本發(fā)明涉及抗體生物工程，具體涉及一種itga2單克隆抗體或其片段、dna分子、載體、制備方法、應用及治療癌癥的藥物。

背景技術：

1、細胞免疫治療，是近年來在治療如胃癌、胰腺癌、結(jié)直腸癌治療領域備受關注的一種新興療法。它主要通過激發(fā)或調(diào)動機體的免疫系統(tǒng)，增強腫瘤微環(huán)境的抗腫瘤免疫力，從而抑制和殺傷腫瘤細胞。胃癌的特異性免疫細胞治療：如car-t細胞療法等，通過基因工程技術改造t細胞，使其能夠特異性地識別并攻擊腫瘤細胞表面的特定抗原。這種療法在血液系統(tǒng)腫瘤的治療中取得了顯著成效，目前也在不斷探索其在實體瘤(包括胃癌)中的應用。

2、car-t細胞免疫治療是一種個性化的治療方法，其過程包括從患者血液中提取t細胞，在實驗室中通過基因工程技術對其進行改造，使其表面表達嵌合抗原受體(car)。這種car能夠特異性地識別并結(jié)合腫瘤細胞表面的抗原，從而激活t細胞，進而殺傷腫瘤細胞。經(jīng)過改造的car-t細胞被大量擴增后，再回輸?shù)交颊唧w內(nèi)，繼續(xù)增殖并發(fā)揮抗腫瘤作用。

3、ct041(又稱satri-cel或satricabtagene?autoleucel)是一種靶向claudin18.2(cldn18.2)的自體car-t細胞療法，用于治療cldn18.2陽性的晚期胃腸道腫瘤，尤其是胃癌和胰腺癌。除了ct041外，還有其他針對胃癌的car-t療法正在進行臨床試驗，如靶向gpc3的c-car031等，這些療法也顯示出了一定的療效和安全性。

4、總之，胃癌、胰腺癌car-t治療在一些臨床試驗中取得了令人鼓舞的進展，為胃癌、胰腺癌等實體瘤患者提供了新的治療選擇和希望。然而，仍需要更多的研究和臨床數(shù)據(jù)來驗證其療效和安全性。

5、整合素2(integrin?2，又稱cd18或lfa-1β)作為整合素家族的重要成員，廣泛參與細胞外基質(zhì)與細胞骨架之間的連接，對細胞的多種生理與病理過程具有深遠的影響。近年來，隨著分子生物學、細胞生物學及臨床醫(yī)學的快速發(fā)展，整合素2在細胞功能調(diào)控、組織工程應用、血管生成調(diào)節(jié)、疾病相關性、藥物開發(fā)、基因多態(tài)性、結(jié)構(gòu)與功能關系以及臨床試驗進展等方面取得了顯著的研究成果。

6、整合素2通過與多種細胞外基質(zhì)配體結(jié)合，如細胞間黏附分子(icams)，介導細胞間的緊密連接和信號轉(zhuǎn)導，從而調(diào)控細胞的黏附、遷移、增殖和凋亡過程。研究表明，整合素2的激活能夠促進細胞骨架的重塑，增強細胞的遷移能力，這在免疫細胞的歸巢、炎癥反應以及傷口愈合中尤為重要。此外，整合素2還通過影響細胞周期調(diào)控因子的表達，參與細胞增殖的調(diào)控；在特定條件下，也能誘導細胞凋亡，維護組織的穩(wěn)態(tài)。

7、整合素2與多種疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關。在炎癥反應中，整合素2介導的白細胞黏附和遷移是炎癥反應的重要步驟。在腫瘤領域，整合素2不僅參與腫瘤細胞的黏附和遷移，還通過調(diào)控腫瘤微環(huán)境中的免疫細胞行為影響腫瘤進展。此外，整合素2的異常表達與心血管疾病的發(fā)生發(fā)展也緊密相關，如動脈粥樣硬化、心肌梗死等。

8、在腫瘤領域，整合素2成為抗腫瘤治療的潛在靶點之一。通過抑制整合素2介導的腫瘤細胞黏附和遷移，可以阻斷腫瘤細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力。此外，整合素2還參與腫瘤免疫微環(huán)境的調(diào)控，因此針對整合素2的免疫療法也在積極探索中。

9、我們通過前期的研究發(fā)現(xiàn)整合素2(itga2)是一個膜蛋白，并在胃癌、胰腺癌組織中具有較高的表達，是car-t細胞治療的理想靶點，靶向整合素2的car-t細胞能夠有效的殺傷腫瘤細胞，抑制胃癌細胞的增殖，為胃癌、胰腺癌的car-t細胞治療提供新的策略。

技術實現(xiàn)思路

1、發(fā)明人在前期的研究中發(fā)現(xiàn)整合素2(itga2)是一種膜蛋白，并且在胃癌、胰腺癌組織中高表達，是胃癌、胰腺癌car-t細胞治療的理想靶點，因此構(gòu)建itga2的抗體是car-t細胞免疫治療的首要技術目的。

2、本發(fā)明正是為了實現(xiàn)以上目的而進行的。本發(fā)明提供了itga2單克隆抗體或其片段，還提供了編碼抗體或其片段的dna分子、載體及其制備方法以及應用，還提供了包含itga2單克隆抗體或其片段的治療癌癥的藥物，通過優(yōu)化抗體序列，可以提高其特異性、親和力和穩(wěn)定性，從而增強治療效果。

