本申請是申請日為2010年5月26日，申請?zhí)枮椤?01080028246.x”，發(fā)明名稱為“免疫調(diào)節(jié)劑-聚合物化合物”的中國專利申請的分案申請。

相關(guān)申請

本申請要求在美國臨時申請61/217129、61/217117、61/217124、和61/217116的35u.s.c.§119下的權(quán)益，這幾項申請中的每一件都是2009年5月27日提交的，其中每一件的內(nèi)容都通過引用以其全文結(jié)合在此。

本發(fā)明涉及免疫調(diào)節(jié)劑與聚合物或其一個或多個單元的結(jié)合物的組合物、和相關(guān)化合物以及方法。這些結(jié)合物可以包含在合成納米載體內(nèi)，并且這些免疫調(diào)節(jié)劑能以一種ph值敏感的方式從合成納米載體釋放。

背景技術(shù)：

免疫調(diào)節(jié)劑用于在被試者中產(chǎn)生免疫應(yīng)答。將這樣的試劑附著到遞送運載體上有時是有利的?，F(xiàn)在，已知的附著化學(xué)通常要求某些活性基團(tuán)，利用某些活化步驟用于發(fā)生附著，和/或生成并不表現(xiàn)出最佳特性的結(jié)合物。因此，對于用于將免疫調(diào)節(jié)劑附著到遞送運載體上的新方法存在需要，連同對于生成表現(xiàn)出希望的特性的結(jié)合物存在需要。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

一方面，本發(fā)明提供了包括如在化學(xué)式(i)中那樣的結(jié)構(gòu)的一種化合物：

其中r1＝h、oh、sh、nh2，或者取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r2＝h、烷基、或取代的烷基；y＝n或c；如果y＝n那么r3不存在；或者如果y＝c，那么r3是h、烷基、取代的烷基、或者與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；在不與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)時，r4是h、或取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r4或者與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；并且r8是生物可降解的聚合物或其單元。在一個實施方案中，對于具有化學(xué)式(i)的化合物，該生物可降解的聚合物或其單元包括聚酯、聚碳酸酯、或聚酰胺、或其單元。在另一個實施方案中，該生物可降解的聚合物或其單元包括聚(乳酸)、聚(乙醇酸)、聚(乳酸-乙醇酸)共聚物、或聚己酸內(nèi)酯、或其單元。

另一方面，本發(fā)明提供了包括如在化學(xué)式(ii)中那樣的結(jié)構(gòu)的一種化合物：

其中r1＝h、oh、sh、nh2，或者取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r2＝h、烷基、或取代的烷基；y＝n或c；如果y＝n那么r3不存在；或者如果y＝c，那么r3是h、烷基、取代的烷基、或者與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；在不與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)時，r4是h、或取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r4或者與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；r5是聚合物或其單元；x＝c、n、o、或s；r6和r7每一個獨立地是不存在、h、或被取代；并且r9、r10、r11、和r12每一個獨立地是h、鹵素、oh、硫、nh2、或取代的或未取代的烷基、芳基、雜環(huán)的、烷氧基、芳氧基、烷硫基、芳硫基、烷氨基、或芳氨基。在一個進(jìn)一步的實施方案中，對于具有化學(xué)式(ii)的化合物，該聚合物或其單元包括聚酯、聚碳酸酯、或聚酰胺、或聚醚、或其單元。在另一個實施方案中，該聚合物或其單元包括聚(乳酸)、聚(乙醇酸)、聚(乳酸-乙醇酸)共聚物、或聚己酸內(nèi)酯、或聚(乙二醇)、或其單元。在又一個實施方案中，該聚合物是生物可降解的。

在一個實施方案中，對于具有化學(xué)式(i)或(ii)的化合物，r1是h，r2是異丁基，y是c，并且r3和r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成苯環(huán)。在另一個實施方案中，r1是乙氧基甲基，r2是羥基異丁基，y＝c，并且r3與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成苯環(huán)。在又一個實施方案中，r1是乙氧基甲基，r2是甲磺酰氨基異丁基，y＝c，并且r3與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成苯環(huán)。在一個實施方案中，r1是oh，r2是苯甲基，y＝n，r3不存在，并且r4是丁氧基。在另一個實施方案中，y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是丁基氰基。在又一個實施方案中，y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是丁氧基。在又一個實施方案中，y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是芐氨基。在一個實施方案中，y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是戊基。

在一個實施方案中，對于具有化學(xué)式(i)或(ii)的化合物，在ph＝7.4并且在25℃下，該聚合物在水中是不可溶的。在另一個實施方案中，對于具有化學(xué)式(i)或(ii)的化合物，在ph＝7.4并且在25℃下，該聚合物在水中是不可溶的，但是在ph＝4.5并且在25℃下是可溶的。在一個實施方案中，對于具有化學(xué)式(i)或(ii)的化合物，如使用凝膠滲透色譜法確定的那樣，該聚合物具有范圍從800道爾頓至10,000道爾頓的重均分子量。在另一個實施方案中，對于具有化學(xué)式(i)或(ii)的化合物，該聚合物或其單元并不包括聚縮酮(polyketal)或其單元。在一個實施方案中，提供一種組合物，包括具有化學(xué)式(i)或(ii)的化合物。在一個進(jìn)一步的實施方案中，該組合物進(jìn)一步包括一種藥學(xué)上可接受的賦形劑。

在一個實施方案中，提供一種合成納米載體，包括具有化學(xué)式(i)或(ii)的化合物。在一個進(jìn)一步的實施方案中，該合成納米載體進(jìn)一步包括一種b細(xì)胞抗原和/或t細(xì)胞抗原。在又一個實施方案中，該合成納米載體進(jìn)一步包括一種抗原遞呈細(xì)胞(apc)靶向特征。在一個進(jìn)一步的實施方案中，該合成納米載體是一種樹枝狀化合物，巴奇球，納米線，肽或蛋白基納米顆粒，包括納米材料、球狀納米顆粒、立方納米顆粒、錐形納米顆粒、長方形納米顆粒、圓柱形納米顆粒、或環(huán)形納米顆粒的一種組合的納米顆粒。在另一個實施方案中，提供一種組合物，包括一種合成納米載體。在仍進(jìn)一步的實施方案中，該組合物進(jìn)一步包括一種藥學(xué)上可接受的賦形劑。

在一個實施方案中，提供一種組合物，該組合物包括一種疫苗，該疫苗包括具有化學(xué)式(i)或(ii)的化合物。在另一個實施方案中，提供一種組合物，該組合物包括一種疫苗，該疫苗包括一種組合物，后一種組合物包括具有化學(xué)式(i)或(ii)的化合物。在又一個實施方案中，提供一種組合物，該組合物包括一種疫苗，該疫苗包括合成納米載體，該納米載體包括具有化學(xué)式(i)或(ii)的化合物。在又一個實施方案中，提供一種方法，包括給予受試者任何以上說明的化合物、組合物、或合成納米載體。在一個進(jìn)一步的實施方案中，在給予受試者任何以上說明的化合物、組合物、或合成納米載體以后，誘導(dǎo)或增強了該受試者體內(nèi)的免疫應(yīng)答。

一方面，用于制造包括如在化學(xué)式(i)中那樣的結(jié)構(gòu)的結(jié)合物的一種方法：

包括：活化一種可生物降解的聚合物或其單元，并且將活化的可生物降解的聚合物或其單元和包括如在化學(xué)式(iii)中那樣的結(jié)構(gòu)的化合物暴露于一種堿和/或溶劑：

其中r1＝h、oh、sh、nh2，或者取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r2＝h、烷基、或取代的烷基；y＝n或c；如果y＝n那么r3不存在；或者如果y＝c，那么r3是h、烷基、取代的烷基、或者與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；在不與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)時，r4是h、或取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r4或者與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；并且r8是生物可降解的聚合物或其單元。在一個實施方案中，該生物可降解的聚合物或其單元包括聚酯、聚碳酸酯、或聚酰胺、或其單元。在一個進(jìn)一步的實施方案中，該生物可降解的聚合物或其單元包括聚(乳酸)、聚(乙醇酸)、聚(乳酸-乙醇酸)共聚物、或聚己酸內(nèi)酯、或其單元。

另一方面，用于制造包括如在化學(xué)式(i)中那樣的結(jié)構(gòu)的結(jié)合物的一種方法：

包括將包括聚合物或其單元的組合物和包括如在化學(xué)式(iii)中那樣的結(jié)構(gòu)的化合物暴露于偶合劑和堿和/或溶劑：

其中r1＝h、oh、sh、nh2，或者取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r2＝h、烷基、或取代的烷基；y＝n或c；如果y＝n那么r3不存在；或者如果y＝c，那么r3是h、烷基、取代的烷基、或者與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；在不與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)時，r4是h、或取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r4或者與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；并且r8是一種聚合物或其單元。

另一方面，用于制造包括如在化學(xué)式(ii)中那樣的結(jié)構(gòu)的結(jié)合物的一種方法：

包括將醇、催化劑、和包括如在化學(xué)式(iv)中那樣的結(jié)構(gòu)的化合物進(jìn)行合并：

其中r1＝h、oh、sh、nh2，或者取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r2＝h、烷基、或取代的烷基；y＝n或c；如果y＝n那么r3不存在；或者如果y＝c，那么r3是h、烷基、取代的烷基、或者與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；在不與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)時，r4是h、或取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r4或者與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；r5是聚合物或其單元；x＝c、n、o、或s；r6和r7每一個獨立地是h或被取代；并且r9、r10、r11、和r12每一個獨立地是h、鹵素、oh、硫、nh2、或取代的或未取代的烷基、芳基、雜環(huán)的、烷氧基、芳氧基、烷硫基、芳硫基、烷氨基、或芳氨基；并且加熱該醇、催化劑、和化合物。在一些實施方案中，在一種溶劑存在下，加熱該醇、催化劑、和化合物。

仍另一方面，用于制造包括如在化學(xué)式(ii)中那樣的結(jié)構(gòu)的結(jié)合物的一種方法：

包括將醇和包括如在化學(xué)式(iv)中那樣的結(jié)構(gòu)的化合物進(jìn)行合并：

其中r1＝h、oh、sh、nh2，或者取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r2＝h、烷基、或取代的烷基；y＝n或c；如果y＝n那么r3不存在；或者如果y＝c，那么r3是h、烷基、取代的烷基、或者與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；在不與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)時，r4是h、或取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r4或者與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；r5是聚合物或其單元；x＝c、n、o、或s；r6和r7每一個獨立地是h或被取代；并且r9、r10、r11、和r12每一個獨立地是h、鹵素、oh、硫、nh2、或取代的或未取代的烷基、芳基、雜環(huán)的、烷氧基、芳氧基、烷硫基、芳硫基、烷氨基、或芳氨基；并且加熱該醇和化合物；并且添加催化劑。在一個實施方案中，在同時和/或在添加催化劑以后，加熱該醇、化合物、和催化劑。

仍另一方面，用于制造包括如在化學(xué)式(ii)中那樣的結(jié)構(gòu)的結(jié)合物的一種方法：

包括將醇、催化劑、和包括如在化學(xué)式(iv)中那樣的結(jié)構(gòu)的化合物進(jìn)行合并：

其中r1＝h、oh、sh、nh2，或者取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r2＝h、烷基、或取代的烷基；y＝n或c；如果y＝n那么r3不存在；或者如果y＝c，那么r3是h、烷基、取代的烷基、或者與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；在不與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)時，r4是h、或取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r4或者與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；r5是聚合物或其單元；x＝c、n、o、或s；r6和r7每一個獨立地是h或被取代；并且r9、r10、r11、和r12每一個獨立地是h、鹵素、oh、硫、nh2、或取代的或未取代的烷基、芳基、雜環(huán)的、烷氧基、芳氧基、烷硫基、芳硫基、烷氨基、或芳氨基。

在一個實施方案中，對于制造具有化學(xué)式(ii)的化合物的方法，該醇是具有末端羥基基團(tuán)的聚合物或其單元。在另一個實施方案中，該聚合物或其單元包括聚酯、聚碳酸酯、聚酰胺、或聚醚、或其單元。在又一個實施方案中，該聚合物或其單元包括聚(乳酸)、聚(乙醇酸)、聚(乳酸-乙醇酸)共聚物、或聚己酸內(nèi)酯、或聚(乙二醇)、或其單元。

在一個實施方案中，對于制造具有化學(xué)式(ii)的化合物的方法，該催化劑是膦嗪堿(phosphazinebase)、1，8-二氮雜二環(huán)十一碳-7-烯、1，4，7-三氮雜二環(huán)癸烯、或n-甲基-1，4，7-三氮雜二環(huán)癸烯。在另一個實施方案中，如使用凝膠滲透色譜法確定的那樣，該聚合物具有范圍從800道爾頓至10,000道爾頓的重均分子量。在又一個實施方案中，在ph＝7.4并且在25℃下，該聚合物在水中是不可溶的。在另一個實施方案中，在ph＝7.4并且在25℃下，該聚合物在水中是不可溶的，但是在ph＝4.5并且在25℃下是可溶的。在又一個實施方案中，該聚合物或其單元并不包括聚縮酮或其單元。

在一個實施方案中，對于制造具有化學(xué)式(ii)的化合物的方法，r1是h，r2是異丁基，y是c，并且r3和r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成苯環(huán)。在另一個實施方案中，r1是乙氧基甲基，r2是羥基異丁基，y＝c，并且r3與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成苯環(huán)。在另一個實施方案中，r1是乙氧基甲基，r2是甲磺酰氨基異丁基，y＝c，并且r3與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成苯環(huán)。在又一個實施方案中，r1是oh，r2是苯甲基，y＝n，r3不存在，并且r4是丁氧基。在另一個實施方案中，y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是丁基氨基。在另一個實施方案中，y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是丁氧基。在另一個實施方案中，y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是芐氨基。在又一個實施方案中，y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是戊基。

一方面，本發(fā)明提供了包括如在化學(xué)式(iv)中那樣的結(jié)構(gòu)的一種化合物：

其中r1＝h、oh、sh、nh2，或者取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r2＝h、烷基、或取代的烷基；y＝n或c；如果y＝n那么r3不存在；或者如果y＝c，那么r3是h、烷基、取代的烷基、或者與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；在不與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)時，r4是h、或取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r4或者與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；x＝c、n、o、或s；r6和r7每一個獨立地是h或被取代；并且r9、r10、r11、和r12每一個獨立地是h、鹵素、oh、硫、nh2、或取代的或未取代的烷基、芳基、雜環(huán)的、烷氧基、芳氧基、烷硫基、芳硫基、烷氨基、或芳?xì)浠?/p>

在一個實施方案中，對于具有化學(xué)式(iv)的化合物，r1是h，r2是異丁基，y是c，并且r3和r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成苯環(huán)。在另一個實施方案中，r1是乙氧基甲基，r2是羥基異丁基，y＝c，并且r3與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成苯環(huán)。在另一個實施方案中，r1是乙氧基甲基，r2是甲磺酰氨基異丁基，y＝c，并且r3與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成苯環(huán)。在又一個實施方案中，r1是oh，r2是苯甲基，y＝n，r3不存在，并且r4是丁氧基。在另一個實施方案中，y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是丁基氨基。在另一個實施方案中，y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是丁氧基。在又一個實施方案中，y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是芐氨基。在又一個實施方案中，y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是戊基。在一個實施方案中，提供一種組合物，具有符合化學(xué)式(iv)的化合物。

一方面，本發(fā)明提供了用于制造包括如在化學(xué)式(iv)中那樣的結(jié)構(gòu)的化合物的方法：

包括在一種溶劑存在下和/或加熱條件下，合并包括如在化學(xué)式(iii)中的結(jié)構(gòu)的化合物：

以及包括如在化學(xué)式(v)中的結(jié)構(gòu)的化合物：

其中r1＝h、oh、sh、nh2，或者取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r2＝h、烷基、或取代的烷基；y＝n或c；如果y＝n那么r3不存在；或者如果y＝c，那么r3是h、烷基、取代的烷基、或者與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；在不與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)時，r4是h、或取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r4或者與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；x＝c、n、o、或s；r6和r7每一個獨立地是h或被取代；并且r9、r10、r11、和r12每一個獨立地是h、鹵素、oh、硫、nh2、或取代的或未取代的烷基、芳基、雜環(huán)的、烷氧基、芳氧基、烷硫基、芳硫基、烷氨基、或芳氨基。

在一個實施方案中，對于包括具有化學(xué)式(iv)的化合物的方法，r1是h，r2是異丁基，y是c，并且r3和r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成苯環(huán)。在另一個實施方案中，r1是乙氧基甲基，r2是羥基異丁基，y＝c，并且r3與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成苯環(huán)。在另一個實施方案中，r1是乙氧基甲基，r2是甲磺酰氨基異丁基，y＝c，并且r3與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成苯環(huán)。在又一個實施方案中，r1是oh，r2是苯甲基，y＝n，r3不存在，并且r4是丁氧基。在另一個實施方案中，y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是丁基氨基。在另一個實施方案中，y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是丁氧基。在又一個實施方案中，y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是芐氨基。在又一個實施方案中，y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是戊基。

一方面，本發(fā)明提供了用于制造包括如在化學(xué)式(vi)中那樣的結(jié)構(gòu)的結(jié)合物的方法：

包括合并一種催化劑、具有化學(xué)式(vii)的二醇：

ho-聚合物-oh(vii)，

以及包括如在化學(xué)式(iv)中的結(jié)構(gòu)的化合物：

其中r1＝h、oh、sh、nh2，或者取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r2＝h、烷基、或取代的烷基；y＝n或c；如果y＝n那么r3不存在；或者如果y＝c，那么r3是h、烷基、取代的烷基、或者與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；在不與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)時，r4是h、或取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r4或者與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；x＝c、n、o、或s；r6和r7每一個獨立地是h或被取代；并且r9、r10、r11、和r12每一個獨立地是h、鹵素、oh、硫、nh2、或取代的或未取代的烷基、芳基、雜環(huán)的、烷氧基、芳氧基、烷硫基、芳硫基、烷氨基、或芳?xì)浠?；并且加熱該醇、催化劑、和化合物。在一個實施方案中，對于包括具有化學(xué)式(vi)的化合物的方法，在一種溶劑存在下加熱該醇、催化劑、和化合物。在一個這一方面的實施方案中，該聚合物旨在包括在此提供的聚合物的單元。

另一方面，本發(fā)明提供了用于制造包括如在化學(xué)式(vi)中那樣的結(jié)構(gòu)的結(jié)合物的方法：

包括合并一種具有化學(xué)式(vii)的二醇：

ho-聚合物-oh(vii)，

以及包括如在化學(xué)式(iv)中的結(jié)構(gòu)的化合物：

其中r1＝h、oh、sh、nh2，或者取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r2＝h、烷基、或取代的烷基；y＝n或c；如果y＝n那么r3不存在；或者如果y＝c，那么r3是h、烷基、取代的烷基、或者與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；在不與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)時，r4是h、或取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r4或者與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；x＝c、n、o、或s；r6和r7每一個獨立地是h或被取代；并且r9、r10、r11、和r12每一個獨立地是h、鹵素、oh、硫、nh2、或取代的或未取代的烷基、芳基、雜環(huán)的、烷氧基、芳氧基、烷硫基、芳硫基、烷氨基、或芳氨基；加熱該醇和化合物，并且添加催化劑。在一個進(jìn)一步的實施方案中，在同時和/或在添加催化劑以后，加熱該醇、化合物、和催化劑。在一個這一方面的實施方案中，該聚合物旨在包括在此提供的聚合物的單元。

一方面，本發(fā)明提供了用于制造包括如在化學(xué)式(vi)中那樣的結(jié)構(gòu)的結(jié)合物的方法：

包括合并一種催化劑、具有化學(xué)式(vii)的二醇：

ho-聚合物-oh(vii)，

以及包括如在化學(xué)式(iv)中的結(jié)構(gòu)的化合物：

其中r1＝h、oh、sh、nh2，或者取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r2＝h、烷基、或取代的烷基；y＝n或c；如果y＝n那么r3不存在；或者如果y＝c，那么r3是h、烷基、取代的烷基、或者與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；在不與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)時，r4是h、或取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r4或者與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；x＝c、n、o、或s；r6和r7每一個獨立地是h或被取代；并且r9、r10、r11、和r12每一個獨立地是h、鹵素、oh、硫、nh2、或取代的或未取代的烷基、芳基、雜環(huán)的、烷氧基、芳氧基、烷硫基、芳硫基、烷氨基、或芳?xì)浠?/p>

在一個實施方案中，對于制造包括化學(xué)式(vi)的化合物的方法，從下組選擇具有化學(xué)式(vii)的化合物，該組由以下各項組成：聚縮酮二醇、聚(乙)二醇、聚己酸內(nèi)酯二醇、二嵌段聚丙交酯聚(乙)二醇共聚物、二嵌段聚丙交酯/聚乙醇酸交酯聚(乙)二醇共聚物、二嵌段聚乙醇酸交酯聚(乙)二醇共聚物、聚(丙)二醇、以及聚(碳酸六亞甲基酯)二醇。在一個實施方案中，對于制造包括化學(xué)式(vi)的化合物的方法，該催化劑是膦嗪堿、1，8-二氮雜二環(huán)十一碳-7-烯、1，4，7-三氮雜二環(huán)癸烯、或n-甲基-1，4，7-三氮雜二環(huán)癸烯。在另一個實施方案中，如使用凝膠滲透色譜法確定的那樣，該聚合物具有范圍從800道爾頓至10,000道爾頓的重均分子量。在另一個實施方案中，在ph＝7.4并且在25℃下，該聚合物在水中是不可溶的。在另一個實施方案中，在ph＝7.4并且在25℃下，該聚合物在水中是不可溶的，但是在ph＝4.5并且在25℃下是可溶的。在又一個實施方案中，該聚合物并不包括聚縮酮或其單元。

在一個實施方案中，對于制造具有化學(xué)式(vi)的化合物的方法，r1是h，r2是異丁基，y是c，并且r3和r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成苯環(huán)。在另一個實施方案中，r1是乙氧基甲基，r2是羥基異丁基，y＝c，并且r3與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成苯環(huán)。在另一個實施方案中，r1是乙氧基甲基，r2是甲磺酰氨基異丁基，y＝c，并且r3與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成苯環(huán)。在又一個實施方案中，r1是oh，r2是苯甲基，y＝n，r3不存在，并且r4是丁氧基。在另一個實施方案中，y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是丁基氨基。在另一個實施方案中，y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是丁氧基。在又一個實施方案中，y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是芐氨基。在又一個實施方案中，y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是戊基。

一方面，一種包括如在化學(xué)式(vi)中的結(jié)構(gòu)的化合物：

其中每一個r1，獨立地，＝h、oh、sh、nh2，或者是取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；

每一個r2，獨立地，＝h、烷基、或取代的烷基；

每一個y，獨立地，＝n或c；

每一個r3，獨立地，如果y＝n那么r3不存在；或者如果y＝c，那么r3是h、烷基、取代的烷基、或者與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；

每一個r4，獨立地，在不與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)時，r4是h、或取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r4或者與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；

每一個x，獨立地，是c、n、o、或s；

每一個r6和r7，獨立地，每一個獨立地是h或被取代；并且

提供每一個r9、r10、r11、和r12，獨立地，每一個獨立地是h、鹵素、oh、硫、nh2、或取代的或未取代的烷基、芳基、雜環(huán)的、烷氧基、芳氧基、烷硫基、芳硫基、烷氨基、或芳氨基。

