本發(fā)明涉及組織工程，具體涉及一種陣列式細(xì)胞培養(yǎng)芯片及其構(gòu)建方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、皮膚作為人體表面積最大的器官，具有面積大，異質(zhì)性和多層等特點(diǎn)。人體皮膚的主要功能是作為一種生理屏障來(lái)保護(hù)器官和組織，使其免受物理性、機(jī)械性、化學(xué)性和病原微生物性的侵襲。皮膚日常會(huì)許多化學(xué)物質(zhì)和生物制劑，包括化妝品、皮膚清潔劑、環(huán)境污染物和微生物病原體等。這些因素的迅速增加會(huì)引起各種皮膚反應(yīng)，如皮膚發(fā)炎、發(fā)炎、過(guò)敏甚至癌癥。皮膚在人體的生理方面具有保護(hù)、感覺(jué)、排泄、呼吸和分泌等功能，保護(hù)皮膚的健康對(duì)維持人體穩(wěn)態(tài)具有極其重要的作用。

2、化妝品的質(zhì)量評(píng)價(jià)主要是關(guān)注其安全性和功效性。自2009年以來(lái)，歐盟委員會(huì)一直在強(qiáng)調(diào)化妝品新法規(guī)，制定測(cè)試和營(yíng)銷禁令：禁止在動(dòng)物身上測(cè)試成品化妝品或成分，并禁止在歐盟內(nèi)對(duì)任何在動(dòng)物身上進(jìn)行測(cè)試的化妝品或成分進(jìn)行商業(yè)化。因此，化妝品行業(yè)受到了動(dòng)物試驗(yàn)限制的很大影響。因此體外替代技術(shù)成為化妝品安全性評(píng)價(jià)的必然趨勢(shì)，開(kāi)發(fā)出與生理相關(guān)的皮膚模型，以取代傳統(tǒng)的低效方法顯得尤為重要。

3、目前最常見(jiàn)的是體外細(xì)胞培養(yǎng)，通常是單層表皮角質(zhì)形成細(xì)胞和真皮成纖維細(xì)胞。雖然在體外可維持一定的結(jié)構(gòu)功能，具有通量高、操作簡(jiǎn)便、培養(yǎng)穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)，但也存在一些不足或缺陷，如細(xì)胞層次單一、細(xì)胞容易老化、給藥方式與人體存在一定的差異，僅在二維水平進(jìn)行單層細(xì)胞培養(yǎng)，其結(jié)果外推具有不確定性。組織工程技術(shù)結(jié)合細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)發(fā)展起來(lái)的重組人皮膚類似物，也稱為3d皮膚模型。該模型可以組裝成復(fù)雜的結(jié)構(gòu)，以模擬更多與生理相關(guān)的條件。3d細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)一定程度上解決了離體皮膚和體外皮膚細(xì)胞培養(yǎng)的局限性，在給藥方式上也更接近人體皮膚的實(shí)際情況。隨著微流控、微加工、組織工程等技術(shù)的發(fā)展，器官芯片成為了大規(guī)模藥物測(cè)試的最佳工具之一。器官芯片在體外模擬人體內(nèi)的器官功能，具有高度的仿生性和精確可控的微環(huán)境，顯著提高了對(duì)藥物反應(yīng)的預(yù)測(cè)能力。由新鮮皮膚組織提取的原代細(xì)胞衍生的人類皮膚微生理系統(tǒng)，成為用于替代傳統(tǒng)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)行皮膚生物學(xué)機(jī)制研究、生理學(xué)、藥理學(xué)研究及美容評(píng)估的體外模型。

4、但是目前的皮膚芯片仍然存在局限性：其一，現(xiàn)存皮膚芯片僅能培養(yǎng)一塊皮膚組織，難以進(jìn)行大規(guī)模的化學(xué)品測(cè)試。其二，體外構(gòu)建血管化組織是準(zhǔn)確進(jìn)行藥物測(cè)試的先決條件，而血管化組織的構(gòu)建一直是研究的難點(diǎn)，現(xiàn)有的片上組織往往缺乏血管結(jié)構(gòu)，事實(shí)情況下，皮膚真皮層具有豐富的毛細(xì)血管。

