本發(fā)明屬于生物
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及clean-cl純化試劑盒及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：自從dna的雙螺旋結(jié)構(gòu)被人們解析開始，人們在探究健康與疾病的基因組的復(fù)雜性與差異性上做出了巨大的努力。為了支持人類基因組計(jì)劃的順利進(jìn)行，人們在儀器和試劑上做出了巨大的改進(jìn)。該計(jì)劃的完成使得人們強(qiáng)烈的意識(shí)到人們需要更多更好的技術(shù)與數(shù)據(jù)分析能力來回答隨之而來的一系列生物學(xué)問題。然而，通量的限制以及居高不下的測序成本成為了人們進(jìn)一步了解基因組的一道坎。2000年之后推出的高通量測序平臺(tái)很好地解決了這個(gè)問題，人類基因組測序的成本直接因此下降50000倍，并且由此產(chǎn)生了一個(gè)新的名詞：下一代測序(next-generationsequencing，ngs)。在過去的十年中，ngs技術(shù)不停的在進(jìn)步——測序的數(shù)據(jù)量增加了100-1000倍。這些技術(shù)上的進(jìn)展使得人們甚至可以在一條read上讀出整條基因組序列。根據(jù)veritasgenomics的數(shù)據(jù)，人類基因組測序的成本也已經(jīng)下降到1000美元/人。不僅如此，該技術(shù)已經(jīng)廣泛在臨床診斷上得到應(yīng)用。高通量測序技術(shù)的流程大致分為基因組dna提取、文庫構(gòu)建、上機(jī)測序和數(shù)據(jù)解讀。而其中的文庫構(gòu)建，以現(xiàn)在普遍的技術(shù)是需要進(jìn)行磁珠純化的，主要目的是去掉引物二聚體和雜質(zhì)等?，F(xiàn)有進(jìn)口磁珠純化試劑因其高昂的價(jià)格使得整體人類基因組檢測成本提高。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種磁珠純化試劑。本發(fā)明提供的磁珠純化試劑是將羧酸鹽磁珠speedbeadmagneticcarboxylatemodifiedparticles、tris-hcl溶液、edta溶液、氯化鈉、聚乙二醇和水混勻得到的溶液。上述試劑中，所述羧酸鹽磁珠speedbeadmagneticcarboxylatemodifiedparticles、所述tris-hcl溶液、所述edta溶液、所述氯化鈉和所述聚乙二醇的配比為205ul:(80-120)ul:(15-25)ul:(1-1.3)g:(1.5-2.2)g。上述試劑中，所述羧酸鹽磁珠speedbeadmagneticcarboxylatemodifiedparticles、所述tris-hcl溶液、所述edta溶液、所述氯化鈉和所述聚乙二醇的配比具體為205ul:100ul:20ul:1.17g:1.8g。上述試劑中，所述聚乙二醇為聚乙二醇11000；所述tris-hcl溶液的濃度為1m；所述edta溶液的濃度為0.5m；所述水為滅菌純化水。在本發(fā)明的具體實(shí)施例中，10ml的磁珠純化試劑是將205ul羧酸鹽磁珠speedbeadmagneticcarboxylatemodifiedparticles、100ultris-hcl溶液、20uledta溶液、1.17g氯化鈉和1.8g聚乙二醇混勻，滅菌純化水定容至10ml得到的。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供上述磁珠純化試劑的制備方法。本發(fā)明提供的上述磁珠純化試劑的制備方法包括如下步驟：(1)將羧酸鹽磁珠speedbeadmagneticcarboxylatemodifiedparticles至于離心管中；向所述離心管中加入tris-hcl溶液、edta溶液和水，混勻，得到體系甲；(2)向所述體系甲中加入氯化鈉和聚乙二醇，混勻，得到體系乙；(3)向所述體系乙中加入水，混勻，孵育，得到磁珠純化試劑。