本技術(shù)涉及微流控制領(lǐng)域，具體而言，涉及一種核酸多重檢測(cè)微流控芯片。

背景技術(shù)：

1、微流控芯片技術(shù)，又稱(chēng)芯片實(shí)驗(yàn)室，可以把生物和化學(xué)等領(lǐng)域中所涉及的樣本制備、生物與化學(xué)反應(yīng)、分離檢測(cè)等基本操作集成或基本集成于一塊幾平方厘米的芯片上，用以完成不同的生物或化學(xué)反應(yīng)過(guò)程，并對(duì)其產(chǎn)物進(jìn)行分析的一種技術(shù)能大大降低檢測(cè)過(guò)程對(duì)場(chǎng)地、人員和設(shè)備的要求。

2、現(xiàn)有微流控檢測(cè)芯片已實(shí)現(xiàn)核酸擴(kuò)增、核酸檢測(cè)等多步驟集成在一個(gè)體積較小的芯片上，快速完成“樣本進(jìn)——結(jié)果出”的檢測(cè)流程。由于微流控芯片擺脫了對(duì)精密移液裝置和專(zhuān)業(yè)人員的依賴，因此在即時(shí)檢測(cè)領(lǐng)域具有巨大潛力。

3、等溫?cái)U(kuò)增因反應(yīng)速度快、儀器設(shè)備要求低等在即時(shí)檢測(cè)領(lǐng)域得到了越來(lái)越多的關(guān)注，但由于待測(cè)樣本的復(fù)雜性，如血液、痰液、尿液、組織等，通常在等溫?cái)U(kuò)增后還需與檢測(cè)試劑反應(yīng)來(lái)放大信號(hào)才能實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確檢測(cè)，稱(chēng)為核酸多重檢測(cè)。核酸多重檢測(cè)需要待測(cè)樣本在多個(gè)反應(yīng)室進(jìn)行可控式轉(zhuǎn)移，并且能防止樣本回流引起交叉影響。現(xiàn)有的微流控芯片大多僅設(shè)置一個(gè)反應(yīng)室用于核酸的擴(kuò)增和檢測(cè)，導(dǎo)致難以實(shí)現(xiàn)核酸多重檢測(cè)。

4、同時(shí)，現(xiàn)有的微流控芯片一般需要外加壓力裝置、離心力、虹吸作用作為驅(qū)動(dòng)力。使用外加壓力裝置，如負(fù)壓真空泵、注射泵等具有較強(qiáng)驅(qū)動(dòng)力，但需要外接在芯片上，使檢測(cè)平臺(tái)結(jié)構(gòu)復(fù)雜。將離心力作為驅(qū)動(dòng)，存在電力和離心設(shè)備依賴的問(wèn)題。虹吸作用的液流驅(qū)動(dòng)方式雖無(wú)需設(shè)備，但驅(qū)動(dòng)力較小，在進(jìn)樣過(guò)程中存在揮發(fā)的問(wèn)題。

5、為了能夠?qū)崿F(xiàn)核酸多重檢測(cè)，發(fā)明人曾申請(qǐng)發(fā)明專(zhuān)利2023117199558，公開(kāi)了一種無(wú)需依賴外力即可實(shí)現(xiàn)核算多重檢測(cè)的微流控芯片，在微流控芯片上設(shè)置了反應(yīng)腔和檢測(cè)腔，反應(yīng)腔和檢測(cè)腔都需設(shè)置排氣通道和防水透氣膜，并在反應(yīng)腔和檢測(cè)腔之間增設(shè)閥塊，當(dāng)閥塊為固態(tài)時(shí)，反應(yīng)腔和檢測(cè)腔不能流體連通；當(dāng)閥塊為液態(tài)時(shí)，檢測(cè)腔與反應(yīng)腔流體連通，利用閥塊的升溫相變性能和防水透氣膜的特性，結(jié)合大氣壓內(nèi)外平衡原理，巧妙地實(shí)現(xiàn)待測(cè)樣本在不同腔室的可控式轉(zhuǎn)移。