5、因此，有必要提出一種具有血管化組織的細(xì)胞培養(yǎng)芯片，以便于更好的模擬皮膚微環(huán)境，進(jìn)行準(zhǔn)確的藥物篩選和測(cè)試。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的主要目的在于提供一種陣列式細(xì)胞培養(yǎng)芯片及其構(gòu)建方法和應(yīng)用，通過(guò)陣列式細(xì)胞培養(yǎng)芯片，培養(yǎng)血管化的皮膚組織，以便于進(jìn)行準(zhǔn)確的藥物篩選和測(cè)試。

2、為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：

3、一種陣列式細(xì)胞培養(yǎng)芯片，包括疊放的上層芯片和下層芯片，上層芯片包括多個(gè)并排布置的培養(yǎng)區(qū)，相鄰的培養(yǎng)區(qū)之間設(shè)有間距，各培養(yǎng)區(qū)包括布置于兩端的入液口和出液口，入液口與出液口之間構(gòu)成血液通道，血液入口和血液出口之間設(shè)有多個(gè)培養(yǎng)腔，入液口、培養(yǎng)腔和出液口呈直線排布，下層芯片包括多個(gè)平行間隔布置的銜接槽道，各銜接槽道位于各培養(yǎng)區(qū)下方，入液口和出液口之間通過(guò)銜接槽道連通，各培養(yǎng)腔下端與銜接槽道連通，上層芯片和下層芯片之間還設(shè)有多個(gè)多孔膜，各多孔膜覆蓋培養(yǎng)區(qū)內(nèi)各培養(yǎng)腔下端。

4、優(yōu)選地，多孔膜上下兩側(cè)分別設(shè)有第一密封墊和第二密封墊，上層芯片和第一密封墊合攏并夾緊第一密封墊和第二密封墊以?shī)A緊多孔膜，第一密封墊上設(shè)有多個(gè)第二貫通孔，各第二貫通孔與各培養(yǎng)腔對(duì)齊，第二密封墊上設(shè)有貫通腰槽，第一密封墊和第二密封墊上還設(shè)有第一貫通孔和第三貫通孔，第一貫通孔和第三貫通孔分別與血液入口和血液出口對(duì)齊；貫通腰槽處設(shè)有沉槽，多孔膜放置在沉槽內(nèi)。

5、優(yōu)選地，銜接槽道內(nèi)設(shè)有多個(gè)頂柱，頂柱上端設(shè)有過(guò)流槽，頂柱上端抵靠多孔膜下端；頂柱設(shè)有多排，銜接槽道中央設(shè)有呈直線排列的多個(gè)可轉(zhuǎn)動(dòng)的調(diào)節(jié)柱，調(diào)節(jié)柱設(shè)有條形擋片，調(diào)節(jié)柱一端設(shè)有轉(zhuǎn)動(dòng)軸，轉(zhuǎn)動(dòng)軸與下層芯片轉(zhuǎn)動(dòng)連接并穿過(guò)下層芯片，轉(zhuǎn)動(dòng)軸端部設(shè)有環(huán)槽，還設(shè)有多個(gè)碟簧片，碟簧片設(shè)有u型卡槽，u型卡槽底端設(shè)有卡接部，卡接部與環(huán)槽卡接，碟簧片外緣抵靠在下層板底端。

6、優(yōu)選地，上層芯片上端還設(shè)有分區(qū)隔板，分區(qū)隔板包括多個(gè)平行間隔布置的條形分區(qū)槽，各條形分區(qū)槽設(shè)在各培養(yǎng)區(qū)上方，條形分區(qū)槽一側(cè)設(shè)有多個(gè)標(biāo)簽槽，各標(biāo)簽槽內(nèi)設(shè)有磁塊，還設(shè)有多個(gè)標(biāo)簽片，標(biāo)簽片設(shè)在標(biāo)簽槽中并被磁塊吸附，標(biāo)簽片一端指向培養(yǎng)腔。

7、優(yōu)選地，多孔膜孔徑為0.4-1μm。

8、本發(fā)明還提供了所述陣列式細(xì)胞培養(yǎng)芯片的構(gòu)建方法，包括以下步驟：

9、使用計(jì)算機(jī)輔助設(shè)計(jì)軟件繪制上層芯片和下層芯片的微通道結(jié)構(gòu)和微觀圖形，通過(guò)微加工技術(shù)在上層芯片和下層芯片基材表面加工；

