專(zhuān)利名稱(chēng):一種三角帆蚌肉酶解蛋白液的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于三角帆蛘肉的綜合利用領(lǐng)域，特別涉及一種三角帆蛘肉酶解蛋白液的制備方法。
背景技術(shù)：
研究表明，利用蛋白酶可對(duì)具有復(fù)雜立體結(jié)構(gòu)的低值動(dòng)、植物蛋白質(zhì)進(jìn)行有效切割以得到富含新構(gòu)象和生物學(xué)功能的小分子肽段及游離氨基酸的酶解蛋白液。酶解蛋白液不僅營(yíng)養(yǎng)豐富，還具有極強(qiáng)的清除自由基的功能；酶解蛋白液作為動(dòng)物氮源具有改善動(dòng)物生長(zhǎng)性能和提高動(dòng)物品質(zhì)的功能。目前酶解蛋白液被廣泛應(yīng)用在保健品、醫(yī)藥及飼料中，具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，因此開(kāi)發(fā)新蛋白來(lái)源的酶解蛋白液也成為近年來(lái)食品開(kāi)發(fā)利用的研究 熱點(diǎn)之一。
三角帆蛘(HgriopsisCumingii)屬瓣觸綱(Lamellibranchia)蛘目(Unionoida)蛘科(Unionidae)帆蛘屬，是我國(guó)特有的、也是江浙一帶淡水育珠的主要品種，采珠后的蛘肉數(shù)量相當(dāng)豐富，僅浙江諸暨就年產(chǎn)蛘肉約700余噸。三角帆蛘肉含有豐富的蛋白質(zhì)和糖類(lèi)物質(zhì)，分別占干物質(zhì)的54. 07%和35. 85%，且蛘肉蛋白中必需氨基酸及鮮味氨基酸含量高，具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和很大的開(kāi)發(fā)利用潛力。但因蛘肉肉質(zhì)粗韌，且具有淡水貝類(lèi)所特有的土腥味，故往往成了廢棄物被直接丟棄或簡(jiǎn)單烘干用作飼料，一直未得到充分利用。因此，隨著珍珠養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，取珠后蛘肉的開(kāi)發(fā)利用是亟待解決的問(wèn)題。
目前對(duì)蛘肉的深加工的工作逐年增多，從酶解的蛘肉產(chǎn)物中已成功分離出降血壓肽和血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制肽，可惜產(chǎn)率不高。目前雖有6個(gè)公開(kāi)專(zhuān)利報(bào)道了蛘肉蛋白及多肽類(lèi)產(chǎn)品的提取方法，均屬于食品加工或醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域：
，實(shí)施中均需要手工切除三角帆蛘內(nèi)臟，需要較多的人工投入。除此之外，專(zhuān)利公開(kāi)號(hào)為CN 101066086A采用的“堿提酸沉”法提取三角帆蛘蛋白，該專(zhuān)利與中國(guó)專(zhuān)利CN 1517099A公開(kāi)的蛘肉提取物的制備方法的共同缺陷是存在酸或堿廢液的排放，對(duì)環(huán)境有一定污染。中國(guó)專(zhuān)利CN 101248866A雖然可從河蛘中同時(shí)提取蛘肉提取物、蛋白粉和多肽粉，但需要使用較多的設(shè)備，如大容量的離心機(jī)，負(fù)壓過(guò)濾裝置、冷凍凍干機(jī)，且需要數(shù)次的離心、負(fù)壓過(guò)濾、透析、凍干等，工藝較為繁瑣。