6、但是閥塊的設(shè)置給微流控芯片的制備工藝增加了麻煩，且還需控制加熱溫度來(lái)控制閥塊的狀態(tài)，使操作過(guò)程也增加了額外步驟。因此急需找到一種結(jié)構(gòu)更加簡(jiǎn)單、操作更加方便、儀器要求更低、制造成本也更低的核酸多重檢測(cè)微流控芯片。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、為解決上述問(wèn)題，本實(shí)用新型提供了一種核酸多重檢測(cè)微流控芯片，通過(guò)在反應(yīng)腔和檢測(cè)腔之間設(shè)置一條多匝迂回的流體通道實(shí)現(xiàn)流體連通，且該流體通道的孔徑小于反應(yīng)腔進(jìn)樣流道的孔徑，使樣品能在重力作用下從加樣區(qū)流入反應(yīng)腔，但不會(huì)流入流體通道，再經(jīng)簡(jiǎn)易施壓裝置施壓后，樣品能從反應(yīng)腔經(jīng)流體通道順利進(jìn)入檢測(cè)腔，實(shí)現(xiàn)樣品在不同腔室的可控式轉(zhuǎn)移，并能有效防止樣本回流。該微流控芯片結(jié)構(gòu)更簡(jiǎn)單，僅需在檢測(cè)腔設(shè)置排氣通道和防水透氣膜，反應(yīng)腔無(wú)需設(shè)置排通道，進(jìn)僅靠重力或芯片上的簡(jiǎn)易施壓裝置就能實(shí)現(xiàn)樣品在不同腔室的轉(zhuǎn)換，無(wú)需額外驅(qū)動(dòng)設(shè)備，在保證檢測(cè)精密度的基礎(chǔ)上極大地簡(jiǎn)化結(jié)構(gòu)和操作過(guò)程，從而能適應(yīng)更多簡(jiǎn)易檢測(cè)環(huán)境，低成本集成化，適合大規(guī)模推廣應(yīng)用。

2、一方面，本實(shí)用新型提供了一種核酸多重檢測(cè)微流控芯片，所述芯片包括加樣區(qū)、用于樣品前處理的反應(yīng)腔和用于檢測(cè)樣品的檢測(cè)腔；所述加樣區(qū)與反應(yīng)腔之間設(shè)有進(jìn)樣流道；所述反應(yīng)腔和檢測(cè)腔之間通過(guò)一條流體通道實(shí)現(xiàn)流體連通；所述流體通道的孔徑小于進(jìn)樣流道；在重力作用下樣品能從加樣區(qū)流入反應(yīng)腔，但不會(huì)流入流體通道。

3、本實(shí)用新型提供的微流控芯片設(shè)有多組檢測(cè)單元，每組檢測(cè)單元多層級(jí)排布在芯片本體，每組檢測(cè)單元都設(shè)有反應(yīng)腔和檢測(cè)腔，能夠適用于多種不同目標(biāo)待測(cè)物的同時(shí)檢測(cè)，如多種不同核酸靶標(biāo)的檢測(cè)，并且每組檢測(cè)單元都能實(shí)現(xiàn)核酸多重檢測(cè)。當(dāng)然可以理解的是，本技術(shù)的微流控芯片并非只能用于核酸多重檢測(cè)，也適用于蛋白、抗體等其他類(lèi)分子檢測(cè)，反應(yīng)腔可用于樣品前處理，檢測(cè)腔用于樣本檢測(cè)。

4、微流控芯片在使用過(guò)程中，需要保持豎直狀態(tài)，進(jìn)樣口朝上放置。以下涉及微流控芯片中各流道及腔室的位置關(guān)系時(shí)，均是基于微流控芯片保持豎直狀態(tài)時(shí)進(jìn)行的描述。在一些方式中，可以將該微流控芯片插入配套使用的檢測(cè)裝置中，使微流控芯片保持進(jìn)樣口朝上豎直擺放，并能通過(guò)檢測(cè)裝置提供熱源為微流控芯片特定位置(如反應(yīng)腔、閥塊等)加熱；在一些方式中，還可以通過(guò)檢測(cè)裝置檢測(cè)微流控芯片中的樣品反應(yīng)后產(chǎn)生的熒光物質(zhì)，讀取檢測(cè)結(jié)果。