在一個實施方案中，該聚合物選自下組，該組由以下各項組成：聚縮酮二醇、聚(乙)二醇、聚己酸內(nèi)酯二醇、二嵌段聚丙交酯聚(乙)二醇共聚物、二嵌段聚丙交酯/聚乙醇酸交酯聚(乙)二醇共聚物、二嵌段聚乙醇酸交酯聚(乙)二醇共聚物、聚(丙)二醇、聚(碳酸六亞甲基酯)二醇、以及聚(四氫呋喃)。在這一方面的另一個實施方案中，該聚合物包括一個聚合物的單元。在另一個實施方案中，如使用凝膠滲透色譜法確定的那樣，該聚合物具有范圍從800道爾頓至10,000道爾頓的重均分子量。在一個進(jìn)一步的實施方案中，在ph＝7.4并且在25℃下，該聚合物在水中是不可溶的。在又一個實施方案中，該聚合物并不包括聚縮酮或其單元。

在一個實施方案中，r1是h，r2是異丁基，y＝c，并且r3與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成苯環(huán)。在另一個實施方案中，r1是乙氧基甲基，r2是羥基異丁基，y＝c，并且r3與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成苯環(huán)。在又一個實施方案中，r1是乙氧基甲基，r2是甲磺酰氨基異丁基，y＝c，并且r3與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成苯環(huán)。在又一個實施方案中，r1是oh，r2是苯甲基，y＝n，r3不存在，并且r4是丁氧基。在另一個實施方案中，y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是丁基氨基。在另一個實施方案中，y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是丁氧基。在一個進(jìn)一步的實施方案中，y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是芐氨基。在又一個實施方案中，y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是戊基。

在一個實施方案中，提供了包括以上化合物的組合物。在另一個實施方案中，該組合物進(jìn)一步包括一種藥學(xué)上可接受的賦形劑。

在另一個實施方案中，提供了包括任何以上化合物的合成納米載體。在一個實施方案中，該合成納米載體進(jìn)一步包括一種b細(xì)胞抗原和/或t細(xì)胞抗原。在另一個實施方案中，該合成納米載體進(jìn)一步包括一種抗原遞呈細(xì)胞(apc)靶向特征。仍在一個進(jìn)一步的實施方案中，該合成納米載體是一種樹枝狀化合物，巴奇球，納米線，肽或蛋白基納米顆粒，包括納米材料、球狀納米顆粒、立方納米顆粒、錐形納米顆粒、長方形納米顆粒、圓柱形納米顆粒、或環(huán)形納米顆粒的一種組合的納米顆粒。

在一個實施方案中，提供了包括任何以上合成納米載體的組合物。在一個實施方案中，該組合物進(jìn)一步包括一種藥學(xué)上可接受的賦形劑。

在另一個實施方案中，提供了包括一種疫苗的組合物，該疫苗包括任何以上化合物。在又一個實施方案中，提供了包括一種疫苗的組合物，該疫苗包括任何以上組合物。在另一個實施方案中，提供了包括一種疫苗的組合物，該疫苗包括任何以上合成納米載體。

在另一個實施方案中，提供了包括將任何以上化合物、組合物或合成納米載體給予受試者的方法。在一個實施方案中，該方法是在受試者中誘導(dǎo)或增強免疫應(yīng)答的一種方法。

另一方面，提供了具有在此提供的任何化合物的結(jié)構(gòu)的化合物。還提供了包括提供的任何化合物的組合物、合成納米載體、以及疫苗。

在一個進(jìn)一步的方面，還提供了制造在此提供的化合物的任何方法。

附圖說明

圖1示出了在ph7.4、37℃條件下，從合成納米載體配制品釋放瑞喹莫德(r848)。

圖2示出了在ph4.5、37℃條件下，從合成納米載體配制品釋放r848。

圖3示出了在ph7.4和ph4.5，在24小時條件下，從合成納米載體配制品釋放r848。

圖4示出與用不具有含cpg免疫刺激核酸的合成納米載體的抗體誘導(dǎo)水平(組1)比較，用具有含cpg免疫刺激核酸的合成納米載體的抗體誘導(dǎo)水平(組2和3)。

圖5示出用釋放磷酸二酯、非-硫代的含cpg免疫刺激核酸或硫代的含cpg免疫刺激核酸的合成納米載體的抗體誘導(dǎo)水平。

圖6示出用按不同速率釋放r848的納米載體的抗體誘導(dǎo)水平。

具體實施方式

在詳細(xì)說明本發(fā)明以前，已理解本發(fā)明并不局限于具體舉例說明的材料或工藝參數(shù)，因為這些當(dāng)然可以變化。還已理解在此使用的術(shù)語只是為了說明本發(fā)明的具體實施方案的目的，并不旨在限制使用可替代的術(shù)語來說明本發(fā)明。

在此引用的所有出版物、專利和專利申請，無論在前或在后，都出于所有目的通過引用以其全文結(jié)合在此。

如在本說明書和附加權(quán)利要求中使用的那樣，單數(shù)形式“一個”、“一種”和“該”包括復(fù)數(shù)指示物，除非該內(nèi)容清楚地另外指明。例如，引用“一種聚合物”包括兩種或更多種這樣的分子的混合物，引用“一種溶劑”包括兩種或更多種這樣的溶劑的混合物，引用一種“粘合劑”包括兩種或更多種這樣的材料的混合物，并且以此類推。

序論

本發(fā)明的諸位發(fā)明人已經(jīng)意外地并且令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，通過實踐在此披露的本發(fā)明，可以克服以上提到的問題和限制。特別是，本發(fā)明的諸位發(fā)明人已經(jīng)意外地發(fā)現(xiàn)可能與相關(guān)組合物和方法一起提供組合物，包括：

如在化學(xué)式(i)中的結(jié)構(gòu)：

其中r1＝h、oh、sh、nh2，或者是取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；

r2＝h、烷基、或取代的烷基；

y＝n或c；

如果y＝n那么r3不存在；或者如果y＝c，那么r3是h、烷基、取代的烷基、或者與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；

在不與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)時，r4是h、或取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r4或者與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；并且

r8是可生物降解的聚合物或其單元。

在使用合成納米載體用來在受試者中產(chǎn)生免疫應(yīng)答時，它有利地給合成納米載體加載免疫調(diào)節(jié)劑。這樣的試劑包括多種試劑，它們在從合成納米載體解偶合時是免疫調(diào)節(jié)的，但是在偶合到合成納米載體時可以不表現(xiàn)出免疫調(diào)節(jié)特性。包括該免疫調(diào)節(jié)劑作為部分合成納米載體自身是特別有利的。為了達(dá)到這點，該免疫調(diào)節(jié)劑可以共價地附著到一種適當(dāng)?shù)木酆衔锘蚱鋯卧?。因此，在此提供的化合物和結(jié)合物，在一些實施方案中，包括一種免疫調(diào)節(jié)劑，該免疫調(diào)節(jié)劑還旨在包括一種試劑，它在從該聚合物或其單元解偶合時是免疫調(diào)節(jié)的，但是在偶合到該聚合物或其單元時可以不表現(xiàn)出免疫調(diào)節(jié)特性。在此提供的這些化合物可以被合并到一種或多種合成納米載體中。通過本領(lǐng)域已知的或在此以外的地方說明的方法，這些化合物被合并到合成納米載體上。

在一些實施方案中，提供的這些化合物或結(jié)合物的聚合物或其單元是可生物降解的聚合物或其單元。因此，該聚合物或其單元可以包括聚酯、聚碳酸酯、或聚酰胺、或其單元。因此，該聚合物或其單元包括聚(乳酸)、聚(乙醇酸)、聚(乳酸-乙醇酸)共聚物、或聚己酸內(nèi)酯、或其單元。一般地，優(yōu)選如果該聚合物包括聚醚(例如聚(乙二醇)(peg)或其單元)，那么該聚合物是聚醚和生物可降解聚合物的嵌段共聚物，這樣該聚合物是生物可降解的。在一些實施方案中，該聚合物或其單元并不包括聚醚(例如聚(乙二醇)、或其單元)。在其他實施方案中，該聚合物并不單獨包括聚醚或其單元(例如聚(乙二醇)、或其單元)。一般地，對于用作合成納米載體的一部分，在ph＝7.4并且在25℃下，在此提供的化合物或結(jié)合物的聚合物在水中是不可溶的，是生物可降解的，或者同時具有這二者。在其他實施方案中，在ph＝7.4并且在25℃下，該聚合物在水中是不可溶的，但是在ph＝4.5并且在25℃下是可溶的。仍在其他實施方案中，在ph＝7.4并且在25℃下，該聚合物在水中是不可溶的，但是在ph＝4.5并且在25℃下是可溶的并且生物可降解的。在組合物中，在此提供的化合物、結(jié)合物、和合成納米載體是唯一的，并且對于制備疫苗和有關(guān)材料是有用的。

還提供了用于制造以上提到的化合物的方法。在實施方案中，用于制造包括如在化學(xué)式(i)中那樣的結(jié)構(gòu)的結(jié)合物的一種方法：

包括：

活化一種可生物降解的聚合物或其單元，并且

將活化的可生物降解的聚合物或其單元和包括如在化學(xué)式(iii)中那樣的結(jié)構(gòu)的一種化合物暴露于一種堿和/或溶劑：

其中r1＝h、oh、sh、nh2，或者是取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；

r2＝h、烷基、或取代的烷基；

y＝n或c；

如果y＝n那么r3不存在；或者如果y＝c，那么r3是h、烷基、取代的烷基、或者與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；

在不與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)時，r4是h、或取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r4或者與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；并且

r8是可生物降解的聚合物或其單元。

在其他實施方案中，用于制造包括如在化學(xué)式(i)中那樣的結(jié)構(gòu)的結(jié)合物的一種方法：

包括：

將包括聚合物或其單元的組合物和包括如在化學(xué)式(iii)中那樣的結(jié)構(gòu)的化合物暴露于偶合劑和堿和/或溶劑：

其中r1＝h、oh、sh、nh2，或者是取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；

r2＝h、烷基、或取代的烷基；

y＝n或c；

如果y＝n那么r3不存在；或者如果y＝c，那么r3是h、烷基、取代的烷基、或者與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；

在不與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)時，r4是h、或取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r4或者與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；并且

r8是聚合物或其單元。

本發(fā)明的諸位發(fā)明人已經(jīng)意外地發(fā)現(xiàn)可能與相關(guān)組合物和方法一起提供化合物，包括：

如在化學(xué)式(ii)中的結(jié)構(gòu)：

其中r1＝h、oh、sh、nh2，或者是取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；

r2＝h、烷基、或取代的烷基；

y＝n或c；

如果y＝n那么r3不存在；或者如果y＝c，那么r3是h、烷基、取代的烷基、或者與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；

在不與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)時，r4是h、或取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r4或者與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；

r5是聚合物或其單元；

x＝c、n、o、或s；

r6和r7中每一個獨立地不存在、是h、或被取代；并且

r9、r10、r11、和r12每一個獨立地是h、鹵素、oh、硫、nh2、或取代的或未取代的烷基、芳基、雜環(huán)的、烷氧基、芳氧基、烷硫基、芳硫基、烷氨基、或芳氨基。

已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，可能附著試劑(例如免疫調(diào)節(jié)劑，包括如在化學(xué)式(iii)中的結(jié)構(gòu))至具有末端醇的聚合物或其單元上。一般地，末端醇是較小反應(yīng)性的，使附著化學(xué)成為問題。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)使用在開環(huán)聚合中普遍使用的催化劑，酰亞胺(例如包括如在化學(xué)式(iv)中那樣的結(jié)構(gòu)的那些)將與末端醇反應(yīng)。生成的反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)由一個酯鍵將酰亞胺連接至醇。

因此，還提供用于制造經(jīng)由以上提到的化學(xué)的結(jié)合物的方法。在一些實施方案中，用于制造包括如在化學(xué)式(ii)中那樣的結(jié)構(gòu)的結(jié)合物的一種方法：

包括：

合并一種醇、催化劑、和包括如在化學(xué)式(iv)中那樣的結(jié)構(gòu)的化合物：

其中r1＝h、oh、sh、nh2，或者是取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；

r2＝h、烷基、或取代的烷基；

y＝n或c；

如果y＝n那么r3不存在；或者如果y＝c，那么r3是h、烷基、取代的烷基、或者與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；

在不與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)時，r4是h、或取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r4或者與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；

r5是聚合物或其單元；

x是c、n、o、或s；

r6和r7中每一個獨立地是h、或被取代；并且

r9、r10、r11、和r12每一個獨立地是h、鹵素、oh、硫、nh2、或取代的或未取代的烷基、芳基、雜環(huán)的、烷氧基、芳氧基、烷硫基、芳硫基、烷氨基、或芳氨基；并且

加熱該醇、催化劑、和化合物。

在其他實施方案中，用于制造包括如在化學(xué)式(ii)中那樣的結(jié)構(gòu)的結(jié)合物的一種方法：

包括：

合并一種醇和包括如在化學(xué)式(iv)中那樣的結(jié)構(gòu)的化合物：

其中r1＝h、oh、sh、nh2，或者是取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；

r2＝h、烷基、或取代的烷基；

y＝n或c；

如果y＝n那么r3不存在；或者如果y＝c，那么r3是h、烷基、取代的烷基、或者與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；

在不與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)時，r4是h、或取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r4或者與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；

r5是聚合物或其單元；

x是c、n、o、或s；

r6和r7中每一個獨立地是h、或被取代；并且

r9、r10、r11、和r12每一個獨立地是h、鹵素、oh、硫、nh2、或取代的或未取代的烷基、芳基、雜環(huán)的、烷氧基、芳氧基、烷硫基、芳硫基、烷氨基、或芳氨基；

加熱該醇和化合物；并且

添加催化劑。

在仍其他實施方案中，用于制造包括如在化學(xué)式(ii)中那樣的結(jié)構(gòu)的結(jié)合物的一種方法：

包括：

合并一種醇、催化劑、和包括如在化學(xué)式(iv)中那樣的結(jié)構(gòu)的化合物：

其中r1＝h、oh、sh、nh2，或者是取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；

r2＝h、烷基、或取代的烷基；

y＝n或c；

如果y＝n那么r3不存在；或者如果y＝c，那么r3是h、烷基、取代的烷基、或者與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；

在不與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)時，r4是h、或取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r4或者與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；

r5是聚合物或其單元；

x是c、n、o、或s；

r6和r7中每一個獨立地是h、或被取代；并且

r9、r10、r11、和r12每一個獨立地是h、鹵素、oh、硫、nh2、或取代的或未取代的烷基、芳基、雜環(huán)的、烷氧基、芳氧基、烷硫基、芳硫基、烷氨基、或芳氨基。

在此還提供了可以用于以上提到的反應(yīng)的酰亞胺。在一個實施方案中，該酰亞胺化合物包括如在化學(xué)式(iv)中那樣的結(jié)構(gòu)：

其中r1＝h、oh、sh、nh2，或者是取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；

r2＝h、烷基、或取代的烷基；

y＝n或c；

如果y＝n那么r3不存在；或者如果y＝c，那么r3是h、烷基、取代的烷基、或者與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；

在不與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)時，r4是h、或取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r4或者與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；

x是c、n、o、或s；

r6和r7中每一個獨立地是h、或被取代；并且

r9、r10、r11、和r12每一個獨立地是h、鹵素、oh、硫、nh2、或取代的或未取代的烷基、芳基、雜環(huán)的、烷氧基、芳氧基、烷硫基、芳硫基、烷氨基、或芳氨基。

可以通過多種方法制造這一化合物，這些方法包括在溶劑和/或熱量的存在下，在具有或不具有脫水劑(例如羧酸酐或乙酸酐)、和堿(例如吡啶化合物)下，合并一種包括如在化學(xué)式(iii)中那樣的結(jié)構(gòu)的化合物：

包括如在化學(xué)式(v)中的結(jié)構(gòu)的化合物：

其中r1＝h、oh、sh、nh2，或者是取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；

r2＝h、烷基、或取代的烷基；

y＝n或c；

如果y＝n那么r3不存在；或者如果y＝c，那么r3是h、烷基、取代的烷基、或者與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；

在不與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)時，r4是h、或取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r4或者與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；

x是c、n、o、或s；

r6和r7中每一個獨立地是h、或被取代；并且

r9、r10、r11、和r12每一個獨立地是h、鹵素、oh、硫、nh2、或取代的或未取代的烷基、芳基、雜環(huán)的、烷氧基、芳氧基、烷硫基、芳硫基、烷氨基、或芳氨基。

本發(fā)明的諸位發(fā)明人已經(jīng)意外地并且令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，可能使用多種聚合物制造聚合物的合成納米載體，如使用凝膠滲透色譜法確定的那樣，這些聚合物具有范圍從800道爾頓至10,000道爾頓的重均分子量。在該聚合物的合成納米載體的配制品中，一般已經(jīng)相信聚合物的分子量應(yīng)當(dāng)是或超過10,000道爾頓。有時，有利地向這些聚合物附加免疫調(diào)節(jié)化合物，這些化合物可以通過在體內(nèi)的非特異性降解步驟從合成納米載體釋放。如果合成納米載體將被用于靶向內(nèi)體/溶酶體分隔區(qū)，那么使這一降解步驟優(yōu)選發(fā)生在酸性的ph下是特別有利的。將該免疫調(diào)節(jié)劑附加到該聚合物的一個缺點是隨著聚合物的分子量增加，加載減少。此外，隨著該聚合物的分子量增加，該聚合物的疏水性也是如此，結(jié)果是在給定ph值下的降解速率會減小。這導(dǎo)致免疫調(diào)節(jié)劑的不希望地減小的釋放速率。令人驚訝地，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)具有范圍從約800道爾頓至約10,000道爾頓的重均分子量的低分子量聚合物形成穩(wěn)定的合成納米載體，并且隨著分子量減小，免疫調(diào)節(jié)劑從該合成納米載體的釋放的速率增加。因此，在實施方案中，在此提供的化合物的聚合物具有范圍從約800道爾頓至約10,000道爾頓的重均分子量，并且這一的化合物可以被用于生產(chǎn)合成納米載體。

在此提供的化合物或包括這些化合物的合成納米載體還可以是ph敏感的(即，與在或約生理ph(即ph或7.4)下免疫調(diào)節(jié)劑的釋放相比，在或約4.5的ph下，表現(xiàn)出增加的免疫調(diào)節(jié)劑的釋放)。對于它靶向這些免疫調(diào)節(jié)劑至例如傾向于擁有在或約4.5的ph的抗原遞呈細(xì)胞(apc)的內(nèi)體/溶酶體分隔區(qū)，在或約生理ph下具有免疫調(diào)節(jié)劑的較低釋放、但是在或約4.5的ph下具有增加的釋放的特性是希望的。發(fā)現(xiàn)這一低ph水平主要存在于上部胃腸道和內(nèi)體/溶酶體內(nèi)。因此，除非發(fā)明的化合物和組合物經(jīng)由口腔給藥途徑給予，在或約4.5的ph的加速釋放提供在靶分隔區(qū)中該免疫調(diào)節(jié)劑的增強的濃度。在這些條件下，這些免疫調(diào)節(jié)劑表現(xiàn)出ph敏感的解離，并且然后自由地與內(nèi)體/溶酶體內(nèi)的受體相互作用，并且刺激希望的免疫應(yīng)答。此外，因為聚合物的偶合可以發(fā)生在該免疫調(diào)節(jié)劑或感興趣的化合物上的一個位置，這一般基本減少或消除了該免疫調(diào)節(jié)劑或感興趣的化合物的生物活性，該偶合可以有效地產(chǎn)生一種“前體藥物”樣效應(yīng)。與在存在于內(nèi)體/溶酶體中的條件下的加速釋放結(jié)合，對于包括發(fā)明的化合物和組合物的組合物和疫苗，這一效應(yīng)意味著脫靶效應(yīng)(例如不良事件)減少和安全限度增加。

現(xiàn)在將更詳細(xì)地說明本發(fā)明。

定義

“給予”或“給藥”是指以一種藥理學(xué)上有用的方式，將在此提供的化合物、結(jié)合物、合成納米載體、或組合物提供給患者。

“apc靶向特征”是指本發(fā)明的合成納米載體所包括的一個或多個部分，這一個或多個部分靶向合成納米載體至專職抗原遞呈細(xì)胞(“apcs”)(例如但并不局限于樹突細(xì)胞、scs巨噬細(xì)胞、濾泡樹突細(xì)胞、以及b細(xì)胞)。在實施方案中，apc靶向特征可以包括一個或多個免疫特征表面和/或多個靶向部分，這些靶向部分將已知靶結(jié)合在apcs上。在實施方案中，apc靶向特征可以包括存在于合成納米載體表面上的一個或多個b細(xì)胞抗原。在實施方案中，apc靶向特征還可以包括選擇的一個或多個尺寸的這些合成納米顆粒用來通過apcs促進(jìn)攝入。

