專利名稱:水解人參皂甙糖基的人參皂甙糖苷酶及其應(yīng)用的制作方法
水解人參皂甙糖基的人參皂甙糖苷酶及其應(yīng)用
發(fā)明領(lǐng)域
本發(fā)明涉及水解人參中含量較高的皂甙糖基以制備生理活性高的稀有皂甙的人參皂甙糖苷酶。本發(fā)明還涉及所述人參皂甙糖苷酶的用途。
發(fā)明背景
人參是已有幾千年歷史的中草藥材，是滋補(bǔ)強(qiáng)壯的藥材。常用的藥用人參是人參(Panax ginseng C.A.Meyer)、美國(guó)參(panaxquinquefolium L.)、三七參(Panaxnatoginseng)、竹節(jié)參(Panaxjaponicus)和其他人參屬(Panax genus)植物。
人參植物中最重要的有效成分是人參皂甙，已發(fā)現(xiàn)的人參皂甙已有30余種。人參阜式可分為三種類型:原人參二醇類阜式(Protopanaxdiol Type ginsenoside, PPD)、原人參三醇類阜式(Protopanaxtriol Type ginsenoside, PPT)和齊墩果酸類阜式。人參皂甙 Ra1, Ra2, Ra3, Rb1, Rb2, Rb3, Re，Rd, F2, Rg3, Rg5, Rh2，和 Rh3 是原人參二醇類皂甙；人參皂甙Re，Rg1, Rg2, Rg4, Rh1, Rh4是原人參三醇類皂甙；Ro等皂甙是人參齊墩果酸類皂甙。其中，人參阜式 Ra1, Ra2, Ra3, Rb1, Rb2, Rb3, Re, Rd, F2, Re, Rg1 是達(dá)瑪 20 (S)-阜式(Dammarane20(S)-saponins)，ASg_Rg3、Rg2、Rg2、Rh1 具有 20 (S)和 20 (R)異構(gòu)體。主要的人參皂甙化學(xué)結(jié)構(gòu)如下:
原人參二醇類皂甙原人參三醇類皂甙
權(quán)利要求
1.人參皂甙糖苷酶:水解人參皂甙Ra'RbpRlvRc人參二醇類皂甙的第3碳原子(3-C)和第20碳原子(20-C)的β -葡萄糖苷鍵、β -木糖苷鍵、α -阿拉伯糖苷鍵，生成Rd、F2和Rg3，進(jìn)一步水解成Rh2和C-K，進(jìn)一步水解成皂甙元的人參皂甙糖苷酶I ; 水解人參皂甙Ra、Rb1, Rb2, Re的第20碳原子(20-C)的β -葡萄糖苷鍵、β -木糖苷鍵、α -阿拉伯糖苷鍵，生成Rd，進(jìn)一步水解成Rg3的人參皂甙糖苷酶II ； 水解人參皂甙的第3碳原子上的雙葡萄糖基和甙元之間的糖苷鍵，將Rd變成C-K的人參皂甙糖苷酶III ； 水解人參三醇類皂甙Re、Rg2的第6碳上的α -鼠李糖苷鍵，變成Rg1和Rh1的人參皂甙-α -鼠李糖苷酶: 所述酶水解原人參二醇類皂甙和原人參三醇類皂甙糖基，生成C-K、Rh1, Rh2, Rg2, Rg3、F2、Rg1、Rd人參皂甙和皂甙元， 所述的人參皂甙糖苷酶來(lái)源于霉菌、細(xì)菌、酵母或擔(dān)子菌的微生物培養(yǎng)物，或來(lái)源于人參植物、杏仁、麥麩、麥芽或動(dòng)物肝提取物，并通過(guò)如下方法制得: 以液態(tài)或者固態(tài)培養(yǎng)所述微生物，其中固態(tài)培養(yǎng)之后用緩沖液浸出、離心除渣得酶液；液態(tài)培養(yǎng)后，離心除渣得酶液；或者將人參植物或動(dòng)物肝破碎，用緩沖液浸出，離心除渣得酶液；或者將麥麩、麥芽和杏仁 用緩沖液浸出，離心除渣得酶液； 上述酶液任選地包括加入硫酸銨或者乙醇而沉淀酶蛋白，再用緩沖液溶解，除渣得到所述人參皂甙糖苷酶的濃縮液；其中所述緩沖液為醋酸、磷酸或Tris緩沖液，緩沖液的濃度為 0.001-1M, pH 為 2-11 ； 