上述方法中，所述羧酸鹽磁珠speedbeadmagneticcarboxylatemodifiedparticles、所述tris-hcl溶液、所述edta溶液、所述氯化鈉和所述聚乙二醇的配比為205ul:(80-120)ul:(15-25)ul:(1-1.3)g:(1.5-2.2)g；在本發(fā)明的具體實(shí)施例中，所述speedbeadmagneticcarboxylatemodifiedparticles、所述tris-hcl溶液、所述edta溶液、所述氯化鈉和所述聚乙二醇的配比具體為205ul:100ul:20ul:1.17g:1.8g。上述方法中，所述聚乙二醇為聚乙二醇11000；所述tris-hcl溶液的濃度為1m；所述tris-hcl溶液的ph為8.0；所述edta溶液的濃度為0.5m；所述水為滅菌純化水。上述方法中，所述羧酸鹽磁珠speedbeadmagneticcarboxylatemodifiedparticles至于離心管之前還包括在室溫放置的步驟；所述室溫放置的時(shí)間為30分鐘，且放置期間每10分鐘渦旋振蕩1分鐘；所述混勻的方法為振蕩，所述振蕩的時(shí)間具體為3min；所述孵育的條件為8rpm孵育2小時(shí)。本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供一種純化試劑盒。本發(fā)明提供的純化試劑盒包括上述磁珠純化試劑或上述方法制備得到的磁珠純化試劑。本發(fā)明的純化試劑盒在具體的使用中，向樣本(如pcr結(jié)束后的反應(yīng)體系)中加入的上述磁珠純化試劑的量為所述樣本的體積(如pcr結(jié)束后的反應(yīng)體系的體積)的1.8倍。本發(fā)明的最后一個(gè)目的是提供上述磁珠純化試劑或上述方法制備得到的磁珠純化試劑或上述純化試劑盒的新用途。本發(fā)明提供了上述磁珠純化試劑或上述方法制備得到的磁珠純化試劑或上述純化試劑盒在如下1)-4)中任一種所述的應(yīng)用：1)核酸純化；2)文庫構(gòu)建；3)pcr體系純化；4)酶切和連接反應(yīng)體系純化。本發(fā)明提供了一種clean-cl純化試劑盒。本發(fā)明的clean-cl純化試劑盒是一款磁珠法dna產(chǎn)物純化試劑盒，該純化試劑盒中含有磁珠純化試劑，所述磁珠純化試劑是將羧酸鹽磁珠speedbeadmagneticcarboxylatemodifiedparticles、tris-hcl溶液、edta溶液、氯化鈉、聚乙二醇和水混勻得到的溶液，可有效結(jié)合大小為100-500bp的片段，有效去除dntp、引物、引物二聚體、接頭、鹽離子和其他雜質(zhì)。通過實(shí)驗(yàn)證明：本發(fā)明的clean-cl純化試劑盒中的磁珠純化試劑具有良好的可用性和穩(wěn)定性，可以保證建庫質(zhì)量，并且和現(xiàn)有技術(shù)中的純化試劑盒相比，本發(fā)明的clean-cl純化試劑盒的成本大大降低(根據(jù)市場價(jià)格：本發(fā)明的clean-cl純化試劑盒試劑成本：328.32元/50ml；beckmanagencourtampurexp-核酸純化試劑盒試劑成本：10281元/60ml；axygenaxypreptmmagpcrclean-upprotocol試劑成本：5694元/50ml)。因此，本發(fā)明的clean-cl純化試劑盒解決了現(xiàn)有進(jìn)口磁珠純化試劑價(jià)格高昂的問題，可廣泛應(yīng)用于sanger和ngs文庫構(gòu)建、pcr體系純化、酶切和連接反應(yīng)體系純化等。附圖說明圖1為安捷倫2100檢測儀的文庫質(zhì)檢結(jié)果。圖2為qubite3.0核酸檢測儀的文庫質(zhì)檢結(jié)果。