r>[0016]雞糞浸出液I份，NaHCO30.6份，人尿0.7份，Na2S130.02份，f/2微量元素溶液0.8份，f/2維生素溶液0.8份，過磷酸鈣0.1份，土壤浸出液0.6份，海泥抽取液0.8份，MgS04.7Η200.2 份，Ca(NO3)20.3 份，CaCl2.2Η20 0.5 份，CH3COONa 0.05 份，CH3CH2COONa 0.1份，吲哚乙酸0.001份，煮沸冷卻海水100份；裝入三角燒瓶，放在搖床上搖勻15分鐘，濃縮培養(yǎng)液制備完成；其中m微量元素溶液配方(按配制1000毫升溶液計(jì))=ZnSO4.4H2023 毫克，MnCl2.4H20 178 毫克，CuSO4.5H20 10 毫克，F(xiàn)eC6H5O7.5H20 3.9 克，Na2MoO4.2H207.3毫克，CoCl2.6H20 12毫克，Na2EDTA 4.35克，蒸餾水1000毫升；f/2維生素溶液配方(按配制1000毫升溶液計(jì)):維生素B120.5毫克，維生素B110毫克，維生素H 0.5毫克，蒸餾水1000毫升。
[0017]步驟2小型角毛藻高效培養(yǎng)方法
[0018]取三個(gè)20升的帶把的塑料純凈水桶(市場有售)，分別加入權(quán)利要求1所述的小型角毛藻濃縮培養(yǎng)液1000毫升，然后加入9000毫升煮沸冷卻的普通海水，搖勻；選生長旺盛、無污染、處于指數(shù)生長期的小型角毛藻藻種接種，接種密度4萬個(gè)細(xì)胞/毫升藻液，輕輕搖勻3分鐘；每個(gè)純凈水桶瓶口插入兩根玻璃管，管的直徑為8毫米，一根為充氣管，另一根為排氣管，第2個(gè)桶的充氣管與第一個(gè)桶的排氣管相連，第3個(gè)桶的充氣管與第2個(gè)桶的排氣管相連，這樣充入的氣體依次經(jīng)過三個(gè)塑料桶，可得到3次利用；第一個(gè)桶的充氣管上端連接空氣壓縮機(jī)，另一端插入到藻液底部，充入混合氣體，氣體成分=空氣99% +純CO20.5% + —氧化氮0.3% +氨氣0.2%，每天24小時(shí)不間斷充氣，氣量不宜太大，以藻細(xì)胞浮起不下沉即可；將這3個(gè)塑料桶放入微藻培養(yǎng)室中培養(yǎng)，室內(nèi)空調(diào)控溫，日光燈管照明，以打開燈管的數(shù)量多少來控制光照強(qiáng)度，連續(xù)培養(yǎng)9天，前3天調(diào)節(jié)溫度至25°C，光照強(qiáng)度60001UX，光暗周期=6h/L+6h/D，即提供間歇光，6小時(shí)連續(xù)光照，6小時(shí)連續(xù)黑暗，如此循環(huán)；第4-6天，調(diào)節(jié)溫度至26°C，光照強(qiáng)度90001UX，每天提供15小時(shí)連續(xù)光照，然后9小時(shí)連續(xù)黑暗，如此循環(huán)，至第5天，每個(gè)瓶子補(bǔ)加步驟I所述的濃縮培養(yǎng)液50毫升，第7-9天，調(diào)節(jié)溫度至28°C，光照強(qiáng)度120001uX，每天24小時(shí)連續(xù)光照，沒有黑暗，第7天，每個(gè)桶補(bǔ)加蒸餾水250毫升，至第8天，每個(gè)桶補(bǔ)加步驟I所述的濃縮培養(yǎng)液30毫升，到第9天，小型角毛藻細(xì)胞密度可達(dá)75萬/毫升藻液，培養(yǎng)完畢。
[0019]步驟I中各種營養(yǎng)鹽要按配方中提供的順序加入，以免發(fā)生化學(xué)反應(yīng)；
[0020]步驟I中各種無機(jī)營養(yǎng)鹽和維生素可預(yù)先配成母液且置于4°C冰箱冷藏保存?zhèn)溆?，放置時(shí)間不要超過30天；
[0021]步驟I中所述土壤浸出液制備方法:取樹林中上層土壤1000份，加蒸餾水1000份，再加NaOH 2.5份，加熱，煮沸45分鐘，冷卻，沉淀12小時(shí)，取上清液，濾紙過濾，濾液即為土壤浸出液；
