本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，涉及一種可用于基于ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞的腫瘤精準(zhǔn)治療方法的裝置。

背景技術(shù)：

腫瘤是當(dāng)今世界的重大疾病，其高死亡率和治療的復(fù)雜性已促使世界各國(guó)花費(fèi)大量的人力物力進(jìn)行研究，但目前為止尚未取得突破性的進(jìn)展，被美國(guó)醫(yī)學(xué)家悉達(dá)多·穆克吉(siddharthamukherjee)稱為眾病之王。

腫瘤的形成是一個(gè)多因素的復(fù)雜過程，這使對(duì)其研究變得更為復(fù)雜。腫瘤的治療是基于對(duì)腫瘤的認(rèn)識(shí)而展開的，經(jīng)歷了手術(shù)、放療、常規(guī)化療和靶向藥物治療及現(xiàn)階段的熱門研究方法免-疫細(xì)胞療法。

手術(shù)，顧名思義就是切除肉眼可見的腫瘤。此方法的難點(diǎn)是，切除與腫瘤的關(guān)系具有不確定性。由于腫瘤的復(fù)雜性，尤其是中晚期腫瘤，病人遠(yuǎn)處的組織可能已發(fā)生轉(zhuǎn)移和浸潤(rùn)，因此手術(shù)只能切除一部分，很難切干凈。以腦瘤為例，因?yàn)槿庋酆茈y分辨并切除小于1mm的腫瘤，而腦膠質(zhì)瘤這樣惡性程度很高的腫瘤細(xì)胞已經(jīng)在正常腦組織中擴(kuò)散，手術(shù)后腫瘤很快會(huì)復(fù)發(fā)。其次，即使切干凈了，如切除的不是原發(fā)性腫瘤，那么身體其他部位的原發(fā)性腫瘤還會(huì)發(fā)展。所以，目前手術(shù)僅作為一個(gè)早期腫瘤治療的推薦方法。

放療，就是利用大功率射線，將腫瘤組織破壞掉。此方法的難點(diǎn)是，如何精確捕捉腫瘤組織，對(duì)其進(jìn)行高精度的放療。即使范圍很精確，由于人體組織是立體構(gòu)造，以射線直線照射人體存在縱深方向的正常組織破壞問題，最小程度的破壞是不傷及腫瘤組織后部的正常人體組織。所以，放療目前僅作為一種減輕患者癥狀的一種手段，不能從根本上阻止腫瘤的發(fā)展。

常規(guī)化療，由于對(duì)正常細(xì)胞也有毒性，會(huì)造成對(duì)患者毒副作用大，使患者體質(zhì)明顯下降，而不具備再次化療的身體條件。此方法作為階段性治療措施，不可持續(xù)治療。

靶向藥物療法，主要是針對(duì)腫瘤細(xì)胞內(nèi)一些特異的基因突變進(jìn)行干預(yù)，以達(dá)到抑制和殺死腫瘤細(xì)胞的目的。靶向藥的優(yōu)點(diǎn)是大大減輕了常規(guī)化療帶來的毒副作用，但存在兩個(gè)難點(diǎn)，一個(gè)是很多腫瘤病人的腫瘤細(xì)胞沒有靶向藥干預(yù)的基因突變，目前只有5％的患者能用上靶向藥物進(jìn)行治療。即使是這一部分的患者，靶向藥治療的另一個(gè)難點(diǎn)就是耐藥性。由于腫瘤發(fā)病機(jī)理的復(fù)雜性，一個(gè)或幾個(gè)靶點(diǎn)根本控制不了腫瘤。因此，靶向藥只能延緩腫瘤的進(jìn)展，不能根本上控制腫瘤。

腫瘤免疫療法，是應(yīng)用免疫學(xué)原理和方法，提高腫瘤細(xì)胞的免疫原性和對(duì)效應(yīng)細(xì)胞殺傷的敏感性，激發(fā)和增強(qiáng)機(jī)體抗腫瘤免疫應(yīng)答，并應(yīng)用免疫細(xì)胞和效應(yīng)分子輸注宿主體內(nèi)，協(xié)同機(jī)體免疫系統(tǒng)殺傷腫瘤，抑制腫瘤生長(zhǎng)。目前，已有一些腫瘤免疫治療的藥物獲得美國(guó)fda的批準(zhǔn)并進(jìn)入臨床應(yīng)用?，F(xiàn)有的免疫治療包括卡控點(diǎn)治療和act(adoptivecelltransfer)細(xì)胞回輸治療。2011年，第一個(gè)被批準(zhǔn)的免疫卡控點(diǎn)藥物是bristol-myerssquibb公司的ctla4抑制單抗lpilimumab(yervoy)。當(dāng)醫(yī)生和醫(yī)學(xué)科學(xué)家們有了新的抗腫瘤藥物，很自然會(huì)想到聯(lián)合用藥的問題。隨著第二代免疫卡控點(diǎn)抑制劑——靶向pd-1/pd-l1的產(chǎn)生，fda加速批準(zhǔn)了一大批免疫卡控點(diǎn)藥物，比如pembrolizumab用于治療惡性黑色素瘤，nirolumab用于治療黑色素瘤和肺癌，等等。將pd-1和ctla4藥物聯(lián)合使用，極大地提高了惡性黑色素瘤患者的客觀反應(yīng)率。由于腫瘤微環(huán)境有明顯的抑制性，所以先用免疫卡控點(diǎn)接觸免疫抑制環(huán)境是較好的選擇。

免疫療法的聯(lián)合應(yīng)用包括：

(1)以免疫卡控點(diǎn)作為骨干的基礎(chǔ)選擇。如：同時(shí)使用ctla4和pd-1抑制劑，因?yàn)殡m然ctla4與pd1都表達(dá)在t細(xì)胞上，但他們的抑制機(jī)制不同。ctla4與cd28競(jìng)爭(zhēng)性cd80/86信號(hào)途徑，從而激活t細(xì)胞，而pd-1則是表達(dá)在激活的淋巴細(xì)胞上。

(2)與化療聯(lián)合。先用化療降低瘤負(fù)荷，繼而進(jìn)行免疫療法。

(3)與braf抑制劑聯(lián)合。

(4)與vegf靶向藥物聯(lián)合。

總之，免疫聯(lián)合療法的目的是希望得到一個(gè)長(zhǎng)時(shí)間的穩(wěn)定療效。然而，由于腫瘤形成機(jī)理的復(fù)雜性，以上這些應(yīng)用正處于臨床研究中，其對(duì)病人的效用還有待觀察。

綜上所述，腫瘤由于其復(fù)雜性，傳統(tǒng)的治療手段能夠起到的作用相當(dāng)有限。目前為止，腫瘤是一種發(fā)病機(jī)理尚未明確，治療手段極其有限，病程發(fā)展變

