一種緊密連接蛋白抑制劑多肽及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及緊密連接蛋白抑制劑多肽及其應(yīng)用，具體涉及具有抑制緊密連接蛋白，預(yù)防和治療乳腺癌術(shù)后癌癥的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的多肽。
【背景技術(shù)】
[0002]女性乳腺是由皮膚、纖維組織、乳腺腺體和脂肪組成的，乳腺癌是發(fā)生在乳腺腺上皮組織的惡性腫瘤。乳腺癌中99%發(fā)生在女性，男性僅占1%。目前乳腺癌已成為威脅女性身心健康的常見腫瘤。
[0003]乳腺并不是維持人體生命活動(dòng)的重要器官，原位乳腺癌并不致命；但由于乳腺癌細(xì)胞喪失了正常細(xì)胞的特性，細(xì)胞之間連接松散，容易脫落。癌細(xì)胞一旦脫落，游離的癌細(xì)胞可以隨血液或淋巴液播散全身，形成轉(zhuǎn)移，危及生命。如何消滅某種癌癥的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移或防止復(fù)發(fā)，是癌癥治療方法中不可缺少的組成部分，也是目前正在探討的治療乳腺癌熱點(diǎn)問題。
[0004]緊密連接蛋白與惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展有著密切關(guān)系，Claudin蛋白是細(xì)胞間的緊密連接蛋白的主要結(jié)構(gòu)之一。早期研究確定蛋白緊密連接-2 (claudin-2)是乳腺癌肝轉(zhuǎn)移的重要功能性調(diào)解因子。近來的一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)claudin-2在肝臟轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞中特異表達(dá)。最后，研究表明，claudin-2的細(xì)胞外循環(huán)部位對(duì)介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞/肝細(xì)胞相互作用以及乳腺癌細(xì)胞在體內(nèi)形成肝轉(zhuǎn)移的能力是必不可少的。
[0005]因此，在乳腺癌肝轉(zhuǎn)移過程中，claudin-2在乳腺癌細(xì)胞和肝細(xì)胞之間相關(guān)作用過程中從緊密連接復(fù)合體狀態(tài)轉(zhuǎn)變成粘附分子來發(fā)揮作用。減少claudin-2的表達(dá)，無論是在腫瘤細(xì)胞或原代肝細(xì)胞中，都會(huì)抑制這些異型細(xì)胞與肝細(xì)胞之間的相互作用，從而，抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移，可以預(yù)防和治療乳腺癌術(shù)后癌癥的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。
[0006]目前，沒有成熟開發(fā)的緊密連接蛋白抑制劑多肽問世，用于預(yù)防和治療乳腺癌術(shù)后癌癥的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]發(fā)明目的
本發(fā)明提供全新的序列，該序列為緊密連接蛋白抑制劑，對(duì)乳腺癌具有很好的療效。
[0008]技術(shù)方案
緊密連接蛋白抑制劑多肽，其特征在于其序列為LNLSSTLASGKDATGSYPTLMV。
[0009]緊密連接蛋白抑制劑多肽在預(yù)防和治療乳腺癌術(shù)后癌癥的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移藥物中的應(yīng)用。
[0010]有益效果
利用固相合成法化學(xué)合成緊密連接蛋白抑制劑多肽，該多肽具有全新的序列，該多肽可體外抑制緊密連接蛋白，預(yù)防和治療乳腺癌術(shù)后癌癥的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。我們發(fā)現(xiàn)的緊密連接蛋白抑制劑多肽可以同時(shí)抑制乳腺癌細(xì)胞遷移和增殖的活力，并在體內(nèi)試驗(yàn)中提高荷瘤小鼠生存率，具有潛在的新藥開發(fā)價(jià)值。
【具體實(shí)施方式】
[0011]實(shí)施例1
緊密連接蛋白抑制劑多肽乳腺癌細(xì)胞MCF-7遷移的作用。
