一種分心木酸性多糖及其制備和應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明設及天然植物多糖領域，具體設及一種分屯、木酸性多糖及其制備和應用， 屬于高分子和分子生物學領域。
【背景技術】
[0002] 分屯、木來源于胡桃科植物胡桃Cjuglans regia L.)果核的干燥木質隔膜，又稱胡 桃衣、胡桃夾、胡桃隔等，味苦、澀，性平，入脾、腎經，固腎澀精，臨床主治遺精、淋病、血尿、 帶下、瀉頻等。近年來，人們從分屯、木中分離得到黃酬類、多糖類、皂巧類、釀類、酪酸類等多 種化合物，并對其中的黃酬、踩質及糖類等成分進行了含量測定。藥理活性研究表明分屯、木 除具有抑菌、抗氧化等作用外，對治療腎虛遺精、滑精遺尿等癥具有顯著效果。
[0003] 近年來，有不少報道關于分屯、木用藥的文獻。中國發(fā)明專利化200310119376. 6公 開了一種補腎生精益元的藥物及其制備方法，該藥物中含有炒焦分屯、木的重量比為30份。 中國發(fā)明專利化201210389282. X公開了一種治療兒童感冒的中藥，含有分屯、木1-3份。中 國發(fā)明專利化201310307132. 4公開了一種治療神經性嘔吐的中藥，其中分屯、木的重量份 數為3-9份。中國發(fā)明專利化201210053971. 3公開了一種治療骨腫瘤的中藥制劑，分屯、木 的重量份數為7-9份。中國發(fā)明專利化201310046000. 0公開了一種疏導和強化人體氣機 的保健食品，選用重量比為15-20的分屯、木，再與桑寄生、烏梅一起炮制，加入普巧茶、萊莉 花、浮小麥混合粉碎制成粉劑、片劑或膠囊。王艷等報道了維吾爾藥核桃分屯、木不同提取物 對腎陽虛模型小鼠的實驗研究，指出分屯、木水提物對腎陽虛小鼠有不同程度的減輕。多糖 作為一種生物免疫應答劑，具有抗腫瘤、降血脂、抗氧化等生物活性（謝明勇，憂少平，天然 產物活性多糖結構與功能研究進展，中國食品學報，2010, 10(2) 然而到目前為止， 鮮有深入研究分屯、木多糖的制備及其應用。高莉等從新疆核桃隔膜中提取分離得到的多糖 PD化-A3具有一定的清除超氧和哲基自由基能力，但活性不明顯（高莉，新疆核桃隔膜多糖 提取、分離純化及抗氧化活性的研究，新疆大學碩±學位論文，2010)。
[0004] 上述報道大多是關于分屯、木水提物的制備方法及生物活性研究，大多停留在水提 物水平重復和小規(guī)模試驗階段，創(chuàng)新性技術很少，未能真正使分屯、木多糖在工業(yè)化生產中 得W大規(guī)模的應用，且未見分屯、木多糖類產品。更未設及分屯、木多糖的高級結構分析，比如 對其單糖組成、糖巧鍵連接方式等未見報道；而且越來越多的研究表明多糖重要功能的發(fā) 揮是由其結構特征決定的，其高級結構（二級及=級結構）更為密切，多糖的生物活性與其 分子量、分子鏈構象（Con化rmation)緊密相關，了解該糖分子的構象更有助于闡明其生物 活性作用機制。所W發(fā)現(xiàn)新的多糖組分及活性，對研究開發(fā)新功能保健品具有非常重要的 科學意義。

【發(fā)明內容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種分屯、木酸性多糖，該多糖具有生物活性，能作為（如針 劑等）藥用及保健品原料。
[0006] 本發(fā)明的另一目的是提供所述分屯、木酸性多糖的制備方法，該方法不影響分屯、木 多糖天然結構及分離效果，具有操作簡單、易于控制的優(yōu)點。
[0007] 本發(fā)明還提供了所述分屯、木酸性多糖的應用，其具有較強的氧自由基清除作用， 可W作為抗氧化劑使用或者用于制備抗氧化劑。
[000引本發(fā)明解決其技術問題所采用的技術方案是；
[0009] 一種分屯、木酸性多糖，由重量百分含量為99% W上的多糖組成；所述的多糖的組 成為半乳糖醒酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖，其中，半乳糖醒酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯 糖的物質的量之比為 66. 30-72. 50:13. 50-18. 60:6. 20-11. 40:2. 80-4. 40。
[0010] 所述的葡萄糖為0 -葡萄糖，優(yōu)選為0 -D-葡萄糖；所述的半乳糖為a -半乳糖， 優(yōu)選為a -D-半乳糖；所述的半乳糖醒酸為a -半乳糖醒酸，優(yōu)選為a -D-半乳糖醒酸；所 述的阿拉伯糖為a -阿拉伯糖，優(yōu)選為a 阿拉伯糖。
[0011] 所述的分屯、木酸性多糖是W半乳糖醒酸和葡萄糖為主鏈，并含有少量分支的多 糖。所述的分屯、木酸性多糖的結構單元中優(yōu)選主鏈結構為（1 一 4)連接的a -D-半乳糖醒 酸（a -D-GalpA)殘基和（1 一。連接的0 -D-葡萄糖（0 -D-Glcp)殘基，支鏈為（1 一 4) 連接的a -D-半乳糖（a -D-Galp)殘基和端基a 阿拉伯糖（a A-Araf)，支鏈連接在 0- D-葡萄糖殘基的0-4位。
[0012] 所述的分屯、木酸性多糖的側鏈有多種不同的變化組合，如可具有如式I所示的結 構單元：