10、依次將上層芯片、第一密封墊、多孔膜、第二密封墊和下層芯片對(duì)準(zhǔn)封接，形成陣列式細(xì)胞培養(yǎng)芯片。

11、優(yōu)選地，在所述的陣列式細(xì)胞培養(yǎng)芯片的構(gòu)建中，全程采用無(wú)菌操作。

12、優(yōu)選地，所述的上層芯片和下層芯片的材料包括聚甲基丙烯酸甲酯(pmma)、聚二甲基硅氧烷(pdms)、聚四氟乙烯(ptfe)或聚乳酸(pla)；選用無(wú)毒、無(wú)刺激性的材料制作器官芯片，減少對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的不利影響。

13、優(yōu)選地，所述各層芯片之間通過(guò)擠壓、鍵合或螺紋組裝的方式封接在一起。

14、優(yōu)選地，所述上層芯片和下層芯片的加工方法為3d打印方法、激光刻蝕方法、數(shù)控銑刻方法和熱壓法方法中的至少一種。

15、本發(fā)明還提供了所述陣列式細(xì)胞培養(yǎng)芯片進(jìn)行組織培養(yǎng)的方法，包括以下步驟：

16、對(duì)所述陣列式細(xì)胞培養(yǎng)芯片進(jìn)行滅菌處理；

17、向細(xì)胞培養(yǎng)芯片的組織培養(yǎng)區(qū)加入相應(yīng)細(xì)胞-基質(zhì)混合液，向所述血液通道內(nèi)加入培養(yǎng)液，對(duì)組織培養(yǎng)區(qū)的細(xì)胞進(jìn)行共同培養(yǎng)，獲得對(duì)應(yīng)的組織模型。

18、優(yōu)選地，所述細(xì)胞-基質(zhì)混合液的制備方法，包括以下步驟：

19、(1)細(xì)胞培養(yǎng)：將正常臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和角質(zhì)形成細(xì)胞放置于37℃，5%co2培養(yǎng)箱中進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)；

20、(2)細(xì)胞懸液：將培養(yǎng)瓶中的貼壁細(xì)胞分別消化為單細(xì)胞后，分別加入培養(yǎng)基，充分吹打混勻后，并加入培養(yǎng)基稀釋成適宜濃度的細(xì)胞懸液，隨后將其懸浮于基質(zhì)溶液中，獲得細(xì)胞-基質(zhì)、細(xì)胞-培養(yǎng)液混合液；

21、其中，臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的懸液濃度為1×106-5×106個(gè)/ml，成纖維細(xì)胞懸液的濃度為0.5×106-3×106個(gè)/ml，角質(zhì)形成細(xì)胞懸液的濃度為1×106-2×106個(gè)/ml。

22、優(yōu)選地，所述基質(zhì)溶液選自ⅰ型鼠尾膠原、牛纖維蛋白、膠原凝膠、透明質(zhì)酸、層粘連蛋或ⅰ型鼠尾膠原與牛纖維蛋白的混合物中的至少一種。

23、優(yōu)選地，為了便于血管組織的生成，將所述臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞懸浮于基質(zhì)溶液i，從而得到血管組織細(xì)胞-基質(zhì)混合液。

24、優(yōu)選地，所述基質(zhì)溶液i為ⅰ型鼠尾膠原或牛纖維蛋白溶液。

25、優(yōu)選地，所述成纖維細(xì)胞懸液懸浮于基質(zhì)溶液ii，所述角質(zhì)形成細(xì)胞懸浮于培養(yǎng)液中。

26、進(jìn)一步優(yōu)選地，所述基質(zhì)溶液ii為ⅰ型鼠尾膠原溶液和牛纖維蛋白溶液中的至少一種(固化成膠的主要成分，膠原是人體組織中重要成分，纖維蛋白是有利于血管生成的細(xì)胞外基質(zhì))，并添加少量透明質(zhì)酸和層粘連蛋白混合其中，增加仿生性。ⅰ型鼠尾膠原在構(gòu)建肝臟和血管時(shí)濃度在1.5~5mg/ml可達(dá)到較優(yōu)效果，太稀無(wú)法凝固或松散，太濃則硬度過(guò)高，既不符合體內(nèi)肝臟和血管的理化條件，也不利于細(xì)胞拉伸連接；ⅰ型鼠尾膠原在構(gòu)建真皮組織時(shí)濃度在2~6mg/ml可達(dá)到較優(yōu)效果；牛纖維蛋白有利于體外血管化組織的構(gòu)建，可為內(nèi)皮細(xì)胞拉伸為三維血管網(wǎng)絡(luò)提供支撐，濃度在1~6mg/ml可達(dá)到較優(yōu)效果。