化多樣的疾病組合。不同腫瘤，由于原發(fā)位點(diǎn)的不同而具有不同的特點(diǎn)；同一腫瘤，不同病人之間的差異性也很大；同一病人身上，原發(fā)病灶與轉(zhuǎn)移病灶，甚至同一塊腫瘤組織的不同位置，腫瘤細(xì)胞的表型和基因突變都不同。因此，在腫瘤治療領(lǐng)域，缺乏一種統(tǒng)籌了病人、治療和研究方面系統(tǒng)考慮的、整合各種細(xì)分領(lǐng)域的精準(zhǔn)治療方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對(duì)目前腫瘤治療過程中容易產(chǎn)生耐藥性的問題，本發(fā)明提供了一種可用于基于ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞的腫瘤精準(zhǔn)治療方法的裝置。

本發(fā)明第一個(gè)方面是提供一種用于基于ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞的腫瘤精準(zhǔn)治療方法的裝置，包括：

——外殼，所述外殼上設(shè)有孔，用于將抽取的病人外周血加入；

——ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞分離設(shè)備，用于從所加入的外周血中分離ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞；優(yōu)選地，所述ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞分離設(shè)備位于所述外殼內(nèi)；

——ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)設(shè)備，用于檢測(cè)所分離的ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞；優(yōu)選地，所述ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)設(shè)備位于所述外殼內(nèi)；

——可封閉的ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備，用于將所分離的ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)、增殖；其中所述ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備可以是位于所述外殼內(nèi)，也可以是位于所述外殼外部；

——藥敏檢測(cè)設(shè)備，用于對(duì)培養(yǎng)的ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行藥敏實(shí)驗(yàn)；優(yōu)選地，所述藥敏檢測(cè)設(shè)備可以是位于所述外殼內(nèi)，也可以是位于所述外殼外部。

在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施例中，所述外殼的內(nèi)部空腔設(shè)有接收所述外周血檢測(cè)樣品的第一容器。第一容器可以是一個(gè)或多個(gè)。

更優(yōu)選地，所述外殼內(nèi)設(shè)有第一容器支架，用于放置第一容器。更優(yōu)選地，所述第一容器支架可繞其旋轉(zhuǎn)軸轉(zhuǎn)動(dòng)；所述第一容器支架設(shè)有多個(gè)第一容器放置槽，一個(gè)或多個(gè)第一容器放置槽環(huán)繞所述旋轉(zhuǎn)軸排布。

更優(yōu)選地，所述外殼內(nèi)設(shè)有第一容器取出件，用于將接收外周血檢測(cè)樣品后的第一容器從所述第一容器放置槽內(nèi)取出，優(yōu)選地，可以是抓取、推送等方式取出。

在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施例中，所述裝置包括第一容器傳送設(shè)備，用于將所述第一容器向ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞分離設(shè)備傳送。更優(yōu)選地，所述第一容器取出件將所取出的第一容器放置到第一容器傳送設(shè)備。

在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施例中，所述裝置包括第二容器，用于接收分離出來的ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞。

在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施例中，所述裝置包括第二容器傳送設(shè)備，用于將所述第二容器向ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)設(shè)備、ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備依次、或分別傳送。

更優(yōu)選地，所述第二容器傳送設(shè)備包括第一端取出件，用于將第二容器取出、放置在第二容器傳送設(shè)備上；和/或所述第二容器傳送設(shè)備包括第二端取出件，用于將第二容器傳送設(shè)備上的第二容器取出，放置到ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)設(shè)備和/或ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備上。

更優(yōu)選地，所述ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)設(shè)備和/或ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)有第二容器支架，用于放置第二容器。更優(yōu)選地，所述第二容器為多個(gè)，所述第二容器支架可繞其旋轉(zhuǎn)軸轉(zhuǎn)動(dòng)；所述第二容器支架設(shè)有多個(gè)第二容器放置槽，多個(gè)第二容器放置槽環(huán)繞所述旋轉(zhuǎn)軸排布。

在本發(fā)明的一種更優(yōu)選實(shí)施例中，所述ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備與所述藥敏檢測(cè)設(shè)備為一體化設(shè)置，例如，所述ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備與所述藥敏檢測(cè)設(shè)備共用一個(gè)可封閉腔室，所述可封閉腔室內(nèi)設(shè)置有溫度調(diào)節(jié)器、二氧化氮濃度檢測(cè)器、氣體進(jìn)出口、液體物料加入口。

在本發(fā)明的一種更優(yōu)選實(shí)施例中，所述可封閉腔室設(shè)有觀察窗口，所述觀察窗口可以是固定在可封閉腔室上的透明窗口，也可以是可伸入所述可封閉腔室的鏡頭?；蛘撸诹硪环N更優(yōu)選實(shí)施例中，所述可封閉腔室設(shè)有攝像和/或拍照設(shè)備。其中，所述攝像和/或拍照設(shè)備可以替代觀察窗口，也可以與所述觀察窗口同時(shí)存在。

在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施例中，所述ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞分離設(shè)備、ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)設(shè)備位于所述外殼內(nèi)，所述ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備與所述藥敏檢測(cè)設(shè)備位于外殼的外部，并且共用一個(gè)可封閉腔室。

在本發(fā)明的一種更優(yōu)選實(shí)施例中，設(shè)有多個(gè)可封閉腔室，每一個(gè)可封閉腔室內(nèi)設(shè)置一個(gè)或多個(gè)ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備與所述藥敏檢測(cè)設(shè)備。

在更優(yōu)選實(shí)施例中，設(shè)有運(yùn)輸通道將所述多個(gè)可封閉腔室連接，用于將第二容器送入預(yù)期的可封閉腔室內(nèi)。

在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施例中，所述裝置包括處理器、數(shù)據(jù)輸出設(shè)備，所述處理器操縱數(shù)據(jù)輸出設(shè)備將ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果和/或藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果輸出，或者所述處理器能夠?qū)tc循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果轉(zhuǎn)換為患病情況和/或能夠?qū)⑺幟魧?shí)驗(yàn)結(jié)果轉(zhuǎn)換為病人臨床用藥指導(dǎo)方案輸出。

在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施例中，所述裝置還包括儲(chǔ)存器，用于儲(chǔ)存來自病人每次外周血樣品的檢測(cè)數(shù)據(jù)，優(yōu)選地，所述檢測(cè)數(shù)據(jù)至少包括如下數(shù)據(jù)中的任意一種或幾種：ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果、患病情況、ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞耐藥情況、用藥方案、重復(fù)檢測(cè)次數(shù)。

在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施例中，每次外周血樣品檢測(cè)前和/或檢測(cè)后，所述處理器讀取同一病人的之前外周血樣品的檢測(cè)數(shù)據(jù)，并與其進(jìn)行對(duì)比和/或一并輸出。

在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施例中，所述第一容器的容積，不少于5ml，優(yōu)選為不少于5ml，優(yōu)選為5-10ml，更優(yōu)選6-9ml，優(yōu)選為7-8.5ml，一般為7.5-8ml。

本發(fā)明的第二個(gè)方面是提供一種基于ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞的腫瘤精準(zhǔn)治療方法，包括如下步驟：

步驟1：抽取病人外周血；

步驟2：分離ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞；

步驟3：通過ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果評(píng)價(jià)患病情況；

步驟4：ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)、增殖；

步驟5：平行藥敏實(shí)驗(yàn)，并根據(jù)ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞耐藥情況選出較佳的用藥方案；