5、由于體系中氣壓平衡，因此加樣區(qū)的樣品無(wú)需外加驅(qū)動(dòng)裝置，僅在重力驅(qū)動(dòng)下便可實(shí)現(xiàn)向反應(yīng)腔的自主轉(zhuǎn)移，而且這個(gè)過(guò)程很容易實(shí)現(xiàn)，樣品一進(jìn)入加樣區(qū)，就會(huì)自行向下流動(dòng)，并經(jīng)進(jìn)樣流道進(jìn)入反應(yīng)腔。

6、微流控芯片的主流道，以及反應(yīng)腔的進(jìn)樣流道的孔徑較大，能夠使液體在重力驅(qū)動(dòng)下順暢流動(dòng)。但流體通道的孔徑會(huì)明顯小于這些流道，流體通道為多匝迂回的孔徑偏小流道，僅在重力作用下，液體無(wú)法進(jìn)入并順暢流動(dòng)，從而使樣品充滿反應(yīng)腔后，繼續(xù)推進(jìn)時(shí)會(huì)受阻，難以從反應(yīng)腔頂部的流體通道流出，會(huì)全部存留在反應(yīng)腔完成核酸擴(kuò)增反應(yīng)，待核酸擴(kuò)增反應(yīng)結(jié)束后，再經(jīng)壓力推動(dòng)才能經(jīng)流體通道進(jìn)入檢測(cè)腔，從而保證準(zhǔn)確檢測(cè)。

7、進(jìn)一步地，所述檢測(cè)腔設(shè)有排氣通道，排氣通道的出口處設(shè)有防水透氣膜，用于控制檢測(cè)腔與外界大氣之間的連通狀態(tài)；所述反應(yīng)腔不設(shè)排氣通道。

8、檢測(cè)腔的排氣通道和防水透氣膜的設(shè)置，能夠?qū)崿F(xiàn)反應(yīng)腔和檢測(cè)腔氣體經(jīng)防水透氣膜向外界排出，但液體無(wú)法經(jīng)防水透氣膜排出。當(dāng)排氣通道充滿液體后，會(huì)使防水透氣膜失去透氣作用，從而使得整個(gè)體系處于封閉狀態(tài)，體系內(nèi)的液體停止流動(dòng)。因此防水透氣膜能夠幫助檢測(cè)腔內(nèi)樣本建立內(nèi)外壓力平衡，能夠調(diào)控液體流動(dòng)方向，當(dāng)檢測(cè)腔內(nèi)充滿液體，并且經(jīng)排氣通道潤(rùn)濕防水透氣膜后，芯片內(nèi)體系處于封閉狀態(tài)，從而使檢測(cè)腔內(nèi)樣本停止流動(dòng)，不會(huì)出現(xiàn)回流。在一些方式中，防水透氣膜采用聚合物材料制備。

9、現(xiàn)有的核酸多重檢測(cè)微流控芯片，通常都需要在反應(yīng)腔和檢測(cè)腔之間設(shè)置閥門(mén)進(jìn)行阻隔，因此反應(yīng)腔和檢測(cè)腔都需要分別設(shè)置排氣通道和防水透氣膜。

10、而本實(shí)用新型提供的芯片中，反應(yīng)腔無(wú)需設(shè)置排氣通道，多匝迂回且孔徑偏小的流體通道，可以充當(dāng)臨時(shí)阻斷反應(yīng)腔和檢測(cè)腔之間液體流動(dòng)的閥門(mén)，但反應(yīng)腔和檢測(cè)腔之間始終能保持通氣，因此反應(yīng)腔和檢測(cè)腔可以共用位于檢測(cè)腔上的排氣通道進(jìn)行排氣，反應(yīng)腔無(wú)需另外設(shè)置排氣通道和防水透氣膜。這樣的設(shè)計(jì)使結(jié)構(gòu)更簡(jiǎn)單，成本更低，且操作更方便，同時(shí)還能保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

11、進(jìn)一步地，所述流體通道包括進(jìn)樣段、中間段和出樣段，所述中間段向上拱起，中間段的位置高于進(jìn)樣段和出樣段。

12、流體通道的中間段向上拱起，增大了反應(yīng)腔內(nèi)樣品在無(wú)額外施壓情況下進(jìn)入流體通道的難度，有助于反應(yīng)腔內(nèi)樣品全部存留在反應(yīng)腔完成核酸擴(kuò)增反應(yīng)。