具體實(shí)施方式下述實(shí)施例中的試劑及其購買處如表1所示：表1、試劑及其購買處下述實(shí)施例中的耗材設(shè)備及其購買處如表2所示：表2、耗材設(shè)備名稱規(guī)格型號廠家渦旋振蕩器si-0246scientificindustries旋轉(zhuǎn)混合器ptr-35grant-bio量筒20ml成都特斯特移液器1mleppendorf移液器200uleppendorf移液器100uleppendorf電子天平bsa423ssartorius離心管15mlfalcon實(shí)施例1、clean-cl純化試劑盒及其使用方法一、clean-cl純化試劑盒本發(fā)明的clean-cl純化試劑盒包括clean-cl磁珠純化試劑，clean-cl磁珠純化試劑由羧酸鹽磁珠speedbeadmagneticcarboxylatemodifiedparticles、1mtris-hcl溶液(ph8.0)、0.5medta溶液、氯化鈉、聚乙二醇11000和無菌純化水配置而成。10ml試劑量的clean-cl磁珠純化試劑中各組分的用量如表3所示。具體配置方法如下：表3、10ml試劑量的clean-cl磁珠純化試劑中各組分的用量(1)取205ul的羧酸鹽磁珠speedbeadmagneticcarboxylatemodifiedparticles室溫放置30分鐘，期間每10分鐘渦旋振蕩1分鐘。(2)取出15ml離心管(自帶刻度)，將離心管蓋旋下，用1ml移液器將室溫放置后的speedbeadmagneticcarboxylatemodifiedparticles至于離心管中。(3)用100ul移液器吸出100ul的1mtris-hcl溶液(ph8.0)加入到上步(2)中。(4)用100ul移液器吸出20ul的0.5medta溶液加入到上步(3)中。(5)用20ml量筒稱量5ml滅菌純化水加入到上步(4)中。(6)將15ml離心管蓋旋緊，打開渦旋振蕩器，振蕩3分鐘。(7)用電子天平稱量1.17g氯化鈉加入到上步(6)中。(8)用電子天平稱量1.8g聚乙二醇11000加入到上步(7)中。(9)將15ml離心管蓋旋緊，打開渦旋振蕩器，振蕩3分鐘。(10)用1ml移液器吸取滅菌純化水至上步(9)中，定容至10ml。(11)將上步定容好的溶液，旋好蓋子在室溫下插入到旋轉(zhuǎn)混合器上，將旋轉(zhuǎn)混合器上調(diào)整8rpm孵育2小時(shí)，得到clean-cl磁珠純化試劑，并將其放置到4度冰箱，保存?zhèn)溆?。本發(fā)明的clean-cl純化試劑盒包括如下三種規(guī)格：clean-cl-1(使用離心管)、clean-cl-96(使用96孔板)和clean-cl-384(使用384孔板)，根據(jù)樣本量可以選擇合適的clean-cl純化試劑盒。二、clean-cl純化試劑盒的使用方法采用clean-cl純化試劑盒對pcr結(jié)束后的反應(yīng)體系進(jìn)行純化，具體使用方法如下(以單一樣本采用1.5ml離心管為例)：1、將試劑盒中的clean-cl磁珠純化試劑從4度保存中拿至室溫平衡30分鐘。2、向樣本(pcr結(jié)束后的反應(yīng)體系)中加入適量的clean-cl磁珠純化試劑(加入clean-cl磁珠純化試劑的體積為1.8×pcr反應(yīng)體積)。3、在離心管中用移液器緩慢吸打至溶液完全混勻。4、蓋上管蓋，室溫放置5分鐘5、將離心管放置到1.5ml磁力架上，室溫放置5分鐘(5分鐘后磁珠會(huì)貼服在有磁力的管壁旁，dna將吸附在磁珠上)。6、從上步管中吸取上清液，去除上清液(不要碰到磁珠)，盡可能吸取干凈，室溫干燥2分鐘。7、向上步6的管中加入配置好的80％乙醇200ul。8、用移液器輕輕吸打混勻上步7含80％乙醇的磁珠。9、蓋上管蓋，室溫放置5分鐘。10、將離心管放置到1.5ml磁力架上，室溫放置5分鐘。11、從上步管中吸取上清液，去除上清液(不要碰到磁珠)，盡可能吸取干凈，室溫干燥2分鐘。12、重復(fù)7-11步。13、向管中加入所需體積的無菌滅菌水，用移液器吸打混勻。14、室溫放置5分鐘，轉(zhuǎn)移到磁力架上室溫放置5分鐘。15、吸取上步14中的上清液至新的離心管中。16、后續(xù)進(jìn)行其他實(shí)驗(yàn)安排。實(shí)施例2、clean-cl純化試劑盒的應(yīng)用以16份靜脈血液樣本為實(shí)驗(yàn)材料，采用bioo文庫構(gòu)建試劑盒和實(shí)施例1中的clean-cl純化試劑盒批量構(gòu)建文庫，檢測本發(fā)明clean-cl純化試劑盒中clean-cl磁珠純化試劑的穩(wěn)定性。