本發(fā)明屬于微生物，具體涉及一種粘質(zhì)沙雷氏菌、菌苗及其制備方法和應用。

背景技術：

1、本發(fā)明背景技術中公開的信息僅僅旨在增加對本發(fā)明的總體背景的理解，而不必然被視為承認或以任何形式暗示該信息構成已經(jīng)成為本領域一般技術人員所公知的現(xiàn)有技術。

2、沙雷氏菌全稱為粘質(zhì)沙雷氏菌(serratia?marcescens)，屬于沙雷氏菌屬(serratia)。當前，國內(nèi)外關于粘質(zhì)沙雷氏菌的研究多集中于其次級代謝產(chǎn)物靈菌紅素、胞外酶以及其植物生防效應上。此外，還有報道指出粘質(zhì)沙雷氏菌能夠高產(chǎn)幾丁質(zhì)酶、酯酶等。因此，粘質(zhì)沙雷氏菌具有重要的實際應用價值。

3、同時，在粘質(zhì)沙雷氏菌的發(fā)酵生產(chǎn)以及應用過程中，不可避免的面臨著來自外界環(huán)境的環(huán)境脅迫效應，如溫度脅迫、酸堿脅迫、鹽脅迫等，而這些外界環(huán)境脅迫均影響了粘質(zhì)沙雷氏菌的生理活性，進而限制其發(fā)酵性能以及實際應用。因此進一步篩選具有更強的環(huán)境適應能力，同時兼具良好生物活性的粘質(zhì)沙雷氏菌意義重大。

4、針對現(xiàn)有技術中存在的問題，本發(fā)明的目的在于提供一種粘質(zhì)沙雷氏菌、菌苗及其制備方法和應用。具體的，本發(fā)明篩選獲得一株具有高環(huán)境脅迫耐受性，同時兼具清除自由基、調(diào)節(jié)機體免疫力，以及抗腫瘤等生物功效的粘質(zhì)沙雷氏菌?；谏鲜鲅芯砍晒?，從而完成本發(fā)明。

5、本發(fā)明的第一個方面，提供一種粘質(zhì)沙雷氏菌(serratia?marcescens)hl-1，所述的粘質(zhì)沙雷氏菌的保藏編號為cgmcc?no.31403。

6、該菌株系發(fā)明人經(jīng)誘變處理后獲得，對該菌株16s?rrna進行pcr擴增與測序(16srdna序列如seq?id?no.1所示)，結合生理生化指標表明該菌為粘質(zhì)沙雷氏菌。

7、本發(fā)明的第二個方面，提供上述粘質(zhì)沙雷氏菌hl-1在如下任意一種或多種中的應用：

8、(a)制備免疫調(diào)節(jié)的產(chǎn)品；

9、(b)制備預防、治療和/或輔助治療腫瘤的產(chǎn)品中；

10、本發(fā)明通過研究證明，上述粘質(zhì)沙雷氏菌hl-1及其發(fā)酵液具有清除自由基(abts自由基、dpph自由基和羥基自由基)活性，提高機體抗氧化能力，從而可進一步調(diào)節(jié)并提高機體免疫力。

11、本發(fā)明的又一具體實施方式中，所述的產(chǎn)品可以包含粘質(zhì)沙雷氏菌hl-1的發(fā)酵液、發(fā)酵液上清、發(fā)酵液沉淀、活菌和/或死菌。

12、其中，所述發(fā)酵液是指將粘質(zhì)沙雷氏菌hl-1菌種接種于培養(yǎng)基中，培養(yǎng)獲得的液體。本發(fā)明中，所述培養(yǎng)基可以為任意培養(yǎng)細菌的培養(yǎng)基，在本發(fā)明的一個具體實施方式中，所述培養(yǎng)基為lb培養(yǎng)基。

13、所述發(fā)酵液上清是指發(fā)酵液經(jīng)離心后的上層的澄清液體；內(nèi)含粘質(zhì)沙雷氏菌生長繁殖過程中的代謝產(chǎn)物(主要為胞外代謝產(chǎn)物)及一部分菌體碎片。

14、所述發(fā)酵液沉淀是指發(fā)酵液離心出來的液體沉淀，包括但不限于粘質(zhì)沙雷氏菌殘留的菌體、破碎的細胞和培養(yǎng)基質(zhì)的殘渣等。

15、所述的活菌即粘質(zhì)沙雷氏菌活的菌體，其可在宿主腸道內(nèi)進行定植以及繁衍等，從而增加粘質(zhì)沙雷氏菌的菌種數(shù)量。

16、所述的死菌即為已經(jīng)失去生命活力的粘質(zhì)沙雷氏菌，其已無法進行生長和繁殖，具體可以是在生產(chǎn)過程導致粘質(zhì)沙雷菌失去活力，如使用化學試劑(如β-丙內(nèi)酯、甲醛等)滅活或物理方式滅活(如高溫加熱或輻射)等。

17、所述的產(chǎn)品可以為藥物、保健品、醫(yī)藥原料、工業(yè)原料或保健品原料。

18、當所述產(chǎn)品為藥物時，具體地，所述的藥物還包括藥學上可接受的輔料。

19、進一步具體地，所述的藥學上可接受的輔料選自緩沖劑、賦形劑、稀釋劑、防腐劑、潤濕劑、乳化劑、潤滑劑、增稠劑、穩(wěn)定劑、增溶劑、懸浮劑以及助懸劑中任意一種或多種。