在實施方案中，用于在巨噬細(xì)胞(“mphs”)上的已知靶的靶向部分包括特異性地結(jié)合任何實體(例如蛋白、脂類、碳水化合物、小分子、等)的任何靶向部分，這些實體顯著表達(dá)和/或存在于巨噬細(xì)胞上(即被膜下竇-mph標(biāo)記)。示例性的scs-mph標(biāo)記包括，但并不局限于，cd4(l3t4，w3/25，t4)；cd9(p24，drap-1，mrp-1)；cd11a(lfa-1α，αl整聯(lián)蛋白鏈)；cd11b(αm整聯(lián)蛋白鏈，cr3，mo1，c3nir，mac-1)；cd11c(αx整聯(lián)蛋白，p150，95，axb2)；cdw12(p90-120)；cd13(apn，gp150，ec3.4.11.2)；cd14(lps-r)；cd15(x-半抗原，lewis，x，ssea-1，3-fal)；cd15s(唾液酰lewisx)；cd15u(3′磺基lewisx)；cd15su(6磺基唾液酰lewisx)；cd16a(fcriiia)；cd16b(fcgriiib)；cdw17(乳糖酶基神經(jīng)鞘氨醇，laccer)；cd18(整聯(lián)蛋白β2，cd11a，b，cβ-亞基)；cd26(dppivectoeneyme，ada結(jié)合蛋白)；cd29(血小板gpiia，β-1整聯(lián)蛋白，gp)；cd31(pecam-1，endocam)；cd32(fcγrii)；cd33(gp67)；cd35(cr1，c3b/c4b受體)；cd36(gpiiib，gpiv，pasiv)；cd37(gp52-40)；cd38(adp-核糖基環(huán)化酶，t10)；cd39(atp脫氫酶，ntp脫氫酶-1)；cd40(bp50)；cd43(涎蛋白，增白細(xì)胞蛋白)；cd44(emcrii，h-cam，pgp-1)；cd45(lca，t200，b220，ly5)；cd45ra；cd45rb；cd45rc；cd45ro(uchl-1)；cd46(mcp)；cd47(gp42，iap，oa3，神經(jīng)纖毛蛋白)；cd47r(mem-133)；cd48(blast-1，hulym3，bcm-1，ox-45)；cd49a(vla-1α，α1整聯(lián)蛋白)；cd49b(vla-2α，gpla，α2整聯(lián)蛋白)；cd49c(vla-3α，α3整聯(lián)蛋白)；cd49e(vla-5α，α5整聯(lián)蛋白)；cd49f(vla-6α，α6整聯(lián)蛋白，gplc)；cd50(icam-3)；cd51(整聯(lián)蛋白α，vnr-α，v玻連蛋白-rα)；cd52(campath-1，he5)；cd53(ox-44)；cd54(icam-1)；cd55(daf)；cd58(lfa-3)；cd59(1f5ag，h19，保護(hù)素，macif，mirl，p-18)；cd60a(gd3)；cd60b(9-o-乙酰基gd3)；cd61(gpiiia，β3整聯(lián)蛋白)；cd62l(l-選擇素，lam-1，lecam-1，mel-14，leu8，tq1)；cd63(limp，mla1，gp55，nga，lamp-3，me491)；cd64(fcγri)；cd65(神經(jīng)酰胺，vim-2)；cd65s(唾液酸化的-cd65，vim2)；cd72(ly-19.2，ly-32.2，lyb-2)；cd74(ii，恒定鏈)；cd75(唾液掩蔽的乳糖胺)；cd75s(α2，6唾液酸化的乳糖胺)；cd80(b7，b7-1，bb1)；cd81(tapa-1)；cd82(4f9，c33，ia4，kai1，r2)；cd84(p75，gr6)；cd85a(ilt5，lir2，hl9)；cd85d(ilt4，lir2，mir10)；cd85j(ilt2，lir1，mir7)；cd85k(ilt3，lir5，hm18)；cd86(b7-2/b70)；cd87(upar)；cd88(c5ar)；cd89(igafc受體，fcαr)；cd91(α2m-r，lrp)；cdw92(p70)；cdw93(gr11)；cd95(apo-1，fas，tnfrsf6)；cd97(bl-kdd/f12)；cd98(4f2，frp-1，rl-388)；cd99(mic2，e2)；cd99r(cd99mab限制的)；cd100(sema4d)；cd101(igsf2，p126，v7)；cd102(icam-2)；cd111(pvrl1，hvec，prr1，nectin1，higr)；cd112(hveb，prr2，pvrl2，粘合素2)；cd114(csf3r，g-csrf，hg-csfr)；cd115(c-fms，csf-1r，m-csfr)；cd116(gmcsfrα)；cdw119(ifnγr，ifnγra)；cd120a(tnfri，p55)；cd120b(tnfrii，p75，tnfrp80)；cd121b(類型2il-1r)；cd122(il2rb)；cd123(il-3rα)；cd124(il-4rα)；cd127(p90，il-7r，il-7rα)；cd128a(il-8ra，cxcr1，(暫時重命名為cd181))；cd128b(il-8rb，cscr2，(暫時重命名為cd182))；cd130(gp130)；cd131(公共β亞基)；cd132(公共γ鏈，il-2rγ)；cdw136(msp-r，ron，p158-ron)；cdw137(4-1bb，ila)；cd139；cd141(血栓調(diào)節(jié)素，胎兒調(diào)節(jié)素)；cd147(basigin，emmprin，m6，ox47)；cd148(hptp-η，p260，dep-1)；cd155(pvr)；cd156a(cd156，adam8，ms2)：cd156b(tace，adam17，csvp)；cdw156c(adam10)；cd157(mo5，bst-1)；cd162(psgl-1)；cd164(mgc-24，muc-24)；cd165(ad2，gp37)；cd168(rhamm，ihabp，hmmr)；cd169(唾液酸粘附素，涎免凝集素-1)；cd170(涎免凝集素5)；cd171(l1cam，nile)；cd172(sirp-1α，myd-1)；cd172b(sirpβ)；cd180(rp105，bgp95，ly64)；cd181(cxcr1，(以前稱為cd128a))；cd182(cxcr2，(以前稱為cd128b))；cd184(cxcr4，npy3r)；cd191(ccr1)；cd192(ccr2)；cd195(ccr5)；cdw197(ccr7(是cdw197))；cdw198(ccr8)；cd204(msr)；cd205(dec-25)；cd206(mmr)；cd207(胰島蛋白)；cdw210(ck)；cd213a(ck)；cdw217(ck)；cd220(胰島素r)；cd221(igf1r)；cd222(m6p-r，igfii-r)；cd224(ggt)；cd226(dnam-1，pta1)；cd230(朊病毒蛋白(prp))；cd232(vesp-r)；cd244(2b4，p38，nail)；cd245(p220/240)；cd256(april，tall2，tnf(配體)超家族，成員13)；cd257(blys，tall1，tnf(配體)超家族，成員13b)；cd261(trail-r1，tnf-r超家族，成員10a)；cd262(trail-r2，tnf-r超家族，成員10b)；cd263(trail-r3，tnbf-r超家族，成員10c)；cd264(trail-r4，tnf-r超家族，成員10d)；cd265(trance-r，tnf-r超家族，成員11a)；cd277(bt3.1，b7家族：嗜乳脂蛋白3)；cd280(tem22，endo180)；cd281(tlr1，toll-樣受體1)；cd282(tlr2，toll-樣受體2)；cd284(tlr4，toll-樣受體4)；cd295(lepr)；cd298(atp1b3，nakatp酶，β3亞基)；cd300a(cmrf-35h)；cd300c(cmrf-35a)；cd300e(cmrf-35l1)；cd302(dcl1)；cd305(lair1)；cd312(emr2)；cd315(cd9p1)；cd317(bst2)；cd321(jam1)；cd322(jam2)；cdw328(涎免凝集素7)；cdw329(涎免凝集素9)；cd68(gp110，巨涎蛋白(macrosiaiin))；和/或甘露糖受體；其中在括號中列出的名字代表可替代的名字。

在實施方案中，用于在樹突細(xì)胞(“dcs”)上的已知靶的靶向部分包括特異性地結(jié)合任何實體(例如蛋白、脂類、碳水化合物、小分子、等)的任何靶向部分，這些實體顯著表達(dá)和/或存在于dcs上(即一種dc標(biāo)記)。示例性的dc標(biāo)記包括，但并不局限于，cd1a(r4，t6，hta-1)；cd1b(r1)；cd1c(m241，r7)；cd1d(r3)；cd1e(r2)；cd11b(αm整聯(lián)蛋白鏈，cr3，mo1，c3nir，mac-1)；cd11c(αx整聯(lián)蛋白，p150，95，axb2)；cdw117(乳糖酶基神經(jīng)鞘氨醇，laccer)；cd19(b4)；cd33(gp67)；cd35(cr1，c3b/c4b受體)；cd36(gpiiib，gpiv，pasiv)；cd39(atp脫氫酶，ntp脫氫酶-1)；cd40(bp50)；cd45(lca，t200，b220，ly5)；cd45ra；cd45rb；cd45rc；cd45ro(uchl-1)；cd49d(vla-4α，α4整聯(lián)蛋白)；cd49e(vla-5α，α5整聯(lián)蛋白)；cd58(lfa-3)；cd64(fcγri)；cd72(ly-19.2，ly-32.2，lyb-2)；cd73(ecto-5’nucloticlase)；cd74(ii，恒定鏈)；cd80(b7，b7-1，bb1)；cd81(tapa-1)；cd83(hb15)；cd85a(ilt5，lir3，hl9)；cd85d(ilt4，lir2，mir10)；cd85j(ilt2，lir1，mir7)；cd85k(ilt3，lir5，hm18)；cd86(b7-2/b70)；cd88(c5ab)；cd97(bl-kdd/f12)；cd101(igsf2，p126，v7)；cd116(gm-csfrα)；cd120a(tmfri，p55)；cd120b(tnfrii，p75，tnfrp80)；cd123(il-3rα)；cd139；cd148(hptp-η，dep-1)；cd150(slam，ipo-3)；cd156b(tace，adam17，csvp)；cd157(mo5，bst-1)；cd167a(ddr1，trke，cak)；cd168(rhamm，ihabp，hmmr)；cd169(唾液酸黏附素，涎免凝集素-1)；cd170(涎免凝集素-5)；cd171(l1cam，nile)；cd172(sirp-1α，myd-1)；cd172b(sirpβ)；cd180(rp105，bgp95，ly64)；cd184(cxcr4，npy3r)；cd193(ccr3)；cd196(ccr6)；cd197(ccr7(wscdw197))；cdw197(ccr7，ebi1，blr2)；cd200(ox2)；cd205(dec-205)；cd206(mmr)；cd207(胰島蛋白)；cd208(dc-lamp)；cd209(dcsign)；cdw218a(il18rα)；cdw218b(il8rβ)；cd227(muc1，pum，pem，ema)；cd230(朊病毒蛋白(prp))；cd252(ox40l，tnf(配體)超家族，成員4)；cd258(light，tnf(配體)超家族，成員14)；cd265(trance-r，tnf-r超家族，成員11a)；cd271(ngfr，p75，tnfr超家族，成員16)；cd273(b7dc，pdl2)；cd274(b7h1，pdl1)；cd275(b7h2，icosl)；cd276(b7h3)；cd277(bt3.1，b7家族：嗜乳脂蛋白3)；cd283(tlr3，toll-樣受體3)；cd289(tlr9，toll-樣受體9)；cd295(lepr)；cd298(atp1b3，nakatp酶β3亞基)；cd300a(cmrf-35h)；cd300c(cmrf-35a)；cd301(mgl1，clecsf14)；cd302(dcl1)；cd303(bdca2)；cd304(bdca4)；cd312(emr2)；cd317(bst2)；cd319(cracc，slamf7)；cd320(8d6)；以及cd68(gp110，巨涎蛋白)；ii類mhc；bdca-1；涎免凝集素-h；其中在括號中列出的名字代表可替代的名字。

在實施方案中，可以通過特異性地結(jié)合任何實體(例如蛋白、脂類、碳水化合物、小分子、等)的任何靶向部分完成靶向，這些實體顯著表達(dá)和/或存在于b細(xì)胞上(即b細(xì)胞標(biāo)記)。示例性的b細(xì)胞標(biāo)記包括，但并不局限于，cd1c(m241，r7)；cd1d(r3)；cd2(e-花環(huán)r，t11，lfa-2)；cd5(t1，tp67，leu-1，ly-1)；cd6(t12)；cd9(p24，drap-1，mrp-1)；cd11a(lfa-1α，αl整聯(lián)蛋白鏈)；cd11b(αm整聯(lián)蛋白鏈，cr3，mo1，c3nir，mac-1)；cd11c(αx整聯(lián)蛋白，p150，95，axb2)；cdw17(乳糖胺，laccer)；cd18(整聯(lián)蛋白β2，cd11a，b，cβ-亞基)；cd19(b4)；cd20(b1，bp35)；cd21(cr2，ebv-r，c3dr)；cd22(bl-cam，lyb8，涎免凝集素-2)；cd23(fcerii，b6，blast-2，leu-20)；cd24(bba-1，hsa)；cd25(tac抗原，il-2rα，p55)；cd26(dppivectoeneyme，ada結(jié)合蛋白)；cd27(t14，s152)；cd29(血小板gpiia，β-1整聯(lián)蛋白，gp)；cd31(pecam-1，endocam)；cd32(fcγrii)；cd35(cr1，c3b/c4b受體)；cd37(gp52-40)；cd38(adp核糖基環(huán)化酶，t10)；cd39(atp脫氫酶，ntp脫氫酶-1)；cd40(bp50)；cd44(ecmrii，h-cam，pgp-1)；cd45(lca，t200，b220，ly5)；cd45ra；cd45rb；cd45rc；cd45ro(uchl-1)；cd46(mcp)；cd47(gp42，iap，oa3，抗人神經(jīng)菌毛素)；cd47r(mem-133)；cd48(blast-1，hulym3，bcm-1，ox-45)；cd49b(vla-2α，gpla，α2整聯(lián)蛋白)；cd49c(vla-3α，α3整聯(lián)蛋白)；cd49d(vla-4α，α4整聯(lián)蛋白)；cd50(icam-3)；cd52(campath-1，hes)；cd53(ox-44)；cd54(icam-1)；cd55(daf)；cd58(lfa-3)；cd60a(gd3)；cd62l(l-選擇素，lam-1，lecam-1，mel-14，leu8，tq1)；cd72(ly-19.2，ly-32.2，lyb-2)；cd73(ecto-5′-核苷酸酶)；cd74(ii，恒定鏈)；cd75(唾液掩蔽的乳糖胺)；cd75s(α2，6唾液酸化的乳糖胺)；cd77(pk抗原，bla，cth/gb3)；cd79a(igα，mb1)；cd79b(igβ，b29)；cd80；cd81(tapa-1)；cd82(4f9，c33，ia4，kai1，r2)；cd83(hb15)；cd84(p75，gr6)；cd85j(ilt2，lir1，mir7)；cdw92(p70)；cd95(apo-1，fas，tnfrsf6)；cd98(4f2，frp-1，rl-388)；cd99(mic2，e2)；cd100(sema4d)；cd102(icam-2)；cd108(sema7a，jmh血型抗原)；cdw119(ifnγr，ifnγra)；cd120a(tnfri，p55)；cd120b(tnfrii，p75，tnfrp80)；cd121b(類型2il-1r)；cd122(il2rβ)；cd124(il-4rα)；cd130(gp130)；cd132(公共γ鏈，il-2rγ)；cdw137(4-1bb，ila)；cd139；cd147(basigin，emmprin，m6，ox47)；cd150(slam，ipo-3)；cd162(psgl-1)；cd164(mgc-24，muc-24)；cd166(alcam，kg-cam，sc-1，ben，dm-grasp)；cd167a(ddr1，trke，cak)；cd171(l1cma，nile)；cd175s(唾液酰-tn(s-tn))；cd180(rp105，bgp95，ly64)；cd184(cxcr4，npy3r)；cd185(cxcr5)；cd192(ccr2)；cd196(ccr6)；cd197(ccr7(wascdw197))；cdw197(ccr7，ebi1，blr2)；cd200(ox2)；cd205(dec-205)；cdw210(ck)；cd213a(ck)；cdw217(ck)；cdw218a(il18rα)；cdw218b(il18rβ)；cd220(胰島素r)；cd221(igf1r)；cd222(m6p-r，igfii-r)；cd224(ggt)；cd225(leu13)；cd226(dnam-1，pta1)；cd227(muc1，pum，pem，ema)；cd229(ly9)；cd230(朊病毒蛋白(prp))；cd232(vesp-r)；cd245(p220/240)；cd247(cd3zeta鏈)；cd261(trail-r1，tnf-r超家族，成員10a)；cd262(trail-r2，tnf-r超家族，成員10b)；cd263(trail-r3，tnf-r超家族，成員10c)；cd264(trail-r4，tnf-r超家族，成員10d)；cd265(trance-r，tnf-r超家族，成員11a)；cd267(taci，tnf-r超家族，成員13b)；cd268(baffr，tnf-r超家族，成員13c)；cd269(bcma，tnf-r超家族，成員16)；cd275(b7h2，icosl)；cd277(bt3.1.b7家族：嗜乳脂蛋白3)；cd295(lepr)；cd298(atp1b3nakatp酶b3亞基)；cd300a(cmrf-35h)；cd300c(cmrf-35a)；cd305(lair1)；cd307(irta2)；cd315(cd9p1)；cd316(ew12)；cd317(bst2)；cd319(cracc，slamf7)；cd321(jam1)；cd322(jam2)；cdw327(涎免凝集素6，cd33l)；cd68(gp100，巨涎蛋白)；cxcr5；vla-4；ii類mhc；表面igm；表面igd；aprl；和/或baff-r；其中在括號中列出的名字代表可替代的名字。標(biāo)記的實例包括在其他地方提供的那些。

在一些實施方案中，可以通過特異性地結(jié)合任何實體(例如蛋白、脂類、碳水化合物、小分子、等)的任何靶向部分完成b細(xì)胞靶向，這些實體顯著表達(dá)和/或存在于經(jīng)活化的b細(xì)胞上(即活化的b細(xì)胞標(biāo)記)。示例性的活化的b細(xì)胞標(biāo)記包括，但并不局限于，cd1a(r4，t6，hta-1)；cd1b(r1)；cd15s(唾液酰lewisx)；cd15u(3′磺基lewisx)；cd15su(6磺基-唾液酰lewisx)；cd30(ber-h2，ki-1)；cd69(aim，ea1，mlr3，gp34/28，vea)；cd70(ki-24，cd27配體)；cd80(b7，b7-1，bb1)；cd86(b7-2/b70)；cd97(blkdd/f12)；cd125(il-5rα)；cd126(il-6rα)；cd138(多配體聚糖-1，硫酸乙酰肝素蛋白聚糖)；cd152(ctla-4)；cd252(ox40l，tnf(配體)超家族，成員4)；cd253(trail，tnf(配體)超家族，成員10)；cd279(pd1)；cd289(tlr9，toll-樣受體9)；以及cd312(emr2)；其中在括號中列出的名字代表可替代的名字。標(biāo)記的實例包括在其他地方提供的那些。

“b細(xì)胞抗原”是指天然地或者可以被構(gòu)建為被b細(xì)胞識別的任何抗原，并且觸發(fā)(天然地或如本領(lǐng)域中已知那樣被構(gòu)建)在b細(xì)胞中的免疫應(yīng)答(例如被b細(xì)胞上的b細(xì)胞受體特異性識別的抗原)。在一些實施方案中，是t細(xì)胞抗原的抗原也是b細(xì)胞抗原。在其他實施方案中，t細(xì)胞抗原并不也是b細(xì)胞抗原。b細(xì)胞抗原包括，但并不局限于蛋白、肽、小分子、以及碳水化合物。在一些實施方案中，b細(xì)胞抗原是非蛋白抗原(即不是蛋白或肽抗原)。在一些實施方案中，b細(xì)胞抗原是與傳染物相關(guān)的碳水化合物。在一些實施方案中，b細(xì)胞抗原是與傳染物有關(guān)的糖蛋白或糖肽。這些傳染物可以是細(xì)菌、病毒、真菌、原生動物、寄生蟲或朊病毒。在一些實施方案中，b細(xì)胞抗原是免疫原性差的抗原。在一些實施方案中，b細(xì)胞抗原是濫用的物質(zhì)或其一部分。在一些實施方案中，b細(xì)胞抗原是上癮的物質(zhì)或其一部分。上癮的物質(zhì)包括，但并不局限于煙堿、麻醉劑、止咳劑、鎮(zhèn)靜劑、以及安神劑。在一些實施方案中，b細(xì)胞抗原是毒素(例如來自化學(xué)武器或天然來源的毒素)或污染物。b細(xì)胞抗原還可以是危險的環(huán)境因素。在其他實施方案中，b細(xì)胞抗原是異體抗原、變應(yīng)原、接觸性致敏原、退行性疾病抗原、半抗原、傳染病抗原、癌抗原、特應(yīng)性疾病抗原、上癮的物質(zhì)、異種抗原、或代謝病酶或其酶產(chǎn)物。

“可生物降解的聚合物”是指在引入受試者體內(nèi)時，隨時間降解的聚合物。生物可降解的聚合物包括但并不局限于聚酯、聚碳酸酯、聚縮酮、或聚酰胺。這樣的聚合物可以包括聚(乳酸)、聚(乙醇酸)、聚(乳酸乙醇酸)共聚物、或聚己酸內(nèi)酯。在一些實施方案中，該生物可降解的聚合物包括聚醚的嵌段共聚物(例如聚(乙二醇))、以及聚酯、聚碳酸酯、或聚酰胺、或其他生物可降解的聚合物。在實施方案中，該生物可降解的聚合物包括聚(乙二醇)和聚(乳酸)的嵌段共聚物、聚(乙醇酸)、聚(乳酸乙醇酸)共聚物、或聚己酸內(nèi)酯。然而在一些實施方案中，該生物可降解的聚合物并不包括聚醚(例如聚(乙二醇))，或單獨由聚醚組成。一般地，在ph＝7.4并且在25℃下，對于用作合成納米載體的一部分，該生物可降解的聚合物在水中是不可溶的。在實施方案中，如使用凝膠滲透色譜法確定的那樣，該生物可降解的聚合物具有范圍從約800道爾頓至約50,000道爾頓的重均分子量。在一些實施方案中，如使用凝膠滲透色譜法確定的那樣，該重均分子量是從約800道爾頓至約10,000道爾頓，優(yōu)選從800道爾頓至10,000道爾頓。在其他實施方案中，如使用凝膠滲透色譜法確定的那樣，該重均分子量是從1000道爾頓至10,000道爾頓。在一個實施方案中，該生物可降解的聚合物并不包括聚縮酮或其單元。

“偶合”或“偶接”或“偶聯(lián)”(以及類似表述)是指附著到聚合物或其單元或附著到或包含在合成納米載體內(nèi)。在一些實施方案中，通過一個或多個連接物介導(dǎo)共價偶合。在一些實施方案中，該偶合是非共價的。在一些實施方案中，通過電荷相互作用、親和相互作用、金屬配位、物理吸附、主客體相互作用、疏水相互作用、tt堆積相互作用、氫鍵相互作用、范德華相互作用、磁相互作用、靜電相互作用、偶極-偶極相互作用、和/或它們的組合來介導(dǎo)該非共價偶合。在實施方案中，使用常規(guī)技術(shù)，在合成納米載體內(nèi)的封裝的背景中，可能出現(xiàn)該偶合。任何以上提到的偶合可以安排在一個表面上或安排在發(fā)明的合成納米載體內(nèi)。

“劑型”是指在適合給予受試者的一種介質(zhì)、載體、運載體、或裝置中，在此提供的化合物、結(jié)合物、合成納米載體、或組合物。

“膠囊化”是指封裝在合成納米載體內(nèi)，優(yōu)選完全封裝在合成納米載體內(nèi)。多數(shù)或所有膠囊化的物質(zhì)并不暴露于合成納米載體外的局部環(huán)境。膠囊化不同于吸收，后者將多數(shù)或所有物質(zhì)放置在合成納米載體表面上，并且使該物質(zhì)暴露于合成納米載體外的局部環(huán)境。在實施方案中，免疫調(diào)節(jié)劑或b細(xì)胞和/或t細(xì)胞抗原被膠囊化在合成納米載體內(nèi)。

“免疫調(diào)節(jié)劑”是指調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的媒介物。如在此使用的那樣，“調(diào)節(jié)”是指誘導(dǎo)、增強、刺激、或指導(dǎo)免疫應(yīng)答。這樣的媒介物包括刺激(或促進(jìn))對抗原的免疫應(yīng)答的免疫刺激劑，但不是抗原或衍生自抗原。在一些實施方案中，該免疫調(diào)節(jié)劑在合成納米載體的表面上，和/或合并在合成納米載體內(nèi)。在實施方案中，經(jīng)由提供的化合物或結(jié)合物的聚合物或其單元，免疫調(diào)節(jié)劑被偶合到合成納米載體。

在一些實施方案中，所有合成納米載體的免疫調(diào)節(jié)劑都是彼此相同的。在一些實施方案中，合成納米載體包括大量不同類型的免疫調(diào)節(jié)劑。在一些實施方案中，合成納米載體包括多種獨自的免疫調(diào)節(jié)劑，所有這些都是彼此相同的。在一些實施方案中，合成納米載體正好包括一個類型的免疫調(diào)節(jié)劑。在一些實施方案中，合成納米載體正好包括兩個不同類型的免疫調(diào)節(jié)劑。在一些實施方案中，合成納米載體包括多于兩個的不同類型的免疫調(diào)節(jié)劑。