同時(shí)以beckmanagencourtampurexp-核酸純化試劑盒和axygenaxypreptmmagpcrclean-upprotocol試劑盒作為對照，構(gòu)建平行文庫橫向比較本發(fā)明的clean-cl純化試劑盒與beckmanagencourtampurexp-核酸純化試劑盒和axygenaxypreptmmagpcrclean-upprotocol的差異性。建庫測試過程中的反應(yīng)條件、反應(yīng)試劑及磁珠用量等均一致，只有純化所用磁珠種類有差異。具體步驟如下：(一)試驗(yàn)前準(zhǔn)備1、環(huán)境要求實(shí)驗(yàn)室事先經(jīng)紫外線照射過夜，實(shí)驗(yàn)開始前用75％乙醇擦拭臺(tái)面。實(shí)驗(yàn)過程中不要隨意解除非實(shí)驗(yàn)物品并盡量減少走動(dòng)。2、試驗(yàn)器具用75％乙醇擦拭實(shí)驗(yàn)臺(tái)面、移液器、ep管架和磁力架。(二)試驗(yàn)設(shè)備及試劑耗材1、主要使用設(shè)備耗材試驗(yàn)主要使用設(shè)備耗材及廠家如表4所示。表4、主要使用設(shè)備耗材設(shè)備名稱規(guī)格廠家pcr儀4484073abi片段檢測儀2100安捷倫核酸定量儀qubit3.0life渦旋振蕩器si-0246scientificindustries旋轉(zhuǎn)混合器ptr-35grant-bio移液器1mleppendorf移液器200uleppendorf移液器100uleppendorf移液器10uleppendorf磁力架1.5ml-16孔life2、試驗(yàn)主要試劑試驗(yàn)主要試劑及廠家如表5所示。表5、試驗(yàn)主要試劑及廠家試劑名稱廠家nextflexrapiddna-seqkitbiooampurexpbeckmanaxypreptmmagpcrclean-upprotocolaxygenclean-cl實(shí)施例1中的clean-cl純化試劑盒highsensitivitydnareagents安捷倫(三)實(shí)驗(yàn)操作1、試劑盒室溫平衡將本發(fā)明的clean-cl純化試劑盒、ampurexp和axypreptmmagpcrclean-upprotocol三個(gè)磁珠試劑盒中的磁珠純化試劑至于室溫，放置30min。2、對純化樣本進(jìn)行1：1磁珠孵育結(jié)合(1)分別吸取3ng16份靜脈血液樣本的cfdna(使用<天跟游離dna提取試劑盒提取>)至新的pcr管，補(bǔ)足至32ul水，然后加入15ulnextflexend-repair&adenylationbuffermix(bioorapiddna-seqkit，貨號：5144-08)和3ulnextflexend-repair&adenylationenzymemix(bioorapiddna-seqkit，貨號：5144-08)，混勻10次，得到50ul的反應(yīng)體系；然后將50ul的反應(yīng)體系進(jìn)行孵育，如果是pcr儀孵育，則先22℃孵育20min，然后再72℃孵育20min。(2)連接接頭充分混勻nextflexligaseenzymemix(bioorapiddna-seqkit，貨號：5144-08)，避免分層，然后在pcr儀或水浴鍋中預(yù)熱至22℃；在冰上向每管的50ul的反應(yīng)體系中再加入47.5ul的nextflexligaseenzymemix和2.5ul的nextflexdnabarcode(bioorapiddna-seqkit，貨號：5144-08)，得到100ul的反應(yīng)體系；將100ul的反應(yīng)體系進(jìn)行孵育，如果是pcr儀孵育，則22℃孵育15min；如果是水浴鍋孵育，則22℃孵育17min。