13、進(jìn)一步地，所述流體通道位于反應(yīng)腔和檢測(cè)腔中間，且流體通道的中間段向反應(yīng)腔的上端延伸。

14、流體通道的中間段向反應(yīng)腔的上端延伸，使流體通道的長(zhǎng)度延長(zhǎng)，進(jìn)一步加大了反應(yīng)腔內(nèi)樣品在無(wú)額外施壓情況下進(jìn)入流體通道的難度。

15、進(jìn)一步地，所述流體通道為多匝迂回流道，設(shè)有至少一個(gè)彎折形狀的結(jié)構(gòu)。

16、在流體通道設(shè)置多個(gè)彎折形狀的結(jié)構(gòu)，能夠盡量延長(zhǎng)流體通道的長(zhǎng)度，最大程度加大反應(yīng)腔內(nèi)樣品在無(wú)額外施壓情況下進(jìn)入流體通道的難度，但是為反應(yīng)腔內(nèi)樣品全部存留在反應(yīng)腔內(nèi)提供保障。

17、進(jìn)一步地，所述流體通道的入口處位于反應(yīng)腔的頂部；所述進(jìn)樣流道的出口處位于反應(yīng)腔的底部；所述流體通道的出口處位于檢測(cè)腔的底部；所述排氣通道的入口處位于檢測(cè)腔的頂部。

18、進(jìn)樣流道的出口處相當(dāng)于反應(yīng)腔的進(jìn)樣口，流體通道的入口處相當(dāng)于反應(yīng)腔的出樣口。本實(shí)用新型針對(duì)反應(yīng)腔的進(jìn)樣口和出樣口位置也進(jìn)行了設(shè)計(jì)，進(jìn)樣口在反應(yīng)腔的底部位置，出樣口在反應(yīng)腔的頂部位置，這樣做的目的是為了保證樣品在進(jìn)入反應(yīng)腔時(shí)，能順利向出樣口排氣，保持氣壓平衡，同時(shí)由于出樣口在反應(yīng)腔頂部，加大了樣品流出的難度，使樣品更穩(wěn)定地停留在反應(yīng)腔內(nèi)。

19、流體通道的出口處相當(dāng)于檢測(cè)腔的進(jìn)樣口，排氣通道的入口處相當(dāng)于檢測(cè)腔的排氣口。進(jìn)樣口在檢測(cè)腔的底部位置，排氣口在檢測(cè)腔的頂部位置，這樣做的目的是為了保證樣品在進(jìn)入檢測(cè)腔時(shí)，能順利向排氣口排氣，保持氣壓平衡。反應(yīng)腔內(nèi)的樣品在施壓區(qū)的壓力作用下，經(jīng)流體通道，從檢測(cè)腔底部進(jìn)入檢測(cè)腔，由于樣品量通常較充盈，樣品還能進(jìn)入排氣通道，并且接觸到防水透氣膜，使防水透氣膜失去透氣作用，使芯片內(nèi)整體處于封閉狀態(tài)，樣品停止流道，從而完全保留在檢測(cè)腔進(jìn)行檢測(cè)反應(yīng)以及完成目的核酸的檢測(cè)。

20、進(jìn)一步地，所述檢測(cè)腔的位置高于反應(yīng)腔，所述檢測(cè)腔的底部不低于反應(yīng)腔的頂部。

21、檢測(cè)腔的位置高于反應(yīng)腔，增大了反應(yīng)腔內(nèi)樣品在無(wú)額外施壓情況下進(jìn)入檢測(cè)腔的難度，有助于防止反應(yīng)腔內(nèi)樣品提前流入檢測(cè)腔。

22、進(jìn)一步地，還包括主流道，所述進(jìn)樣流道與主流道的分支口流體連通，進(jìn)樣流道為向上拱起的弧形流道，進(jìn)樣流道的入口處和出口處分別位于弧形流道的兩側(cè)的低點(diǎn)，且入口處高于出口處，