中國(guó)專(zhuān)利CN 102524797A公開(kāi)的利用蛘肉制備珠蛘肽鈣產(chǎn)品，需要對(duì)酶解后的水解液反復(fù)凍干、復(fù)溶并進(jìn)行超聲改性和氯化鈣螯合處理，過(guò)程也較為繁瑣，且肽得率較低。專(zhuān)利公開(kāi)號(hào)為CN 101503727A的“三角帆蛘酶解多肽的制備和應(yīng)用”中得到的多肽分子量大(分子質(zhì)量集中于6100Da和26200Da2個(gè)區(qū)域)，其添加蛋白酶的方法是按蛘粉中蛋白含量的質(zhì)量百分比添加的，未考慮加入的堿性蛋白酶的有效酶活力。中國(guó)專(zhuān)利CN 101248830A報(bào)道的“無(wú)腥水解蛘肉蛋白功能制品的制備方法”中接種嗜熱鏈球菌或保加利亞乳酸桿菌對(duì)蛘肉蛋白進(jìn)行發(fā)酵水解，雖無(wú)酸堿鹽排放，但需使用發(fā)酵罐等設(shè)備，且需考慮接種發(fā)酵的純菌種保存，發(fā)酵中雜菌的污染等問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容
[0005]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種三角帆蛘肉酶解蛋白液的制備方法，該方法所需時(shí)間短，不需酸堿，對(duì)設(shè)備要求不高，實(shí)用性強(qiáng)，為充分利用三角帆蛘肉資源開(kāi)辟了一條新的途徑。
本發(fā)明的一種三角帆蛘肉酶解蛋白液的制備方法，包括
(I)三角帆蛘肉勻漿液的制備
將新鮮的三角帆蛘肉用清水沖洗干凈，初步切碎后搗碎均勻，得到三角帆蛘肉勻漿液；
( 2 )三角帆蛘肉的酶解
將上述三角帆蛘肉勻漿液加水稀釋?zhuān)缓笳{(diào)節(jié)pH值為6-8，升溫到40_45°C，然后加入酶制劑恒溫酶解5h，得到酶解蛋白液；再經(jīng)煮沸滅酶活處理，冷卻至室溫，離心或過(guò)濾 后收集上清液，最后減壓濃縮，即制得三角帆蛘肉酶解蛋白液。
步驟(I)中所述的三角帆蛘肉為取珠后的三角帆蛘肉。
步驟(2)中所述的加水稀釋中三角帆蛘肉勻漿液與水的體積比為1:2 1:3。
步驟(2)中所述的調(diào)節(jié)pH值為采用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)節(jié)。
步驟(2)中所述的酶制劑為堿性蛋白酶Alcalase 2. 4L。
步驟(2)中所述酶制劑的用量為每克三角帆蛘肉勻漿液中加入800-1500U。
步驟(2)中所述離心的離心速度為5000-10000rpm,離心時(shí)間為5_20min。
本發(fā)明的三角帆蛘肉酶解蛋白液的制備方法不用大量酸堿，所需時(shí)間短，生產(chǎn)的三角帆蛘肉酶解蛋白液富含寡肽，克服現(xiàn)有的提取蛘肉蛋白及多肽制品的缺陷。本發(fā)明具體將大規(guī)模采珠后的副產(chǎn)品-蛘肉通過(guò)酶解處理來(lái)制備具有豐富小分子肽段的酶解蛋白制品。此工藝不僅具有很強(qiáng)的實(shí)用性，使充分開(kāi)發(fā)采珠后蛘肉資源規(guī)?；a(chǎn)能得以穩(wěn)定進(jìn)行，還可解決蛘肉簡(jiǎn)單丟棄造成資源浪費(fèi)及污染環(huán)境的現(xiàn)狀，為充分利用三角帆蛘肉資源、提高產(chǎn)品附加值開(kāi)辟了一條新的途徑，也為酶解研究提供有價(jià)值的理論數(shù)據(jù)。
與已有技術(shù)相比，本發(fā)明的主要特點(diǎn)在于