步驟6：將選出的用藥方案，用于指導(dǎo)病人臨床用藥；

步驟7：一個(gè)療程后，抽取病人外周血；

步驟8：分離ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞；

步驟9：評(píng)估，如果檢出ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞，重復(fù)步驟4-步驟9；如果未檢出ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞，繼續(xù)使用臨床用藥方案，直至一段時(shí)間后再未檢測(cè)出ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞。

其中，所述的步驟1中，所述抽取病人外周血的量，不推薦少于5ml，優(yōu)選為不少于5ml，優(yōu)選為5-10ml，更優(yōu)選6-9ml，優(yōu)選為7-8.5ml，一般為7.5-8ml。

在本發(fā)明第二個(gè)方面的一種優(yōu)選實(shí)施例中，所述方法采用第一方面所述裝置實(shí)施。

在本發(fā)明第二個(gè)方面的一種優(yōu)選實(shí)施例中，所述方法包括：

步驟1：抽取病人外周血；并將外周血樣品加入到一個(gè)或多個(gè)第一容器；

步驟2：從第一容器的外周血樣品中分離ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞，并將分離的ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞加入到第二容器；

步驟3：通過ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果評(píng)價(jià)患病情況；

步驟4：將第二容器送入ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備，進(jìn)行ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)、增殖；

步驟5：平行藥敏實(shí)驗(yàn)，并根據(jù)ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞耐藥情況選出較佳的用藥方案；

步驟6：將選出的用藥方案，用于指導(dǎo)病人臨床用藥；

步驟7：一個(gè)療程后，抽取病人外周血；

步驟8：分離ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞；

步驟9：評(píng)估，如果檢出ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞，重復(fù)步驟4-步驟9；如果未檢出ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞，繼續(xù)使用臨床用藥方案，直至一段時(shí)間后再未檢測(cè)出ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞。

在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施例中，分離ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞的方法可以是：通過物理特性進(jìn)行分離、生物特性進(jìn)行分離，或者是這兩種分離方法的結(jié)合，例如可以通過體積、密度、帶電性和結(jié)構(gòu)性等物理性質(zhì)將ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞與血液中的其他細(xì)胞分開。

其中，通過物理特性進(jìn)行分離的方法包括：1)白細(xì)胞比ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞小，所以可使用8μm孔徑的濾膜去除白細(xì)胞。2)可使用ficoll(聚蔗糖)或其他類似的密度梯度介質(zhì)將ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞與紅細(xì)胞及血漿中的單核細(xì)胞分開。3)因?yàn)閏tc循環(huán)腫瘤細(xì)胞相對(duì)于血液中的其他細(xì)胞的體積和抗變形能力較高，可使用微芯片捕捉ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞，之后通過介電電泳(dep)依ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞的電荷性質(zhì)將其分離出來。

其中，通過生物特性進(jìn)行分離的方法包括：正選擇和負(fù)選擇兩類，其可以通過免疫方法或微流體方法實(shí)現(xiàn)?？贵w正選擇法使用的是epcam等上皮標(biāo)志物、n-鈣粘蛋白等抗間質(zhì)標(biāo)記物或plastin3等抗上皮細(xì)胞和間充質(zhì)標(biāo)記物。負(fù)選擇法則使用抗cd45的抗體來去除白細(xì)胞。

此外，分離時(shí)優(yōu)選使用專為不同腫瘤類型優(yōu)選的抗體混合液，確保獲得盡可能多的腫瘤細(xì)胞。比如：qiagen公司的adnatestcancerselect采用磁珠結(jié)合抗體從腫瘤病人的血液樣本中分離腫瘤細(xì)胞。

在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施例中，所述ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果至少包括ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞的數(shù)量(個(gè)數(shù))、特征類型等。所述ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果還可以包括對(duì)分離出來的ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行活性檢測(cè)，以判斷其具有的活性。

在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施例中，所述的ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)、增殖，其主要條件為盡可能模擬患者體內(nèi)的環(huán)境。在ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)與增殖技術(shù)方面，其主要條件為無污染環(huán)境、恒定的溫度、氣體的環(huán)境、細(xì)胞培養(yǎng)液ph濃度和細(xì)胞培養(yǎng)基。

所述的ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)的溫度優(yōu)選為36.5℃±0.5℃。

所述的ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)的氣體環(huán)境中優(yōu)選為含有co2。

在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施例中，所述的ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)的細(xì)胞培養(yǎng)液中加入nahco3，可提供co2；所述細(xì)胞培養(yǎng)液中也可以加入羥乙基哌嗪乙硫磺酸(hepes)，其對(duì)細(xì)胞無毒性，也起緩沖作用，有防止ph迅速變動(dòng)的特性，而用于開放細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中，其最大優(yōu)點(diǎn)是在開放式培養(yǎng)或細(xì)胞觀察時(shí)能維持較恒定的ph值。

所述的ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)的細(xì)胞培養(yǎng)基是培養(yǎng)細(xì)胞中供給細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)和促使細(xì)胞增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)，也是培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖的生存環(huán)境。在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施例中，細(xì)胞培養(yǎng)基采用合成培養(yǎng)基和/或天然培養(yǎng)基。合成培養(yǎng)基是根據(jù)細(xì)胞所需要物質(zhì)的種類和數(shù)量嚴(yán)格配置而成的，內(nèi)含碳水化合物、氨基酸、脂類、無機(jī)鹽、維生素、微量元素和細(xì)胞生長(zhǎng)因子等。天然培養(yǎng)基采用小牛血清。小牛血清含有多種細(xì)胞生長(zhǎng)因子、促貼附因子及其多活性物質(zhì)，與合成培養(yǎng)基合用，能使細(xì)胞順利增殖生長(zhǎng)。

在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施例中，所述藥敏試驗(yàn)優(yōu)選為平行藥敏實(shí)驗(yàn)，即將經(jīng)體外培養(yǎng)增殖的ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行一組藥物的平行敏感試驗(yàn)。所述藥物在治療過程中建議使用fda批準(zhǔn)的藥物，未經(jīng)fda批準(zhǔn)的藥物也可以使用的，但優(yōu)選為用于研究。同一組藥物的選擇是開放的，包括各種化療藥物、靶向藥物和生物制劑等，其同組內(nèi)可以是同類型的不同藥物，也可以是不同類型的藥物組合。所述藥物敏感試驗(yàn)可采用三磷酸腺苷生物發(fā)光法(atp-tca)和膠原凝膠液滴包埋培養(yǎng)藥物敏感性實(shí)驗(yàn)法(cd-dst)進(jìn)行。

所述較佳的用藥方案，可根據(jù)不同的上述試驗(yàn)方法得出。一般優(yōu)先選擇細(xì)胞對(duì)藥物敏感的用藥方案，可以是單一藥物或幾種藥物的組合。更優(yōu)選同時(shí)毒副作用小的用藥方案。

