量少，該精制品中含有的原花青素為兒茶素、表兒茶素和二聚體，且原花青素純度為96.7%。
【IPC分類】C07D311/62
【公開號】CN105153099
【申請?zhí)枴緾N201510668408
【發(fā)明人】寧發(fā)子, 鄧小玲, 張娜
【申請人】重慶都好生物科技有限公司
【公開日】2015年12月16日
【申請日】2015年10月17日