一種鏈格孢菌j1311-1及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種鏈格孢菌J1311-1及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]生物合成納米金方法具有原料來源廣泛、成本低廉、工藝簡單、反應(yīng)條件溫和及產(chǎn)量高等特點(diǎn)，是一種清潔無毒的綠色合成方法。微生物是強(qiáng)大的綠色生物工廠，其合成的金納米顆粒具有尺寸可控、菌體產(chǎn)量高、不產(chǎn)生有毒副產(chǎn)物、室溫下高度穩(wěn)定、生物相容性好等優(yōu)點(diǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]發(fā)明目的:針對現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，本發(fā)明的目的是提供一種鏈格孢菌J1311-1及其應(yīng)用。該制備方法條件溫和，無需使用多種化學(xué)試劑，反應(yīng)成本低，并具有環(huán)境友好性。本發(fā)明提供的鏈格孢菌可快速積聚金納米顆粒，其反應(yīng)條件溫和，菌體收集方便，制備過程易于放大。
[0004]技術(shù)方案:為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明的目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:一種鏈格孢菌J1311-1，其特征在于，其分類命名為鏈格孢菌sp.J1311-1A該菌株已于2014年7月3號保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCC No:M 2014310 ；保藏地址:湖北省武漢市武昌區(qū)武漢大學(xué)保藏中心(武漢大學(xué)第一附屬小學(xué)對面)。
[0005]該鏈格孢菌菌落初白色，漸變?yōu)榛液稚z稀疏，基質(zhì)黑褐色。分生孢子梗單枝，長短不一，頂生不分枝，分生孢子有縱橫隔膜，倒棍棒形、卵形。
[0006]上述鏈格孢菌J1311-1的篩選方法如下:
[0007]I)取實(shí)驗(yàn)室保藏的分離自東南大學(xué)校園土壤的35株真菌，分別在PDA固體培養(yǎng)基上于28°C培養(yǎng)3-5天；
[0008]2)將35株菌種分別接種于10mL馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基，于28°C、150rpm培養(yǎng)2天得到菌體；
[0009]3)收集菌體并用無菌水洗滌，將20g濕菌體加入10ml無菌去離子水中，于28°C、pH 7、150rpm 培養(yǎng) 48h ；
[0010]4)離心除去步驟3)中的菌體，收集上清液。將終濃度0.5-2.0 mmol/L的氯金酸溶液加入步驟4)的上清液中，于28°C、150rpm反應(yīng)3_48h，根據(jù)反應(yīng)后溶液的顏色判斷是否生成納米金(生成納米金的溶液為紫色至深紫色)，對發(fā)生反應(yīng)的體系重復(fù)篩選實(shí)驗(yàn)并對生成的納米金進(jìn)行確證；
[0011]5)收集步驟3)中的菌體，經(jīng)無菌水洗滌后，將20g濕菌體加入10ml終濃度0.5-2.0 mmol/L的無菌氯金酸溶液中，于28°C、pH 7、150rpm反應(yīng)3_48h，根據(jù)反應(yīng)后菌體的顏色判斷其胞內(nèi)是否生成納米金(生成納米金的細(xì)胞為紫色至深紫色)，對發(fā)生反應(yīng)的體系重復(fù)篩選實(shí)驗(yàn)并對生成的納米金進(jìn)行確證；將篩選得到的能夠生成納米金的菌株選取一株保藏，并命名為鏈格孢菌J1311-1。
[0012]上述的鏈格孢菌J1311-1在制備金屬納米材料方面的應(yīng)用。
[0013]上述的鏈格孢菌J1311-1在制備納米金方面的應(yīng)用。
[0014]上述鏈格孢菌J1311-1制備納米金的具體步驟如下:將鏈格孢菌J1311-1在PDA固體培養(yǎng)基上于28°C培養(yǎng)4天后，接種于10mL馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基，于28°C、pH7、150rpm培養(yǎng)2天得到菌體；收集菌體，經(jīng)無菌水洗滌后，將20g濕菌體加入10ml濃度0.5-2.0 mmol/L的無菌氯金酸溶液中，于28°C、pH 7、150rpm反應(yīng)6h后，破碎菌體，收獲納米金顆粒。
[0015]上述納米金顆粒粒徑為30~40nm。
[0016]對于微生物合成納米材料的機(jī)制，一般認(rèn)為是微生物產(chǎn)生的生物活性物質(zhì)包括蛋白質(zhì)、還原糖、還原性谷胱甘肽等可對金屬離子如金、銀、鎘、鈀、鉬等進(jìn)行富集還原成納米材料，或?qū)Ⅲw系內(nèi)的兩種金屬離子還原成納米合金，且生物分子對納米金屬的穩(wěn)定起著重要作用。因此，本發(fā)明中的鏈格孢菌也可以具有將金、銀、鉻、鈀、鉬等離子還原組裝為納米粒子或合金的能力。
[0017]有益效果:與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn):本發(fā)明采用鏈格孢菌J1311-1制備納米金的方法，反應(yīng)于常溫常壓進(jìn)行，不使用多種化學(xué)試劑，反應(yīng)成本低。制得的金納米顆?？梢栽谒凶灾鞣稚?，常溫下穩(wěn)定。本發(fā)明產(chǎn)生的金納米對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌具有一定的抑制活性。本發(fā)明可對相關(guān)行業(yè)的含金廢液及土壤作無害化處理并再生利用。
【附圖說明】