(3)磁珠純化向步驟(2)獲得的100ul的反應(yīng)體系分別加入180ul充分混勻的clean-cl純化試劑盒、beckmanagencourtampurexp-核酸純化試劑盒和axygenaxypreptmmagpcrclean-upprotocol中的磁珠純化試劑，輕輕吹打均勻，室溫孵育15min；然后室溫放置磁力架至少5min，使磁珠充分吸附在磁力架上，吸棄上清，收集沉淀，并將含有沉淀的反應(yīng)管置于磁力架上用80％乙醇的進(jìn)行洗雜，洗雜的具體步驟如下：1)向置于磁力架上的反應(yīng)管中加入200ul80％的乙醇溶液；2)室溫孵育30s，吸棄上清；3)重復(fù)步驟1)和2)；4)室溫靜置15min以晾干磁珠；5)每管加入52.5ulrsb(resuspensionbuffer)，充分混勻磁珠；6)室溫孵育2min，然后磁力架靜置5min；7)吸取50ul上清至一新的ep管；8)每管分別加入50ul充分混勻的clean-cl純化試劑盒、beckmanagencourtampurexp-核酸純化試劑盒和axygenaxypreptmmagpcrclean-upprotocol中的磁珠，輕輕吹打均勻，室溫孵育15min；9)然后室溫放置磁力架至少5min，使磁珠充分吸附在磁力架上；10)吸棄上清；11)然后向置于磁力架上的反應(yīng)管中加入200ul80％的乙醇溶液；12)室溫孵育30s，吸棄上清；13)重復(fù)步驟11)和12)；14)室溫靜置15min以晾干磁珠；15)每管加入22.5ulrsb(resuspensionbuffer)，充分混勻磁珠；16)室溫孵育2min，然后磁力架靜置5min；17)吸取20ul上清至一新的pcr管。(4)富集dna片段每管加入2ulnextflexprimermix(bioorapiddna-seqkit，貨號：5144-08)，再加入12ulnextflexpcrmastermix(bioorapiddna-seqkit，貨號：5144-08)，補(bǔ)水16ul，將體系調(diào)整到50ul，充分混勻，進(jìn)行pcr擴(kuò)增，得到pcr擴(kuò)增產(chǎn)物。pcr擴(kuò)增程序如下：98℃2min；98℃30s，65℃30s，72℃60s，12個(gè)循環(huán)；72℃5min，4℃hold。(5)磁珠純化向步驟(4)獲得的pcr擴(kuò)增產(chǎn)物中分別加入50ul充分混勻的clean-cl純化試劑盒、beckmanagencourtampurexp-核酸純化試劑盒和axygenaxypreptmmagpcrclean-upprotocol中的磁珠純化試劑，輕輕吹打均勻，室溫孵育15min；然后室溫放置磁力架至少5min，使磁珠充分吸附在磁力架上，吸棄上清，收集沉淀，并將含有沉淀的反應(yīng)管置于磁力架上用80％的乙醇溶液進(jìn)行洗雜，洗雜的具體步驟如下：1)向置于磁力架上的反應(yīng)管中加入200ul80％的乙醇溶液；2)室溫孵育30s，吸棄上清；3)重復(fù)步驟1)和2)；4)室溫靜置15min以晾干磁珠；5)每管加入52.5ulrsb(resuspensionbuffer)，充分混勻磁珠；6)室溫孵育2min，然后磁力架靜置5min；7)吸取50ul上清至一新的ep管；8)每管再加入50ul充分混勻的clean-cl純化試劑盒、beckmanagencourtampurexp-核酸純化試劑盒和axygenaxypreptmmagpcrclean-upprotocol中的磁珠，輕輕吹打均勻，室溫孵育15min；9)然后室溫放置磁力架至少5min，使磁珠充分吸附在磁力架上；10)吸棄上清；11)然后向置于磁力架上的反應(yīng)管中加入200ul80％的乙醇溶液；12)室溫孵育30s，吸棄上清；13)重復(fù)步驟11)和12)；14)室溫靜置15min以晾干磁珠；15)每管加入22.5ulrsb(resuspensionbuffer)，充分混勻磁珠；16)室溫孵育2min，然后磁力架靜置5min；17)吸取20ul上清至一新的pcr管。(四)文庫質(zhì)控分別進(jìn)行安捷倫2100檢測儀及qubite3.0核酸檢測儀進(jìn)行文庫質(zhì)檢。安捷倫2100質(zhì)檢說明(以下操作所用試劑均為<安捷倫highsensitivitydnareagents>)經(jīng)安捷倫2100進(jìn)行文庫質(zhì)檢。