本發(fā)明涉及貽貝肉酶解用酶和酶解純化工藝，屬于生物科技技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：
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貽貝，屬軟體動(dòng)物門(Mollosca)，瓣鰓綱，異柱目(Anisomyaria)，貽貝科(Mytidea)，是一種營(yíng)足絲附著生活的雙殼類軟體動(dòng)物，俗稱“海紅”、“殼菜”、“洗菜”，是我國(guó)重要的養(yǎng)殖貝類之一。貽貝生命力頑強(qiáng)，易于大量人工養(yǎng)殖，我國(guó)山東，遼寧、浙江、福建、廣東、海南等沿海省份都有廣闊的養(yǎng)殖海域。

貽貝肉鮮味美，營(yíng)養(yǎng)豐富素有“海中雞蛋”的美稱，其營(yíng)養(yǎng)成分高于一般的貝類、魚和蝦。每100g貽貝肉中含水分71.32，蛋白質(zhì)15.82g，脂肪6.08g，碳水化合物3.34g，鈣32mg，磷128mg，鈉330mg，鉀95mg，鐵5.5mg。鋅3mg。

貽貝的藥用價(jià)值已經(jīng)得到了普遍的認(rèn)同，據(jù)《本草綱目》記載，貽貝能治療“虛勞疲憊，精血衰老，吐血久痢，腸鳴腰痛”。

目前現(xiàn)有的貽貝研究過程中存在以下不足之處：

(1)對(duì)貽貝研究的學(xué)者只是提取貽貝肽或貽貝多糖，沒有把貽貝肉蒸煮液中蛋白質(zhì)和多糖綜合考慮提取，造成貽貝資源的浪費(fèi)。

(2)對(duì)貽貝的酶解用酶沒有系統(tǒng)篩選，不能確定到底哪一種酶或哪幾種酶最適合貽貝肉的酶解。

(3)對(duì)酶解產(chǎn)物的分子量沒有測(cè)定。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
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針對(duì)上述問題，本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種貽貝肉和蒸煮液的酶解純化工藝。

本發(fā)明的貽貝肉和蒸煮液的酶解純化工藝步驟為：步驟一：將蒸煮貽貝的水用截留分子量10ku-50ku膜進(jìn)行濃縮1-3倍，并進(jìn)行脫鹽得到濃縮液，將貽貝洗滌采肉后進(jìn)行粉碎，均漿為均漿料。

步驟二：將濃縮液與貽貝肉均漿料適量混合為混合料，混合料中蛋白質(zhì)底物濃度為5％-15％，將混合料升溫至40℃-50℃，用NaOH溶液調(diào)整pH至7.5-9.0，加復(fù)合蛋白酶，其中復(fù)合蛋白酶中蛋白總量為1.0％-5.0％，攪拌酶解3h-6h，調(diào)酶解液pH至5.0-7.0，升溫至70℃-95℃，滅酶10min-30min，用管式離心機(jī)進(jìn)行固、液、油三相分離，得酶解液；

步驟三：酶解液經(jīng)陶瓷膜濾清后為清液，清液由截留分子量3ku-30ku膜進(jìn)行分離，截留液多次用純水稀釋后再通過該膜，透過液為貽貝低聚肽，截留液為貽貝多糖液；

步驟四：在透過液中加入1％-5％的β-環(huán)糊精脫腥，脫腥液通過顆?；钚蕴恐M(jìn)一步脫腥，脫色，過柱液通過陶瓷膜脫炭濾清，得精濾液；

步驟五：精濾液經(jīng)減壓蒸發(fā)濃縮得濃縮液，濃縮液經(jīng)噴霧干燥得貽貝低聚肽粉，將步驟三中的截留液中加入3倍95％乙醇，攪拌，靜止后，分取沉淀，干燥，即得貽貝粗多糖。

本發(fā)明的有益效果：(1)貽貝肉中和貽貝蒸煮液的蛋白質(zhì)和多糖同時(shí)提取，使貽貝資源得到充分利用；

(2)酶解貽貝用的復(fù)合蛋白酶是經(jīng)單酶系統(tǒng)篩選的基礎(chǔ)上進(jìn)行復(fù)配，并經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，酶解收率≥90％。

(3)產(chǎn)品分子量小，分子量≤2000Du的低聚肽占總蛋白的比例≥90％，產(chǎn)品消化級(jí)收率高。

(4)工藝經(jīng)脫腥處理，產(chǎn)品沒有貽貝那種特有的腥味，口感好。

(5)由于采取綜合利用措施，生產(chǎn)過程中除清洗設(shè)備廢水排放外，生產(chǎn)過程中沒有廢棄物排放，做到綠色生產(chǎn)。

附圖說明：

為了易于說明，本發(fā)明由下述的具體實(shí)施及附圖作以詳細(xì)描述。

圖1為本發(fā)明的工藝流程結(jié)構(gòu)示意圖。

具體實(shí)施方式：

如圖1所示，本具體實(shí)施方式采用以下技術(shù)方案：所述的貽貝肉和蒸煮液的酶解純化工藝步驟為：步驟一：將蒸煮貽貝的水用截留分子量10ku-50ku膜進(jìn)行濃縮1-3倍，并進(jìn)行脫鹽得到濃縮液，將貽貝洗滌采肉后進(jìn)行粉碎，均漿為均漿料。