[0018]圖1為實(shí)施例1的鏈格孢菌J1311-1制備的金納米顆粒的效果圖；
圖2為實(shí)施例1的鏈格孢菌制備的金納米顆粒的掃描電鏡照片；
圖3為實(shí)施例1的鏈格孢菌制備的金納米顆粒的EDS譜圖；
圖4為實(shí)施例2的抑制大腸桿菌的效果圖；
圖5為實(shí)施例2的抑制金黃色葡萄菌的效果圖。
【具體實(shí)施方式】
[0019]以下結(jié)合附圖與具體實(shí)施進(jìn)一步說明本發(fā)明的內(nèi)容，但不應(yīng)理解為對本發(fā)明的限制。在不背離本發(fā)明精神和實(shí)質(zhì)的情況下，對本發(fā)明方法、步驟或條件所作的修改或替換，均屬于本發(fā)明的范圍。
[0020]實(shí)施例1:鏈格孢菌J1311-1的培養(yǎng)條件
鏈格孢菌J1311-1在PDA固體培養(yǎng)基(馬鈴薯20%，葡萄糖2%，去離子水lOOOmL，pH自然，121°C滅菌30min待用)上于28°C培養(yǎng)，在液體培養(yǎng)基(PDA固體培養(yǎng)基:馬鈴薯20%，葡萄糖2%，瓊脂1.5%，去離子水100mL,pH自然，121°C滅菌30min待用)中于28°C、150rpm培養(yǎng)。
[0021]實(shí)施例2鏈格孢菌J1311-1制備納米金的具體步驟
將鏈格孢菌J1311-1在PDA固體培養(yǎng)基上于28°C培養(yǎng)4天后，接種于10mL馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基，于28 °C、pH7、150rpm培養(yǎng)2天；收集菌體，經(jīng)無菌水洗滌后，將20g濕菌體加入10ml無菌氯金酸溶液(濃度0.5-2.0 mmol/L)中，于28°C、pH 7、150rpm反應(yīng)5h后，破碎菌體，收獲納米金顆粒。 附圖1左為加氯金酸之前的菌體，右為加入氯金酸反應(yīng)5h后的包裹了納米金的深紫色菌體，說明鏈格孢菌可在胞內(nèi)快速合成納米金。
附圖2和附圖3分別為鏈格孢菌胞內(nèi)制備的納米金的透射電鏡照片和EDS圖譜，可以清晰的顯示胞內(nèi)生成的納米金顆粒。
[0022]實(shí)施例3本發(fā)明所合成的金納米對細(xì)菌的抑菌作用
步驟I將大腸桿菌和金黃色葡萄球菌涂布于固體培養(yǎng)基(牛肉膏0.5%，NaCl 0.5%，蛋白胨 1%，pH 7.6-7.8)；
步驟2在固體培養(yǎng)基上放置一張已滅菌濾紙，其上添加實(shí)施例2所制備的金納米顆粒溶液5μ1 ；
步驟3將大腸桿菌和金黃色葡萄球菌于37°C培養(yǎng)24h，分別測量其抑菌圈直徑并取平均值，確定大腸桿菌在納米金作用下的抑菌圈直徑為1.21cm,金黃色葡萄球菌在納米金作用下的抑菌圈直徑為1.27cm。
附圖4和附圖5是實(shí)施例2所合成的納米金對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌抑菌圈大小，說明鏈格孢菌制備的納米金對革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌都具有抑制作用。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種鏈格孢菌J1311-1，其特征在于，其分類命名為鏈格孢菌J1311-1 ( Alternariasp.J1311-1A該菌株已于2014年7月3號保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCC No:M 2014310。
2.權(quán)利要求1所述的鏈格孢菌J1311-1在制備金屬納米材料方面的應(yīng)用。
3.權(quán)利要求1所述的鏈格孢菌J1311-1在制備納米金方面的應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述鏈格孢菌J1311-1制備納米金的具體步驟如下:將鏈格孢菌J1311-1在PDA固體培養(yǎng)基上于28°C培養(yǎng)4天后，接種于10mL馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基，于28°C、pH7U50rpm培養(yǎng)2天得到菌體；收集菌體，經(jīng)無菌水洗滌后，將20g濕菌體加入10ml濃度0.5-2.0 mmol/L的無菌氯金酸溶液中，于28°C、pH 7、150rpm反應(yīng)6h后,破碎菌體,收獲納米金顆粒。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述納米金顆粒粒徑為30~40nm。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種鏈格孢菌J1311-1。本發(fā)明還公開了鏈格孢菌J1311-1在制備金屬納米材料方面的應(yīng)用。本發(fā)明還公開了鏈格孢菌J1311-1在制備納米金方面的應(yīng)用。本發(fā)明采用鏈格孢菌J1311-1制備的納米金顆粒的方法，反應(yīng)于常溫常壓進(jìn)行，不使用多種化學(xué)試劑，反應(yīng)成本低。制得的金納米顆?？梢栽谒凶灾鞣稚?，常溫下穩(wěn)定。本發(fā)明產(chǎn)生的金納米顆粒對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌具有一定的抑制活性。本發(fā)明可對相關(guān)行業(yè)的含金廢液及土壤作無害化處理并再生利用。CCTCC No：M 201431020140703
【IPC分類】C12N1-14, C12R1-645, C12P3-00
【公開號】CN104593268
【申請?zhí)枴緾N201410819820
【發(fā)明人】陳峻青, 戚文秀, 吉民, 李黎
【申請人】東南大學(xué)
【公開日】2015年5月6日
【申請日】2014年12月25日