27、更進(jìn)一步優(yōu)選地，透明質(zhì)酸濃度范圍在0.5~4mg/ml，層粘連蛋白濃度范圍1~2mg/ml；單一的細(xì)胞基質(zhì)很難滿足組織體外再生的所有要求，因此本發(fā)明將細(xì)胞基質(zhì)混合成復(fù)合材料，以利用每種成分的優(yōu)勢(shì)。

28、優(yōu)選地，所述纖維蛋白凝膠的制備方法，包括：分別配置纖維蛋白原液和凝血酶原液，隨后將二者混合均勻后，凝血酶終濃度3u/ml，即可獲得纖維蛋白凝膠。

29、通過(guò)以上步驟，可以制備出含有不同類型細(xì)胞的細(xì)胞-基質(zhì)混合液，為后續(xù)的組織器官模型構(gòu)建提供必要的材料。

30、具體的，所述陣列式細(xì)胞培養(yǎng)芯片進(jìn)行組織培養(yǎng)的方法，包括以下步驟：

31、s1.預(yù)處理：對(duì)構(gòu)建的陣列式細(xì)胞培養(yǎng)芯片進(jìn)行滅菌處理；

32、s2.血管組織構(gòu)建：將臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞-基質(zhì)混合液注入組織培養(yǎng)區(qū)，靜置一定時(shí)間，使細(xì)胞外基質(zhì)凝固，形成血管層；

33、s3.皮膚組織構(gòu)建：將成纖維細(xì)胞-基質(zhì)混合液注入組織培養(yǎng)區(qū)，靜置一定時(shí)間，使細(xì)胞外基質(zhì)凝固，形成真皮層；隨后再將角質(zhì)形成細(xì)胞-培養(yǎng)液注入組織培養(yǎng)區(qū)，使貼附于真皮層，形成表皮層；

34、s4.組織培養(yǎng)：從入液口緩慢加入培養(yǎng)液，排出血液通道內(nèi)的氣體，在搖臂上或連接蠕動(dòng)泵系統(tǒng)進(jìn)行動(dòng)態(tài)培養(yǎng)；

35、s5.表皮分化：將組織培養(yǎng)區(qū)中的培養(yǎng)基吸出，并將血液通道中的培養(yǎng)液替換為新的培養(yǎng)液，搖臂上或連接蠕動(dòng)泵系統(tǒng)下培育若干天后，即可形成具有角質(zhì)層的皮膚組織。

36、優(yōu)選地，s1中，所述的滅菌處理為采用紫外線對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)芯片進(jìn)行滅菌處理30-60min，以確保無(wú)菌環(huán)境。

37、優(yōu)選地，s2中，所述血管組織細(xì)胞-基質(zhì)混合液的加入量為30-50μl。

38、優(yōu)選地，s3中，所述成纖維細(xì)胞細(xì)胞-基質(zhì)混合液的加入量為50-100μl，角質(zhì)形成細(xì)胞-基質(zhì)混合液的加入量為80-120μl，以確保細(xì)胞均勻分布和吸附在細(xì)胞培養(yǎng)芯片中。

39、優(yōu)選地，s4中，從入液口緩慢加入培養(yǎng)液i，排出通道內(nèi)的氣體，同時(shí)向皮膚組織培養(yǎng)區(qū)加入培養(yǎng)液ii，并通過(guò)調(diào)整調(diào)節(jié)柱控制入液口和出液口的培養(yǎng)液高度不超過(guò)皮膚組織上表面水平線；同時(shí)，使用搖臂或蠕動(dòng)泵系統(tǒng)驅(qū)動(dòng)培養(yǎng)液在血液通道中進(jìn)行循環(huán)流動(dòng)，促進(jìn)細(xì)胞穩(wěn)定生長(zhǎng)和繁殖，保持細(xì)胞的活力和功能。

40、更優(yōu)選地，所述培養(yǎng)液i為以高糖dmem培養(yǎng)液為基液，添加0.1%抗生素、30~50ng/ml內(nèi)皮生長(zhǎng)因子egf和10%胎牛血清；

41、所述培養(yǎng)液ii為以高糖dmem培養(yǎng)液為基液，添加0.2%商用角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)添加劑、0.1%抗生素和10%胎牛血清，以促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞增殖。