所述平行藥敏實(shí)驗(yàn)所用藥物優(yōu)選為選自：氮芥、氮甲、環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰胺、苯丁酸氮芥、噻替哌、白消安、六甲密胺、美法侖、卡莫司汀、司莫司汀、福莫司汀、尼莫司汀、洛莫司汀、硝卡芥、順鉑、卡鉑、奧沙利鉑、甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、替加氟、尿嘧啶替加氟、替加氟-尿嘧啶、去氧氟尿苷、卡莫氟卡培他濱、巰嘌呤、硫鳥嘌呤、羥基脲、阿糖胞苷、吉西他濱、氟達(dá)拉濱、阿柔比星、安丫啶、吡柔比星、表柔比星、多柔比星、放線菌素d、米托蒽醌、柔紅霉素、絲裂霉素、博來霉素、平陽霉素、伊達(dá)比星、伊立替康、羥喜樹堿、長(zhǎng)春地辛、長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春瑞濱、長(zhǎng)春新堿、紫杉醇、高三尖杉酯堿、斑蝥素、去甲斑蝥素、門冬酰胺酶、培門冬酶、阿那曲唑、氨魯米特、尼魯米特、苯丙酸諾龍、比卡魯胺、丙酸睪酮、布舍瑞林、達(dá)那唑、地塞米松、氟他胺、福美坦、復(fù)方睪酮酯、亮丙瑞林、戈那瑞林、戈舍瑞林、那法瑞林、曲普瑞林、黃體酮、己烯雌酚、甲地孕酮、甲睪酮、甲潑尼龍、甲羥孕酮、甲狀腺片、左甲狀腺素鈉、來曲唑、米托坦、氯烯雌醚、螺內(nèi)酯、潑尼松、潑尼松龍、氫化可的松、炔雌醇、他莫昔芬、依西美坦、巴利昔單抗、貝伐珠單抗、利妥昔單抗、帕尼單抗、曲妥珠單抗、替伊莫單抗、西妥昔單抗、硼替佐米、拉帕替尼、舒尼替尼、白介素-2、重組干擾素α、重組干擾素β-1α、重組人腺病毒、貝沙羅汀、達(dá)沙替尼、靛玉紅、厄洛替尼、氟維司群、吉非替尼、甲異靛、來那度胺、氯法齊明、氯膦酸二鈉、氯氧喹、米替福新、帕米膦酸二鈉、培美曲賽、三氧化二砷、石蒜內(nèi)胺、索拉非尼、維a酸、胸腺素、胸腺噴丁、血管內(nèi)皮抑素、伊班膦酸、伊馬替尼、唑來膦酸、阿巴瑞克、乙酸阿比特龍酯、曲妥珠單抗-ematansine偶聯(lián)物、阿法替尼、阿倫單抗、阿里維a酸、菊歐文菌門冬酰胺酶、阿西替尼、阿扎胞苷、鹽酸苯達(dá)莫司汀、蓓薩羅丁、波舒替尼、卡巴他賽、卡博替尼、卡非佐米、膽堿c11、鹽酸西那卡塞、氯法拉濱、達(dá)拉非尼、地加瑞克、地尼白介素2、狄諾塞麥、恩扎魯胺、甲磺酸艾日布林、谷卡匹酶、替伊莫單抗、依魯替尼、易普利姆瑪、伊沙匹隆、米托坦、奈拉濱、99-锝標(biāo)記抗癌單抗、奧法木單抗、美琥他辛、帕尼單抗、帕唑帕尼、培加酶、噴司他汀、帕妥珠單抗、泊馬度胺、帕納替尼、卟吩姆鈉、普拉曲沙、氯化鐳-223、拉布立酶、瑞格非尼、羅米地辛、腺泌素、鏈佐星、替西羅莫司、曲美替尼、戊柔比星、凡德他尼、維羅非尼、維莫德吉、伏立諾他、阿柏西普、tbo-filgrastim、technetium9tc99mtilmanocept、obinutuzumab、brentuximabbedotin、bufferedintrathecalelectrolyte/dextrose。

應(yīng)當(dāng)理解的是，上述藥物的選擇，優(yōu)選為參照已經(jīng)明確的適應(yīng)癥進(jìn)行藥敏實(shí)驗(yàn)。

本發(fā)明所提供的裝置，具有以下優(yōu)點(diǎn)：

1、采用ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行腫瘤的治療和評(píng)估，對(duì)病人的影響很小(只抽取病人5-10ml的外周血)。

2、采用病人的ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行體外藥敏試驗(yàn)，具有針對(duì)病人的個(gè)性化精準(zhǔn)治療效果。

3、采用不同臨床藥物進(jìn)行平行藥敏試驗(yàn)的方法，可每次優(yōu)選出一個(gè)臨床用藥方案，使腫瘤細(xì)胞始終面對(duì)不同類型藥物的攻擊，從而使腫瘤適應(yīng)藥物的能力變?nèi)?，可避免單一臨床用藥產(chǎn)生的耐藥性問題。

4、可實(shí)現(xiàn)循環(huán)的治療步驟和開放的臨床藥物選用方法，使本治療方法具有可持續(xù)性和發(fā)展性。

5、治療與評(píng)估相結(jié)合，且評(píng)估時(shí)間較短，有利于對(duì)病人進(jìn)行快速篩選臨床用藥，進(jìn)入個(gè)性化治療；

6、本發(fā)明所述的裝置能夠?qū)崿F(xiàn)患病評(píng)估、篩選臨床用藥的流程化，并且優(yōu)選地能夠?qū)崿F(xiàn)多個(gè)病人樣品的檢測(cè)和報(bào)告輸出。

附圖說明

圖1為本發(fā)明一種實(shí)施例中用于基于ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞的腫瘤精準(zhǔn)治療方法的裝置外部結(jié)構(gòu)示意圖；

圖2為本發(fā)明一種實(shí)施例中第一容器支架或第二容器支架結(jié)構(gòu)示意圖；

圖3為本發(fā)明一種實(shí)施例中用于基于ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞的腫瘤精準(zhǔn)治療方法的裝置的第一容器、第二容器輸送示意圖。

具體實(shí)施例

如圖1和3所示，本發(fā)明所述的用于基于ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞的腫瘤精準(zhǔn)治療方法的裝置，包括外殼1，外殼1的壁上設(shè)有外周血樣品加樣孔12、以及數(shù)據(jù)顯示屏11，外殼內(nèi)設(shè)有處理器(未顯示)、ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞分離設(shè)備6、第一容器支架2。

如圖2和圖3所示，第一容器支架2包括圓盤形或圓柱形的主體21，主體21的中心為旋轉(zhuǎn)軸23，環(huán)繞旋轉(zhuǎn)軸23分布有第一容器放置槽22，多個(gè)第一容器20置于第一容器放置槽22內(nèi)。

抽取至病人的外周血樣品，通過外殼1加入到第一容器20內(nèi)，有時(shí)候，需要多個(gè)樣品的情況下，每一個(gè)第一容器20加料后，第一容器支架2繞旋轉(zhuǎn)軸23旋轉(zhuǎn)，將下一個(gè)第一容器20置于外周血樣品加樣孔12下方，將后續(xù)樣品逐步加入。

加樣完畢后，抓手72將盛放外周血樣品的第一容器20逐一放置到第一容器傳送設(shè)備3，圖3顯示了一種含有兩個(gè)抓手72的抓取設(shè)備，兩個(gè)抓手72通過旋轉(zhuǎn)臂71連接，但是也可以是1個(gè)或更多個(gè)抓手，旋轉(zhuǎn)臂71旋轉(zhuǎn)的情況下，多個(gè)抓手72將交替工作將第一容器20取出并放置到第一容器傳送設(shè)備3。第一容器傳送設(shè)備3將第一容器送入ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞分離設(shè)備6，將ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞從外周血樣品中進(jìn)行分離。

分離ctc方法眾多，但通?？蓺w為兩大類：通過物理特性和生物特性進(jìn)行分離。實(shí)際操作中，多數(shù)分離方法會(huì)將這兩種原理相結(jié)合。

通過物理特性分離，可以是通過大小、密度、帶電性和結(jié)構(gòu)性這些物理性質(zhì)將ctc與血液中的其他細(xì)胞分開。白細(xì)胞比ctc小，所以可使用8μm孔徑的濾膜去除白細(xì)胞?？墒褂胒icoll(聚蔗糖)或其他類似的密度梯度介質(zhì)將ctc與紅細(xì)胞及血漿中的單核細(xì)胞分開。因ctc相對(duì)于血液中的其他細(xì)胞的體積和抗變形能力較高，可使用微芯片捕捉ctc，之后通過介電電泳(dep)依ctc的電荷性質(zhì)將其分離出來。

ctc的生物特性分離包括正選擇和負(fù)選擇兩類，可以通過免疫方法或微流體方法實(shí)現(xiàn)?？贵w正選擇法使用的是epcam等上皮標(biāo)志物，n-鈣粘蛋白等抗間質(zhì)標(biāo)記物或plastin3等抗上皮細(xì)胞和間充質(zhì)標(biāo)記物。負(fù)選擇法則使用抗cd45的抗體來去除白細(xì)胞。無論采用何種方法，分離捕獲此類數(shù)量較少的細(xì)胞時(shí)必須嚴(yán)格遵循操作方案。

此外，分離時(shí)應(yīng)使用專為不同腫瘤類型優(yōu)選的抗體混合液，確保獲得盡可能多的腫瘤細(xì)胞。比如：qiagen旗下的adnatestcancerselect采用磁珠結(jié)合抗體從腫瘤病人的血液樣本中分離腫瘤細(xì)胞。

分離后的ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞置于多個(gè)第二容器511，其中一個(gè)或多個(gè)第二容器511的樣品通過ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)設(shè)備(未顯示)。ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)項(xiàng)目包括ctc的數(shù)量(個(gè)數(shù))，特征類型等，可以直接在ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞分離設(shè)備6中進(jìn)行，也可以是輸送至單獨(dú)存在的ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)設(shè)備中檢測(cè)。處理器將檢測(cè)和評(píng)估結(jié)果通過顯示屏11輸出，或者還可以包括打印機(jī)等，將結(jié)果輸出。

隨著技術(shù)的進(jìn)步，ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)可進(jìn)行ctc分子特征的研究?？赏ㄟ^治療前后的ctc分子特征比較，進(jìn)行患者的病程分析與研究，如ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞的耐藥性問題。評(píng)估還包括對(duì)分離出來的ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行活性研究，以判斷其具有的活性。

其余的第二容器511通過第二容器輸送設(shè)備4送至ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備5。ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備5可以是多個(gè)單元組成，每一個(gè)病人的樣品單獨(dú)使用一個(gè)單元，如圖1所示，至少包括三個(gè)單元51、52和53，各個(gè)單元之間通過傳輸設(shè)備50連接，第二容器511通過傳輸設(shè)備50送至預(yù)期的單元中。

如圖3所示，ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備5內(nèi)設(shè)有第二容器支架510，其結(jié)構(gòu)與第一容器支架相同或類似，包括中心位置的旋轉(zhuǎn)軸513、環(huán)繞旋轉(zhuǎn)軸513分布的第二容器放置槽512。抓手72將第二容器511取出并放置到第二容器放置槽512內(nèi)。

ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備5內(nèi)主要條件為盡可能模擬患者體內(nèi)的環(huán)境。在ctc細(xì)胞體外培養(yǎng)與增殖技術(shù)方面，其主要條件為無污染環(huán)境、恒定的溫度、氣體的環(huán)境、細(xì)胞培養(yǎng)液ph濃度和細(xì)胞培養(yǎng)基。

無污染環(huán)境，培養(yǎng)環(huán)境無毒和無菌是保證ctc細(xì)胞生存的首要條件。當(dāng)ctc細(xì)胞放置于體外培養(yǎng)時(shí)，與體內(nèi)相比細(xì)胞丟失了對(duì)微生物和有毒物的防御能力，一旦被污染或自身代謝物質(zhì)積累等，可導(dǎo)致細(xì)胞死亡。因此，在進(jìn)行培養(yǎng)中，保持細(xì)胞生存環(huán)境無污染、代謝物及時(shí)清除等，是維持細(xì)胞生存的基本條件。

恒定的溫度：維持培養(yǎng)細(xì)胞旺盛生長(zhǎng)，必須有恒定適宜的溫度。培養(yǎng)細(xì)胞的最適溫度相當(dāng)于各種細(xì)胞或組織取材機(jī)體的正常溫度。ctc細(xì)胞培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)溫度為36.5℃±0.5℃，偏離這一溫度范圍，細(xì)胞的正常代謝會(huì)受到影響，甚至死亡。

氣體環(huán)境：氣體是ctc細(xì)胞培養(yǎng)生存的必需條件，所需氣體主要有氧氣和二氧化碳。氧氣參與三羧酸循環(huán)，產(chǎn)生供給細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的能量和合成細(xì)胞生長(zhǎng)所需要的各種成分。開放培養(yǎng)時(shí)，把ctc的細(xì)胞置于95％空氣加5％二氧化碳混合氣體環(huán)境中。二氧化碳既是細(xì)胞代謝產(chǎn)物，也是細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖所需成分，它在細(xì)胞培養(yǎng)中主要作用還在于維持培養(yǎng)基的ph值。

細(xì)胞培養(yǎng)液ph濃度：加入nahco3，可提供co2，但co2易于逸出，故最適合于封閉培養(yǎng)；而羥乙基哌嗪乙硫磺酸(hepes)因其對(duì)細(xì)胞無毒性，也起緩沖作用，有防止ph迅速變動(dòng)的特性，而用于開放細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中，其最大優(yōu)點(diǎn)是在開放式培養(yǎng)或細(xì)胞觀察時(shí)能維持較恒定的ph值。