本發(fā)明僅采用一種蛋白酶即可獲得較高水解度的三角帆蛘肉酶解蛋白液，尤其是該酶解蛋白液中寡肽百分比含量高；利用本發(fā)明提供的方法能通過(guò)酶解條件的微調(diào)實(shí)現(xiàn)精確控制酶解蛋白液的水解度，所制備的三角帆蛘肉酶解蛋白液產(chǎn)品質(zhì)量?jī)?yōu)良，成本低，且無(wú)三廢排出；本發(fā)明工藝合理，操作簡(jiǎn)單，生產(chǎn)操作安全。
有益效果
(I)本發(fā)明的方法簡(jiǎn)單，可操作性強(qiáng)，采用的儀器設(shè)備少，僅用生物酶進(jìn)行酶解提取，未使用任何有機(jī)溶劑和化學(xué)物質(zhì)，對(duì)環(huán)境無(wú)污染，生產(chǎn)成本低，有利于推廣應(yīng)用，適用于普通飼料加工業(yè)中廣泛利用，對(duì)飼料新蛋白源開(kāi)發(fā)有積極的意義；
(2)本發(fā)明是利用取珠后的三角帆蛘肉為原料，使大量的廢棄物得到合理利用，充分利用了三角帆蛘肉資源，避免了浪費(fèi)，也對(duì)環(huán)境保護(hù)做出來(lái)積極的貢獻(xiàn)；
(3)本發(fā)明的方法與現(xiàn)有同類(lèi)方法相比，蛘肉中氮回收高，有效寡肽含量豐富，產(chǎn)品用途廣，酶解蛋白液或直接添加到飼料配方中，或采用噴霧干燥等技術(shù)制成耐儲(chǔ)存的粉劑形式添加到飼料配方中，也可用常規(guī)方法進(jìn)一步純化出特定分子量大小的純小肽制品，通過(guò)添加不同的輔料，制成多種食品添加劑或保健藥品的重要原料。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求
書(shū)所限定的范圍。
實(shí)施例I
( I)三角帆蛘勻漿液的制備將新鮮的三角帆蛘肉用清水沖洗干凈，初步切碎，放入高速組織搗碎機(jī)，以3000rpm勻漿l_3min，制得勻漿液。經(jīng)測(cè)定該三角帆蛘肉勻漿液的水分含量為86. 78%，粗蛋白含量為47. 25% (干基)。
( 2 )三角帆蛘肉的酶解
按照1:2. 5 (三角帆蛘肉勻漿液水)的比例加水到1000克的三角帆蛘肉勻漿液中，攪拌均勻，通過(guò)添加0. lmol/LHCl調(diào)節(jié)pH值到6. 6，并升溫到43°C，然后按照1000U/克(三角帆蛘肉勻漿液)的比例加入堿性蛋白酶Alcalase 2. 4L (酶活力為11萬(wàn)單位/克)，43°C恒溫酶解5h后，將酶解蛋白液煮沸15min，進(jìn)行滅酶活處理；然后等酶解蛋白液冷卻至室溫，9000rpm離心15min，收集上清液，再經(jīng)減壓濃縮，即制得三角帆蛘肉酶解蛋白液。
通過(guò)本發(fā)明提供的以三角帆蛘肉為原料的酶解蛋白液的制備方法，所獲得的三角帆蛘肉酶解蛋白液中，水解度為25. 81%，總氮回收率為65. 22%，酶解蛋白液中游離氨基酸含量低于2%，且小于5個(gè)氨基酸組成的功能寡肽含量高達(dá)22. 11%，具體多肽組成見(jiàn)表I :
表I三角帆蛘肉酶解蛋白液中不同分子量多肽組成分布
肽段大小百分比(％)
100個(gè)AA以上的肽段L87
30-100 個(gè) AA 的肽段56.89
I5-3O個(gè)氨基酸的小分子肽5.66
5-15個(gè)氨基酸的小分子肽11.76
2-5個(gè)氨基酸組成的功能寡肽22.11
游離氨基酸1.71