[0022]步驟I中所述雞糞浸出液制備方法:把干雞糞、青草、豆餅、米糠、穎殼(五谷雜糧的外殼)和腐殖土按60: 10: 12: 15: 2: I的重量比例混合，攪拌均勻，裝入陶瓷缸內(nèi)密閉進(jìn)行發(fā)酵，30天后，倒出，在干凈水泥地上，攤成薄層，晾干48小時(shí)，后取2公斤，置于塑料水桶，加自來水10升，攪拌均勻，用80目篩絹過濾，將清液煮沸5分鐘，冷卻，靜置24小時(shí)，取上清液，裝入試劑瓶，貼上標(biāo)簽，置于4°C冰箱，備用；
[0023]步驟I中所述海泥抽取液制備方法:取比較肥沃又不於黑的海泥，以I份泥加2份淡水，充分?jǐn)嚢杈鶆颍o置1-2分鐘，取上層泥漿于鋁鍋中，按每1000毫升泥漿加I克NaOH的量加入NaOH，煮沸25分鐘。煮時(shí)需不斷攪拌均勻，煮后靜置24小時(shí)取上清液備用；
[0024]步驟I中因FeC6H5O7.5H20 (檸檬酸鐵)較難溶解，可加少量自來水在火爐上微熱至80-90°C，并不斷攪拌至全部融化；
[0025]步驟I中人尿制備方法:取人尿1000毫升，三角燒瓶煮沸后冷卻備用；
[0026]步驟I 中所述 NaHCO3, Na2S13,過磷酸鈣，MgSO4, Ca(NO3)2, CaCl2, CH3COONa,CH3CH2COONa,吲哚乙酸等化學(xué)藥品純度均需分析純級別；
[0027]步驟2中接種用的小型角毛藻預(yù)先進(jìn)行提純(本領(lǐng)域常規(guī)方法，只要可實(shí)現(xiàn)提純即可，例如米氏提取法)，以確保接種時(shí)藻種為純種、無污染且處于生長旺盛的指數(shù)生長期；
[0028]步驟2中所用塑料桶需洗刷干凈后加入450毫升蒸餾水潤洗3遍，瓶口處用75%酒精拭擦以消毒滅菌；
[0029]步驟2中所用純凈水桶應(yīng)為透明或白色桶，以增加透光性；
[0030]步驟2中桶口處用透明膠帶或玻璃膠密封，以防漏氣；桶與桶之間可用塑料或橡膠料管連接。
[0031]最后應(yīng)說明的是:以上實(shí)施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案，而非對其限制；盡管參照前述實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解:其依然可以對前述實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換；而這些修改或者替換，并不使相應(yīng)技術(shù)方案的本質(zhì)脫離本發(fā)明實(shí)施例技術(shù)方案的精神和范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種小型角毛藻濃縮培養(yǎng)液，其特征在于具體成分配方如下: 雞糞浸出液I份，NaHCO3 0.6份，人尿0.7份，Na2S13 0.02份，f/2微量元素溶液0.8份，f/2維生素溶液0.8份，過磷酸鈣0.1份，土壤浸出液0.6份，海泥抽取液0.8份，MgS04.7H20 0.2 份，Ca (NO3) 2 0.3 份，CaCl2.2H20 0.5 份，CH3COONa 0.05 份，CH3CH2COONa0.1份，吲哚乙酸0.001份，煮沸冷卻海水100份；裝入三角燒瓶，放在搖床上搖勻15分鐘，濃縮培養(yǎng)液制備完成；其中f/2微量元素溶液配方(按配制1000毫升溶液計(jì))=ZnSO4.4Η2023 毫克，MnCl2.4Η20 178 毫克，CuSO4.5H20 10 毫克，F(xiàn)eC6H5O7.5H20 3.9 克，Na2MoO4.2Η207.3毫克，CoCl2.6Η20 12毫克，Na2EDTA 4.35克，蒸餾水1000毫升；f/2維生素溶液配方(按配制1000毫升溶液計(jì)):維生素B12 0.5毫克，維生素B1 100毫克，維生素H 0.5毫克，蒸餾水1000毫升。