20、優(yōu)選地，所述藥學上可接受的輔料可以選自葡萄糖、水、乳糖、蔗糖、甘油、乙醇、丙二醇、甘露醇、玉米淀粉、明膠、海藻酸、微晶纖維素、高嶺土、磷酸二鈣、氯化鈉、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉和淀粉羥乙酸鈉等。在此不做具體限定。

21、具體地，所述的腫瘤在本發(fā)明中如本領域技術人員所知的那樣加以使用，其包括良性腫瘤和/或惡性腫瘤。良性腫瘤被定義為不能在體內(nèi)形成侵略性、轉移性腫瘤的細胞過度增殖。反之，惡性腫瘤被定義為能夠形成全身性疾病(例如在遠端器官中形成腫瘤轉移)的具有多種細胞異常和生化異常的細胞。

22、本發(fā)明的又一具體實施方式中，本發(fā)明的藥物可用于治療惡性瘤。可用本發(fā)明的藥物治療的惡性瘤的實例包括實體瘤和血液瘤。

23、實體瘤可以是乳腺、膀胱、骨、腦、中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)、結腸、內(nèi)分泌腺(如甲狀腺和腎上腺皮質(zhì))、食道、子宮內(nèi)膜、生殖細胞、頭和頸、肝、肺、喉和下咽的腫瘤、間皮瘤、卵巢、胰腺、前列腺、直腸、腎、小腸、軟組織、睪丸、胃、皮膚(如黑色素瘤)、輸尿管、陰道和外陰的腫瘤。

24、進一步具體地，所述的腫瘤可以是腹水瘤。

25、本發(fā)明的第三個方面，提供一種藥物，所述藥物其活性成分至少包括粘質(zhì)沙雷氏菌hl-1；所述的粘質(zhì)沙雷氏菌hl-1的保藏編號為cgmcc?no.31403。所述藥物可用于調(diào)節(jié)機體免疫活性和/或改善腫瘤。

26、具體地，所述的粘質(zhì)沙雷氏菌為其發(fā)酵液、發(fā)酵液上清、發(fā)酵液沉淀、活菌和死菌中的一種或多種。

27、進一步的，所述藥物其活性成分還可以包括其他任意已知的用于調(diào)節(jié)機體免疫活性和/或改善腫瘤的產(chǎn)品，所述產(chǎn)品可以是已知的化療藥物(如順鉑、多西他賽等)。

28、所述藥物可以為菌苗。

29、所述菌苗是對某一種特定的傳染病增強免疫能力、產(chǎn)生特異抗體的制劑，包括死亡的微生物制成的制劑、活的微生物但是通過篩選或基因工程減弱其毒性的微生物制成的菌苗以及活的并且毒性充分的微生物制成的菌苗。一般將菌苗分為活菌苗和死菌苗。在本發(fā)明中，所述菌苗可以為死菌苗。

30、本發(fā)明的藥物可通過已知的方式施用至體內(nèi)。例如通過靜脈全身遞送或者局部注射(如瘤內(nèi)注射)遞送到感興趣組織中。這樣的施用可以經(jīng)由單劑量或多劑量來進行。本領域技術人員理解的是，本發(fā)明中有待施用的實際劑量可以在很大程度上取決于多種因素而變化，如靶細胞、生物類型或其組織、待治療受試者的一般狀況、給藥途徑、給藥方式等等。

31、本發(fā)明的又一具體實施方式中，藥物施用對象可以是人和非人哺乳動物，如小鼠、大鼠、豚鼠、兔、狗、猴、猩猩等。

32、本發(fā)明的第四個方面，提供上述藥物的制備方法，所述制備方法包括培養(yǎng)上述粘質(zhì)沙雷氏菌hl-1。

33、具體地，所述的粘質(zhì)沙雷氏菌hl-1的培養(yǎng)基可以為培養(yǎng)細菌的任意培養(yǎng)基，在本發(fā)明的一個具體實施方式中，所述培養(yǎng)基為lb培養(yǎng)基。

34、進一步的，當所述藥物為菌苗制劑時，所述制備方法還包括對所述粘質(zhì)沙雷氏菌進行滅活處理。如使用化學試劑(如β-丙內(nèi)酯、甲醛等)滅活或物理方式(如高溫加熱或輻射等)滅活。在此不做具體限定。

35、本發(fā)明的第五個方面，提供一種調(diào)節(jié)機體免疫活性的方法，其特征在于，所述方法包括向受試者施用所述粘質(zhì)沙雷氏菌hl-1或所述藥物。

36、本發(fā)明的第六個方面，提供一種預防、治療和/或輔助治療腫瘤的方法，其特征在于，所述方法包括向受試者施用所述粘質(zhì)沙雷氏菌hl-1或所述藥物。

37、其中，本發(fā)明的第五和第六方面中，所述受試者是指已經(jīng)是治療、觀察或實驗的對象的動物，優(yōu)選指哺乳動物，最優(yōu)選指人。

38、上述一個或多個技術方案所取得的技術效果：

39、上述技術方案首次公開了一株粘質(zhì)沙雷氏菌hl-1，經(jīng)試驗驗證，其不僅具有良好的環(huán)境脅迫耐受性，同時兼具清除自由基、調(diào)節(jié)機體免疫力，以及抗腫瘤等生物功效的粘質(zhì)沙雷氏菌。

40、保藏說明：

41、菌株hl-1

42、保藏編號：cgmcc?no.31403；

43、分類命名：粘質(zhì)沙雷氏菌serratia?marcescens；

44、保藏日期：2024年7月25日；

45、保藏單位：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；

46、保藏單位簡稱：cgmcc；

47、保藏單位地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號。

技術實現(xiàn)思路