42、優(yōu)選地，s4中，利用搖臂動(dòng)態(tài)培養(yǎng)時(shí)，翹板幅度為15°，搖晃頻率為15~50轉(zhuǎn)/分，電機(jī)功率為25w；連接蠕動(dòng)泵系統(tǒng)進(jìn)行動(dòng)態(tài)培養(yǎng)時(shí)，蠕動(dòng)泵兩端連接芯片的入液口和出液口，直接形成液體循環(huán)，或借助培養(yǎng)瓶形成循環(huán)，所述加入培養(yǎng)液的速度為100μl/min，所述培養(yǎng)液的加入量為1000~2000μl，運(yùn)行培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)液的流度為1μl/min；培養(yǎng)液的加入量與培養(yǎng)腔的個(gè)數(shù)有關(guān)，培養(yǎng)腔的個(gè)數(shù)越多，需要的培養(yǎng)液越多。

43、優(yōu)選地，所述動(dòng)態(tài)培養(yǎng)中，控制流體剪切力在0.01-10dyn/cm2范圍內(nèi)，模擬人體內(nèi)組織細(xì)胞生長(zhǎng)的動(dòng)態(tài)環(huán)境，動(dòng)態(tài)地進(jìn)行全層皮膚的養(yǎng)分補(bǔ)給與新陳代謝機(jī)制維持，以便于獲得高仿生的組織器官模型。

44、優(yōu)選地，s5中，為便于形成氣液界面，將皮膚組織培養(yǎng)區(qū)中的培養(yǎng)基吸出，并將血液通道中的培養(yǎng)液替換為新的培養(yǎng)液，進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)；在培養(yǎng)過(guò)程中，每2-3天更換血液通道中的培養(yǎng)液，不僅可以構(gòu)建具有氣-液界面培養(yǎng)微環(huán)境的皮膚組織，還可以通過(guò)替換新的培養(yǎng)液排出細(xì)胞產(chǎn)生的代謝物，并提供細(xì)胞新陳代謝所需的養(yǎng)料，促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)。

45、進(jìn)一步優(yōu)選地，所述新的培養(yǎng)液為表皮分化培養(yǎng)液，含有金屬離子、神經(jīng)酰胺和組織型纖溶酶原激活劑中的至少一種；這些成分對(duì)表皮的分化起到關(guān)鍵作用，選用合適的濃度，可以促進(jìn)表皮分化，縮短形成具有角質(zhì)層皮膚組織的時(shí)間。

46、所述神經(jīng)酰胺包括c2-神經(jīng)酰胺、c6-神經(jīng)酰胺。

47、更優(yōu)選地，所述金屬離子為鈣離子，更優(yōu)選地，鈣離子的濃度為1-5mmol/l，在此濃度范圍可以較好的促進(jìn)表皮分化。

48、更優(yōu)選地，所述新的培養(yǎng)液為以高糖dmem培養(yǎng)液為基液，添加0.1%抗生素、1.8mm氯化鈣、20~50ng/ml內(nèi)皮生長(zhǎng)因子egf和10%胎牛血清。

49、優(yōu)選的，s5中，將皮膚組織培養(yǎng)區(qū)中的組織細(xì)胞的培育10-15天后，形成具有角質(zhì)層的皮膚組織。

50、本發(fā)明還提供了所述陣列式細(xì)胞培養(yǎng)芯片在化妝品和藥品測(cè)試的應(yīng)用。

51、進(jìn)一步地，應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)芯片進(jìn)行化妝品和藥品測(cè)試具體方法為：分別采用系統(tǒng)給藥(口服、注射)和局部(透皮)兩種給藥方式進(jìn)行藥物檢測(cè)。對(duì)于系統(tǒng)給藥的藥物，由流體入口通孔進(jìn)入芯片中的流體通道中，動(dòng)態(tài)培養(yǎng)一定時(shí)間后對(duì)皮膚組織進(jìn)行檢測(cè)；對(duì)于透皮給藥的藥物，從皮膚組織培養(yǎng)的培養(yǎng)區(qū)上方加入，動(dòng)態(tài)培養(yǎng)一定時(shí)間后對(duì)皮膚組織進(jìn)行檢測(cè)。