[0012]采用劃痕實(shí)驗(yàn)。先用marker筆在24孔板背后，用直尺比著，均勻得劃橫線，大約每隔0.5~lcm—道，橫穿過孔。每孔穿過3條線；將成對(duì)數(shù)生長的MCF-7細(xì)胞，以1.0X105加入24孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)24h。第二天用10 μ I槍頭比著直尺，垂直于背后的橫線劃痕，以劃痕和背后橫線的交叉點(diǎn)為固定觀察位點(diǎn)；實(shí)驗(yàn)孔、陽性藥物對(duì)照孔分別加入不同濃度的實(shí)驗(yàn)藥物緊密連接蛋白抑制劑多肽(上海生工合成)和陽性對(duì)照藥物長春新堿；空白組加入相同體積的溶劑，每孔設(shè)五個(gè)復(fù)孔；放入37°C、5%C02培養(yǎng)箱,培養(yǎng)。按0,6,12, 24, 36小時(shí)，拍照；測量O，6，12，24，36h劃痕寬度。以不同的時(shí)間點(diǎn)，記錄每孔三個(gè)固定位置處劃痕寬度的變化，即為細(xì)胞遷移距離。按照公式計(jì)算遷移率(migrat1n rate, MR):遷移率(MR)=(實(shí)驗(yàn)第η小時(shí)的劃痕寬度一實(shí)驗(yàn)第O小時(shí)的劃痕寬度)X 100%/實(shí)驗(yàn)第O小時(shí)的劃痕寬度。結(jié)果，隨緊密連接蛋白抑制劑多肽濃度增加，遷移抑制率逐漸下降，說明緊密連接蛋白抑制劑多肽能夠抑制乳腺癌細(xì)胞MCF-7遷移，抑制率為61.7%。
[0013]實(shí)施例2
緊密連接蛋白抑制劑多肽對(duì)體外培養(yǎng)人乳腺癌細(xì)胞的生長和存活I(lǐng)C50。
[0014]采用MTT比色法。將對(duì)數(shù)生長的人乳腺癌細(xì)胞，以1.0X 15加入96孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)24h，實(shí)驗(yàn)孔、陽性藥物對(duì)照孔分別加入不同濃度的實(shí)驗(yàn)藥物緊密連接蛋白抑制劑多肽(上海生工合成)和陽性對(duì)照藥物紫杉醇；空白組加入相同體積的溶劑。每孔設(shè)五個(gè)復(fù)孔，培養(yǎng)4811，分別在他、211、811、1411、2011、2411、3611、，4811每孔加入MTT，作用4h后，加入DMS0，孵育30min，在酶標(biāo)儀620nm處測定吸光度A值，按公式人乳腺癌細(xì)胞生長抑制率=(1-實(shí)驗(yàn)組吸光值/對(duì)照組吸光值)X 100%。計(jì)算出實(shí)驗(yàn)藥物的IC50為14.89 μ M。
[0015]實(shí)施例3
用腫瘤模型檢測緊密連接蛋白抑制劑多肽的體內(nèi)活力。
[0016]建立MCF-7腫瘤模型，陽性對(duì)照藥物紫杉醇；空白組加入相同體積的溶劑，實(shí)驗(yàn)組多肽(上海生工合成)設(shè)3個(gè)劑量:2、4、8μΜ /Kg。21天后，觀察小鼠存活數(shù)量，計(jì)算存活率。結(jié)果顯示，緊密連接蛋白抑制劑多肽可有效地保護(hù)小白鼠，提高荷瘤小鼠的生存率，生存率達(dá)到76.4%。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.緊密連接蛋白抑制劑多肽，其特征在于其序列為LNLSSTLASGKDATGSYPTLMV。
2.如權(quán)利要求1所述的緊密連接蛋白抑制劑多肽在預(yù)防和治療乳腺癌術(shù)后癌癥的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移藥物中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體涉及具有抑制緊密連接蛋白，預(yù)防和治療乳腺癌術(shù)后癌癥的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的多肽。其序列為LNLSSTLASGKDATGSYPTLMV是全新的序列，它們可以在體外抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖和遷移，并在體內(nèi)試驗(yàn)中提高荷瘤小鼠生存率，具有潛在的新藥開發(fā)價(jià)值。
【IPC分類】C07K14-00, A61P35-00, A61K38-16
【公開號(hào)】CN104693289
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510157189
【發(fā)明人】羅瑞雪
【申請(qǐng)人】蘇州普羅達(dá)生物科技有限公司
【公開日】2015年6月10日
【申請(qǐng)日】2015年4月6日