3、本發(fā)明的第一個目的在于提供一種itga2單克隆抗體或其片段，所述抗體包括輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)，其特征在于，所述輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no：1所示，所述重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no：2所示。

4、作為優(yōu)選地，所述輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列如seq?id?no：3所示，所述重鏈可變區(qū)的核苷酸序列如seq?id?no：4所示。

5、本發(fā)明的第二個目的在于還提供了一種itga2單克隆抗體或其片段，所述抗體包括輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)，所述輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no：5所示，所述重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no：6所示。

6、作為優(yōu)選地，所述輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列如seq?id?no：7所示，所述重鏈可變區(qū)的核苷酸序列如seq?id?no：8所示。

7、本發(fā)明的第三個目的在于提供一種dna分子，編碼如上任一項所述的一種itga2單克隆抗體或其片段。

8、本發(fā)明的第四個目的在于提供一種載體，包含如上所述的一種dna分子。

9、本發(fā)明的第五個目的在于提供以上任一項所述的一種itga2單克隆抗體或其片段的制備方法，通過雜交瘤細胞技術篩選得到。

10、本發(fā)明的第六個目的在于提供以上任一項所述的抗體或其片段在制備治療癌癥藥物中的應用，所述癌癥為針對高表達itga2的相關癌癥。

11、作為優(yōu)選地，所述癌癥至少包括胃癌、胰腺癌、結(jié)直腸癌。

12、本發(fā)明還保護一種治療癌癥的藥物，該藥物包括如上任一項所述的抗體或其片段。

13、更進一步地，本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，其包括如前所述的抗體或其片段。

14、本發(fā)明所述的藥物中還包括藥學上可接受的輔料。所述的藥物為口服制劑或注射劑。所述注射劑為注射用粉針劑或注射液劑。

15、本發(fā)明與現(xiàn)有技術相比，具有如下的優(yōu)點和有益效果：

16、1、本發(fā)明中通過雜交瘤融合的方法獲得了itga2單克隆抗體，特別是其可變區(qū)(v區(qū))的序列，決定了itga2抗體識別和結(jié)合抗原的特異性，本發(fā)明的itga2單克隆抗體具有高特異性、高親和力和穩(wěn)定性，能夠有效的識別胃癌細胞系mkn-45上的靶抗原itga2，并且可以有效的抑制mkn-45胃癌細胞的增殖；且具有很好的生物相容性，為靶向itga2的抗體藥物和car-t細胞免疫治療方法的開發(fā)提供重要依據(jù)。

17、2、本發(fā)明的itga2單克隆抗體在抗體結(jié)構(gòu)與功能、疾病診斷與治療、生物技術與疫苗設計以及免疫學研究等方面都具有重要的意義和價值。

技術特征：

1.一種itga2單克隆抗體或其片段，所述抗體包括輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)，其特征在于，所述輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no：1所示，所述重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no：2所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種itga2單克隆抗體或其片段，其特征在于，所述輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列如seq?id?no：3所示，所述重鏈可變區(qū)的核苷酸序列如seq?id?no：4所示。

3.一種itga2單克隆抗體或其片段，所述抗體包括輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)，其特征在于，所述輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no：5所示，所述重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no：6所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種itga2單克隆抗體或其片段，其特征在于，所述輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列如seq?id?no：7所示，所述重鏈可變區(qū)的核苷酸序列如seq?id?no：8所示。

5.一種dna分子，編碼如權(quán)利要求1～4任一項所述的一種itga2單克隆抗體或其片段。

6.一種載體，包含如權(quán)利要求5所述的一種dna分子。

7.權(quán)利要求1～4任一項所述的一種itga2單克隆抗體或其片段的制備方法，其特征在于，通過雜交瘤細胞技術篩選得到。

8.權(quán)利要求1～4任一項所述的抗體或其片段在制備治療癌癥藥物中的應用，所述癌癥為針對高表達itga2的相關癌癥。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應用，所述癌癥至少包括胃癌、胰腺癌、結(jié)直腸癌、乳腺癌、膠質(zhì)瘤。

10.治療癌癥的藥物，其特征在于，包括如權(quán)利要求1～4任一項所述的抗體或其片段。

技術總結(jié)
本發(fā)明公開了ITGA2單克隆抗體及其應用，還公開了抗體的片段、DNA分子、載體、制備方法、應用及治療癌癥的藥物?？贵w包括輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)，所述輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如SEQ?ID?No：1所示，所述重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如SEQ?ID?No：2所示，或者輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如SEQ?ID?No：5所示，所述重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如SEQ?IDNo：6所示。本發(fā)明的ITGA2單克隆抗體具有高特異性、高親和力和穩(wěn)定性，能夠有效的識別胃癌細胞系mkn?45上的靶抗原ITGA2，并有效抑制mkn?45胃癌細胞的增殖，且具有很好的生物相容性。

技術研發(fā)人員：李玉民,顧艷梅,趙陽
受保護的技術使用者：蘭州大學
技術研發(fā)日：
技術公布日：2025/1/6