23、進(jìn)一步地，所述弧形流道的最高處不低于反應(yīng)腔的頂部。

24、進(jìn)樣流道的弧形流道設(shè)計(jì)，能使樣品較容易從分支口進(jìn)入進(jìn)樣流道，再經(jīng)進(jìn)樣流道進(jìn)入反應(yīng)腔，但是進(jìn)入反應(yīng)腔后的樣品難以從進(jìn)樣流道返回主流道，因?yàn)榉磻?yīng)腔的進(jìn)樣口位于進(jìn)樣流道的最低點(diǎn)，樣品無(wú)法克服重力作用以及向上拱起的弧形流道帶來(lái)的壓力返回主流道，只能全部留存在反應(yīng)腔，從而能夠防止反應(yīng)腔內(nèi)出現(xiàn)樣本回流。

25、當(dāng)特定體積的待測(cè)樣品從加樣區(qū)加入后，蓋好加樣區(qū)的蓋子，樣品在重力作用下從主流道進(jìn)入各個(gè)檢測(cè)單元的反應(yīng)腔內(nèi)，反應(yīng)腔的進(jìn)樣口處于低位，能使待測(cè)樣品迅速流入反應(yīng)腔并逐漸充滿，但此時(shí)并不會(huì)從出樣口流出反應(yīng)腔，因?yàn)槌鰳涌谠诜磻?yīng)腔的頂部，而且流體通道為多匝迂回、孔徑偏小的流道，樣品無(wú)法流入流體通道，同時(shí)樣品也難以從進(jìn)樣流道返回主流道，因?yàn)榉磻?yīng)腔進(jìn)樣口位于進(jìn)樣流道最低點(diǎn)，且進(jìn)樣流道最高處高于反應(yīng)腔的頂部，樣品在重力作用下無(wú)法返回主流道，因此樣品全都會(huì)穩(wěn)定存留在反應(yīng)腔內(nèi)進(jìn)行反應(yīng)。

26、在一些方式中，所述進(jìn)樣流道的孔徑為400μm～800μm，所述流體通道的孔徑為50～300μm。

27、可以理解的是，進(jìn)樣流道和流體通道的孔徑可以是能成功制備成微流控芯片，并且流體通道因孔徑小，在重力和表面張力等作用下，能起到一定的防止液體輕易流入的效果即可。此處對(duì)孔徑的限定，并非是指超過(guò)該孔徑或小于該孔徑就無(wú)法使用，只是一種優(yōu)選的實(shí)施方式，比如進(jìn)樣流道的孔徑達(dá)到801μm、805μm、810μm、820μm、850μm、900μm、399μm、395μm、390μm、385μm、380μm等等，或是流體通道的孔徑達(dá)到301μm、302μm、305μm、310μm、320μm、350μm、390μm、49μm、48μm、46μm、41μm、40μm、35μm等等，在合適的芯片尺寸下也依然可以實(shí)現(xiàn)，

28、進(jìn)一步地，還包括施壓區(qū)，所述施壓區(qū)位于芯片上或用于封閉芯片進(jìn)樣區(qū)的管蓋上，用于為反應(yīng)腔內(nèi)的液體增加壓力，使反應(yīng)腔內(nèi)的液體經(jīng)流體通道流入檢測(cè)腔內(nèi)。

29、設(shè)置施壓區(qū)的目的在于：當(dāng)樣本在反應(yīng)腔完成擴(kuò)增等反應(yīng)后，樣本需要從反應(yīng)腔全部進(jìn)入檢測(cè)腔，此時(shí)需要克服一定的氣壓及多匝迂回且孔徑偏小的流體通道帶來(lái)的壓力。因此施壓區(qū)需要提供足夠的壓力來(lái)驅(qū)動(dòng)待測(cè)樣本從反應(yīng)腔進(jìn)入檢測(cè)腔。

30、可以理解的是，施壓區(qū)可以設(shè)置在芯片的任何位置，比如芯片中間、芯片底部、芯片側(cè)邊上、芯片的加樣區(qū)、芯片的檢測(cè)區(qū)等等，甚至也可以設(shè)置在管蓋上，只要通過(guò)按壓施壓區(qū)的氣囊，能為反應(yīng)腔內(nèi)的液體提供壓力，使其順利進(jìn)入檢測(cè)區(qū)即可。