步驟二：將濃縮液與貽貝肉均漿料適量混合為混合料，混合料中蛋白質(zhì)底物濃度為5％-15％，將混合料升溫至40℃-50℃，用NaOH溶液調(diào)整pH至7.5-9.0，加復(fù)合蛋白酶，其中復(fù)合蛋白酶中蛋白總量為1.0％-5.0％，攪拌酶解3h-6h，調(diào)酶解液pH至5.0-7.0，升溫至70℃-95℃，滅酶10min-30min，用管式離心機(jī)進(jìn)行固、液、油三相分離，得酶解液；

步驟三：酶解液經(jīng)陶瓷膜濾清后為清液，清液由截留分子量3ku-30ku膜進(jìn)行分離，截留液多次用純水稀釋后再通過該膜，透過液為貽貝低聚肽，截留液為貽貝多糖液；

步驟四：在透過液中加入1％-5％的β-環(huán)糊精脫腥，脫腥液通過顆?；钚蕴恐M(jìn)一步脫腥，脫色，過柱液通過陶瓷膜脫炭濾清，得精濾液；

步驟五：精濾液經(jīng)減壓蒸發(fā)濃縮得濃縮液，濃縮液經(jīng)噴霧干燥得貽貝低聚肽粉，將步驟三中的截留液中加入3倍95％乙醇，攪拌，靜止后，分取沉淀，干燥，即得貽貝粗多糖。

實(shí)施例：

本實(shí)施例中用的貽貝從大連市普蘭店區(qū)皮口鎮(zhèn)農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)選購(gòu)，洗滌、采肉、勻漿，測(cè)定蛋白質(zhì)含量16.34％，多糖含量2.03％；貽貝蒸煮水從皮口鎮(zhèn)某海產(chǎn)品加工廠取得，測(cè)定其蛋白質(zhì)含量0.83％，多糖含量1.56％，貽貝肉和蒸煮液的酶解純化工藝步驟為：步驟一：經(jīng)膜濃縮至3∶1；

步驟二：貽貝勻漿14kg，加4倍量3∶1濃縮貽貝蒸煮液，蛋白質(zhì)底物濃度為6.59％，將混合料液在攪拌下升溫至45℃±1℃；用10％NaOH溶液調(diào)pH8.2±0.1，加復(fù)合蛋白酶(As1.397 30％-60％；2709堿性蛋白酶20％-50％；胰酶10-40％)198g(蛋白總量4.0％)，攪拌酶解4h；調(diào)酶解液pH6.0左右，升溫至70℃15min滅酶；管式離心機(jī)分離，去除固形物和油脂，得酶解液；

步驟三：酶解液經(jīng)過陶瓷膜進(jìn)一步凈化；凈化液用截留分子量3ku有機(jī)膜分離，得截留液體積較少時(shí)，分2-3次加適量純水稀釋后，繼續(xù)分離，將多糖中的低聚肽盡可能分離干凈得到透過液為貽貝低聚肽，截留液為貽貝多糖液；

步驟四：將透過液加入反應(yīng)釜中，加入蛋白總量3％的β-環(huán)糊精脫腥，60℃攪拌處理30min，處理液通過顆?；钚蕴恐M(jìn)行脫色脫味精制；過柱液用陶瓷膜脫炭，得澄清精制液；

步驟五：將澄清精制液減壓蒸發(fā)濃縮至固形物30％-40％，得濃縮液；濃縮液經(jīng)噴霧干燥得貽貝低聚肽，總收率大86.7％；經(jīng)測(cè)定貽貝低聚肽粉中低聚肽含量占總蛋白的比例達(dá)93.4％；且將步驟三中的截留液加入3倍95％乙醇，攪勻后靜置過夜；分取沉淀，干燥，得貽貝粗多糖。

以上顯示和描述了本發(fā)明的基本原理和主要特征和本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)。本行業(yè)的技術(shù)人員應(yīng)該了解，本發(fā)明不受上述實(shí)施例的限制，上述實(shí)施例和說明書中描述的只是說明本發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下，本發(fā)明還會(huì)有各種變化和改進(jìn)，這些變化和改進(jìn)都落入要求保護(hù)的本發(fā)明范圍內(nèi)。本發(fā)明要求保護(hù)范圍由所附的權(quán)利要求書及其等效物界定。