“合成納米載體的最大尺寸”是指沿合成納米載體的任何軸測量的納米載體的最大尺寸?！昂铣杉{米載體的最小尺寸”是指沿合成納米載體的任何軸測量的合成納米載體的最小尺寸。例如，對于球形合成納米載體，合成納米載體的最大和最小尺寸會是基本相同的，并且會是它的直徑的大小。類似地，對于立方體合成納米載體，合成納米載體的最小尺寸會是它的高、寬、或長中最小的，同時合成納米載體的最大尺寸會是它的高、寬、或長中最大的。在一個實施方案中，基于樣品中合成納米載體的總數(shù)，樣品中至少75％、優(yōu)選至少80％、更優(yōu)選至少90％的合成納米載體的最小尺寸是大于100nm。在一個實施方案中，基于樣品中合成納米載體的總數(shù)，樣品中至少75％、優(yōu)選至少80％、更優(yōu)選至少90％的合成納米載體的最大尺寸是等于或小于5μm。優(yōu)選地，基于樣品中合成納米載體的總數(shù)，樣品中至少75％、優(yōu)選至少80％、更優(yōu)選至少90％的合成納米載體的最小尺寸是等于或大于110nm、更優(yōu)選等于或大于120nm、更優(yōu)選等于或大于130nm、并且仍更優(yōu)選等于或大于150nm。優(yōu)選地，基于樣品中合成納米載體的總數(shù)，樣品中至少75％、優(yōu)選至少80％、更優(yōu)選至少90％的合成納米載體的最大尺寸是等于或小于3μm、更優(yōu)選等于或小于2μm、更優(yōu)選等于或小于1μm、更優(yōu)選等于或小于800nm、更優(yōu)選等于或小于600nm、并且仍更優(yōu)選等于或小于500nm。在優(yōu)選的實施方案中，基于樣品中合成納米載體的總數(shù)，樣品中至少75％，優(yōu)選至少80％，更優(yōu)選至少90％的合成納米載體的最大尺寸是等于或大于100nm、更優(yōu)選等于或大于120nm、更優(yōu)選等于或大于130nm、更優(yōu)選等于或大于140nm、并且仍更優(yōu)選等于或大于150nm。通過將這些合成納米載體懸浮在一種液體(通常是水性)介質(zhì)中，并且使用動態(tài)光散射(例如使用一臺brookhavenzetapals儀器)獲得合成納米載體大小的測量值。

“藥學(xué)上可接受的賦形劑”是指一種藥理學(xué)上無活性的物質(zhì)，該物質(zhì)被添加到一種發(fā)明的化合物、結(jié)合物、合成納米載體、或組合物中來進(jìn)一步協(xié)助它的給藥。沒有限制，藥學(xué)上可接受的賦形劑的實例包括碳酸鈣、磷酸鈣、不同的稀釋劑、不同的糖和各種類型的淀粉、纖維素衍生物、明膠、植物油以及聚乙二醇。

“釋放速率”是指在體外釋放測試中，封存的免疫調(diào)節(jié)劑從組合物(例如合成納米載體)流入周圍介質(zhì)的速率。首先，通過置入適當(dāng)?shù)捏w外釋放介質(zhì)中，制備合成納米載體用于釋放測試。這一般通過在離心使合成納米載體成小粒以后交換緩沖劑，并且使用溫和條件重建合成納米載體來實現(xiàn)。通過將樣品置于一臺適當(dāng)?shù)臏囟瓤刂蒲b置中，在37℃開始測定。在不同的時間點移出樣品。

通過離心使合成納米載體成小粒從釋放介質(zhì)分離合成納米載體。測定從合成納米載體分散的免疫調(diào)節(jié)劑的釋放介質(zhì)。使用hplc測量免疫調(diào)節(jié)劑以確定免疫調(diào)節(jié)劑的含量和質(zhì)量。將包含剩余封存的免疫調(diào)節(jié)劑的小粒溶解在溶劑中，或用堿水解來從合成納米載體解脫封存的免疫調(diào)節(jié)劑。然后還通過hplc測量包含免疫調(diào)節(jié)劑的小粒以確定在給定時間點，仍未釋放的免疫調(diào)節(jié)劑的含量和質(zhì)量。

已經(jīng)釋放至釋放介質(zhì)中的和剩余在合成納米載體中的免疫調(diào)節(jié)劑間的質(zhì)量平衡被關(guān)閉。數(shù)據(jù)表示為釋放部分或凈釋放，都表示為隨時間釋放的微克數(shù)。

“受試者”是指一種動物，包括哺乳動物例如人和靈長目動物；鳥；家養(yǎng)動物或家畜(例如貓、狗、綿羊、山羊、牛、馬和豬)；實驗動物(例如小鼠、大鼠和豚鼠)；魚；以及類似動物。

“一種或多種合成納米載體”是指在自然界不能找到的并且至少擁有在大小上小于或等于5微米的尺寸的離散物。白蛋白納米顆粒清楚地包括在合成納米載體內(nèi)。

合成納米載體包括在此提供的化合物或組合物，并且因此可以是聚合物的納米顆粒。在一些實施方案中，合成納米載體可以包括一種或多種聚合物基質(zhì)。然而，合成納米載體還可以包括其他納米材料，并且可以是例如脂類聚合物納米顆粒。在一些實施方案中，可以由包被層(例如脂質(zhì)體、脂質(zhì)單分子層、微膠粒、等)環(huán)繞聚合物基質(zhì)。在一些實施方案中，合成納米載體不是微膠粒。在一些實施方案中，合成納米載體可以包括一個核，該核包括被一個脂質(zhì)層(例如脂質(zhì)雙分子層、脂質(zhì)單分子層、等)環(huán)繞的聚合物基質(zhì)。在一些實施方案中，合成納米載體的不同元件可以與該聚合物基質(zhì)偶合。

合成納米載體可以包括一種或多種脂類。在一些實施方案中，合成納米載體可以包括一種脂質(zhì)體。在一些實施方案中，合成納米載體可以包括一個脂質(zhì)雙分子層。在一些實施方案中，合成納米載體可以包括一個脂質(zhì)單分子層。在一些實施方案中，合成納米載體可以包括一種微膠粒。在一些實施方案中，合成納米載體可以包括被一個脂質(zhì)層(例如脂質(zhì)雙分子層、脂質(zhì)單分子層、等)環(huán)繞的非聚合物核(例如金屬顆粒、量子點、陶瓷顆粒、骨顆粒、病毒性顆粒、蛋白、核酸、碳水化合物、等)。

合成納米載體可以包括脂基納米顆粒、金屬納米顆粒、表面活性劑基乳液、樹枝狀化合物、巴奇球，納米線、病毒狀顆粒、肽或蛋白基顆粒(例如白蛋白納米顆粒)。合成納米載體可以具有多種不同的形狀，包括但并不局限于球形、立方形、錐形、長方形、圓柱形、環(huán)形、以及類似形狀。根據(jù)本發(fā)明的合成納米載體包括一個或多個表面。可以適合用于實踐本發(fā)明的示例性的合成納米載體包括：(1)gref等人的美國專利5,543,158中披露的生物可降解納米顆粒，(2)saltzman等人的美國專利申請20060002852公開的聚合物納米顆粒，(3)desimone等人的美國專利申請20090028910公開的石版印刷構(gòu)建的納米顆粒，(4)andrian等人的wo2009/051837的披露，或(5)penades等人的公開的美國專利申請2008/0145441中披露的納米顆粒。

根據(jù)本發(fā)明的合成納米載體具有等于或小于約100nm、優(yōu)選地等于或小于100nm的最小尺寸，并不包括具有使補體活化的羥基的表面，或者可替代地包括基本由不是使補體活化的羥基的部分組成的表面。在一個優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的合成納米載體具有等于或小于約100nm、優(yōu)選地等于或小于100nm的最小尺寸，并不包括實質(zhì)上使補體活化的表面，或者可替代地包括基本由不實質(zhì)上活化補體的部分組成的表面。在更優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的合成納米載體具有等于或小于約100nm、優(yōu)選地等于或小于100nm的最小尺寸，并不包括使補體活化的表面，或者可替代地包括基本由不使補體活化的部分組成的表面。在實施方案中，合成納米載體可以擁有大于1∶1、1∶1.2、1∶1.5、1∶2、1∶3、1∶5、1∶7、或大于1∶10的長徑比。

在一些實施方案中，合成納米載體是球體或扁球體。在一些實施方案中，合成納米載體是扁平的或盤狀的。在一些實施方案中，合成納米載體是立方體或立方形的。在一些實施方案中，合成納米載體是卵形或橢圓形的。在一些實施方案中，合成納米載體是圓柱體、椎體、或錐形。

通常希望使用一群在大小、形狀、和/或構(gòu)成方面較一致的合成納米載體，這樣每一合成納米載體具有類似特性。例如，至少80％、至少90％、或至少95％的合成納米載體可以具有落在5％、10％或20％的平均直徑或平均尺寸內(nèi)的最小尺寸或最大尺寸。在一些實施方案中，一群合成納米載體可以關(guān)于大小、形狀、和/或構(gòu)成是不均勻的。

合成納米載體可以是實心的或空心的，并且可以包括一個或多個層。在一些實施方案中，相對于其他一層或多層，每一層具有獨特的構(gòu)成和獨特的特性。為了給出但是一個實例，合成納米載體可以具有一個核/殼結(jié)構(gòu)，其中核是一層(例如一個聚合物核)并且殼是一個第二層(例如一個脂質(zhì)雙分子層或單分子層)。合成納米載體可以包括多個不同的層。

“t細(xì)胞抗原”是指通過t細(xì)胞中的免疫應(yīng)答來識別的并且觸發(fā)t細(xì)胞中的免疫應(yīng)答的任何抗原(例如，經(jīng)由遞呈結(jié)合到i類或ii類主要組織相容性復(fù)合物分子(mhc)上的、或者結(jié)合到cd1復(fù)合物上的抗原或其一部分，通過在t細(xì)胞或nkt細(xì)胞上的t細(xì)胞受體來特異性識別的抗原)。在一些實施方案中，是t細(xì)胞抗原的抗原也是b細(xì)胞抗原。在其他實施方案中，t細(xì)胞抗原并不也是b細(xì)胞抗原。t細(xì)胞抗原一般是蛋白或多肽。t細(xì)胞抗原可以是刺激cd8+t細(xì)胞應(yīng)答、cd4+t細(xì)胞應(yīng)答、或二者的抗原。因此，在一些實施方案中，這些t細(xì)胞抗原可以有效刺激這兩種類型的應(yīng)答。

在一些實施方案中，t細(xì)胞抗原是t輔助細(xì)胞抗原，它是通過刺激t細(xì)胞輔助細(xì)胞，可以產(chǎn)生對無關(guān)的b細(xì)胞抗原的增強的應(yīng)答的t細(xì)胞抗原。在實施方案中，t輔助細(xì)胞抗原可以包括一種或多種衍生自破傷風(fēng)類毒素、eb病毒、流行性感冒病毒、呼吸道合胞病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒、風(fēng)疹病毒、巨細(xì)胞病毒、腺病毒、白喉類毒素、或padre肽的肽。在其他實施方案中，t輔助細(xì)胞抗原包括一種或多種脂類、或糖脂類，包括但并不局限于：α-半乳糖基神經(jīng)酰胺(α-galcer)、α-連接的糖鞘脂(來自鞘氨醇單胞菌屬)、半乳糖基二?；视?來自伯氏疏螺旋體)、lypophosphoglycan(來自杜氏利什曼原蟲)、和磷脂酰肌醇四甘露糖苷(pim4)(來自麻風(fēng)分枝桿菌)。對于作為t輔助細(xì)胞抗原有用的添加的脂類和/或糖脂類，參見v.cerundolo等人，“harnessinginvariantnktcellsinvaccinationstrategies.”naturerevimmun，9：28-38(2009)。在實施方案中，cd4+t細(xì)胞抗原可以是從一個來源(例如天然來源)獲得的cd4+t細(xì)胞抗原的衍生物。在這樣的實施方案中，cd4+t細(xì)胞抗原序列(例如結(jié)合到mhcii的那些肽)可以具有與從該來源獲得的抗原的至少70％、80％、90％、或95％的同一性。在實施方案中，t細(xì)胞抗原，優(yōu)選是t輔助細(xì)胞抗原，可以偶合到合成納米載體，或者從合成納米載體解偶合。

“其單元”是指聚合物的單體單元，該聚合物一般由一系列的連接的單體構(gòu)成。

“疫苗”是指改進(jìn)對具體的病原體或疾病的免疫應(yīng)答的物質(zhì)的組合物。疫苗典型地包含刺激受試者的免疫系統(tǒng)以識別特異性抗原為外來并且將它從受試者身體消除的因子。疫苗還建立免疫“記憶”，這樣如果人被再攻擊，那么抗原將被迅速識別并響應(yīng)。疫苗可以是預(yù)防性的(例如阻止由任何病原體引起的未來感染)，或治療的(例如為了治療癌癥，針對腫瘤特異抗原的疫苗)。根據(jù)本發(fā)明的疫苗可以包括一種或多種在此提供的化合物、結(jié)合物、合成納米載體、或組合物。

制造本發(fā)明的化合物、結(jié)合物、或合成納米載體的方法

免疫調(diào)節(jié)劑和聚合物或其單元經(jīng)由一個酰胺鍵或酯鍵共價偶合。在一些實施方案中，這些結(jié)合物形成合成納米載體的一部分。通常，聚合物(例如聚丙交酯(pla)或聚丙交酯乙交酯共聚物(plga))可以與免疫刺激劑(例如瑞喹莫德(也稱為r848))以若干方式結(jié)合。以下并且在實例中提供了偶合的方法。

提供的以下方法或這些方法的任何步驟都是示例性的，并且可以在任何合適的條件下進(jìn)行。在一些情況下，提供的這些方法的反應(yīng)或任何步驟可以在溶劑或溶劑的混合物存在的條件下進(jìn)行。適合用于本發(fā)明的溶劑的非限制性實例包括，但并不局限于：對苯甲酚、甲苯、二甲苯、均三甲苯、二乙醚、二醇、石油醚、己烷、環(huán)己烷、戊烷、二氯甲烷(或亞甲基氯)、氯仿、二噁烷、四氫呋喃(thf)、二甲亞砜(dmso)、二甲基甲酰胺(dmf)、乙酸乙酯(etoac)、三乙胺、乙腈、甲基叔丁基醚(mtbe)、n-甲基吡咯烷酮(nmp)、二甲基乙酰胺(dmac)、異丙醇(ipa)、它們的混合物、或類似物質(zhì)。在一些情況下，該溶劑選自下組，該組由以下各項組成：乙酸乙酯、亞甲基氯、thf、dmf、nmp、dmac、dmso、和甲苯、或它們的混合物。

可以在任何合適的溫度下進(jìn)行所提供的方法的反應(yīng)或任何步驟。在一些情況下，在約室溫下(例如約25℃、約20℃、在約20℃和約25℃之間、或類似溫度)進(jìn)行所提供的方法的反應(yīng)或任何步驟。然而，在一些情況下，可以在低于或高于室溫的溫度下進(jìn)行所提供的方法的反應(yīng)或任何步驟，例如在約-20℃、在約-10℃、在約0℃、在約10℃、在約30℃、約40℃、約50℃、約60℃、約70℃、約80℃、約90℃、約100℃、約120℃、約140℃、約150℃或更高溫度.在具體的實施方案中，在0℃和120℃之間的溫度進(jìn)行所提供的方法的反應(yīng)或任何步驟。在一些實施方案中，可以在多于一個溫度下進(jìn)行所提供的方法的反應(yīng)或任何步驟(例如在一個第一溫度下添加反應(yīng)物，并且在一個第二溫度下攪拌該反應(yīng)混合物，其中從第一溫度至第二溫度的轉(zhuǎn)變可以是逐漸的或迅速的)。

可以允許所提供的方法的反應(yīng)或任何步驟進(jìn)行任何合適的一段時間。在一些情況下，允許所提供的方法的反應(yīng)或任何步驟進(jìn)行約10分鐘、約20分鐘、約30分鐘、約40分鐘、約50分鐘、約1小時、約2小時、約4小時、約8小時、約12小時、約16小時、約24小時、約2天、約3天、約4天、或更長時間。在一些情況下，可以在一個中間時間移出并分析反應(yīng)混合物的等分部分以確定所提供的方法的反應(yīng)或任何步驟的進(jìn)展。在一些實施方案中，可以在惰性氣氛在無水條件下(例如在氮氣或氬氣氣氛、無水溶劑、等條件下)進(jìn)行所提供的方法的反應(yīng)或任何步驟。

可以使用普遍已知的技術(shù)分離(例如經(jīng)由蒸餾、柱色譜法、萃取、沉淀、等)和/或分析(例如氣液色譜法、高效液相色譜法、核磁共振波譜法、等)反應(yīng)產(chǎn)物和/或中間產(chǎn)物。在一些情況下，可以例如使用反相高效液相色譜法分析包括結(jié)合物質(zhì)的結(jié)合物或合成納米載體，以確定免疫調(diào)節(jié)劑的加載。

這些聚合物可以具有任何合適的分子量。例如這些聚合物可以具有低或高分子量。非限制性的分子量值包括100da、200da、300da、500da、750da、1000da、2000da、3000da、4000da、5000da、6000da、7000da、8000da、9000da、10,000da、或更大。在一些實施方案中，這些聚合物具有約800da至約10,000da的重均分子量?？梢允褂媚z滲透色譜法確定聚合物的分子量。

以下提供的是并不旨在限制的示例性結(jié)合反應(yīng)。

方法1

使用在酰胺合成中普遍使用的活化試劑，將一種聚合物(例如pla、plga)或其單元與至少一種酸端基轉(zhuǎn)化為一種反應(yīng)性?；瘎?，例如鹵化?；Ⅴ；溥颉⒒钚怎?、等。

在這一兩步法中，分離生成的活化聚合物或其單元(例如pla、plga)，并且然后在一種堿存在下，與一種免疫調(diào)節(jié)劑(例如r848)反應(yīng)以給出希望的結(jié)合物(例如pla-r848)，例如像以下圖解示出的那樣：

活化試劑可以被用來將聚合物或其單元(例如pla或plga)轉(zhuǎn)化為活化的?；问?，包括但并不局限于：氰尿酰氟、n，n-四甲基氟代甲酰胺六氟磷酸酯(tffh)；?；溥?例如碳酰二咪唑(cdi))、n，n’-碳酰雙(3-甲基咪唑鎓)三氟甲磺酸酯(cbmit)；以及活性酯(例如n-羥基丁二酰亞胺(nhs或hosu))，在碳二亞胺(例如n，n’-二環(huán)己基碳二亞胺(dcc)、n-乙基-n’-(3-(二甲氨基)丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(edc)或n，n′-二異丙基碳二亞胺(dic))存在下；n，n′-二丁二酰亞胺碳酸酯(dsc)；五氟苯酚，在dcc或edc或dic存在下；五氟苯基三氟醋酸酯。

可以分離(例如經(jīng)由沉淀、萃取、等)活化的聚合物或其單元，和/或在活化以后，在合適的條件(例如在低溫，在氬氣下)儲存，或可以立即使用?；罨木酆衔锘蚱鋯卧梢耘c免疫刺激劑在任何合適的條件下反應(yīng)。在一些情況下，在堿和/或催化劑存在下進(jìn)行該反應(yīng)。堿催化劑的非限制性實例包括二異丙基乙胺(dipea)和4-二甲基氨基吡啶(dmap)。

方法2

在活化試劑或偶聯(lián)試劑存在下，將一種具有酸端基的聚合物或其單元(例如具有任何合適的分子量的pla、plga)與一種免疫調(diào)節(jié)劑(例如r848)反應(yīng)，這在原位將該聚合物或其單元(例如pla、plga)轉(zhuǎn)化為反應(yīng)性酰化劑，以給出希望的結(jié)合物(例如pla-r848、plga-r848)。

偶聯(lián)劑或活化劑包括但并不局限于：在碳二亞胺(例如edc或dcc或dic)存在下使用的活化劑，例如1-羥基苯并三唑(hobt)、1-羥基-7-氮雜苯并三唑(hoat)、3，4-二氫-3-羥基-4-氧代-1，2，3-苯并三嗪(ho-dhbt)、n-羥基丁二酰亞胺(nhs或hosu)、五氟苯酚(pfp)；無碳二亞胺的活化劑：鏻鹽(例如o-苯并三唑-1-基氧基三(二甲氨基)鏻六氟磷酸鹽(bop)、o-苯并三唑-1-基氧基三(吡咯烷基)鏻六氟磷酸鹽(pybop)、7-氮雜苯并三唑-1-基氧基三(吡咯烷基)鏻六氟磷酸鹽(pyaop))；脲鎓鹽類(例如o-苯并三唑-1-基氧基三-1，1，3，3-四甲基脲鎓四氟硼酸鹽(tbtu)和六氟磷酸鹽(hbtu)、o-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽(hatu)、o-(1，2-二氫-2-氧代-1-吡啶基)-1，1，3，3-四甲基-脲鎓四氟硼酸鹽(tptu))；鹵脲和鹵鏻鹽類(例如二(四亞甲基)氟代甲酰胺六氟磷酸鹽(btffh)、溴三(二甲氨基)鏻六氟磷酸鹽(brop)、溴三吡咯烷基鏻六氟磷酸鹽(pybrop)和氯三吡咯烷基鏻六氟磷酸鹽(pyclop))；苯并三嗪衍生物(例如o-(3，4-二氫-4-氧代-1，2，3-苯并三嗪-3-基)n，n，n’，n’-四甲基脲鎓四氟硼酸鹽(tdbtu)和3-(二乙氧基磷酰基氧)-1，2，3-苯并三嗪-4(3h)-酮(depbt))。如在此說明的那樣，合適溶劑的非限制性實例包括dmf、dcm、甲苯、乙酸乙酯、等。

方法3

免疫調(diào)節(jié)劑(例如r848)還可以被偶合到羥基封端的聚合物或其單元上。這樣的聚合物或其單元包括聚乙二醇、聚丙交酯、聚丙交酯乙交酯共聚物、聚己酸內(nèi)酯、以及其他類似聚酯、或其單元。通常，如以下進(jìn)行反應(yīng)，使用在內(nèi)酯開環(huán)聚合中使用的催化劑，其中具有一般結(jié)構(gòu)(iv)的酰亞胺將與以上提到的聚合物或其單元的末端羥基反應(yīng)。生成的反應(yīng)產(chǎn)物(ii)經(jīng)由酯鍵將媒介物的酰胺連接到聚合物或其單元上?；瘜W(xué)式(iv)和(ii)的化合物如下：

其中r1＝h、oh、sh、nh2，或者取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r2＝h、烷基、或取代的烷基；y＝n或c；如果y＝n那么r3不存在；或者如果y＝c，那么r3是h、烷基、取代的烷基、或者與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；在不與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)時，r4是h、或取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r4或者與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；r5是聚合物或其單元；x＝c、n、o、或s；r6和r7每一個獨立地是h或被取代；并且r9、r10、r11、和r12每一個獨立地是h、鹵素、oh、硫、nh2、或取代的或未取代的烷基、芳基、雜環(huán)的、烷氧基、芳氧基、烷硫基、芳硫基、烷氨基、或芳氨基。

催化劑包括，但并不局限于膦嗪堿、1，8-二氮雜二環(huán)十一碳-7-烯(dbu)、1，4，7-三氮雜二環(huán)癸烯(tbd)、以及n-甲基-1，4，7-三氮雜二環(huán)癸烯(mtdb)。其他催化劑在本領(lǐng)域是已知的并已提供，例如在kamber等人，organocatalyticring-openingpolymerization，chem.rev.2007，107，58-13-5840。合適的溶劑的非限制性實例包括亞甲基氯、氯仿、和thf。

在此示出通過這樣一種方法完成的反應(yīng)的一個具體實例：

其中r5-oh包含兩個羥基(例如一種二醇，ho-r5-oh)，其中每一個都通過與r848有關(guān)的酰亞胺的反應(yīng)功能化。在一些情況下，ho-r5-oh是一種聚二醇(例如聚(碳酸六甲基酯)二醇或聚己酸內(nèi)酯二醇。例如，可以按以下進(jìn)行該反應(yīng)：

其中r基團(tuán)如在此說明的那樣。合適的聚合物的非限制性實例包括聚縮酮二醇、聚(乙)二醇、聚己酸內(nèi)酯二醇、二嵌段聚丙交酯聚(乙)二醇共聚物、二嵌段聚丙交酯/聚乙醇酸交酯聚(乙)二醇共聚物、二嵌段聚乙醇酸交酯聚(乙)二醇共聚物、聚(丙)二醇、聚(碳酸六亞甲基酯)二醇、以及聚(四氫呋喃)。

在其中使用聚二醇的實施方案中，可以用一個保護(hù)基團(tuán)(例如叔丁氧羰基)保護(hù)二醇基團(tuán)之一，因此該聚二醇會是具有化學(xué)式ho-r5-op的化合物，其中p是保護(hù)基團(tuán)。與免疫調(diào)節(jié)劑進(jìn)行反應(yīng)從而形成免疫調(diào)節(jié)劑-r5-op結(jié)合物之后，該保護(hù)基團(tuán)可以被除去，并且這第二個二醇基團(tuán)可以與任何合適的試劑(例如plga，pla)反應(yīng)。

方法4

例如像以下圖解示出的那樣，在一種催化劑存在下，可以經(jīng)由一種免疫調(diào)節(jié)劑(例如r848)與一種聚合物或其單元(例如d/l-丙交酯)的一鍋法開環(huán)聚合形成結(jié)合物(例如r848-pla)：

在一個一步方法中，該免疫調(diào)節(jié)劑和該聚合物或其單元可以結(jié)合到包括一種催化劑的單反應(yīng)混合物中。可以在合適的溫度(例如在約150℃)進(jìn)行該反應(yīng)，并且使用普遍已知的技術(shù)分離生成的結(jié)合物。合適的催化劑的非限制性實例包括dmap和乙基己酸錫。

方法5

例如像以下圖解示出的那樣，在催化劑存在下，可以經(jīng)由一種免疫調(diào)節(jié)劑(例如r848)與一種聚合物或其單元(例如d/l-丙交酯和乙交酯)的兩步開環(huán)聚合形成結(jié)合物：

可以首先結(jié)合該聚合物或其單元，并且在一些情況下，加熱(例如至135℃)以形成一種溶液。可以添加該免疫調(diào)節(jié)劑到包括聚合物或其單元的溶液中，隨后添加一種催化劑(例如乙基己酸錫)?？梢允褂闷毡橐阎募夹g(shù)分離生成的結(jié)合物。合適的催化劑的非限制性實例包括dmap和乙基己酸錫。

在一些實施方案中，在此提供的化合物或結(jié)合物、另一種免疫調(diào)節(jié)劑、抗原、和/或靶向部分可以共價地與一種聚合物基質(zhì)締合。在一些實施方案中，由一個連接物介導(dǎo)共價締合作用。在一些實施方案中，在此提供的化合物或結(jié)合物、另一種免疫調(diào)節(jié)劑、抗原、和/或靶向部分可以非共價地與一種聚合物基質(zhì)締合。例如，在一些實施方案中，在此提供的化合物或結(jié)合物、另一種免疫調(diào)節(jié)劑、抗原、和/或靶向部分可以被膠囊化在聚合物基質(zhì)內(nèi)、被聚合物基質(zhì)環(huán)繞、和/或分散遍及一種聚合物基質(zhì)?？商娲鼗蝾~外地，在此提供的化合物或結(jié)合物、另一種免疫調(diào)節(jié)劑、抗原、和/或靶向部分可以通過疏水性相互作用、電荷相互作用、范德華力、等與一種聚合物基質(zhì)締合。

多種多樣的聚合物和用于從此形成聚合物基質(zhì)的方法是常規(guī)已知的。通常，一種聚合物基質(zhì)包括一種或多種聚合物。聚合物可以是天然的或非天然的(合成的)聚合物。聚合物可以是均聚物或包括兩種或更多種單體的共聚物。在序列方面，共聚物可以是隨機的、嵌段的，或者包括隨機序列和嵌段序列的組合。典型地，根據(jù)本發(fā)明的聚合物是有機聚合物。

適合用于本發(fā)明的聚合物的實例包括，但并不局限于聚乙烯、聚碳酸酯(例如聚(1，3-二噁烷-2酮))、聚酐(例如聚(癸二酸酐))、聚羥基酸(例如聚(β-羥基烷酸酯))、聚丙基延胡索酸酯(polypropylfumerate)、聚己內(nèi)酯、聚酰胺(例如聚己內(nèi)酰胺)、聚縮醛、聚醚、聚酯(例如聚丙交酯、聚乙交酯)、聚(原酸酯)、聚氰基丙烯酸酯、聚乙烯醇、聚氨酯、聚磷腈、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、聚脲、聚苯乙烯、聚胺、以及多糖類(例如殼聚糖)。

在一些實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的聚合物包括在21c.f.r.§177.2600下已經(jīng)由美國食品與藥品管理局(fda)批準(zhǔn)用于人的聚合物，包括但并不局限于聚酯(例如聚乳酸、聚(乳酸乙醇酸共聚物)、聚己內(nèi)酯、聚戊內(nèi)酯、聚(1，3-二噁烷-2酮))；聚酐(例如聚(癸二酸酐))；聚醚(例如聚乙二醇)；聚氨酯；聚甲基丙烯酸酯；聚丙烯酸酯；以及聚氰基丙烯酸酯。

在一些實施方案中，聚合物可以是親水的。例如，聚合物可以包括陰離子基團(tuán)(例如磷酸根、硫酸根、羧酸根)；陽離子基團(tuán)(例如季胺基團(tuán))；或極性基團(tuán)(例如羥基、硫醇基團(tuán)、胺基團(tuán))。在一些實施方案中，包括親水的聚合物基質(zhì)的合成納米載體在合成納米載體內(nèi)產(chǎn)生親水環(huán)境。在一些實施方案中，聚合物可以是疏水的。在一些實施方案中，包括疏水的聚合物基質(zhì)的合成納米載體在合成納米載體內(nèi)產(chǎn)生疏水環(huán)境。在合成納米載體內(nèi)，選擇親水性或疏水性聚合物可以影響要合并(例如偶合)材料的性質(zhì)。

在一些實施方案中，聚合物可以用一個或多個部分和/或官能團(tuán)改性。根據(jù)本發(fā)明，可以使用多個部分或官能團(tuán)。在一些實施方案中，可以用peg、用碳水化合物、和/或用衍生自多糖類的非環(huán)狀聚縮醛來將聚合物(papisov，2001，acssymposiumseries，786：301)改性。

在一些實施方案中，可以用脂類或脂肪酸基團(tuán)改性聚合物。在一些實施方案中，脂肪酸基團(tuán)可以是丁酸、己酸、辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、花生酸、山崳酸、或廿四烷酸中的一種或多種。在一些實施方案中，脂肪酸基團(tuán)可以是棕櫚烯酸、油酸、異油酸、亞麻酸、α-亞麻酸、γ-亞麻酸、花生四烯酸、二十碳烯酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸、或芥酸中的一種或多種。

在一些實施方案中，聚合物可以是聚酯，包括共聚物，這些共聚物包括乳酸和乙醇酸單元(例如聚(乳酸乙醇酸共聚物)和聚(聚丙交酯乙交酯共聚物))，在此統(tǒng)稱為“plga”；以及包括乙醇酸單元的均聚物，在此稱為“pga”，以及乳酸單元(例如聚-l-乳酸、聚-d-乳酸、聚-d，l-乳酸、聚-l-丙交酯、聚-d-丙交酯、以及聚-d，l-丙交酯)，在此統(tǒng)稱為“pla”。在一些實施方案中，示例性的聚酯包括，例如多羥基酸；peg共聚物和丙交酯與乙交酯的共聚物(例如pla-peg共聚物、pga-peg共聚物、plga-peg共聚物)，以及它們的衍生物)。在一些實施方案中，聚酯包括，例如聚酐、聚(原酸酯)、聚(原酸酯)-peg共聚物、聚(己內(nèi)酯)、聚(己內(nèi)酯)-peg共聚物、聚賴氨酸、聚賴氨酸-peg共聚物、聚(亞乙基亞胺)、聚(亞乙基亞胺)-peg共聚物、聚(l-丙交酯賴氨酸共聚物)、聚(絲氨酸酯)、聚(4-羥基-l-脯氨酸酯)、聚[α-(4-氨基丁基)-l-乙醇酸]、以及它們的衍生物。

在一些實施方案中，聚合物可以是plga。plga是一種生物相容的并且生物可降解的乳酸和乙醇酸的共聚物，并且多種形式的plga特征在于乳酸∶乙醇酸的比率。乳酸可以是l-乳酸、d-乳酸、或d，l-乳酸?？梢酝ㄟ^改變?nèi)樗帷靡掖妓岬谋嚷收{(diào)整plga的降解速率。在一些實施方案中，根據(jù)本發(fā)明，將使用的plga特征在于約85∶15、約75∶25、約60∶40、約50∶50、約40∶60、約25∶75、或者約15∶85約的乳酸∶乙醇酸比率。

在一些實施方案中，聚合物可以是一種或多種丙烯酸聚合物。在某些實施方案中，丙烯酸聚合物包括，例如丙烯酸和甲基丙烯酸的共聚物、甲基丙烯酸甲酯共聚物、甲基丙烯酸乙氧基乙酯、甲基丙烯酸氰基乙基酯、甲基丙烯酸氨基烷基酯共聚物、聚(丙烯酸)、聚(甲基丙烯酸)、甲基丙烯酸烷基酰胺共聚物、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(甲基丙烯酸酸酐)、甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸酯、聚(甲基丙烯酸甲酯)共聚物、聚丙烯酰胺、甲基丙烯酸氨基烷基酯共聚物、甲基丙烯酸縮水甘油酯共聚物、聚腈基丙烯酸酯、以及包括一種或多種以上聚合物的組合。該丙烯酸聚合物可以包括具有低含量的季銨基團(tuán)的丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯的充分聚合的共聚物。

在一些實施方案中，聚合物可以是陽離子聚合物。通常，陽離子聚合物能夠縮合和/或保護(hù)核酸(例如dna、rna、或它們的衍生物)帶負(fù)電的鏈。含有胺的聚合物(例如聚(賴氨酸)(zauner等人，1998，adv.drugdel.rev.，30：97；以及kabanov等人，1995，bioconjugatechem.，6：7)、聚(亞乙基亞胺)(pei；boussif等人，1995，proc.natl.acad.sci.，usa，1995，92：7297)、以及聚(酰胺基胺)樹枝狀化合物(kukowska-latallo等人，1996，proc.natl.acad.sci.，usa，93：4897；tang等人，1996，bioconjugatechem.，7：703；以及haensler等人，1993，bioconjugatechem.，4：372))在生理ph下是帶正電的，在多種細(xì)胞系中與核酸形成離子對，并且介導(dǎo)轉(zhuǎn)染。

在一些實施方案中，聚合物可以是帶有陽離子側(cè)鏈的可降解的聚酯(putnam等人，1999，macromolecules，32：3658；barrera等人，1993，j.am.chem.soc.，115：11010；kwon等人，1989，macromolecules，22：3250；lim等人，1999，j.am.chem.soc.，121：5633；以及zhou等人，1990，macromolecules，23：3399)。這些聚合物的實例包括聚(l-丙交酯l-賴氨酸共聚物)(barrera等人，1993，j.am.chem.soc.，115：11010)、聚(絲氨酸酯)(zhou等人，1990，macromolecules，23：3399)、聚(4-羥基-l-脯氨酸酯)(putnam等人，1999，macromolecules，32：3658；以及l(fā)im等人，1999，j.am.chem.soc.，121：5633)、以及聚(4-羥基-l-脯氨酸酯)(putnam等人，1999，macromolecules，32：3658；以及l(fā)im等人，1999，j.am.chem.soc.，121：5633)。

在本領(lǐng)域，這些和其他聚合物的特性以及用于制備它們的方法是熟知的(參見，例如美國專利6,123,727；5,804,178；5,770,417；5,736,372；5,716,404；6,095,148；5,837,752；5,902,599；5,696,175；5,514,378；5,512,600；5,399,665；5,019,379；5,010,167；4,806,621；4,638,045；以及4,946,929；wang等人，2001，j.am.chem.soc.，123：9480；lim等人，2001，j.am.chem.soc.，123：2460；langer，2000，acc.chem.res.，33：94；langer，1999，j.control.release，62：7；以及uhrich等人，1999，chem.rev.，99：3181)。更一般地，在conciseencyclopediaofpolymerscienceandpolymericaminesandammoniumsalts，ed.bygoethals，pergamonpress，1980中；在principlesofpolymerizationbyodian，johnwiley&sons，fourthedition，2004中；在contemporarypolymerchemistrybyallcocketal.，prentice-hall，1981中；在demingetal.，1997，nature，390：386中；以及在美國專利6,506,577、6,632,922、6,686,446、以及6,818,732中說明了用于合成某些合適的聚合物的多種方法。

在一些實施方案中，聚合物可以是直鏈的或分支的聚合物。在一些實施方案中，聚合物可以是樹枝狀化合物。在一些實施方案中，聚合物可以是實質(zhì)上彼此交聯(lián)的。在一些實施方案中，聚合物可以實質(zhì)上不交聯(lián)。在一些實施方案中，聚合物可以根據(jù)本發(fā)明進(jìn)行使用而不經(jīng)過交聯(lián)步驟。進(jìn)一步理解，本發(fā)明的化合物合成納米載體可以包括嵌段共聚物、接枝共聚物、共混物、混合物、和/或任何以上及其他聚合物的加合物。本領(lǐng)域的那些技術(shù)人員將認(rèn)識到，在此列出的聚合物代表根據(jù)本發(fā)明可以使用的聚合物的示例性的、而不是全面的清單。

在一些實施方案中，合成納米載體可以包括金屬顆粒、量子點、陶瓷顆粒、等。

在一些實施方案中，合成納米載體可以任選地包括一種或多種兩親實體。在一些實施方案中，兩親實體可以促進(jìn)產(chǎn)生具有增加的穩(wěn)定性、改進(jìn)的均勻性、或增加的粘度的合成納米載體。在一些實施方案中，兩親實體可以與脂質(zhì)膜(例如脂質(zhì)雙分子層、脂質(zhì)單分子層、等)的內(nèi)表面有關(guān)。根據(jù)本發(fā)明，在本領(lǐng)域已知的很多兩親實體可以適合用于制造合成納米載體。這樣的兩親實體包括，但并不局限于，磷酸甘油酯；磷脂酰膽堿；二棕櫚酰磷脂酰膽堿(dppc)；二油烯基磷脂?；掖及?dope)；二油烯基氧丙基三乙基銨(dotma)；二油酰基磷脂酰膽堿；膽固醇；膽固醇酯；二酰基甘油；二?；视顽晁狨?；二磷脂?；视?dppg)；十六烷醇；脂肪醇(例如聚乙二醇(peg))；聚氧乙烯-9-月桂基醚；表面活性脂肪酸(例如棕櫚酸或油酸)；脂肪酸；脂肪酸甘油單酯；脂肪酸甘油二酯；脂肪酸酰胺；脫水山梨糖醇三油酸酯(85)甘氨膽酸酯；脫水山梨糖醇單月桂酸酯(20)；聚山梨醇酯20(20)；聚山梨醇酯60(60)；聚山梨醇酯65(65)；聚山梨醇酯80(80)；聚山梨醇酯85(85)；聚氧乙烯單硬脂酸酯；表面活性素；poloxomer；脫水山梨糖醇脂肪酸酯(例如脫水山梨糖醇三油酸酯)；卵磷脂；溶血卵磷脂；磷脂酰絲氨酸；磷脂酰肌醇；鞘磷脂；磷脂酰乙醇胺(腦磷脂)；心磷脂；磷脂酸；腦苷脂；雙十六烷基磷酸酯；二棕櫚酰磷脂酰甘油；硬脂酰胺；十二烷胺；十六烷胺；乙?；貦八狨?；蓖麻油酸甘油酯；十八酸十六烷基酯；肉豆蔻酸異丙酯；四丁酚醛(tyloxapol)；聚(乙二醇)5000磷脂酰乙醇胺；聚(乙二醇)400-單硬脂酸酯；磷脂；具有高表面活性劑特性的合成的和/或天然的洗滌劑；脫氧膽酸酯；環(huán)糊精；離液序列高的鹽；離子對試劑；以及它們的組合。兩親實體組分可以是不同兩親實體的混合物。本領(lǐng)域的那些技術(shù)人員將認(rèn)識到，這是具有表面活性劑活性的物質(zhì)的示例性的、而不是全面的清單。在產(chǎn)生根據(jù)本發(fā)明將被使用的合成納米載體中可以使用任何兩親實體。

在一些實施方案中，合成納米載體可以任選地包括一種或多種碳水化合物。碳水化合物可以是天然的或合成的。碳水化合物可以是衍生的天然碳水化合物。在某些實施方案中，碳水化合物包括單糖或二糖，包括但并不局限于葡萄糖、果糖、半乳糖、核糖、乳糖、蔗糖、麥芽糖、海藻糖、纖維二糖(cellbiose)、甘露糖、木糖、阿拉伯糖、葡糖醛酸、半乳糖醛酸、甘露糖醛酸、葡糖胺、半乳糖胺、以及神經(jīng)氨酸。在某些實施方案中，碳水化合物是一種多糖，包括但并不局限于支鏈淀粉、纖維素、微晶纖維素、羥丙基甲基纖維素(hpmc)、羥基纖維素(hc)、甲基纖維素(mc)、右旋糖酐、環(huán)葡聚糖、糖原、淀粉、羥乙基淀粉、角叉菜聚糖、多聚糖(glycon)、直鏈淀粉、殼聚糖、n，o-羧甲基殼聚糖、褐藻膠和海藻酸、淀粉、甲殼質(zhì)、肝素、魔芋、葡萄甘露聚糖(glucommannan)、石臍素、肝素、透明質(zhì)酸、凝膠多糖、以及黃原膠。在某些實施方案中，該碳水化合物是一種糖醇，包括但并不局限于甘露醇、山梨醇、木糖醇、赤蘚糖醇、麥芽糖醇、以及乳糖醇。

使用多種多樣的本領(lǐng)域已知的方法制備合成納米載體。例如，可以通過如納米沉淀、使用流體通道的流動聚焦、噴霧干燥、單和雙乳液溶劑蒸發(fā)、溶劑萃取、相分離、研磨、微乳液步驟、微型品制造、納米制造、犧牲層、簡單和復(fù)雜凝聚法的方法，以及本領(lǐng)域的那些普通技術(shù)人員熟知的其他方法形成合成納米載體?？商娲鼗蝾~外地，已經(jīng)說明了用于單分散半導(dǎo)體，傳導(dǎo)性的、磁性的、有機的、以及其他納米材料的水性和有機溶劑合成(pellegrino等人，2005，small，1：48；murray等人，2000，ann.rev.mat.sci.，30：545；以及trindade等人，2001，chem.mat.，13：3843)。在文獻(xiàn)中已經(jīng)說明了附加方法(參見，例如doubrow，ed.，“microcapsulesandnanoparticlesinmedicineandpharmacy，”crcpress，bocaraton，1992；mathiowitz等人，1987，j.control.release，5：13；mathiowitz等人，1987，reactivepolymers，6：275；以及mathiowitz等人，1988，j.appl.polymersci.，35：755，以及還有美國專利5578325和6007845)。

在某些實施方案中，通過納米沉淀工藝或噴霧干燥來制備合成納米載體。可以改變在制備合成納米載體中使用的條件以產(chǎn)生具有希望的大小和特性(例如疏水性、親水性、外部形態(tài)學(xué)、“粘性”、形狀、等)的顆粒。制備合成納米載體的方法和使用的條件(例如溶劑、溫度、濃度、空氣流速、等)可以取決于有待偶合到合成納米載體上的材料和/或該聚合物基質(zhì)的構(gòu)成。

如果通過任何以上方法制備的顆粒具有在希望的范圍外的大小范圍，那么可以按大小分類這些顆粒，例如使用一個篩。

可以按多種不同的方式達(dá)到偶合，并且可以是共價的或非共價的。這些偶合可以安排在一個表面上或安排在發(fā)明的納米載體內(nèi)。本發(fā)明的合成納米載體的元件(例如免疫特征表面所包括的部分、靶向部分、聚合物基質(zhì)、以及類似物質(zhì))可以直接彼此偶合，例如通過一個或多個共價鍵，或者可以借助一個或多個連接物進(jìn)行偶合?？梢詮膕altzman等人的公開美國專利申請2006/0002852、desimone等人的公開美國專利申請2009/0028910、或murthy等人的公開國際專利申請wo/2008/127532a1改變官能化合成納米載體的附加方法。

根據(jù)本發(fā)明，可以使用任何合適的連接物。連接物可以用于形成酰胺鍵、酯鍵、二硫鍵、等。連接物可以含有碳原子或雜原子(例如氮、氧、硫、等)。在一些實施方案中，連接物是脂肪族的或雜脂肪族的連接物。在一些實施方案中，該連接物是聚烷基連接物。在某些實施方案中，該連接物是聚醚連接物。在某些實施方案中，該連接物是聚乙烯連接物。在某些特定實施方案中，該連接物是聚乙二醇(peg)連接物。

在一些實施方案中，該連接物是可切割的連接物。為了給出但是一些實例，可切割的連接物包括蛋白酶可切割的肽連接物、核酸酶敏感的核酸連接物、脂肪酶敏感的脂質(zhì)連接物、糖苷酶敏感的碳水化合物連接物、ph敏感的連接物、低氧敏感的連接物、可以光切割的連接物、不耐熱的連接物、可以酶切割的連接物(例如可以酯酶切割的連接物)、超聲波敏感的連接物、可以x射線切割的連接物、等。在一些實施方案中，該連接物不是可切割的連接物。

多種方法可以用于偶合連接物或合成納米載體的其他元件與該合成納米載體。一般的策略包括被動吸附(例如經(jīng)由靜電相互作用)、多價螯合作用、特異性結(jié)合對的成員之間的高親和力非共價結(jié)合、共價鍵形成、等(gao等，2005，curr.op.biotechnol.，16：63)。在一些實施方案中，可以使用點擊化學(xué)來締合材料與合成納米載體。

可以采用非共價特異結(jié)合相互作用。例如，可以用生物素官能化一種顆粒、亦或一種生物分子，該生物素具有其他被鏈霉親和素官能化的物質(zhì)。這兩部分彼此非共價特異性結(jié)合并且具有高親和力，因此締合顆粒和生物分子?？梢灶愃频厥褂闷渌禺愋越Y(jié)合對。可替代地，組氨酸標(biāo)記的生物分子可以與結(jié)合鎳-次氮基三乙酸(ni-nta)的顆粒締合。

對于關(guān)于偶合的額外綜合信息，參見期刊bioconjugatechemistry，由americanchemicalsociety出版，columbusoh，pobox3337，columbus，oh，43210；“cross-linking，”piercechemicaltechnicallibrary，在pierce網(wǎng)址和1994-95piercecatalog中的初次出版中可得，以及其中引用的參考文獻(xiàn)；wongss，chemistryofproteinconjugationandcross-linking，crcpresspublishers，bocaraton，1991；以及hermanson，g.t.，bioconjugatetechniques，academicpress，inc.，sandiego，1996。

已理解可以按任何合適的方式制造這些本發(fā)明的組合物，并且本發(fā)明絕不局限于可以使用在此說明的方法生產(chǎn)的組合物。選擇適當(dāng)方法可以要求關(guān)注有關(guān)的具體部分的特性。

藥用組合物和使用的方法

根據(jù)本發(fā)明的組合物包括與藥學(xué)上可接受的賦形劑任選地結(jié)合的發(fā)明的化合物、結(jié)合物、或合成納米載體?？梢允褂贸Ｒ?guī)藥學(xué)制造和配料技術(shù)制造該組合物，以達(dá)到有用的劑型。在一個實施方案中，發(fā)明的化合物、結(jié)合物、合成納米載體、或組合物懸浮在無菌鹽溶液中，用于與防腐劑一起注射。

在一些實施方案中，發(fā)明的化合物、結(jié)合物、合成納米載體、或組合物是在無菌條件下制造或被最終滅菌。這可以確保生成的組合物是無菌的并且非傳染性的，因此在與非無菌組合物比較時改進(jìn)了安全性。這提供了有價值的安全措施，特別是當(dāng)接受發(fā)明的化合物、結(jié)合物、合成納米載體、或組合物的受試者具有免疫缺陷、遭受感染，和/或?qū)Ω腥久舾袝r。在一些實施方案中，發(fā)明的化合物、結(jié)合物、合成納米載體、或組合物可以被凍干并儲存在懸浮液中、或作為凍干的粉末，這取決于針對不失活的延長時段的配制策略。

本發(fā)明的化合物、結(jié)合物、合成納米載體、或組合物可以通過多種給藥途徑給予，包括但并不局限于：腸胃外的、皮下的、肌內(nèi)、真皮內(nèi)的、口服、鼻內(nèi)的、經(jīng)粘膜的、直腸、眼的、經(jīng)皮的、經(jīng)皮膚的、或者通過這些途徑的組合。

本發(fā)明的化合物、結(jié)合物、合成納米載體、或組合物和在此說明的方法可以用于誘導(dǎo)、增強、刺激、調(diào)節(jié)、或指導(dǎo)免疫應(yīng)答。本發(fā)明的化合物、結(jié)合物、合成納米載體、或組合物和在此說明的方法可以用于診斷、預(yù)防和/或治療病情，例如癌、傳染病、代謝病、退行性疾病、炎性疾病、免疫疾病、或其他失調(diào)和/或病情。本發(fā)明的化合物、結(jié)合物、合成納米載體、或組合物和在此說明的方法還可以用于預(yù)防或治療依賴癥，例如對煙堿或那可丁的依賴癥。本發(fā)明的化合物、結(jié)合物、合成納米載體、或組合物和在此說明的方法還可以用于預(yù)防和/或治療由于暴露于毒素、危險物質(zhì)、環(huán)境毒素、或其他有害媒介物而導(dǎo)致的病情。

實例

實例1：在催化劑存在下，r848與d/l-丙交酯的一鍋法開環(huán)聚合

緩慢加熱在2ml無水甲苯中的r848(0.2mmol，63mg)、d/l-丙交酯(40mmol，5.8g)和4-二甲基氫基吡啶(dmap)(50mg，0.4mmol)的混合物至150℃(油浴溫度)，并且保持在這一溫度18h(在3hr以后，無r848剩余)。冷卻該混合物至環(huán)境溫度，并且用水(50ml)驟冷生成的混合物以沉淀出生成的聚合物，r848-pla。然后依次用每次45ml的meoh、iproh、和乙醚洗滌該聚合物。在30℃，在真空下干燥該聚合物以給出灰白色膨突固體(5.0g)。通過在cdcl3中的¹hnmr證實聚合物結(jié)構(gòu)。通過反相高效液相色譜法，用thf/meoh中的2nnaohaq處理小樣品的聚合物以確定在聚合物上加載的r848。加載的r848為3mg每克聚合物(0.3％加載-理論上的27.5％)

實例2：r848與d/l-丙交酯和乙交酯的兩步開環(huán)聚合

在氬氣下，加熱d/l-丙交酯(10.8g，0.075摩爾)和乙交酯(2.9g，0.025摩爾)混合物至135℃。一旦所有材料已經(jīng)融化并且生成澄清溶液，添加r848(1.08g，3.43x10^-3摩爾)。在135℃，在緩慢的氬氣流下攪拌這一溶液一小時。添加乙基己酸錫(150μl)并且持續(xù)加熱4小時。冷卻以后，將固體淡褐色塊溶解在亞甲基氯(250ml)中，并且用5％酒石酸溶液(2x200ml)洗滌該溶液。在硫酸鎂上干燥該亞甲基氯溶液，過濾，并且然后在真空下濃縮。在亞甲基氯(20ml)中溶解剩余物，并且在攪拌下添加2-丙醇(250ml)。通過傾析2-丙醇分離分開的聚合物，并且在高真空下干燥。nmr示出該聚合物是具有4000的分子量的71.4％丙交酯和28.6％乙交酯。通過nmr，加載的r848接近理論值。

實例3：制備plga-r848結(jié)合物

在室溫，在氬氣下攪拌在無水etoac(160ml)中的plga(lakeshores聚合物，mw約5000，7525dlg1a，酸值0.7mmol/g，10g，7.0mmol)和hbtu(5.3g，14mmol)混合物50分鐘。添加化合物r848(2.2g，7mmol)，隨后添加二異丙基乙胺(dipea)(5ml，28mmol)。在室溫下攪拌該混合物6h，并且然后在50℃-55℃過夜(約16h)。在冷卻后，用etoac(200ml)稀釋該混合物，并且用飽和nh4cl溶液(2x40ml)、水(40ml)和鹽水溶液(40ml)洗滌。在na2so4(20g)上干燥該溶液并且濃縮至凝膠狀剩余物。然后添加異丙醇(ipa)(300ml)并且從溶液中沉淀出該聚合物結(jié)合物。然后用ipa(4x50ml)洗滌該聚合物以除去殘留試劑，并且在35℃-40℃，在真空下干燥3天，為一種白色粉末(10.26g，通過gpc，mw為5200，通過hplc，r848加載為12％)。

實例4：制備plga-854a結(jié)合物

在室溫，在氬氣下攪拌在無水etoac(20ml)中的plga(lakeshores聚合物，mw約5000，7525dlg1a，酸值0.7mmol/g，1.0g，7.0mmol)和hbtu(0.8g，2.1mmol)混合物45分鐘。添加化合物845a(0.29g，0.7mmol)，隨后添加二異丙基乙胺(dipea)(0.73ml，4.2mmol)。在室溫下攪拌該混合物6h，并且然后在50℃-55℃過夜(約15h)。在冷卻后，用etoac(100ml)稀釋該混合物，并且用飽和nh4cl溶液(2x20ml)、水(20ml)和鹽水溶液(20ml)洗滌。在na2so4(10g)上干燥該溶液并且濃縮至凝膠狀剩余物。然后添加異丙醇(ipa)(40ml)并且從溶液中沉淀出該聚合物結(jié)合物。然后用ipa(4x25ml)洗滌該聚合物以除去殘留試劑，并且在35℃-40℃，在真空下干燥2天，為一種白色粉末(1.21g，通過gpc，mw為4900，通過hplc，854a加載為14％)。

實例5：制備plga-bbha結(jié)合物

在室溫，在氬氣下攪拌在無水etoac(30ml)中的plga(lakeshores聚合物，mw約5000，7525dlg1a，酸值0.7mmol/g，1.0g，7.0mmol)和hbtu(0.8g，2.1mmol)混合物30分鐘。添加在2ml干dmso中的化合物bbha(0.22g，0.7mmol)，隨后添加二異丙基乙胺(dipea)(0.73ml，4.2mmol)。在室溫下攪拌該混合物20h。添加額外量的hbtu(0.53g，1.4mmol)和dipea(0.5ml，2.8mmol)，并且在50℃-55℃加熱該混合物4h。在冷卻后，用etoac(100ml)稀釋該混合物，并且用飽和nh4cl溶液(20ml)、水(2x20ml)和鹽水溶液(20ml)洗滌。在na2so4(10g)上干燥該溶液并且濃縮至凝膠狀剩余物。然后添加異丙醇(ipa)(35ml)并且從溶液中沉淀出該褐色聚合物結(jié)合物。然后用ipa(2x20ml)洗滌該聚合物以除去殘留試劑，并且在35℃-40℃，在真空下干燥2天，為一種褐色粉末(1.1g)。

實例6：制備低mwpla-r848結(jié)合物

在室溫，在氬氣下攪拌在etoac(120ml)中的pla-co2h(平均mw：950，dpi：1.32；5.0g，5.26mmol)和hbtu(4.0g，10.5mmol)的溶液45分鐘。添加化合物r848(1.65g，5.26mmol)，隨后添加dipea(5.5ml，31.6mmol)。在室溫下攪拌該混合物6h，并且然后在50℃-55℃攪拌15h。在冷卻后，用etoac(150ml)稀釋該混合物，并且用1％檸檬酸溶液(2x40ml)、水(40ml)和鹽水溶液(40ml)洗滌。在na2so4(10g)上干燥該溶液并且濃縮至凝膠狀剩余物。然后添加甲基叔丁基醚(mtbe)(150ml)并且從溶液中沉淀出該聚合物結(jié)合物。然后用mtbe(50ml)洗滌該聚合物，并且在室溫，在真空下干燥2天，為一種白色泡沫(5.3g，通過gpc，平均mw為1200，pdi：1.29；通過hplc，r848加載為20％)。

實例7：制備低mwpla-r848結(jié)合物

在室溫，在氬氣下攪拌在etoac(120ml)中的pla-co2h(平均mw：1800，dpi：1.44；9.5g，5.26mmol)和hbtu(4.0g，10.5mmol)的溶液45分鐘。添加化合物r848(1.65g，5.26mmol)，隨后添加dipea(5.5ml，31.6mmol)。在室溫下攪拌該混合物6h，并且然后在50℃-55℃攪拌15h。在冷卻后，用etoac(150ml)稀釋該混合物，并且用1％檸檬酸溶液(2x40ml)、水(40ml)和鹽水溶液(40ml)洗滌。在na2so4(10g)上干燥該溶液并且濃縮至凝膠狀剩余物。然后添加甲基叔丁基醚(mtbe)(150ml)并且從溶液中沉淀出該聚合物結(jié)合物。然后用mtbe(50ml)洗滌該聚合物，并且在室溫，在真空下干燥2天，為一種白色泡沫(9.5g，通過gpc，平均mw為1900，pdi：1.53；通過hplc，r848加載為17％)。

實例8：經(jīng)由酰亞胺開環(huán)作用結(jié)合r848至pcadk

根據(jù)在pulendran等人，wo2008/127532中提供的、在以下步驟1說明的方法，以下實例說明了一種聚縮酮pcadk的合成。

在連接短程蒸餾頭的50ml雙頸燒瓶中合成pcadk。首先，在6.82ml的乙酸乙酯中溶解5.5mg的重結(jié)晶的對甲苯磺酸(0.029mmol，aldrich，st.louis，mo)，并且添加至30ml苯溶液(保持在100℃)，它含有1，4-環(huán)己烷二甲醇(12.98g，90.0mmol，aldrich)。允許乙酸乙酯汽化，并且添加蒸餾的2，2-二甲氧基丙烷(10.94ml，90.0mmol，aldrich)至苯溶液，引發(fā)聚合反應(yīng)。在6小時內(nèi)，每小時經(jīng)由一個計量漏斗隨后添加額外劑量的2，2-二甲氧基丙烷(5ml)和苯(25ml)至該反應(yīng)，以補償蒸發(fā)掉的2，2-二甲氧基丙烷和苯。8小時后，通過添加500μl三乙胺停止反應(yīng)。通過在冷己烷(儲存在-20℃)中沉淀，隨后進(jìn)行真空過濾，分離該聚合物。通過裝備有紫外線分光光度檢測器的凝膠滲透色譜法(gpc)(shimadzu，kyoto，japan)確定pcadk的分子量。在1ml/min的流速下，將thf用作流動相。將來自polymerlaboratories(amherst，ma)的聚苯乙烯標(biāo)準(zhǔn)用于建立分子量校準(zhǔn)曲線。在所有隨后的實驗中，這一化合物用于產(chǎn)生pcadk顆粒。

經(jīng)由酰亞胺開環(huán)作用，根據(jù)以下示出的步驟2，可以將r848結(jié)合至具有6000分子量的pcadk的末端醇基。

步驟1：制備pcadk

步驟2：結(jié)合pcadk至r848

在步驟2，在100ml亞甲基氯中溶解來自步驟1的聚合物(12g，2.0x10^-3摩爾)，并且添加r848的內(nèi)酰胺(3.3g，8.0x10^-3摩爾)。攪拌這一漿料，同時以單獨的一份添加1，5，7-三氮雜二環(huán)-[4，4，0]-5-癸烯(tbd，0.835g，6x10^-3摩爾)。在室溫下攪拌過夜后，形成澄清溶液。用亞甲基氯(100ml)稀釋該溶液，并且用5％檸檬酸洗滌該溶液。在硫酸鈉上干燥這一溶液，在這以后，過濾并在真空下蒸發(fā)。在高真空下干燥后，獲得11.3克(81％)的聚合物。在酸中水解一部分，并且確定r848含量為按重量計9％。

實例9：經(jīng)由酰亞胺開環(huán)作用結(jié)合r848至聚己酸內(nèi)酯二醇

酰亞胺開環(huán)作用被用于附連r854至具有2000分子量的聚己酸內(nèi)酯二醇的末端醇基。從aldrichchemicalcompany購買聚己酸內(nèi)酯二醇，cat.#189421，并且具有以下結(jié)構(gòu)：

聚己酸內(nèi)酯二醇-r854結(jié)合物具有以下結(jié)構(gòu)：

在25ml亞甲基氯中溶解該聚合物(5g，2.5x10^-3摩爾)，并且添加r854的內(nèi)酰胺(2.4g，5.0x10^-3摩爾)。攪拌這一漿料，同時以單獨的一份添加1，5，7-三氮雜二環(huán)-[4，4，0]-5-癸烯(tbd，0.557g，4x10^-3摩爾)。在室溫下攪拌15分鐘后，形成澄清淡黃色溶液。用亞甲基氯(100ml)稀釋該溶液，并且用5％檸檬酸洗滌該溶液。在硫酸鈉上干燥這一溶液，在這以后，過濾并在真空下蒸發(fā)。在高真空下干燥后，獲得5.2克(70％)的聚合物。在酸中水解一部分，并且確定r848含量為按重量計18.5％。

實例10：經(jīng)由酰亞胺開環(huán)作用結(jié)合r848至聚(碳酸六亞甲基酯)二醇

酰亞胺開環(huán)作用被用于附連r848至具有2000分子量的聚(碳酸六亞甲基酯)二醇的末端醇基。從aldrichchemicalcompany購買聚(碳酸六亞甲基酯)二醇，cat#461164，并且具有以下結(jié)構(gòu)：

ho-[ch2(ch2)4ch2oco2]nch2(ch2)4ch2-oh.

聚(碳酸六亞甲基酯)二醇-r848結(jié)合物具有以下結(jié)構(gòu)：

在25ml亞甲基氯中溶解該聚合物(5g，2.5x10^-3摩爾)，并且添加r848的內(nèi)酰胺(2.06g，5.0x10^-3摩爾)。攪拌這一漿料，同時以單獨的一份添加1，5，7-三氮雜二環(huán)-[4，4，0]-5-癸烯(tbd，0.557g，4x10^-3摩爾)。在室溫下攪拌過夜后，形成澄清淡黃色溶液。用亞甲基氯(100ml)稀釋該溶液，并且用5％檸檬酸洗滌該溶液。在硫酸鈉上干燥這一溶液，在這以后，過濾并在真空下蒸發(fā)。在高真空下干燥后，獲得5.9克(84％)的聚合物。nmr用于確定r848含量，確定r848含量為21％。

實例11：使用一種乙基己酸錫催化劑的咪唑并喹啉的聚乳酸結(jié)合物

向裝備有攪拌棒和冷凝器的雙頸圓底燒瓶添加咪唑并喹啉瑞喹莫德(r-848、100mg，3.18x10^-4摩爾)、d/l丙交酯(5.6gm，3.89x10^-2摩爾)和無水硫酸鈉(4.0g)。在50℃，真空下干燥該燒瓶和內(nèi)容物8小時。然后用氬氣沖洗該燒瓶并且添加甲苯(100ml)。在設(shè)定在120℃的油浴中攪拌該反應(yīng)直至所有丙交酯已經(jīng)溶解，然后經(jīng)由移液管添加乙基己酸錫(75mg，60μl)。然后在氬氣下持續(xù)加熱16小時。在冷卻以后，添加水(20ml)并且持續(xù)攪拌30分鐘。用添加的甲苯(200ml)稀釋該反應(yīng)，并且然后用水洗滌(200ml)。然后依次用含有5％濃鹽酸的10％氯化鈉溶液(200ml)洗滌該甲苯溶液，隨后用飽和碳酸氫鈉(200ml)洗滌。tlc(硅石，10％在亞甲基氯中的甲醇)示出該溶液不含有游離的r-848。在硫酸鎂上干燥該溶液，過濾并在真空下蒸發(fā)以給出3.59克聚乳酸-r-848結(jié)合物。在堿中水解一部分聚合物，并且通過hplc檢查r-848含量。通過與r-848濃度相對hplc反應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，確定該聚合物含有4.51mgr-848每克聚合物。通過gpc確定該聚合物的分子量為約19,000。

實例12：咪唑并喹啉的低分子量聚乳酸結(jié)合物

向裝備有攪拌棒和冷凝器的雙頸圓底燒瓶添加咪唑并喹啉瑞喹莫德(r-848、218mg，6.93x10^-4摩爾)、d/l丙交酯(1.0g，6.93x10^-3摩爾)和無水硫酸鈉(800mg)。在55℃，真空下干燥該燒瓶和內(nèi)容物8小時。在冷卻后，然后用氬氣沖洗該燒瓶并且添加甲苯(50ml)。在設(shè)定在120℃的油浴中攪拌該反應(yīng)直至丙交酯已經(jīng)溶解，然后經(jīng)由移液管添加乙基己酸錫(19mg，15μl)。然后在氬氣下持續(xù)加熱16小時。冷卻后，用醚(200ml)稀釋該反應(yīng)，并且然后用水洗滌(200ml)該溶液。在硫酸鎂上干燥該溶液，過濾并在真空下蒸發(fā)以給出880mg粗聚乳酸-r-848結(jié)合物。使用在亞甲基氯中的10％甲醇作為洗脫液，在硅石上用色譜法分析粗聚合物。收集含有該結(jié)合物的部分，并且蒸發(fā)以給出純化的結(jié)合物。在高真空下將其干燥以提供結(jié)合物，為一種產(chǎn)量為702mg(57.6％)的固體泡沫。通過整合該喹啉的芳香族質(zhì)子的nmr信號，并且將它與乳酸ch質(zhì)子的整合強度比較，確定該結(jié)合物的分子量為約2kd。gpc示出該結(jié)合物含有小于5％的游離r848。

實例13：咪唑并喹啉的低分子量聚乳酸乙醇酸共聚物結(jié)合物

向裝備有攪拌棒和冷凝器的雙頸圓底燒瓶添加咪唑并喹啉瑞喹莫德(r-848，436mg，1.39x10^-3摩爾)、乙交酯(402mg，3.46x10^-3摩爾)、d/l丙交酯(2.0g，1.39x10^-2摩爾)和無水硫酸鈉(1.6g)。在55℃，真空下干燥該燒瓶和內(nèi)容物8小時。在冷卻后，然后用氬氣沖洗該燒瓶并且添加甲苯(60ml)。在設(shè)定在120℃的油浴中攪拌該反應(yīng)直至所有r848、乙交酯和丙交酯已經(jīng)溶解，并且然后經(jīng)由移液管添加乙基己酸錫(50mg，39μl)。然后在氬氣下持續(xù)加熱16小時。在冷卻后，用乙酸乙酯(200ml)稀釋該反應(yīng)，并且用水洗滌(200ml)該溶液。在硫酸鎂上干燥該溶液，過濾并在真空下蒸發(fā)以給出粗plga-r-848結(jié)合物。使用在亞甲基氯中的10％甲醇作為洗脫液，在硅石上用色譜法分析粗聚合物。收集含有該結(jié)合物的部分，并且蒸發(fā)以給出純化的結(jié)合物。在高真空下將其干燥以提供結(jié)合物，為一種產(chǎn)量為1.55g(54.6％)的固體泡沫。通過整合該喹啉的芳香族質(zhì)子的nmr信號，并且將它與乳酸ch質(zhì)子的整合強度比較，確定該結(jié)合物的分子量為約2kd。gpc示出該結(jié)合物含有不可檢出的游離r848。

實例14：使用一種二異丙氨基鋰催化作用的咪唑并喹啉的聚乳酸結(jié)合物

在使用前，咪唑并喹啉(r-848)、d/l丙交酯和有關(guān)玻璃器皿都在50℃，在真空下干燥8小時。向裝備有攪拌棒和冷凝器的圓底燒瓶添加r-848(33mg，1.05x10^-4摩爾)、和干甲苯(5ml)。加熱它至回流以溶解所有的r-848。在氮氣下攪拌該溶液，并且冷卻至室溫以提供精細(xì)分散的r-848懸浮液。向這一懸浮液添加二異丙氨基鋰溶液(在thf中2.0m，50μl，1.0x10^-4摩爾)，此后在室溫下持續(xù)攪拌5分鐘。在氮氣下，經(jīng)由注射器將已經(jīng)形成的淡黃色溶液添加至d/l丙交酯熱(120℃)溶液(1.87g，1.3x10^-2摩爾)。移去加熱，并且在室溫下攪拌該淡黃色溶液一小時。用亞甲基氯(200ml)稀釋該溶液，并且然后用1％鹽酸(2x50ml)洗滌它，隨后用飽和碳酸氫鈉溶液(50ml)洗滌。在硫酸鎂上干燥該溶液，過濾并在真空下蒸發(fā)以給出聚乳酸-r-848結(jié)合物。tlc(硅石，10％在亞甲基氯中的甲醇)示出該溶液不含有游離的r-848。在亞甲基氯(10ml)中溶解聚合物并且將這一溶液滴入攪拌的己烷(200ml)中。通過傾析法分離沉淀的聚合物，并且在真空下干燥以給出1.47克聚乳酸-r-848結(jié)合物，為一種白色固體。在堿中水解一部分聚合物，并且通過hplc檢查r-848含量。通過與r-848濃度相對hplc反應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，確定該聚合物含有10.96mgr-848每克聚合物。

實例15：聚乳酸活化

將pla(d/l-聚丙交酯)(來自boehringer-ingelheim的resomerr202h，0.21mmol/g的koh當(dāng)量酸值，特性粘度：(iv)：0.21dl/g)(10g，2.1mmol，1.0eq)溶解在二氯甲烷(dcm)(35ml)中。添加edc(2.0g，10.5mmol，5eq)和nhs(1.2g，10.5mmol，5eq)。用超聲處理的助劑溶解這些固體。在室溫下攪拌生成的溶液6天。濃縮該溶液以除去多數(shù)dcm，并且將剩余物添加至250ml的乙醚和5ml的meoh的溶液中，以沉淀出活化的pla-nhs酯。除去溶劑并且用醚(2x200ml)洗滌該聚合物兩次，并且在真空下干燥以給出pla-nhs活化酯，為一種白色泡沫狀固體(回收約8g，¹hnmr證實nhs酯的存在)。在使用前，在低于-10℃冷凍箱中，在氬氣下儲存該pla-nhs酯。

可替代地，可以取代dcm，在dmf、thf、二噁烷或chcl3中進(jìn)行該反應(yīng)?？梢允褂胐cc取代edc(在從醚沉淀pla-nhs酯前，過濾出生成的dcc-脲)。edc或dcc和nhs的量可以在2-10eq的pla的范圍內(nèi)。

實例16：pla活化

在二氯甲烷(dcm)(35ml)中溶解具有mw5000的pla(d/l-聚丙交酯)(10.5g，2.1mmol，1.0eq)。添加edc(2.0g，10.5mmol，5eq)和nhs(1.2g，10.5mmol，5eq)。在室溫下攪拌生成的溶液3天。濃縮該溶液以除去多數(shù)dcm，并且將剩余物添加至250ml的乙醚和5ml的meoh的溶液中，以沉淀出活化的pla-nhs酯。除去溶劑并且用醚(2x200ml)洗滌該聚合物兩次，并且在真空下干燥以給出pla-nhs活化酯，為一種白色泡沫狀固體(回收約8g，可以使用¹hnmr證實nhs酯的存在)。在使用前，在低于-10℃冷凍箱中，在氬氣下儲存該pla-nhs酯。

可替代地，可以取代dcm，在dmf、thf、二噁烷或chcl3中進(jìn)行該反應(yīng)。可以使用dcc取代edc(在從醚沉淀pla-nhs酯前，過濾出生成的dcc-脲)。edc或dcc和nhs的量可以在2-10eq的pla的范圍內(nèi)。

實例17：低mwplga活化

以與以上提供的用于聚合物活化的相同方式，將具有50％至75％乙交酯的低mwplga轉(zhuǎn)化為對應(yīng)plga-nhs活化酯，并且在使用前，在低于-10℃冷凍箱中，在氬氣下儲存。

實例18：聚乳酸活化

在10ml的干乙腈中溶解pla(r202h，0.21mmol/g的酸值)(2.0g，0.42mmol，1.0eq)。添加n，n’-二琥珀酰亞胺碳酸酯(dsc)(215mg，1.26mmol，3.0eq)和催化劑量的4-(n，n-二甲氨基)吡啶(dmap)。在氬氣下，攪拌生成的混合物1天。濃縮生成的溶液至幾乎干燥。然后添加剩余物至40ml的醚中以沉淀出用醚(2x30ml)洗滌兩次的聚合物，并且在真空下干燥以給出pla-nhs活化酯(1hnmr示出nhs酯的量在約80％)。

實例19：聚乳酸活化

在25ml的無水dcm和2.5ml的無水dmf中溶解pla(r202h)(5.0g，1.05mmol)。添加dcc(650mg，3.15mmol，5.0eq)和五氟苯酚(pfp)(580mg，3.15mmol，5.0eq)。在室溫下攪拌生成的溶液6天，并且然后濃縮以除去dcm。生成的剩余物被添加至250ml的醚中以沉淀出用醚(2x100ml)洗滌的活化pla聚合物，并且在真空下干燥以給出pla-pfp活化酯，為一種白色泡沫狀固體(4.0g)。

實例20：咪唑并喹啉的聚乳酸或plga結(jié)合物

在氬氣下，在2ml的干dmf中溶解pla-nhs(1.0g)、r848(132mg，0.42mmol)、和二異丙基乙胺(dipea)(0.073ml，0.42mmol)。在50℃-60℃加熱生成的溶液2天。冷卻該溶液至室溫并且添加至40ml的去離子(di)水以沉淀出聚合物產(chǎn)物。然后用di水(40ml)和醚(2x40ml)洗滌該聚合物，并且在30℃，在真空下干燥以給出r848-pla結(jié)合物，為一種白色泡沫狀固體(0.8g，hnmr示出r848經(jīng)由酰胺鍵結(jié)合至pla)。r848在聚合物上的結(jié)合(加載)程度通過如下hplc分析證實：稱出重量的聚合物在thf/meoh中溶解，并且用15％naoh處理。通過與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較的hplc，分析生成的水解聚合物產(chǎn)物的r848的量。

實例21：咪唑并喹啉的聚乳酸或plga結(jié)合物

在氬氣下，在2ml的干dmf中溶解pla-nhs(1.0g，0.21mmol，1.0eq)、r848(132mg，0.42mmol，2.0eq)、dipea(0.15ml，0.84mmol，4.0eq)和dmap(25mg，0.21mmol，1.0eq)。在50℃-60℃加熱生成的溶液2天。冷卻該溶液至室溫并且添加40ml的去離子(di)水以沉淀出聚合物產(chǎn)物。然后用di水(40ml)和醚(2x40ml)洗滌該聚合物，并且在30℃，在真空下干燥以給出pla-r848結(jié)合物，為一種白色泡沫狀固體(0.7g，20mg的聚合物在0.2ml的thf、0.1ml的meoh和0.1ml的15％naoh的溶液中水解)。通過反相高效液相色譜法分析(c18柱，流動相a：在水中0.1％tfa，流動相b：在ch3cn中0.1％tfa，梯度)確定在聚合物上的r848的量為約35mg/g。

實例22：咪唑并喹啉的聚乳酸結(jié)合物

在4ml的干dmf中溶解pla(r202h)(2.0g，0.42mmol，1.0eq)、dcc(260mg，1.26mmol，3.0eq)、nhs(145mg，1.26mmol，3.0eq)、r848(200mg，0.63mmol，1.5eq)、dmap(77mg，0.63mmol，1.5eq)和dipea(0.223ml，1.26mmol，3.0eq)。在50℃-55℃加熱該混合物3天。冷卻該混合物至室溫并且用dcm稀釋。過濾掉dcc-脲，并且濃縮濾液以除去dcm。將在dmf中的生成的剩余物添加至水(40ml)中以沉淀出用水(40ml)、醚/dcm(40ml/4ml)和醚(40ml)洗滌的聚合物產(chǎn)物。在30℃，在真空下干燥后，獲得希望的pla-r848結(jié)合物，為一種白色泡沫狀固體(1.5g)。

實例23：咪唑并喹啉的聚乳酸結(jié)合物

在4ml的干dmf中溶解pla(r202h)(2.0g，0.42mmol，1.0eq)、edc(242mg，1.26mmol，3.0eq)、hoat(171mg，1.26mmol，3.0eq)、r848(200mg，0.63mmol，1.5eq)和dipea(0.223ml，1.26mmol，3.0eq)。在50℃-55℃加熱該混合物2天。冷卻該溶液至室溫，并且添加至水(40ml)中以沉淀出用水(40ml)、醚/meoh(40ml/2ml)和醚(40ml)洗滌的聚合物產(chǎn)物。在4ml的dcm中溶解橙色聚合物，并且添加生成的溶液至40ml的醚中以沉淀出沒有主要橙色的聚合物。用醚(40ml)洗滌淺色聚合物。在30℃，在真空下干燥后，獲得希望的pla-r848結(jié)合物，為一種淺褐色泡沫狀固體(1.5g)。

實例24：咪唑并喹啉的聚乳酸或plga結(jié)合物

在2ml的干dmf中溶解pla(r202h)(1.0g，0.21mmol，1.0eq)、edc(161mg，0.84mmol，4.0eq)、hoat.h2o(65mg，0.42mmol，2.0eq)、r848(132mg，0.42mmol，2.0eq)和dipea(0.150ml，0.84mmol，4.0eq)。在50℃-55℃加熱該混合物2天。冷卻該溶液至室溫并且添加至水(40ml)中以沉淀出聚合物產(chǎn)物。在2ml的dcm中溶解該橙色聚合物并且添加生成的溶液至40ml的醚中以沉淀出用水/丙酮(40ml/2ml)和醚(40ml)洗滌的聚合物。在30℃，在真空下干燥后，獲得希望的pla-r848結(jié)合物，為一種灰白色泡沫狀固體(1.0g，基于hplc分析并且通過¹hnmr證實，在聚合物上加載的r848為約45mg/g)。以相同的方式，制備plga(75％丙交酯)-r848和plga(50％丙交酯)-r848。

實例25：結(jié)合r848至聚甘氨酸，一種聚酰胺

通過aliferis等人的方法(biomacromolecules，5，1653，(2004))，使用6-氨基己酸苯甲基酯(aldrichcat#s33465)，通過甘氨酸n-羧酸酐(aldrichcat#369772)的開環(huán)聚合制備叔丁氧羰基(tboc)保護(hù)的聚甘氨酸羧酸(i)。端氨基的保護(hù)，如t-boc氨基甲酸酯，隨后在鈀碳上氫化以除去苯甲基酯，完成boc保護(hù)的聚甘氨酸羧酸(i)的合成。

在室溫，在氬氣下，攪拌在無水dmf(100ml)中的boc保護(hù)的聚甘氨酸羧酸的混合物(5gm，mw＝2000，2.5x10^-3摩爾)和hbtu(3.79gm，1.0x10^-2摩爾)50分鐘。然后添加r848(1.6gm，5.0x10^-3摩爾)，隨后添加二異丙基乙胺(4ml，2.2x10^-2摩爾)。在rt攪拌該混合物6h，并且然后在50℃-55℃過夜(約16h)。冷卻后，在真空下蒸發(fā)dmf并且在etoac(100ml)中研磨剩余物。通過過濾分離該聚合物，并且然后用2-丙醇(4x25ml)洗滌該聚合物以除去殘留試劑，并且在35℃-40℃，在真空下干燥3天。分離該聚合物，為一種灰白色固體，產(chǎn)量為5.1g(88％)。可以通過nmr確定r848加載為10.1％。

使用三氟乙酸除去t-boc保護(hù)基，并且通過常規(guī)方法，將生成的聚合物接枝到具有羧基端基的pla。

實例26：制備聚甘氨酸/r848聚合物的一種plga結(jié)合物

步驟1：在三氟乙酸(25ml)中溶解t-boc保護(hù)的聚甘氨酸/r848結(jié)合物(5g)，并且在50℃加熱這一溶液一小時。冷卻后，在真空下除去三氟乙酸，并且在乙酸乙酯(25ml)中研磨剩余物。通過過濾分離該聚合物，并且用2-丙醇很好地洗滌。在真空下干燥后，獲得4.5克的聚合物，為一種灰白色固體。

步驟2：在rt，在氬氣下攪拌在無水dmf(100ml)中的plga(lakeshores聚合物，mw約5000，7525dlg1a，酸值0.7mmol/g，10g，7.0mmol)和hbtu(5.3g，14mmol)混合物50分鐘。添加來自以上溶解在干dmf(20ml)中的聚合物(1.4g，7mmol)，隨后添加二異丙基乙胺(dipea)(5ml，28mmol)。在rt攪拌該混合物6h，并且然后在50℃-55℃過夜(約16h)。冷卻后，在真空下蒸發(fā)dmf，并且在亞甲基氯(50ml)中溶解剩余物。通過添加2-丙醇(200ml)沉淀該聚合物。通過傾析法分離該聚合物，并且然后用2-丙醇(4x50ml)洗滌以除去殘留試劑，并且然后在35℃-40℃，在真空下干燥過夜。獲得9.8g(86％)的嵌段共聚物。

實例27：制備plga-2-丁氧基-8-羥基-9-苯甲基腺嘌呤結(jié)合物

在rt，在氬氣下攪拌在無水etoac(30ml)中的plga(lakeshores聚合物，mw約5000，7525dlg1a，酸值0.7mmol/g，1.0g，7.0mmol)和hbtu(0.8g，2.1mmol)混合物30分鐘。添加在2ml干dmso中的化合物(i)(0.22g，0.7mmol)，隨后添加二異丙基乙胺(dipea)(0.73ml，4.2mmol)。在室溫下攪拌該混合物20h。添加額外量的hbtu(0.53g，1.4mmol)和dipea(0.5ml，2.8mmol)，并且在50℃-55℃加熱該混合物4h。在冷卻后，用etoac(100ml)稀釋該混合物，并且用飽和nh4cl溶液(20ml)、水(2x20ml)和鹽水溶液(20ml)洗滌。在na2so4(10g)上干燥該溶液并且濃縮至凝膠狀剩余物。然后添加異丙醇(ipa)(35ml)并且從溶液中沉淀出該褐色聚合物結(jié)合物。然后用ipa(2x20ml)洗滌該聚合物以除去殘留試劑，并且在35℃-40℃，在真空下干燥2天，為一種褐色粉末(1.0g)。

實例28：制備plga-2，9-二芐基-8-羥基腺嘌呤結(jié)合物

在rt，在氬氣下攪拌在無水etoac(30ml)中的plga(lakeshores聚合物，mw約5000，7525dlg1a，酸值0.7mmol/g，1.0g，7.0mmol)和hbtu(0.8g，2.1mmol)混合物30分鐘。添加在2ml干dmso中的化合物(ii)(0.24g，0.7mmol)，隨后添加二異丙基乙胺(dipea)(0.73ml，4.2mmol)。在rt下攪拌該混合物20h。添加額外量的hbtu(0.53g，1.4mmol)和dipea(0.5ml，2.8mmol)，并且在50℃-55℃加熱該混合物4h。在冷卻后，用etoac(100ml)稀釋該混合物，并且用飽和nh4cl溶液(20ml)、水(2x20ml)和鹽水溶液(20ml)洗滌。在na2so4(10g)上干燥該溶液并且濃縮至凝膠狀剩余物。然后添加異丙醇(ipa)(35ml)并且從溶液中沉淀出該褐色聚合物結(jié)合物。然后用ipa(2x20ml)洗滌該聚合物以除去殘留試劑，并且在35℃-40℃，在真空下干燥2天，為一種褐色粉末(1.2g)。

實例29：使用酰亞胺開環(huán)作用來附連2-戊基-8-羥基-9-芐基腺嘌呤至分子量2000的聚(碳酸六亞甲基酯)二醇的末端醇基

從aldrichchemicalcompany購買聚(碳酸六亞甲基酯)二醇，cat#461164。

聚(碳酸六亞甲基酯)二醇：

ho-[ch2(ch2)4ch2oco2]nch2(ch2)4ch2-oh

聚(碳酸六亞甲基酯)二醇-8-氧代腺嘌呤結(jié)合物：

在25ml亞甲基氯中溶解該聚合物(5g，2.5x10^-3摩爾)，并且添加2-戊基-8-羥基-9-芐基腺嘌呤的內(nèi)酰胺(2.05g，5.0x10^-3摩爾)。攪拌這一漿料，同時以單獨的一份添加1，5，7-三氮雜二環(huán)-[4，4，0]-5-癸烯(tbd，0.557g，4x10^-3摩爾)。在室溫下攪拌過夜后，形成澄清淡黃色溶液。用亞甲基氯(100ml)稀釋該溶液，并且用5％檸檬酸洗滌該溶液。在硫酸鈉上干燥這一溶液，在這以后，過濾并在真空下蒸發(fā)。在高真空下干燥后，獲得5.5克(78％)的聚合物。使用nmr來確定芐基腺嘌呤含量為18％。

實例30：煙堿-peg-pla結(jié)合物

按以下步驟合成3-煙堿-peg-pla聚合物：

首先，將來自的具有3.5kd分子量的單氨基聚(乙二醇)(0.20g，5.7x10^-5摩爾)和過量的4-羧基可替寧(0.126g，5.7x10^-4摩爾)溶解于二甲基甲酰胺(5.0ml)中。攪拌該溶液并且添加二環(huán)己基碳二亞胺(0.124g，6.0x10^-4摩爾)。在室溫下攪拌這一溶液過夜。添加水(0.10ml)并且繼續(xù)攪拌額外的15分鐘。通過過濾除去二環(huán)己基脲的沉淀，并且在真空下蒸發(fā)濾液。在亞甲基氯(4.0ml)中溶解剩余物并且將這一溶液添加到乙醚(100ml)中。在冰箱中冷卻該溶液2小時，并且通過過濾分離沉淀的聚合物。在用乙醚洗滌以后，在高真空下干燥該固體白色聚合物。產(chǎn)量為0.188g。不經(jīng)進(jìn)一步純化，將這一聚合物用于下一步。

在氮氣下將該煙堿/peg聚合物(0.20g，5.7x10^-5摩爾)溶解于干四氫呋喃(10ml)中，并且攪拌該溶液，同時添加在四氫呋喃中的氫化鋁鋰溶液(1.43ml的2.0m，2.85x10^-3摩爾)。添加氫化鋁鋰引起該聚合物沉淀為凝膠狀塊。在緩慢流的氮氣下，加熱該反應(yīng)至80℃，并且允許四氫呋喃蒸發(fā)。然后在80℃下加熱剩余物2小時。冷卻以后，小心添加水(0.5ml)。一旦氫釋放已經(jīng)停止，添加在亞甲基氯中的10％甲醇(50ml)，并且攪拌該反應(yīng)混合物直至該聚合物溶解。通過牌硅藻土(從emdinc.可得，如545，區(qū)域#cx0574-3)過濾這一混合物，并且將濾液在真空下蒸干。在亞甲基氯(4.0ml)中溶解剩余物并且將這一溶液緩慢添加到乙醚(100ml)中。聚合物分離為白色絮凝固體，并且通過離心分離。在用乙醚洗滌以后，在真空下干燥該固體。產(chǎn)量為0.129g。

接下來，將peg/煙堿聚合物(0.081g，2.2x10^-5摩爾)、d/l丙交酯(0.410g，2.85x10^-3摩爾)和無水硫酸鈉(0.380g)加料至一個裝備有攪拌棒和回流冷凝器的100ml圓底燒瓶。在55℃，在真空下干燥這些反應(yīng)物8小時。然后用氬氣冷卻并沖洗該燒瓶并且然后添加干燥的甲苯(10ml)。將該燒瓶置于設(shè)定在120℃的油浴中，并且一旦丙交酯已經(jīng)溶解，添加乙基己酸錫(5.5mg，1.36x10^-5摩爾)。允許該反應(yīng)在120℃繼續(xù)進(jìn)行16小時。在冷卻至室溫以后，添加水(15ml)并且持續(xù)攪拌30分鐘。添加亞甲基氯(200ml)，并且在分液漏斗中攪動以后，允許這些相沉降。分離亞甲基氯層，并且在無水硫酸鎂上干燥。在過濾以除去干燥劑以后，在真空下蒸發(fā)濾液以給出作為一種無色泡沫的聚合物。在四氫呋喃(10ml)中溶解該聚合物，并且在攪拌下將這一溶液緩慢添加到水(150ml)中。通過離心分離沉淀的聚合物，并且在亞甲基氯(10ml)中溶解該固體。在真空下除去亞甲基氯，并且在真空下干燥剩余物。3-煙堿-peg-pla聚合物產(chǎn)量為0.38g。

實例31：合成納米載體配制品

為了膠囊化佐劑配制品，根據(jù)gerster等人的美國專利5,389,640的實例99中提供的合成，合成瑞喹莫德(akar848)。

通過以上提供的方法將r848結(jié)合至pla，并且通過nmr證實pla結(jié)構(gòu)。

根據(jù)實例30制備pla-peg-煙堿結(jié)合物。

購買pla(boehringeringelheimchemicals，inc.，2820northnormandydrive，petersburg，va23805)。從vwrscientific購買聚乙烯醇(mw＝11kd-31kd，85-89％水解)。從bachemamericasinc.(3132kashiwastreet，torranceca90505.區(qū)域#4064565)獲得卵清蛋白肽323-339。

以上材料用于制備以下溶液：

1.在亞甲基氯中瑞喹莫德(r848)@10mg/ml并且pla@100mg/ml，或者在亞甲基氯中pla-r848結(jié)合物@100mg/ml

2.在亞甲基氯中的pla-peg-煙堿@100mg/ml

3.在亞甲基氯中的pla@100mg/ml

4.在水中的卵清蛋白肽323-339@10或69mg/ml

5.在水中的聚乙烯醇@50mg/ml。

在小管形瓶中結(jié)合溶液#1(0.25至0.75ml)、溶液#2(0.25ml)、溶液#3(0.25至0.5ml)和溶液#4(0.1ml)，并且使用一臺branson數(shù)字超聲波儀250在50％振幅聲處理該混合物40秒。向這一乳液添加溶液#5(2.0ml)，并且使用一臺branson數(shù)字超聲波儀250在35％振幅聲處理40秒，形成第二乳液。添加這一乳液至一個含有磷酸鹽緩沖溶液(30ml)的燒杯，并且在室溫下攪拌這一混合物2小時以形成納米載體。

為了洗滌這些顆粒，將一部分納米載體分散體(7.4ml)轉(zhuǎn)移至一個離心管中，并且在5,300g旋轉(zhuǎn)一小時，除去上清液，并且在7.4ml的磷酸鹽緩沖鹽水中重新懸浮小粒。重復(fù)該離心步驟，并且在2.2ml的磷酸鹽緩沖鹽水中重新懸浮小粒，用于約10mg/ml的最終納米顆粒分散體。

實例32：具有多種初級乳液的復(fù)乳液

材料

從bachemamericasinc.(3132kashiwastreet，torranceca90505)購買的卵清蛋白肽323-339，已知是卵清蛋白蛋白質(zhì)的t細(xì)胞表位的一種17氨基酸肽。

根據(jù)美國專利6,608,201提供的方法合成瑞喹莫德(akar848)。

根據(jù)以上提供的方法，將pla-r848瑞喹莫德結(jié)合至具有約2,500da的分子量的pla。

根據(jù)以上提供的方法，將pla-r848瑞喹莫德結(jié)合至具有約4,100da的分子量的plga。

從oligosetc(9775swcommercecirclec-6，wilsonville，or97070)購買具有全硫代磷酸化的主鏈的、具有鈉平衡離子的ps-1826dna寡核苷酸，具有核苷酸序列5′-tccatgacgttcctgacgtt-3′。

從oligosetc(9775swcommercecirclec-6，wilsonville，or97070)購買具有磷酸二酯主鏈的、具有鈉平衡離子的po-1826dna寡核苷酸，具有核苷酸序列5′-tccatgacgttcctgacgtt-3′。

從surmodicspharmaceuticals(756tommartindrive，birmingham，al35211.產(chǎn)品編號100dl2a)購買的具有0.21dl/g的固有粘度的pla。