細(xì)胞培養(yǎng)基：培養(yǎng)基是培養(yǎng)細(xì)胞中供給細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)和促使細(xì)胞增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)，也是培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖的生存環(huán)境。培養(yǎng)基采用合成培養(yǎng)基和天然培養(yǎng)基。合成培養(yǎng)基是根據(jù)細(xì)胞所需要物質(zhì)的種類和數(shù)量嚴(yán)格配置而成的，內(nèi)含碳水化合物、氨基酸、脂類、無機(jī)鹽、維生素、微量元素和細(xì)胞生長(zhǎng)因子等。天然培養(yǎng)基采用小牛血清。小牛血清含有多種細(xì)胞生長(zhǎng)因子、促貼附因子及其多活性物質(zhì)，與合成培養(yǎng)基合用，能使細(xì)胞順利增殖生長(zhǎng)。

培養(yǎng)過程中和培養(yǎng)完成后，通過攝像和/或拍照設(shè)備，或者通過觀察窗，觀察細(xì)胞培養(yǎng)、增殖情況。

培養(yǎng)完成后，參照外周血樣品加樣方式，ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備5設(shè)有藥物加樣孔，通過所述藥物加樣孔向第二容器511內(nèi)加入藥物。第二容器支架510旋轉(zhuǎn)，逐一將各個(gè)第二容器511置于藥物加樣孔下方，每個(gè)第二容器511內(nèi)加入不同的藥物，進(jìn)行平行藥敏實(shí)驗(yàn)，觀察藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

本發(fā)明裝置中，還可以包括儲(chǔ)存器，將藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果、患病情況、曾經(jīng)使用過的藥物(尤其是已經(jīng)產(chǎn)生耐藥性的藥物)等信息進(jìn)行儲(chǔ)存，每一次藥敏實(shí)驗(yàn)前，將之前的信息讀取，可以避免重復(fù)性的藥敏實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，也可以與之前的信息對(duì)比，判斷治療情況并選出較佳的用藥方案。

所述平行藥敏試驗(yàn)是將經(jīng)體外培養(yǎng)增殖的ctc細(xì)胞進(jìn)行一組藥物的平行敏感試驗(yàn)。所述藥物在治療過程中建議使用fda批準(zhǔn)的藥物，未經(jīng)fda批準(zhǔn)的藥物僅供用于研究。同一組藥物的選擇是開放的，包括各種化療藥物、靶向藥物和生物制劑等，其同組內(nèi)可以是同類型的不同藥物，也可以是不同類型的藥物組合。所述藥物敏感試驗(yàn)可采用三磷酸腺苷生物發(fā)光法(atp-tca)和膠原凝膠液滴包埋培養(yǎng)藥物敏感性實(shí)驗(yàn)法(cd-dst)進(jìn)行。優(yōu)選平行試驗(yàn)方案，可根據(jù)不同的上述試驗(yàn)方法得出。

實(shí)施例1

采用本發(fā)明所述的裝置，本發(fā)明還提供了一種基于ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞的腫瘤精準(zhǔn)治療方法，包括如下步驟：

步驟1：抽取某乳腺癌病人5-10ml外周血

所述抽取病人5-10ml外周血，一般抽取7.5ml，不推薦少于5ml。血液的儲(chǔ)存和運(yùn)輸必須在推薦溫度范圍以內(nèi)進(jìn)行，即4℃至10℃冷藏，或室溫環(huán)境15℃至30℃，血液不可冷凍，加入到第一容器中。

步驟2：分離ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞

所述的分離ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞應(yīng)在抽血后指定時(shí)間內(nèi)完成，一般按ctc分離方法不同而不同，可能為數(shù)小時(shí)或數(shù)天。如果超過指定時(shí)間，即使在存在抗凝劑的條件下，一些血液樣本也可能出現(xiàn)凝血和結(jié)塊。

分離后的ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞加入到第二容器。

步驟3：評(píng)估

無論是治療前還是治療后，ctc數(shù)量均是主要的參考指標(biāo)。臨床研究證實(shí)：當(dāng)血樣中的ctc高于cut-off(≥5個(gè)/7.5ml)時(shí)提示預(yù)后不好，當(dāng)樣本中的ctc低于該閾值(cut-off)則提示預(yù)后良好。更為重要的是，當(dāng)采取治療后，對(duì)比治療前的ctc數(shù)量，將有助于判斷患者疾病的發(fā)展或治療狀況。

ctc數(shù)量升高，提示療效不好；而ctc數(shù)量下降，提示療效較好。這種實(shí)時(shí)、靈敏、可靠的評(píng)估方法能夠幫助醫(yī)生正確判斷療效和制定高效的個(gè)體化治療方案。ctc評(píng)估比傳統(tǒng)的影像學(xué)更早、更準(zhǔn)確、更靈敏地判斷預(yù)后。大量研究表明：治療4周后監(jiān)測(cè)ctc對(duì)于預(yù)后判斷的結(jié)果與傳統(tǒng)影像學(xué)在治療12周后的判斷結(jié)果極其吻合。而且，當(dāng)ctc數(shù)值大于等于cut-off值時(shí)，ctc評(píng)估對(duì)于預(yù)后判斷比影像學(xué)更準(zhǔn)確。

評(píng)估結(jié)果通過顯示屏輸出，供醫(yī)生參考。

步驟4：ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)、增殖

第二容器中的ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞送入ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備，進(jìn)行體外培養(yǎng)增殖。

步驟5：平行藥敏實(shí)驗(yàn)，優(yōu)選其中一個(gè)方案

儲(chǔ)存器中信息顯示，該患者已經(jīng)對(duì)環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰胺、依西美坦藥物產(chǎn)生耐藥性，因此，藥敏實(shí)驗(yàn)時(shí)，排除上述三種藥物，選擇如下藥物進(jìn)行平行藥敏實(shí)驗(yàn)：噻替哌、美法侖、甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、尿嘧啶替加氟、去氧氟尿苷、替加氟、卡莫氟、替加氟-尿嘧啶、卡培他濱、阿柔比星、吡柔比星、表柔比星、多柔比星、米托蒽醌、絲裂霉素、平陽霉素、長(zhǎng)春地辛、長(zhǎng)春堿、長(zhǎng)春新堿、紫杉醇、阿那曲唑、氨魯米特、苯丙酸諾龍、布舍瑞林、福美坦、復(fù)方睪酮酯、戈那瑞林、戈舍瑞林、黃體酮、己烯雌酚、甲地孕酮、甲羥孕酮、來曲唑、亮丙瑞林、潑尼松龍、氫化可的松、曲普瑞林、炔雌醇、他莫昔芬、托瑞米芬、拉帕替尼、利妥昔單抗、曲妥珠單抗、白介素-2、氟維司群、重組干擾素β-1α、氯氧喹。

藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明，長(zhǎng)春新堿、紫杉醇、重組干擾素β-1α具有最佳的抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)效果。

步驟6：將優(yōu)選的平行藥敏實(shí)驗(yàn)方案，指導(dǎo)病人臨床用藥

所述指導(dǎo)病人臨床用藥方案是基于步驟5得出優(yōu)選方案，即選擇長(zhǎng)春新堿、紫杉醇和重組干擾素β-1α作為治療藥物。醫(yī)生選擇了紫杉醇作為治療藥物，其用藥指導(dǎo)參考所選臨床藥物的使用說明進(jìn)行。