2.如權(quán)利要求1所述的一種小型角毛藻濃縮培養(yǎng)液培養(yǎng)小型角毛藻的培養(yǎng)方法，其特征在于: 取三個(gè)20升的帶把的塑料純凈水桶(市場有售)，分別加入權(quán)利要求1所述的小型角毛藻濃縮培養(yǎng)液1000毫升，然后加入9000毫升煮沸冷卻的普通海水，搖勻；選生長旺盛、無污染、處于指數(shù)生長期的小型角毛藻藻種接種，接種密度4萬個(gè)細(xì)胞/毫升藻液，輕輕搖勻3分鐘；每個(gè)純凈水桶瓶口插入兩根玻璃管，管的直徑為8毫米，一根為充氣管，另一根為排氣管，第2個(gè)桶的充氣管與第一個(gè)桶的排氣管相連，第3個(gè)桶的充氣管與第2個(gè)桶的排氣管相連，這樣充入的氣體依次經(jīng)過三個(gè)塑料桶，可得到3次利用；第一個(gè)桶的充氣管上端連接空氣壓縮機(jī)，另一端插入到藻液底部，充入混合氣體，氣體成分=空氣99% +純CO2 0.5% +一氧化氮0.3% +氨氣0.2%，每天24小時(shí)不間斷充氣，氣量不宜太大，以藻細(xì)胞浮起不下沉即可；將這3個(gè)塑料桶放入微藻培養(yǎng)室中培養(yǎng)，室內(nèi)空調(diào)控溫，日光燈管照明，以打開燈管的數(shù)量多少來控制光照強(qiáng)度，連續(xù)培養(yǎng)9天，前3天調(diào)節(jié)溫度至25°C，光照強(qiáng)度60001UX，光暗周期=6h/L+6h/D，即提供間歇光，6小時(shí)連續(xù)光照，6小時(shí)連續(xù)黑暗，如此循環(huán)；第4-6天，調(diào)節(jié)溫度至26°C，光照強(qiáng)度90001uX，每天提供15小時(shí)連續(xù)光照，然后9小時(shí)連續(xù)黑暗，如此循環(huán)，至第5天，每個(gè)瓶子補(bǔ)加步驟I所述的濃縮培養(yǎng)液50毫升，第7-9天，調(diào)節(jié)溫度至28°C，光照強(qiáng)度120001uX，每天24小時(shí)連續(xù)光照，沒有黑暗，第7天，每個(gè)桶補(bǔ)加蒸餾水250毫升，至第8天，每個(gè)桶補(bǔ)加步驟I所述的濃縮培養(yǎng)液30毫升，到第9天，小型角毛藻細(xì)胞密度可達(dá)75萬/毫升藻液，培養(yǎng)完畢。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種小型角毛藻濃縮培養(yǎng)液制備方法和高效培養(yǎng)技術(shù)，屬水產(chǎn)養(yǎng)殖領(lǐng)域。本發(fā)明配制的小型角毛藻濃縮培養(yǎng)液，儲存、運(yùn)輸方便，便于工廠化、標(biāo)準(zhǔn)化、專業(yè)化生產(chǎn)，微量成分定量準(zhǔn)確且對傳統(tǒng)使用的f/2營養(yǎng)鹽配方進(jìn)行了優(yōu)化，成分合理、均衡，有利于微藻快速生長；使用塑料純凈水桶養(yǎng)殖小型角毛藻，操作靈活，不易污染，洗刷方便，不易劃破，成本低；在培養(yǎng)的早、中、晚期提供不同光照和溫度且在培養(yǎng)后期補(bǔ)充營養(yǎng)鹽，促進(jìn)小型角毛藻持續(xù)快速生長，藻產(chǎn)量提高120％，采用三個(gè)塑料桶串聯(lián)養(yǎng)殖，通入的氣體得到三次利用，節(jié)約了能量和資源。
【IPC分類】C12R1-89, C12N1-12
【公開號】CN104593261
【申請?zhí)枴緾N201510002937
【發(fā)明人】王培磊
【申請人】臨沂大學(xué)
【公開日】2015年5月6日
【申請日】2015年1月6日