上述人參皂甙糖苷酶的濃縮液用酶蛋白分離中常用的離子交換柱或者分子篩方法分離得到酶蛋白、電泳法檢測(cè)酶蛋白純度和分子量；其中電泳單點(diǎn)的、確定分子量的單一蛋白的流份與人參皂甙反應(yīng)，其中: 能水解人參皂甙Ra、Rb1, Rb2, Re人參二醇類皂甙的第3碳原子(3-C)和第20碳原子(20-C)的β -葡萄糖苷鍵、β -木糖苷鍵、α -阿拉伯糖苷鍵，生成Rd、F2和Rg3,進(jìn)一步水解成Rh2和C-K，進(jìn)一步水解成皂甙元的純酶蛋白為人參皂甙糖苷酶I ; 能水解人參皂甙Ra、Rb1, Rb2, Re的第20碳原子(20-C)的β -葡萄糖苷鍵、β -木糖苷鍵、α -阿拉伯糖苷鍵，生成Rd、進(jìn)一步水解成Rg3的純酶蛋白為人參皂甙糖苷酶II ；能水解人參皂甙的第3碳原子上的雙葡萄糖基和甙元之間的糖苷鍵，將Rd變成C-K的純酶蛋白為人參皂甙糖苷酶III ; 能水解人參三醇類皂甙Re、Rg2的第6碳上的α -鼠李糖苷鍵，變成Rg1和Rh1的純酶蛋白為人參皂甙-α -鼠李糖苷酶， 其中 1)黑曲霉產(chǎn)人參皂甙糖苷酶1、I1、III酶； 2)米曲霉產(chǎn)人參皂甙糖苷酶1、I1、III酶和人參皂甙-α-鼠李糖苷酶； 3)細(xì)菌產(chǎn)人參皂 甙糖苷酶I酶； 4)酵母菌、鏈霉菌和擔(dān)子菌，分別產(chǎn)人參皂甙糖苷酶I酶； 5)人參植物中含有人參皂甙糖苷酶I和III酶； 6)麥麩中含有人參皂甙糖苷酶I酶； 7)麥芽、動(dòng)物肝和杏仁中分別含有人參皂甙糖苷酶I和II酶；上述四種人參皂甙糖苷酶在溫度為5-70°C、pH為2-11條件下與相應(yīng)的人參皂甙進(jìn)行反應(yīng)，生成相應(yīng)的稀有皂甙。
2.權(quán)利要求
1所述的人參皂甙糖苷酶，其中所述人參皂甙糖苷酶1、I1、III酶來(lái)自黑曲霉。
3.權(quán)利要求
1所述的人參皂甙糖苷酶，其中所述人參皂甙糖苷酶1、I1、III酶和人參皂甙-α -鼠李糖苷酶來(lái)自米曲霉。
4.權(quán)利要求
1-3任一項(xiàng)所述的人參皂甙糖苷酶在制備人參稀有皂甙中的應(yīng)用。
5.權(quán)利要求
1-3任一項(xiàng)所述的人參皂甙糖苷酶在處理人參混合皂甙以制備人參稀有皂甙含量較高的混合皂甙中的應(yīng)用。
6.權(quán)利要求
1-3任一項(xiàng)所述的人參皂甙糖苷酶在處理人參粉以制備人參稀有皂甙含量較高的人參制 品中的應(yīng)用。
專利摘要
本發(fā)明涉及水解人參中含量較高的皂甙糖基以制備生理活性高的稀有皂甙的人參皂甙糖苷酶(Ginsenoside glycosidase)，所述的人參皂甙糖苷酶來(lái)源于微生物培養(yǎng)物、人參植物、杏仁、麥麩、麥芽和動(dòng)物肝等，根據(jù)水解人參皂甙糖基反應(yīng)的差別，本發(fā)明的人參皂甙糖苷酶至少分為人參皂甙糖苷酶I、人參皂甙糖苷酶II、人參皂甙糖苷酶III和人參皂甙-α-鼠李糖苷酶。本發(fā)明還涉及所述人參皂甙糖苷酶在制備人參稀有皂甙和稀有皂甙含量高的人參制品中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)C12P19/14GKCN1479787 B發(fā)布類型授權(quán) 專利申請(qǐng)?zhí)朇N 00820112
公開(kāi)日2013年7月10日 申請(qǐng)日期2000年12月29日
發(fā)明者金鳳燮, 魚(yú)紅閃 申請(qǐng)人:金鳳燮導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan