異細交鏈孢菌酮酸人工抗原和抗體及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種異細交鏈孢菌酮酸人工抗原和抗體及其制備方法與應(yīng)用，屬于食品安全領(lǐng)域。所述異細交鏈孢菌酮酸人工抗原的分子結(jié)構(gòu)如下所示：或所述異細交鏈孢菌酮酸人工抗原是通過戊二醛法與載體蛋白偶聯(lián)或活潑酯法與載體蛋白偶聯(lián)制備得到的。利用本發(fā)明上述人工抗原制備得到的抗體的效價可達到1：32000，最低檢測限為0.01ng/mL，半抑制濃度為0.77ng/mL，產(chǎn)生的抗體的特異性高、靈敏度高、準確度高，為建立快速、準確、靈敏的異細交鏈孢菌酮酸免疫檢測方法奠定了基礎(chǔ)。
【專利說明】異細交鏈孢菌酮酸人工抗原和抗體及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及食品安全領(lǐng)域。更具體地，涉及一種異細交鏈孢菌酮酸人工抗原和抗體及其制備方法與應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]異細交鏈孢菌酮酸(Iso-tenuazonic acid, ITeA,化學(xué)名，3_乙?；鵢4羥基_5_異丁基吡咯啉-2-酮)，是鏈格孢菌產(chǎn)生的次級代謝物中的毒素之一，與細交鏈孢菌酮酸(tenuzonicacid, TeA)同屬于四價酸類化合物。作為細交鏈孢菌酮酸的同分異構(gòu)體,它具有與TeA相似的毒性且能被鏈格孢菌同時分泌，已有文獻報道該毒素具有抗腫瘤性、微弱的抗病毒活性以及廣譜、快速、高效的除草性等生物活性。近年來各國對該毒素的進一步生物學(xué)和毒理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)該毒素污染農(nóng)作物(如番茄、蘋果、谷物等)的情況相當普遍，但由于人們平均每日的攝入量很低，未能引起足夠重視。雖然食用含小量毒素的食品不會引起急性中毒，但是長期食用有可能引起慢性中毒。目前從食物里能同時檢出兩種甚至兩種以上的鏈格孢菌產(chǎn)生鏈格孢霉毒素，越來越多的證據(jù)表明這些毒素之間有協(xié)同作用。
[0003]目前，國內(nèi)外尚未制定異細交鏈孢菌酮酸毒素在農(nóng)作物中的限量標準，少數(shù)幾篇文章報道利用傳統(tǒng)的儀器方法對該毒素進行檢測，但儀器由于價格貴需專人操作等缺點不適合大規(guī)模篩選，因此，非常有必要發(fā)明一種針對異細交鏈孢菌酮酸的快速、簡便的檢測方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有檢測異細交鏈孢菌酮酸的技術(shù)不足，提供一種異細交鏈孢菌酮酸人工抗原和抗體及其制備方法與應(yīng)用。
[0005]本發(fā)明的目的是 提供一種異細交鏈孢菌酮酸人工抗原和抗體。
[0006]本發(fā)明另一個目的是提供所述異細交鏈孢菌酮酸人工抗原和抗體在檢測異細交鏈孢菌酮酸方面的應(yīng)用。
[0007]本發(fā)明上述目的通過以下技術(shù)方案實現(xiàn):
本發(fā)明提供了一種異細交鏈孢菌酮酸半抗原，具有如式I所示的結(jié)構(gòu):
【權(quán)利要求】
1.一種異細交鏈孢菌酮酸半抗原，其特征在于，具有如式I所示的結(jié)構(gòu):
2.一種異細交鏈孢菌酮酸人工抗原，其特征在于，具有如式II所示的結(jié)構(gòu):
3.—種權(quán)利要求2所述異細交鏈孢菌酮酸人工抗原的制備方法，其特征在于，制備方法是將ITeAH作為半抗原與載體蛋白通過戊二醛法偶聯(lián)或?qū)TeAHGA作為半抗原與載體蛋白通過活潑酯法偶聯(lián)制備得到。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述異細交鏈孢菌酮酸人工抗原的制備方法，其特征在于，所述戊二醛法包括如下步驟: 51.將半抗原ITeAH和載體蛋白質(zhì)按摩爾比60~80:1混合，溶于PBS溶液中； 52.向SI的混合溶液中逐滴加入體積濃度為25%的戊二醛溶液，室溫攪拌反應(yīng)3~4h，O~4°C下用生理鹽水透析2~3d,得到異細交鏈孢菌酮酸人工抗原； 所述活潑酯法包括如下步驟: 51.將ITeAHGA溶于二甲基甲酰胺中，攪拌加入二環(huán)己基碳二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺，其中，ITeAHGA、二環(huán)己基碳二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺三者的摩爾比為1:1.5~4:L 5 ~4 ; 52.在O~4°C下磁力攪拌反應(yīng)過夜，離心，取上清夜為A液； 53.稱取載體蛋白溶于PBS溶液中，攪拌溶解為B液； 54.在4°C磁力攪拌下，A液逐漸滴入B液中，4°C下反應(yīng)12h，4°C下用生理鹽水透析2~3d，得到異細交鏈孢菌酮酸人工抗原；其中，A液中的ITeAHGA與B液中的載體蛋白的摩爾比為60~80:lo
5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述異細交鏈孢菌酮酸人工抗原的制備方法，其特征在于，所述載體蛋白為鑰孔血藍蛋白、牛血清白蛋白質(zhì)、人血清蛋白質(zhì)或卵清蛋白； 所述PBS溶液的pH值為8.0。
6.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述異細交鏈孢菌酮酸人工抗原的制備方法，其特征在于，所述載體蛋白為牛血清白蛋白質(zhì)或卵清蛋白。
7.一種由權(quán)利要求2所述異細交鏈孢菌酮酸人工抗原免疫動物所制備得到的異細交鏈孢菌酮酸抗體。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述異細交鏈孢菌酮酸抗體，其特征在于，所述抗體為單克隆抗體或多克隆抗體。
9.權(quán)利要求2所述異細交鏈孢菌酮酸人工抗原在檢測異細交鏈孢菌酮酸中的應(yīng)用。
10.權(quán)利要求7所述異細交鏈孢菌酮酸抗體在檢測異細交鏈孢菌酮酸方面的應(yīng)用。
【文檔編號】C07D207/38GK103787946SQ201310747570
【公開日】2014年5月14日 申請日期:2013年12月31日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月31日
【發(fā)明者】王弘, 孫遠明, 王雅麗, 沈玉棟, 肖治理, 楊星星, 楊金易, 徐振林, 雷紅濤 申請人:華南農(nóng)業(yè)大學(xué)