具體步驟如下：1、準(zhǔn)備凝膠染料混合液gel-dyemix(1)取出agilenthighsensitivitydnareagents試劑盒中的dna濃縮染料(藍(lán)色)和dna凝膠(紅色)，平衡試劑到室溫。大約30min。(2)渦旋dna濃縮染料(藍(lán)色)，然后用移液器吸取25ul染料，添加到一管dna凝膠中(紅色)。(3)充分渦旋混合液，離心。轉(zhuǎn)移到過濾柱中。(4)加載凝膠染料混合液gel-dyemix。(5)取一塊新的dna芯片，放在芯片注膠平臺(tái)上。(6)吸取9ul凝膠染料混合液加到標(biāo)記有g(shù)的孔內(nèi)。(7)確保注射器柱塞定位在1ml然后關(guān)閉芯片注膠平臺(tái)。(8)按壓柱塞，直到被夾子卡住。(9)等待計(jì)時(shí)60s，然后松開夾子。(10)等待5s，然后拉回柱塞到1ml的位置。(11)打開芯片注膠平臺(tái)，吸取9ul凝膠染料混合液加到其他標(biāo)記有g(shù)的孔內(nèi)。2、加載標(biāo)記物markers吸取5ulmarker(綠色)加到12個(gè)樣品孔內(nèi)和ladder孔內(nèi)，不要讓任何孔空著。3、加ladder和加樣(1)吸取1uldnaladder(黃色)到標(biāo)記有梯子的孔內(nèi)。(2)其他12個(gè)樣品孔內(nèi)，需要使用的孔內(nèi)添加1ul樣品，不需要使用的孔內(nèi)，添加1ul去離子水。(3)將芯片水平的放在芯片渦旋振蕩器上，2400rpm渦旋1min(計(jì)時(shí)器計(jì)時(shí))。(4)5min之內(nèi)芯片必須放在agilent2100上，按照軟件提示進(jìn)行dna電泳操作。4、上機(jī)(1)雙擊桌面上agilent2100的軟件圖標(biāo)，進(jìn)入系統(tǒng)。(2)在實(shí)驗(yàn)開始之前，先將清洗電極用的cleanerchip注滿超純水，放在芯片平臺(tái)上，蓋上儀器的蓋子，清洗15s左右，打開儀器蓋子，取出cleanerchip。將之前加完樣本的芯片放在儀器芯片平臺(tái)上，蓋上儀器的蓋子，按照軟件提示點(diǎn)擊軟件上的start按鈕，進(jìn)行dna電泳操作。qubite3.0核酸檢測儀進(jìn)行文庫質(zhì)檢的步驟如下：1、試劑配置(1)取出qubitreagent(hs)1ul加入199ulqubitbuffer，振蕩混均，備用。(2)吸取1ul文庫樣本，加入到上步備用配置液中，振蕩混均。2、上機(jī)檢測將上步混合有配置液的樣本蓋緊蓋子，放在qubit3.0檢測儀器上，點(diǎn)擊開始檢測。質(zhì)檢結(jié)果如表6、圖1和圖2所示。結(jié)果表明：三個(gè)磁珠試劑盒經(jīng)安捷倫2100檢測片段大小均無明顯差別(檢測目的片段區(qū)間為：280-300bp)；文庫濃度經(jīng)過qubit3.0檢測儀檢測濃度均為合格值(檢測濃度≥2ng/ul)。同一樣本建平行文庫的出庫濃度值比較均一，顯示片段大小也趨于一致，說明本發(fā)明的clean-cl磁珠純化試劑與xp磁珠和axygen磁珠建庫的效果趨于一致。本發(fā)明的clean-cl磁珠純化試劑批量構(gòu)建nipt文庫，從出庫濃度和片段值可以看出，建庫效果比較穩(wěn)定，可有效去除dntp、引物、引物二聚體、接頭、鹽離子和其他雜質(zhì)，應(yīng)用于sanger和ngs文庫構(gòu)建、pcr體系純化、酶切和連接反應(yīng)體系純化等。而且相對于現(xiàn)有技術(shù)中的純化試劑盒，本發(fā)明的clean-cl純化試劑盒中的clean-cl磁珠純化試劑的成本低，可以大大降低建庫成本。表6、質(zhì)檢結(jié)果注：xp＝beckmanagencourtampurexp-核酸純化試劑盒；axygen＝axygenaxypreptmmagpcrclean-upprotocol；自配磁珠＝clean-cl磁珠純化試劑。當(dāng)前第1頁12