31、在一些方式中，施壓區(qū)優(yōu)選為設(shè)置在芯片的的左上方或右上方，比如芯片加樣區(qū)的一側(cè)等等，因?yàn)槿绻簠^(qū)設(shè)置在加樣區(qū)上或管蓋上，雖然也能提供一定壓力，但是由于加樣區(qū)或管蓋上端體積有限，導(dǎo)致提供的氣流壓力也非常有限，而且按壓操作不便，在擰緊管蓋操作時(shí)，還容易不小心碰到管蓋上的氣囊，導(dǎo)致氣囊提前釋放氣流。因此施壓區(qū)優(yōu)選設(shè)置在微流控芯片的左上方或右上方，同時(shí)還應(yīng)達(dá)到特定體積(具體可以根據(jù)微流控芯片大小及所需壓力大小計(jì)算，從而設(shè)置合適體積的氣囊)，從而使按壓過(guò)程提供更精準(zhǔn)的氣流壓力推動(dòng)驅(qū)動(dòng)待測(cè)樣本從反應(yīng)腔進(jìn)入檢測(cè)腔。

32、按壓施壓區(qū)的氣囊，可以是手工按壓，也可以是通過(guò)配套使用的檢測(cè)裝置提供特定大小的力來(lái)按壓氣囊。

33、在一些方式中，所述施壓區(qū)可以通過(guò)分流道與樣本池相連，通過(guò)按壓，從分流道到樣本池，向微流控芯片內(nèi)部排出氣流。

34、進(jìn)一步地，所述微流控芯片還包括加樣區(qū)，所述加樣區(qū)包括樣品池和管蓋，所述樣本池用于容納待測(cè)樣本，所述管蓋用于密封微流控芯片。

35、在一些方式中，所述反應(yīng)腔截面為圓形，圓形的截面設(shè)置可以使反應(yīng)腔內(nèi)可以容納更多樣本。

36、在一些方式中，所述檢測(cè)腔截面為水滴形，排氣口位于水滴形的頂端。

37、檢測(cè)腔截面為水滴形，有助于檢測(cè)腔內(nèi)的氣體或液體向上匯集，從而更容易進(jìn)入排氣通道。

38、可以理解的是，反應(yīng)腔和檢測(cè)腔內(nèi)置的固體試劑可根據(jù)需要靈活設(shè)置，不同的腔室內(nèi)置不同的反應(yīng)試劑，如反應(yīng)腔內(nèi)置靶標(biāo)的擴(kuò)增引物，檢測(cè)腔內(nèi)置不同靶標(biāo)的檢測(cè)探針。

39、在一些方式中，反應(yīng)腔可作為era擴(kuò)增腔室，檢測(cè)腔可作為era檢測(cè)腔室。

40、在一些方式中，反應(yīng)腔可作為era反應(yīng)腔室，檢測(cè)腔可作為crispr檢測(cè)腔室。

41、在一些方式中，反應(yīng)腔可作為era反應(yīng)腔室，檢測(cè)腔可作為ago檢測(cè)腔室。

42、在一些方式中，反應(yīng)腔可作為era反應(yīng)腔室，檢測(cè)腔可作為rnase?h檢測(cè)腔室。

43、在一些方式中，所述微流控芯片用于(dna和/或rna)核酸多重檢測(cè)，反應(yīng)腔用于核酸擴(kuò)增，反應(yīng)腔內(nèi)需預(yù)先放置核酸擴(kuò)增試劑，所述核酸擴(kuò)增試劑為通過(guò)凍干或烘干的固體擴(kuò)增試劑，核酸擴(kuò)增試劑為常見(jiàn)的變溫或等溫核酸擴(kuò)增試劑，包括但不限于era(enzymaticrecombinase?amplification)、rpa(recombinase?polymerase?amplification，重組酶聚合酶擴(kuò)增)、lamp(loop-mediated?isothermal?amplification，環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增)、near(nicking?enzyme-assisted?reaction，切刻酶輔助擴(kuò)增反應(yīng))、nasba(nuclear?acidsequence-based?amplification，核酸依賴性擴(kuò)增檢測(cè)技術(shù))、hda(helicase-dependentamplification，解旋酶依賴性擴(kuò)增技術(shù))等。

44、在一些方式中，所述固體檢測(cè)試劑具體包括檢測(cè)引物探針和/或檢測(cè)預(yù)混液，檢測(cè)預(yù)混液包括檢測(cè)所需的酶和緩沖液。