[001 引
【主權項】
1. 一種分心木酸性多糖，其特征在于，由重量百分含量為99%以上的多糖組成；所述 的多糖的組成為半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖，其中，半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳 糖和阿拉伯糖的物質的量之比為 66. 30-72. 50:13. 50-18. 60:6. 20-11. 40:2. 80-4. 40。
2. 根據權利要求1所述的分心木酸性多糖，其特征在于，所述的葡萄糖為0 _葡萄 糖；所述的半乳糖為a-半乳糖；所述的半乳糖醛酸為a-半乳糖醛酸；所述的阿拉伯糖為 a-阿拉伯糖。
3. 根據權利要求1所述的分心木酸性多糖，其特征在于，所述的葡萄糖為0 -D-葡萄 糖；所述的半乳糖為a-D-半乳糖；所述的半乳糖醛酸為a-D-半乳糖醛酸；所述的阿拉伯 糖為a-L-阿拉伯糖。
4. 根據權利要求1所述的分心木酸性多糖，其特征在于，所述的分心木酸性多糖的結 構單元中主鏈結構為（1 - 4)連接的a-D-半乳糖醛酸殘基和（1 - 2)連接的0 -D-葡 萄糖殘基，支鏈為（1 - 4)連接的a-D-半乳糖殘基和端基a-L-阿拉伯糖，支鏈連接在 0-D-葡萄糖殘基的0-4位。
5. 根據權利要求1所述的分心木酸性多糖，其特征在于，所述的分心木酸性多糖的重 均分子量為2. 5KDa-4. 5KDa。
6. 根據權利要求5所述的分心木酸性多糖，其特征在于，所述的分心木酸性多糖的重 均分子量為2. 8KDa-4. 2KDa。
7. 根據權利要求1-6任一項所述的分心木酸性多糖的制備方法，其特征在于，包括步 驟： (1) 水提：將分心木粉碎得到分心木粉末，每克分心木粉末加入20mL-40mL水， 90°〇-100°0浸提2小時-4小時后尚心，取上清液；尚心所得沉淀可按所述水提方法重復 1- 2次，合并上清液得到分心木多糖水提液； (2) 醇沉：向步驟（1)中的分心木多糖水提液中加入乙醇水溶液，攪拌混勻，于 2°C_5°C沉淀過夜，離心，取離心所得沉淀得到一次分心木粗多糖； (3) 去蛋白：將步驟（2)所得的一次分心木粗多糖的水溶液用蛋白酶酶解，滅酶并離心 除去變性蛋白和酶，離心所得上清液再用有機溶劑離心除去下層有機相和中間的蛋白層， 重復用有機溶劑離心的步驟直至無白色沉淀產生，得到提取液； (4) 透析：將步驟（3)所得的提取液用孔徑為800Da-1500Da的透析袋在自來水中透析 40h-50h，再用去離子水透析40h-50h，收集透析后的提取液，真空冷凍干燥得二次分心木粗 多糖； (5) 純化：將步驟（4)得到的二次分心木粗多糖用去離子水溶解得到二次分心木粗多 糖水溶液，經二乙氨基乙基纖維素-52離子交換層析柱層析，收集的洗脫液用苯酚-硫酸法 檢測多糖，收集第一洗脫峰的洗脫液經凝膠過濾層析，凝膠過濾層析所收集的洗脫液用苯 酚-硫酸法檢測多糖峰，收集含多糖的洗脫液，經濃縮、透析和凍干得到白色疏松絮狀分心 木酸性多糖。
8. 根據權利要求7所述的分心木酸性多糖的制備方法，其特征在于，步驟（3)中，所述 的蛋白酶選用木瓜蛋白酶。
9. 根據權利要求7或8所述的分心木酸性多糖的制備方法，其特征在于，所述的蛋白酶 的重量為一次分心木粗多糖重量的1% -2%。
10.根據權利要求1-6任一項所述的分心木酸性多糖在作為抗氧化劑或者用于制備抗 氧化劑中的應用。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種分心木酸性多糖及其制備和應用。所述的分心木酸性多糖，由重量百分含量為99％以上的多糖組成；所述的多糖的組成為半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖，其中，半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖的物質的量之比為66.30-72.50:13.50-18.60:6.20-11.40:2.80-4.40。所述的分心木酸性多糖的制備方法，包括：水提醇沉提取分心木粉末粗多糖，經酶-Sevage結合法去蛋白、透析、陰離子交換層析和凝膠過濾層析純化，真空冷凍干燥分離純化組分即為分心木酸性多糖。本發(fā)明對純化后多糖進行組分分析、結構鑒定及免疫功能研究，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明分心木酸性多糖有較強的抗氧化活性，可以作為抗氧化劑或者用于制備抗氧化劑，可廣泛用于化妝品、食品保健品、動物飼料添加劑、醫(yī)藥等方面。
【IPC分類】A61P39-06, A61K8-73, A23L1-09, A61K31-715, C08B37-00, A61Q19-08, A23K1-16, A61P17-18
【公開號】CN104725520
【申請?zhí)枴緾N201510110116
【發(fā)明人】賀亮, 李杰君, 李文魁, 李曉君
【申請人】鳳慶縣裕澤谷核桃專業(yè)合作社
【公開日】2015年6月24日
【申請日】2015年3月13日