52、基質(zhì)材料的力學(xué)強(qiáng)度是促進(jìn)細(xì)胞向某一特定方向分化的關(guān)鍵條件。本發(fā)明根據(jù)不同組織細(xì)胞的生長(zhǎng)特征，將其懸浮不同的基質(zhì)溶液中，促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)和繁殖。為了促進(jìn)血管組織生產(chǎn)，將臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞懸浮于濃度為2.5mg/ml牛纖維蛋白溶液中，使細(xì)胞外基質(zhì)凝固，形成血管層；將成纖維細(xì)胞細(xì)胞懸浮于濃度為2.5mg/ml?ⅰ型鼠尾膠原和濃度為2.5mg/ml牛纖維蛋白( v1 :v2=1:1)的混合液中，使其細(xì)胞外基質(zhì)凝固，形成真皮層，再接種角質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，使細(xì)胞貼附于真皮層，形成表皮層；同時(shí)在表皮分化期間的培養(yǎng)液中加入一定濃度的鈣離子，促進(jìn)表皮細(xì)胞的分化，縮短培養(yǎng)具有角質(zhì)層結(jié)構(gòu)皮膚組織的時(shí)間，為大規(guī)模的藥物篩選提供保障。

53、本發(fā)明提供的陣列式細(xì)胞培養(yǎng)芯片，通過(guò)動(dòng)態(tài)培養(yǎng)方式，模擬體內(nèi)微環(huán)境，從而獲得高仿生的組織器官模型，可實(shí)現(xiàn)多組織器官模型構(gòu)建，本發(fā)明細(xì)胞培養(yǎng)芯片構(gòu)建方法簡(jiǎn)單，可滿足不同組織器官的構(gòu)建，而且具有較強(qiáng)的屏障功能。

54、本發(fā)明提供的陣列式細(xì)胞培養(yǎng)芯片，能夠?qū)ν钙そo藥(培養(yǎng)區(qū)上方加藥)和口服注射等系統(tǒng)給藥(流體通道入口給藥)兩種給藥方式下的藥效進(jìn)行精確評(píng)估。

55、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果：

56、1.本發(fā)明的陣列式細(xì)胞培養(yǎng)芯片，可以在單個(gè)芯片上設(shè)置多個(gè)皮膚組織培養(yǎng)區(qū)，這種設(shè)計(jì)適合大規(guī)?；瘜W(xué)品的皮膚不良反應(yīng)測(cè)試，顯著提高測(cè)試效率和節(jié)約時(shí)間。

57、2.本發(fā)明的陣列式細(xì)胞培養(yǎng)芯片采用可拆卸式結(jié)構(gòu)，加工難度低，易拼裝，可重復(fù)利用度高；各層板方便拆開(kāi)，便于清洗內(nèi)部區(qū)域以及充分消毒。

58、3.本發(fā)明的細(xì)胞培養(yǎng)芯片設(shè)置有多組入液口和出液口，能夠滿足大規(guī)模的藥物測(cè)試需求；設(shè)置多個(gè)有組織培養(yǎng)區(qū)，不僅能夠滿足藥物測(cè)試時(shí)需要多組重復(fù)實(shí)驗(yàn)，還能分析不同濃度藥物對(duì)皮膚組織的影響，從而實(shí)現(xiàn)高通量的藥物篩選和精確的藥效評(píng)估。

59、4.本發(fā)明的陣列式細(xì)胞培養(yǎng)芯片能夠?yàn)榕囵B(yǎng)的皮膚組織提供氣液培養(yǎng)界面條件和血液流動(dòng)條件，真實(shí)模擬人體的流體微環(huán)境；傳統(tǒng)的皮膚模型難以模擬藥物通過(guò)血管運(yùn)輸?shù)倪^(guò)程，本發(fā)明在皮膚組織下方培養(yǎng)了血管組織，形成了內(nèi)皮屏障，可以更好的模擬藥物隨血管運(yùn)輸。

60、5.本發(fā)明的陣列式細(xì)胞培養(yǎng)芯片采用開(kāi)放式設(shè)計(jì)，便于使芯片加樣，同時(shí)開(kāi)放式設(shè)計(jì)便于培養(yǎng)組織的取出進(jìn)行后續(xù)的多手段分析測(cè)試。

61、6.本發(fā)明通過(guò)將臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞懸浮于牛纖維蛋白溶液，使細(xì)胞外基質(zhì)凝固，形成血管層；將成纖維細(xì)胞細(xì)胞懸浮于鼠尾膠原和纖維蛋白溶液混合物中，使其細(xì)胞外基質(zhì)凝固，形成真皮層，再接種角質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，使細(xì)胞貼附于真皮層，形成表皮層，構(gòu)建了血管化全層皮膚組織，為化妝品測(cè)試和藥物篩選提供平臺(tái)。