45、在一些方式中，所述芯片本體結(jié)構(gòu)采用具有低成本、易加工性能和良好的生物相容性芯片的材料如pmma(聚甲基丙烯酸甲酯，polymethyl?methacrylate)、pp(polypropylene，聚丙烯)、pc(polycarbonate，聚碳酸酯)等材質(zhì)作基底，直接用激光刻蝕技術(shù)制作通道和反應(yīng)槽，或在pmma基底上刻蝕結(jié)構(gòu)，再用pdms倒模。

46、采用本實(shí)用新型提供的微流控芯片進(jìn)行核酸多重檢測(cè)的方法包括如下步驟：

47、(1)將微流控芯片豎直插入檢測(cè)裝置中；

48、(2)樣品從加樣口進(jìn)入微流控芯片，并在重力作用下流入反應(yīng)腔，蓋上管蓋；

49、(3)待測(cè)樣品在反應(yīng)腔進(jìn)行核酸擴(kuò)增；

50、(4)擠壓施壓區(qū)，使完成核酸擴(kuò)增的待測(cè)樣品進(jìn)入檢測(cè)腔進(jìn)行反應(yīng)；

51、(5)讀取檢測(cè)結(jié)果。

52、本實(shí)用新型提供的核酸多重檢測(cè)微流控芯片，通過(guò)巧妙設(shè)計(jì)進(jìn)樣流道、流體通道、腔室和排氣通道的結(jié)構(gòu)，無(wú)需外加驅(qū)動(dòng)，樣品可以利用自身重力進(jìn)入反應(yīng)腔且不會(huì)進(jìn)入檢測(cè)腔，并且在反應(yīng)腔完成擴(kuò)增反應(yīng)后，又能在簡(jiǎn)易施壓裝置下進(jìn)入檢測(cè)腔，實(shí)現(xiàn)樣品在不同腔室的可控式轉(zhuǎn)移，且不會(huì)發(fā)生樣品回流現(xiàn)象，主要具有如下的有益效果：

53、1、無(wú)需外加驅(qū)動(dòng)裝置，僅在重力驅(qū)動(dòng)下便可實(shí)現(xiàn)樣品向反應(yīng)腔的自主轉(zhuǎn)移；

54、2、在反應(yīng)腔和檢測(cè)腔之間設(shè)計(jì)一條流體通道，流體通道為多匝迂回、孔徑偏小、長(zhǎng)度較長(zhǎng)、且位置較高的流道，僅在重力作用下，樣品無(wú)法進(jìn)入，從而使樣品充滿反應(yīng)腔后，繼續(xù)推進(jìn)時(shí)會(huì)受阻，難以從反應(yīng)腔頂部的流體通道流出，全部存留在反應(yīng)腔完成核酸擴(kuò)增反應(yīng)；

55、3、設(shè)計(jì)了進(jìn)樣流道的結(jié)構(gòu)，使反應(yīng)腔的進(jìn)樣口位于進(jìn)樣流道的最低點(diǎn)，從而使樣品無(wú)法克服重力作用及進(jìn)樣流道帶來(lái)的壓力返回主流道，全部留存在反應(yīng)腔，防止出現(xiàn)樣本回流；

56、4、反應(yīng)腔無(wú)需設(shè)置排氣通道，多匝迂回且孔徑偏小的流體通道，既可以充當(dāng)臨時(shí)阻斷反應(yīng)腔和檢測(cè)腔之間液體流動(dòng)的閥門(mén)，又能充當(dāng)反應(yīng)腔的臨時(shí)排氣通道，反應(yīng)腔無(wú)需另外設(shè)置排氣通道和防水透氣膜，結(jié)構(gòu)更簡(jiǎn)單，成本更低；

57、5、設(shè)計(jì)了簡(jiǎn)易施壓裝置，當(dāng)樣品在反應(yīng)腔完成核酸擴(kuò)增后，按壓施壓裝置，即可使樣品從反應(yīng)腔進(jìn)入檢測(cè)腔，實(shí)現(xiàn)樣品在不同腔室的可控式轉(zhuǎn)移；

58、6、在保證檢測(cè)精密度的基礎(chǔ)上極大的簡(jiǎn)化結(jié)構(gòu)和操作過(guò)程，操作更方便，成本更低，適合大規(guī)模推廣應(yīng)用。