步驟7：一個(gè)療程后，抽取病人5-10ml外周血

所述的一個(gè)療程的時(shí)間，參考步驟6中選用的臨床藥物使用說明而定。所述的抽取病人5-10ml外周血的數(shù)量，應(yīng)與前一次抽取病人外周血的數(shù)量相一致，如同樣抽取7.5ml。采用統(tǒng)一的外周血抽取量是為了治療前后進(jìn)行ctc評(píng)估有一個(gè)統(tǒng)一的對(duì)比條件。

步驟8：分離ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞

所述分離ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞，方法同步驟2，采用同一種分離方法和條件，以便進(jìn)行治療前后ctc評(píng)估有一個(gè)統(tǒng)一的對(duì)比條件。

步驟9：評(píng)估

步驟9所述的評(píng)估方法、條件都按照步驟3進(jìn)行，同樣是為了統(tǒng)一評(píng)估方法。一段時(shí)間評(píng)估時(shí)未檢出ctc，可判定療程進(jìn)展良好，提示病人腫瘤擴(kuò)散得以控制。所述的一段時(shí)間，視病情和藥物而定，一般為所用臨床藥物的連續(xù)三個(gè)療程時(shí)間為宜。即一般情況下，連續(xù)三個(gè)所用臨床藥物療程后在進(jìn)行ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞評(píng)估時(shí)未檢出，即可判定為病情得到穩(wěn)定控制。一旦檢出ctc，將重復(fù)上述步驟4，進(jìn)入ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)、增殖步驟，進(jìn)而繼續(xù)步驟5-9之所有流程，進(jìn)入診療循環(huán)。一次、二次的未檢出ctc，可繼續(xù)延用所優(yōu)選之臨床用藥方案。

該病人未檢出ctc，可以延續(xù)之前的用藥方案。

實(shí)施例2

本發(fā)明所述的基于ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞的腫瘤精準(zhǔn)治療方法的第二個(gè)實(shí)施例，包括如下步驟：

步驟1：抽取前列腺癌病人5-10ml外周血

所述抽取病人5-10ml外周血，一般抽取7.5ml，不推薦少于5ml。血液的儲(chǔ)存和運(yùn)輸必須在推薦溫度范圍以內(nèi)進(jìn)行，即4℃至10℃冷藏，或室溫環(huán)境15℃至30℃，血液不可冷凍。

步驟2：分離ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞

所述的分離ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞應(yīng)在抽血后指定時(shí)間內(nèi)完成，一般按ctc分離方法不同而不同，可能為數(shù)小時(shí)或數(shù)天。如果超過指定時(shí)間，即使在存在抗凝劑的條件下，一些血液樣本也可能出現(xiàn)凝血和結(jié)塊。

步驟3：評(píng)估

臨床研究證實(shí)：當(dāng)血樣中的ctc高于cut-off(≥5個(gè)/7.5ml)時(shí)提示預(yù)后不好，當(dāng)樣本中的ctc低于閾值(cut-off)則提示預(yù)后良好。更為重要的是，當(dāng)采取治療后，對(duì)比治療前的ctc數(shù)量，將有助于判斷患者疾病的發(fā)展或治療狀況。

ctc數(shù)量升高，提示療效不好；而ctc數(shù)量下降，提示療效較好。這種實(shí)時(shí)、靈敏、可靠的評(píng)估方法能夠幫助醫(yī)生正確判斷療效和制定高效的個(gè)體化治療方案。ctc評(píng)估比傳統(tǒng)的影像學(xué)更早、更準(zhǔn)確、更靈敏地判斷預(yù)后。大量研究表明：治療4周后監(jiān)測(cè)ctc對(duì)于預(yù)后判斷的結(jié)果與傳統(tǒng)影像學(xué)在治療12周后的判斷結(jié)果極其吻合。而且，當(dāng)ctc數(shù)值大于等于cut-off值時(shí)，ctc評(píng)估對(duì)于預(yù)后判斷比影像學(xué)更準(zhǔn)確。ctc評(píng)估比單獨(dú)的生物學(xué)標(biāo)記物更好地判斷療效和預(yù)后。研究表明：在前列腺癌中，ctc評(píng)估對(duì)于預(yù)后的判斷比傳統(tǒng)的標(biāo)記物psa更準(zhǔn)確和靈敏。

步驟4：ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)、增殖

步驟5：平行藥敏實(shí)驗(yàn)，優(yōu)選其中一個(gè)方案

選擇如下藥物進(jìn)行平行藥敏實(shí)驗(yàn)：順鉑、替加氟、卡莫氟、多柔比星、米托蒽醌、布舍瑞林、達(dá)那唑、氟他胺、戈那瑞林、戈舍瑞林、黃體酮、己烯雌酚、甲地孕酮、甲羥孕酮、氟烯雌醚、那法瑞林、尼魯米特、潑尼松龍、氫化可的松、曲普瑞林、炔雌醇、他莫昔芬。

其中，布舍瑞林、他莫昔芬合用方案效果最佳。

步驟6：將優(yōu)選的平行藥敏實(shí)驗(yàn)方案，指導(dǎo)病人臨床用藥

所述指導(dǎo)病人臨床用藥方案是基于步驟5得出優(yōu)選方案，即布舍瑞林、他莫昔芬合用。其用藥指導(dǎo)參考所選臨床藥物的使用說明進(jìn)行。

步驟7：一個(gè)療程后，抽取病人5-10ml外周血

所述的一個(gè)療程的時(shí)間，參考步驟6中選用的臨床藥物使用說明而定。所述的抽取病人5-10ml外周血的數(shù)量，應(yīng)與前一次抽取病人外周血的數(shù)量相一致，如同樣抽取7.5ml。采用統(tǒng)一的外周血抽取量是為了治療前后進(jìn)行ctc評(píng)估有一個(gè)統(tǒng)一的對(duì)比條件。

步驟8：分離ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞

所述分離ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞，方法同步驟2，采用同一種分離方法和條件，以便進(jìn)行治療前后ctc評(píng)估有一個(gè)統(tǒng)一的對(duì)比條件。

步驟9：評(píng)估

(1)一段時(shí)間未檢出ctc，病情得到控制，病人進(jìn)入觀察狀態(tài)；(2)檢出ctc，重復(fù)以上步驟4及以后步驟；(3)未檢出ctc，繼續(xù)使用臨床用藥方案。

步驟9所述的評(píng)估方法、條件都按照步驟3進(jìn)行，同樣是為了統(tǒng)一評(píng)估方法。一段時(shí)間評(píng)估時(shí)未檢出ctc，可判定療程進(jìn)展良好，提示病人腫瘤擴(kuò)散得以控制。所述的一段時(shí)間，視病情和藥物而定，一般為所用臨床藥物的連續(xù)三個(gè)療程時(shí)間為宜。即一般情況下，連續(xù)三個(gè)所用臨床藥物療程后在進(jìn)行ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞評(píng)估時(shí)未檢出，即可判定為病情得到穩(wěn)定控制。一旦檢出ctc，將重復(fù)上述步驟4，進(jìn)入ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)、增殖步驟，進(jìn)而繼續(xù)步驟5-9之所有流程，進(jìn)入診療循環(huán)。一次、二次的未檢出ctc，可繼續(xù)延用所優(yōu)選之臨床用藥方案。