本工藝的特點(diǎn)是依據(jù)堿性蛋白酶酶解蛋白質(zhì)大分子的特點(diǎn)，通過(guò)控制蛋白水解度的方式，制定了富含寡肽的三角帆蛘肉酶解蛋白液的加工技術(shù)，符合現(xiàn)代營(yíng)養(yǎng)學(xué)中寡肽吸收的特點(diǎn)，使三角帆蛘肉酶解蛋白液中總氮回收率達(dá)65. 22%，且2-5個(gè)氨基酸組成的功能寡肽從現(xiàn)有報(bào)道的14. 96%提高到22. 11%，而游離氨基酸含量則不足2%。所得酶解蛋白液既能直接應(yīng)用于養(yǎng)殖生產(chǎn)及飼料企業(yè)，也可通過(guò)進(jìn)一步純化得到特定分子量大小的純小肽制品。
權(quán)利要求
1.一種三角帆蛘肉酶解蛋白液的制備方法，包括 (1)將新鮮的三角帆蛘肉用清水沖洗干凈，組織搗碎機(jī)搗碎，得到三角帆蛘肉勻漿液； (2)將上述三角帆蛘肉勻漿液加水稀釋?zhuān){(diào)節(jié)pH值為6-8，加入酶制劑后，于40-45°C恒溫酶解5h，得到酶解蛋白液；再將酶解蛋白液煮沸滅酶活處理，冷卻至室溫，離心或過(guò)濾收集上清液，最后減壓濃縮，即制得三角帆蛘肉酶解蛋白液。
2.根據(jù)權(quán)利要求
I所述的一種三角帆蛘肉酶解蛋白液的制備方法，其特征在于步驟(O中所述的三角帆蛘肉為取珠后的三角帆蛘肉。
3.根據(jù)權(quán)利要求
I所述的一種三角帆蛘肉酶解蛋白液的制備方法，其特征在于步驟(2)中所述的加水稀釋中三角帆蛘肉勻漿液與水的體積比為1:2 1:3。
4.根據(jù)權(quán)利要求
I所述的一種三角帆蛘肉酶解蛋白液的制備方法，其特征在于步驟(2)中所述的調(diào)節(jié)pH值為采用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)節(jié)。
5.根據(jù)權(quán)利要求
I所述的一種三角帆蛘肉酶解蛋白液的制備方法，其特征在于步驟(2)中所述的酶制劑為堿性蛋白酶Alcalase 2. 4L。
6.根據(jù)權(quán)利要求
I所述的一種三角帆蛘肉酶解蛋白液的制備方法，其特征在于步驟(2)中所述酶制劑的用量為每克三角帆蛘肉勻漿液中加入800-1500U。
7.根據(jù)權(quán)利要求
I所述的一種三角帆蛘肉酶解蛋白液的制備方法，其特征在于步驟(2)中所述離心的離心速度為5000-10000rpm,離心時(shí)間為5_20min。
專(zhuān)利摘要
本發(fā)明涉及一種三角帆蚌肉酶解蛋白液的制備方法，包括(1)將新鮮的三角帆蚌肉用清水沖洗干凈，初步切碎后搗碎均勻，得到三角帆蚌肉勻漿液；(2)將上述三角帆蚌肉勻漿液加水稀釋?zhuān)缓笳{(diào)節(jié)pH值為6-8，加入酶制劑，40-45℃恒溫酶解，得到酶解蛋白液；再經(jīng)煮沸滅酶活處理，冷卻至室溫后，離心或過(guò)濾收集上清液，最后減壓濃縮，即制得三角帆蚌肉酶解蛋白液。本發(fā)明的方法簡(jiǎn)單，可操作性強(qiáng)，采用的儀器設(shè)備少，僅用生物酶進(jìn)行酶解提取，未使用任何有機(jī)溶劑和化學(xué)物質(zhì)，對(duì)環(huán)境無(wú)污染，生產(chǎn)成本低；本發(fā)明得到酶解蛋白液中氮回收高，有效寡肽含量豐富，產(chǎn)品用途廣。
文檔編號(hào)C12P21/06GKCN102952841SQ201210448680
公開(kāi)日2013年3月6日 申請(qǐng)日期2012年11月9日
發(fā)明者黃艷青, 陸建學(xué), 龔洋洋, 高露姣, 房文紅 申請(qǐng)人:中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院東海水產(chǎn)研究所導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan