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一種基于pCDH的熒光素酶的重組載體及其應(yīng)用的制作方法

文檔序號(hào):12108926閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種基于pCDH的熒光素酶的重組載體,其特征在于,所述重組載體由慢病毒載體pCDH和熒光素酶基因串聯(lián)構(gòu)成,所述重組載體的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組載體,其特征在于,所述熒光素酶基因的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的重組載體,其特征在于,所述熒光素酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

4.一種如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的重組載體的制備方法,其特征在于,包括如下步驟:

(1)根據(jù)序列設(shè)計(jì)引物,以pET28-Luc為模板進(jìn)行擴(kuò)增,得到一個(gè)替換了酶切位點(diǎn)的基因片段;

(2)將步驟(1)擴(kuò)增得到的基因片段連接到pCDH載體中,構(gòu)建重組質(zhì)粒;

(3)將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,篩選陽(yáng)性克隆。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法,其特征在于,步驟(1)所述引物為SEQ ID NO.4-5所示的序列。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法,其特征在于,步驟(2)所述將擴(kuò)增得到的基因片段連接到pCDH載體的BamHI和NotI克隆位點(diǎn)。

7.一種重組慢病毒,其特征在于,如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的重組載體與pFUGW表達(dá)載體及包膜載體pVSV-G載體進(jìn)行共轉(zhuǎn)染哺乳細(xì)胞得到的重組慢病毒。

8.一種宿主細(xì)胞,其特征在于,包括如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的重組載體或如權(quán)利要求7所述的重組慢病毒。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的宿主細(xì)胞,其特征在于,所述宿主細(xì)胞為293T、293FT或293LTV中的任意一種或至少兩種的組合,優(yōu)選為293T細(xì)胞。

10.一種如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的重組載體,如權(quán)利要求7所述的重組慢病毒或如權(quán)利要求8或9所述的宿主細(xì)胞用于模式動(dòng)物活體成像研究中CD19的追蹤。

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