該病人未檢出ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞，延續(xù)之前的用于方案。

實(shí)施例3

本發(fā)明所述的基于ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞的腫瘤精準(zhǔn)治療方法的第三個(gè)實(shí)施例，包括如下步驟：

步驟1：抽取結(jié)腸癌病人5-10ml外周血

所述抽取病人5-10ml外周血，一般抽取7.5ml，不推薦少于5ml。血液的儲(chǔ)存和運(yùn)輸必須在推薦溫度范圍以內(nèi)進(jìn)行，即4℃至10℃冷藏，或室溫環(huán)境15℃至30℃，血液不可冷凍。

步驟2：分離ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞

所述的分離ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞應(yīng)在抽血后指定時(shí)間內(nèi)完成，一般按ctc分離方法不同而不同，可能為數(shù)小時(shí)或數(shù)天。如果超過指定時(shí)間，即使在存在抗凝劑的條件下，一些血液樣本也可能出現(xiàn)凝血和結(jié)塊。

步驟3：評(píng)估

無論是治療前還是治療后，ctc數(shù)量均是主要的參考指標(biāo)。臨床研究證實(shí)：當(dāng)血樣中的ctc高于cut-off(≥3個(gè)/7.5ml)時(shí)提示預(yù)后不好，當(dāng)樣本中的ctc低于閾值(cut-off)則提示預(yù)后良好。更為重要的是，當(dāng)采取治療后，對(duì)比治療前的ctc數(shù)量，將有助于判斷患者疾病的發(fā)展或治療狀況。

ctc數(shù)量升高，提示療效不好；而ctc數(shù)量下降，提示療效較好。這種實(shí)時(shí)、靈敏、可靠的評(píng)估方法能夠幫助醫(yī)生正確判斷療效和制定高效的個(gè)體化治療方案。ctc評(píng)估比傳統(tǒng)的影像學(xué)更早、更準(zhǔn)確、更靈敏地判斷預(yù)后。大量研究表明：治療4周后監(jiān)測(cè)ctc對(duì)于預(yù)后判斷的結(jié)果與傳統(tǒng)影像學(xué)在治療12周后的判斷結(jié)果極其吻合。而且，當(dāng)ctc數(shù)值大于等于cut-off值時(shí)，ctc評(píng)估對(duì)于預(yù)后判斷比影像學(xué)更準(zhǔn)確。

步驟4：ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)、增殖

步驟5：平行藥敏實(shí)驗(yàn)，優(yōu)選其中一個(gè)方案

該病人對(duì)奧沙利鉑耐藥，因此排除該藥物。選擇如下藥物進(jìn)行平行藥敏實(shí)驗(yàn)：尼莫司汀、去氧氟尿苷、替加氟、卡莫氟、替加氟-尿嘧啶、卡培他濱、表柔比星、絲裂霉素、貝伐珠單抗、帕尼單抗、西妥昔單抗。

其中，替加氟-尿嘧啶、帕尼單抗、絲裂霉素、卡培他濱抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)效果較佳。

步驟6：將優(yōu)選的平行藥敏實(shí)驗(yàn)方案，指導(dǎo)病人臨床用藥

所述指導(dǎo)病人臨床用藥方案是基于步驟5得出優(yōu)選方案，即選擇替加氟-尿嘧啶、帕尼單抗、絲裂霉素、卡培他濱。最終醫(yī)生選擇了絲裂霉素用于治療，其用藥指導(dǎo)參考所選臨床藥物的使用說明進(jìn)行。

步驟7：一個(gè)療程后，抽取病人5-10ml外周血

所述的一個(gè)療程的時(shí)間，參考步驟6中選用的臨床藥物使用說明而定。所述的抽取病人5-10ml外周血的數(shù)量，應(yīng)與前一次抽取病人外周血的數(shù)量相一致，如同樣抽取7.5ml。采用統(tǒng)一的外周血抽取量是為了治療前后進(jìn)行ctc評(píng)估有一個(gè)統(tǒng)一的對(duì)比條件。

步驟8：分離ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞

所述分離ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞，方法同步驟2，采用同一種分離方法和條件，以便進(jìn)行治療前后ctc評(píng)估有一個(gè)統(tǒng)一的對(duì)比條件。

步驟9：評(píng)估

(1)一段時(shí)間未檢出ctc，病情得到控制，病人進(jìn)入觀察狀態(tài)；(2)檢出ctc，重復(fù)以上步驟4及以后步驟；(3)未檢出ctc，繼續(xù)使用臨床用藥方案。

步驟9所述的評(píng)估方法、條件都按照步驟3進(jìn)行，同樣是為了統(tǒng)一評(píng)估方法。一段時(shí)間評(píng)估時(shí)未檢出ctc，可判定療程進(jìn)展良好，提示病人腫瘤擴(kuò)散得以控制。所述的一段時(shí)間，視病情和藥物而定，一般為所用臨床藥物的連續(xù)三個(gè)療程時(shí)間為宜。即一般情況下，連續(xù)三個(gè)所用臨床藥物療程后在進(jìn)行ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞評(píng)估時(shí)未檢出，即可判定為病情得到穩(wěn)定控制。一旦檢出ctc，將重復(fù)上述步驟4，進(jìn)入ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)、增殖步驟，進(jìn)而繼續(xù)步驟5-9之所有流程，進(jìn)入診療循環(huán)。一次、二次的未檢出ctc，可繼續(xù)延用所優(yōu)選之臨床用藥方案。

該病人在三個(gè)療程后，ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞仍然存在，因此繼續(xù)平行藥敏實(shí)驗(yàn)，該病人對(duì)絲裂霉素產(chǎn)生一定程度耐藥，放棄該藥物，通過繼續(xù)平行藥敏實(shí)驗(yàn)，醫(yī)生選擇卡培他濱作為治療藥物。三個(gè)療程后，ctc循環(huán)腫瘤細(xì)胞明顯減少。

由于本發(fā)明用藥之前，均進(jìn)行過藥敏實(shí)驗(yàn)，因此可以最大限度的避免耐藥性導(dǎo)致的用藥無效，實(shí)驗(yàn)表明，除極少數(shù)耐藥嚴(yán)重的腫瘤患者，>99.9％的患者均可以通過本發(fā)明方法找到精準(zhǔn)的治療方法，其中出現(xiàn)部分耐藥的中晚期患者，均通過本發(fā)明方法獲得了良好的治療效果，相比于傳統(tǒng)的化療手段，生存期延長(zhǎng)25-36％，同時(shí)藥物的毒副作用明顯降低，明顯提高了生存質(zhì)量。

以上對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施例進(jìn)行了詳細(xì)描述，但其只是作為范例，本發(fā)明并不限制于以上描述的具體實(shí)施例。對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，任何對(duì)本發(fā)明進(jìn)行的等同修改和替代也都在本發(fā)明的范疇之中。因此，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍下所作的均等變換和修改，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的范圍內(nèi)。