從surmodicspharmaceuticals(756tommartindrive，birmingham，al35211.產(chǎn)品編號100dl7a)購買的具有0.71dl/g的固有粘度的pla。

從boehringeringelheimchemicals，inc.(petersburg，va.產(chǎn)品編號r202h)購買的具有0.19dl/g的固有粘度的pla。

根據(jù)以上提供的方法制備具有約18,500至22,000da的分子量的pla-peg-煙堿。

根據(jù)以上提供的方法制備(合成)具有約15,000da的分子量的pla-peg-r848。

從j.t.baker(產(chǎn)品型號u232-08)購買的聚乙烯醇(mw＝11,000-31,000，87-89％水解)。

使用具有多種初級乳液的復(fù)乳液方法生產(chǎn)各批次。下表引用溶液溶液后綴(例如在溶液#1欄中b表明使用溶液#1b)和使用的溶液體積。

溶液1a：在稀釋鹽酸水溶液中的卵清蛋白肽323-339@35mg/ml。在室溫，通過在0.13n鹽酸溶液中溶解卵清蛋白肽制備該溶液。

溶液1b：在稀釋鹽酸水溶液中的卵清蛋白肽323-339@70mg/ml。在室溫，通過在0.13n鹽酸溶液中溶解卵清蛋白肽制備該溶液。

溶液2a：在亞甲基氯中的0.21-ivpla@75mg/ml和pla-peg-煙堿@25mg/ml。在室溫，通過首先制備兩種分開的溶液制備該溶液：在純亞甲基氯中0.21-ivpla@100mg/ml和在純亞甲基氯中pla-peg-煙堿@100mg/ml。添加用于每一部分pla-peg-煙堿溶液的三部分pla溶液制備最終溶液。

溶液2b：在亞甲基氯中的0.71-ivpla@75mg/ml和pla-peg-煙堿@25mg/ml。在室溫，通過首先制備兩種分開的溶液制備該溶液：在純亞甲基氯中0.71-ivpla@100mg/ml和在純亞甲基氯中pla-peg-煙堿@100mg/ml。添加用于每一部分pla-peg-煙堿溶液的三部分pla溶液制備最終溶液。

溶液2c：在亞甲基氯中的0.19-ivpla@75mg/ml和pla-peg-煙堿@25mg/ml。在室溫，通過首先制備兩種分開的溶液制備該溶液：在純亞甲基氯中0.19-ivpla@100mg/ml和在純亞甲基氯中pla-peg-煙堿@100mg/ml。添加用于每一部分pla-peg-煙堿溶液的三部分pla溶液制備最終溶液。

溶液3a：在凈化水中的寡核苷酸(ps-1826亦或po-1826)@200mg/ml。在室溫下，通過在凈化水中溶解寡核苷酸制備該溶液。

溶液4a：與溶液#2a相同。

溶液4b：與溶液#2b相同。

溶液4c：與溶液#2c相同。

溶液5a：在100mmph8磷酸鹽緩沖液中聚乙烯醇@50mg/ml。

制備兩種分開的初級油包水乳液。通過在小壓力管中合并溶液1和溶液2制備wi/o2，并且使用一臺branson數(shù)字超聲波儀250在50％振幅超聲處理40秒。通過在小壓力管中合并溶液3和溶液4制備w3/o4，并且使用一臺branson數(shù)字超聲波儀250在50％振幅超聲處理40秒。通過合并0.5ml的每一種初級乳液(wi/o2和w3/o4)和溶液5制備具有兩種內(nèi)乳液([w1/o2，w3/o4]/w5)乳液的第三乳液，并且使用branson數(shù)字超聲波儀250在30％振幅超聲處理40秒至60秒。

將該第三乳液添加至一個含有70mm磷酸鹽緩沖溶液(30ml)的燒杯，并且在室溫攪拌2小時，來允許亞甲基氯蒸發(fā)并且允許形成納米載體。通過轉(zhuǎn)移納米載體懸浮液至離心管并且在13,823g旋轉(zhuǎn)一小時來洗滌一部分納米載體，除去上清液，并且在磷酸鹽緩沖鹽水中重新懸浮小粒。重復(fù)該洗滌步驟，并且在磷酸鹽緩沖鹽水中重新懸浮小粒，用于約10mg/ml的最終納米載體分散體。

通過hplc分析確定該納米載體中寡核苷酸和肽的量。

實例33：標(biāo)準(zhǔn)復(fù)乳液

材料

如在以上實例32中提供的那樣。

使用標(biāo)準(zhǔn)復(fù)乳液方法生產(chǎn)各批次。下表引用溶液溶液后綴(例如在溶液#1欄中b表明使用溶液#1b)和使用的溶液體積。

溶液1a：在去離子水中的卵清蛋白肽323-339@69mg/ml。通過緩慢添加卵清蛋白肽至水中同時在室溫混合制備該溶液。

溶液1b：在稀釋鹽酸水溶液中的卵清蛋白肽323-339@70mg/ml。在室溫，通過在0.13n鹽酸溶液中溶解卵清蛋白肽制備該溶液。

溶液ic：在凈化水中的寡核苷酸(ps-1826)@50mg/ml。在室溫下，通過在凈化水中溶解寡核苷酸制備該溶液。

溶液1d：在稀釋鹽酸水溶液中的卵清蛋白肽323-339@17.5mg/ml。通過在室溫在0.13n鹽酸溶液中溶解卵清蛋白肽@70mg/ml，并且然后用3份凈化水每一份起始溶液稀釋該溶液制備溶液。

溶液2a：在室溫制備的在純亞甲基氯中的r848@10mg/ml和0.19-ivpla@100mg/ml。

溶液2b：在室溫制備的在純亞甲基氯中的pla-r848@100mg/ml。

溶液2c：在室溫制備的在純亞甲基氯中的plga-r848@100mg/ml。

溶液2d：在室溫制備的在純亞甲基氯中的pla-peg-r848@100mg/ml。

溶液3a：在室溫制備的在純亞甲基氯中的pla-peg-煙堿@100mg/ml。

溶液4a：在室溫制備的在純亞甲基氯中的0.19-ivpla@100mg/ml。

溶液5a：在去離子水中的聚乙烯醇@50mg/ml。

溶液5b：在100mmph8磷酸鹽緩沖液中聚乙烯醇@50mg/ml。

通過在小壓力管中合并溶液1和溶液2、溶液3、和溶液4制備油包水(w/o)初級乳液，并且使用一臺branson數(shù)字超聲波儀250在50％振幅超聲處理40秒。通過添加溶液5至該初級乳液制備水/油/水(w/o/w)復(fù)乳液，并且使用branson數(shù)字超聲波儀250在30％至35％振幅超聲處理40秒。

將該復(fù)乳液添加至一個含有磷酸鹽緩沖溶液(30ml)的燒杯，并且在室溫攪拌2小時，來允許亞甲基氯蒸發(fā)并且允許形成納米載體。通過轉(zhuǎn)移納米載體懸浮液至離心管并且在5,000至9,500rpm旋轉(zhuǎn)一小時來洗滌一部分納米載體，除去上清液，并且在磷酸鹽緩沖鹽水中重新懸浮小粒。重復(fù)該洗滌步驟，并且在磷酸鹽緩沖鹽水中重新懸浮小粒，用于約10mg/ml的最終納米載體分散體。

實例34：確定媒介物的量

用于r848和肽(例如卵清蛋白肽、人類肽、tt2pdt5t)的方法

在裝備有agilentzorbaxsb-c18柱(3.5μm。75x4.6mm。柱溫＝40℃(零件號866953-902))的agilent1100系統(tǒng)上，在適當(dāng)波長(λ＝254nm用于r848以及215nm用于卵清蛋白肽)使用反相高效液相色譜法測量r848(免疫刺激劑)和卵清蛋白肽(t細(xì)胞抗原)的量，使用95％水/5％乙腈/0.1％tfa的流動相a(mpa)和90％乙腈/10％水/0.09％tfa的流動相b(mpb)(梯度：在7分鐘內(nèi)b＝5％至45％；至9分鐘漸變至95％b；至9.5分鐘退回5％b，并且保持平衡至結(jié)束?？傔\行時間為13分鐘，流速為1ml/min)。

用于cpg的方法

在裝備有watersxbridgec-18(2.5微米顆粒，50x4.6mmid(零件號186003090)，柱溫600℃)的agilent1100系統(tǒng)上，在260nm使用反相高效液相色譜法測量cpg(免疫刺激劑)的量，使用在100mmtea-乙酸緩沖液中的2％乙腈的、ph約8.0的流動相a，和如90％乙腈、10％水的流動相b(在5％b平衡柱，在8.5分鐘內(nèi)增加至55％b，然后至12分鐘漸變至90％b。在一分鐘內(nèi)b的濃度迅速減少至5％并且平衡直至停止時間，16分鐘。流速為1ml/min直至本方法結(jié)束，16分鐘)。

用于煙堿類似物的方法

在裝備有watersx-bridgec-18(5微米顆粒，100x4.6mmid，柱溫在400℃)的agilent1100系統(tǒng)上，在254nm使用反相高效液相色譜法測量煙堿類似物，使用95％水/5％乙腈/0.1％tfa的流動相a(mpa)和90％乙腈/10％水/0.09％tfa的流動相b(mpb)(梯度：在5％b平衡柱，在14分鐘內(nèi)增加至45％b。然后從14至20分鐘漸變至95％b。流動相b濃度迅速退回5％并且重新平衡直至本方法結(jié)束。本方法的流速保持在0.5ml/min，總運行時間25分鐘)。取決于顆粒大小，離心該nc懸浮液@14000rpm約15-30分鐘。在攪拌下，用200ul濃nh4oh(8m)處理收集的小粒2h，直至溶液轉(zhuǎn)為澄清。添加200ul的1％tfa來中和該混合物溶液，這使該小粒溶液的體積達(dá)到200ul。用mpa(或水)稀釋等分部分的50ul的溶液至200ul，并且如以上在hplc上分析以確定存在于小粒中的量。

在納米載體中的膠囊化的游離r848

離心0.5ml的nc懸浮液@14000rpm約15分鐘。用0.3ml的乙腈溶解收集的小粒并且簡單離心@14000rpm以除去任何殘留的不溶物。用4倍當(dāng)量體積的mpa進(jìn)一步稀釋該澄清溶液并在以上說明的反相高效液相色譜法上測定。

在納米載體中膠囊化的cpg

取決于顆粒大小，來自該制造的330ul的nc懸浮液(在pbs中約10mg/ml懸浮液)在14000rpm旋轉(zhuǎn)減慢15至30分鐘。用500ul的水重新懸浮收集的小粒并且超聲處理30分鐘以完全分散這些顆粒。然后在600℃下加熱nc10分鐘。添加額外的200ul的1nnaoh至該混合物，再加熱5分鐘，其中混合物變得澄清。在14000rpm簡單離心水解的nc溶液。然后制造用水最終2x稀釋的澄清溶液，并且在以上說明的反相高效液相色譜法上測定。

膠囊化的t細(xì)胞抗原(例如卵清蛋白肽、或人類肽，tt2pdt5t)

來自該制造的330ul的nc懸浮液(在pbs中約10mg/ml懸浮液)在14000rpm旋轉(zhuǎn)減慢15至30分鐘。添加100ul的乙腈至這些小粒以溶解nc的聚合組分。振蕩并超聲處理該混合物1至5分鐘。添加100ul0.2％tfa至該混合物來提取這些肽，并且再超聲處理5分鐘以確保分解這些聚集體。在14000rpm離心該混合物15分鐘來分離任何不溶解的材料(例如聚合物)。取出50ul等分部分的用150ul的mpa(或水)稀釋的上清液，并且在以上說明的反相高效液相色譜法上測定。

在納米載體中結(jié)合的煙堿類似物(b細(xì)胞抗原)的量

旋轉(zhuǎn)減慢1.5ml的nc懸浮液@14000rpm約15分鐘，使用150ul的濃nh4oh(8m)水解這些小粒約2-3h直至溶液轉(zhuǎn)為澄清。添加150ul的2％tfa(水性)溶液至該小?；旌衔飦碇泻驮撊芤骸Ｓ?00ul的水稀釋100ul等分部分的該混合物，并且在以上說明的反相高效液相色譜法上測定，并且基于使用在該制造中使用的pla-peg-煙堿的前體(peg-煙堿)建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線定量。

實例35：免疫調(diào)節(jié)劑從合成納米載體的釋放速率

以下數(shù)據(jù)示出r-848從納米顆粒的釋放速率，從以上示出的低分子量聚乳酸-r-848結(jié)合物制造這些納米顆粒。表1提供了用于這些實驗的相關(guān)配制品信息。

在37℃，如下進(jìn)行t細(xì)胞抗原、卵清蛋白肽和佐劑、r848從在pbs(100mm，ph＝7.4)和檸檬酸鹽緩沖液(100mm，ph＝4.5)中的合成納米載體(納米顆粒)的釋放：

分析方法：在裝備有一個agilentzorbaxsb-c18柱(3.5μm。75x4.6mm。柱溫＝40℃(零件號866953-902))的agilent1100系統(tǒng)上，在λ＝215nm，使用反相高效液相色譜法測量釋放的r848和卵清蛋白肽的量，使用98％水/2％乙腈/0.1％tfa的流動相a(mpa)和90％乙腈/10％水/0.09％tfa的流動相b(mpb)，具有梯度：在7分鐘內(nèi)b＝5％至45％；至9分鐘漸變至95％b；至結(jié)束重新平衡。運行時間13分鐘。流＝1ml/min。

如在表1中示出的那樣，在納米顆粒中存在的r848和卵清蛋白肽的總量。然后用pbs稀釋測試合成納米載體的水懸浮液至4.4ml的最終蓄積量。

(a)在pbs(ph＝7.4)中的體外釋放速率測量：

對于t0樣品，立即從每一np樣品除去200μl等分部分，并且使用一臺微量離心機(模型：galaxy16)，在微量離心管中離心@14000rpm。除去100μl的上清液并且在hplc流動相a(mpa)中稀釋至200μl，并且在反相高效液相色譜法上測定r848和卵清蛋白肽釋放的量。

對于時間點測量：將9x200μl的每一樣品添加至微量離心管(對于非結(jié)合的3x200)，并且將300μl的37℃pbs添加至每一以上等分部分，并且立即將這些樣品置于37℃烘箱中。在以下時間點：24hr、48hr、96hr和144hr(對于結(jié)合的r848)或2h、16h和24h(對于非結(jié)合的(膠囊化的)r848)，離心這些樣品，并且如以上對于t0樣品那樣測定釋放的r848和卵清蛋白肽的量。

(b)在檸檬酸鹽緩沖液(ph＝4.5)中的體外釋放速率測量：

對于t0樣品，從每一樣品除去200μl等分部分，并且離心@6000rpm20分鐘，并且除去上清液。在200ul的檸檬酸鹽緩沖液中重新懸浮剩余納米顆粒，并且離心@14000rpm15分鐘。除去100ul的上清液并且用mpa稀釋至200ul，并且如以上那樣測定r848和肽。

對于時間點測量：將9x200ul的每一樣品添加至微量離心管(對于非結(jié)合的3x200)，并且離心20分鐘@6000rpm，并且除去上清液。然后在500ul的檸檬酸鹽緩沖液重新懸浮剩余nps，并且置于37℃烘箱中。在以下時間點：24hr、48hr、96hr和144hr(對于結(jié)合的r848)或2h、16h和24h(對于非結(jié)合的(膠囊化的)r848)，離心這些樣品，并且如以上對于t0樣品那樣測定釋放的r848和卵清蛋白肽的量。

為了完成來自以上在pbs和檸檬酸鹽緩沖中的測量的質(zhì)量平衡，不斷混合并用200ul的濃nh4oh(8m)處理來自每一樣品的剩余小粒(只有結(jié)合的r848樣品)3h。在該混合物沉降以后，添加200ul的1％tfa來使該小粒的總體積達(dá)到400ul。用mpa稀釋等分部分的50ul的溶液至200ul，并且如以上那樣在hplc上分析以確定在體外釋放至接近質(zhì)量平衡后，剩余在該小粒中的r848和卵清蛋白肽的量。對于非結(jié)合的樣品，用在乙腈中的tfa稀釋該樣品，并且如以上那樣測定r848和肽。

在圖1-3中總結(jié)了這些結(jié)果。

表1具有共價r848的配制品靶

＊c＝共價r848；e＝r848的膠囊化

材料和方法-

hplc-agilent1100。λ＝215nm。柱溫＝40℃

柱-agilentzorbaxsb-c18，3.5μm。75x4.6mm。(零件號866953-902)

c18保護(hù)柱

流動相a(mpa)-98％水/2％乙腈/0.1％tfa

流動相b(mpb)-90％乙腈/10％水/0.09％tfa

梯度：在7分鐘內(nèi)b＝5％至45％；至9分鐘漸變至95％；至結(jié)束重新平衡。運行時間13分鐘。流速＝1ml/min。

pbs-100mm，ph＝7.4。

檸檬酸鹽緩沖液100mm，ph＝4.5。

烘箱-

微量離心機-galaxy16

微量離心管

超聲波儀

移液管-20μl，200μl，1000μl可調(diào)整的

hplc級水-emd-#wx0008-1。

nh4oh-約8m。mallinkcrodt。

tfa，0.2％。prep4/27/09。

tfa，1％。prep5/13/09。

溫度計

samples-“6-1”和“6-2”具有封存的r848。所有剩余的都具有結(jié)合的r848。估算值基于生成自“62”系列的加載。

表2.估算的在合成納米載體中的r848和卵清蛋白肽：

樣品體積略低于計劃值。為了確保對于所有時間點可得的足夠材料，添加以下體積的pbs至樣品來使它們都達(dá)到4.4ml。

表3.

步驟-

1)t＝0樣品制備

a.pbs

i.從每一樣品除去200μl等分部分。微量離心@14000rpm。除去上清液。

ii.在mpa中稀釋上清液100μl＞200μl。(df＝2)。

iii.測定肽和r848。

b.檸檬酸鹽

i.從每一樣品除去200μl等分部分。微量離心@6000rpm20分鐘。除去上清液。

ii.添加200ul的檸檬酸鹽緩沖液并且充分重新懸浮。

iii.微量離心@14000rpm15分鐘。除去上清液。

iv.在mpa中稀釋上清液100μl＞200μl。(df＝2)。

v.測定肽和r848。

2)pbsivr

a.添加9x200μl的每一樣品至微量離心管。(對于非結(jié)合的3x200)

b.對每一等分部分添加300μl的37℃pbs。

c.立即將樣品置于37℃烘箱。

3)檸檬酸鹽ivr

a.添加9x200μl的每一樣品至微量離心管。(對于非結(jié)合的3x200)

b.離心20分鐘@6000rpm。

c.除去上清液。

d.添加500μl的檸檬酸鹽緩沖液至每一管，并且充分重新懸浮。

e.將樣品置于37℃烘箱。

4)對于批次1-4和8，在以下時間點移開樣品(參見步驟6)：

a.結(jié)合的

i.24hr

ii.48hr(2天)

iii.96hr(4天)

iv.144hr(6天)

v.基于以上數(shù)據(jù)的其他時間點tbd。

b.非結(jié)合的

i.2hr

ii.16hr

iii.24hr

5)對于批次6和7，在以下時間點移開樣品：

a.pbs

i.24hr

ii.48hr(2天)

iii.96hr(4天)

iv.144hr(6天)

v.基于以上數(shù)據(jù)的其他時間點tbd。

b.檸檬酸鹽

i.2hr

ii.16hr

iii.24hr

iv.48hr(2天)

v.72hr(3天)

vi.96hr(4天)

vii.120hr(5天)

viii.基于以上數(shù)據(jù)的其他時間點tbd。

6)取樣如下：

a.微量離心@14000rpm15分鐘。

b.除去上清液。

c.在mpa中稀釋上清液100μl至200μl。(df＝2)。

7)測定肽和r848。這將提供在每一時間點釋放的量。

為了完成質(zhì)量平衡，進(jìn)行以下步驟：

8)添加200ulnh4oh至剩余小粒(只有結(jié)合的)。

9)簡單振蕩并超聲處理至分散。

10)添加攪拌棒。允許靜置直至澄清(至少3小時)。

11)添加200ul的1％tfa(總小粒體積＝400μl)。

12)在mpa中稀釋50μl至200μl。用hplc分析來確定在小粒中剩余的肽和r848。(df＝4)。

13)對于結(jié)合的批次，用典型的acn/tfa法測定肽和r848。

實例36：釋放速率測試

按以下方法確定在37℃，在磷酸鹽緩沖鹽水溶液(pbs)(100mm，ph＝7.4)和檸檬酸鹽緩沖液(100mm，ph＝4.5)中，抗原(例如卵清蛋白肽、t細(xì)胞抗原)和免疫刺激劑(例如r848、cpg)從合成納米載體的釋放：

通過經(jīng)離心和重新懸浮，交換希望的量的從該制造獲得的測試合成納米載體的水懸浮液(例如在pbs中約10mg/ml)至相同體積的適當(dāng)釋放介質(zhì)(檸檬酸鹽緩沖液100mm)，達(dá)到r848從由結(jié)合的r848和卵清蛋白肽構(gòu)成的納米載體釋放。

在pbs(ph＝7.4)中的體外釋放速率測量

取決于顆粒大小，一般離心在微量離心管中的1ml的pbs懸浮液nc@14000rpm從15-30分鐘。然后用等體積的流動相a(mpa)或水稀釋收集的上清液，并且在反相高效液相色譜法上測定在儲存期間釋放的r848的量。在1ml的pbs中重新懸浮剩余小粒至均勻的懸浮液，并且在不斷輕輕攪拌下置于37℃溫箱。

對于t0樣品，在將nc懸浮液置于37℃溫箱以前，立即從nc懸浮液移出150μl等分部分，并且在微量離心管中，使用微量離心機(模型：galaxy16)離心@14000rpm。除去100μl的上清液并且在hplc流動相a(mpa)或水中稀釋至200μl，并且在反相高效液相色譜法上測定釋放的r848和卵清蛋白肽的量。

對于時間點測量，從37℃nc樣品懸浮液移出150μl等分部分，離心這些樣品，并且以與t0樣品相同的方式測定釋放的r848和卵清蛋白的量。在6h、24h測試釋放的r848和卵清蛋白肽用于日常監(jiān)測，與額外的2h、48h、96h和144h用于完整的釋放曲線建立。

在檸檬酸鹽緩沖液(ph＝4.5)中的體外釋放速率測量

施用100mm檸檬酸鈉緩沖液(ph＝4.5)來交換原始nc儲存溶液(例如pbs)代替pbs緩沖液，ph＝7.4。為了完成來自以上在pbs和檸檬酸鹽緩沖液中的測量的質(zhì)量平衡，用100ul的nh4oh(8m)處理來自每一時間點的剩余小粒2h(或更長)，同時攪拌直至溶液轉(zhuǎn)為澄清。添加100ul的1％tfa來中和該混合物，這使該小粒溶液的體積達(dá)到200ul。用mpa(或水)稀釋等分部分的50ul的混合物至200ul，并且如以上那樣在hplc上分析以確定在體外釋放至接近質(zhì)量平衡后，剩余在該小粒中的未釋放的r848的量。對于非結(jié)合的樣品，用在乙腈中的tfa稀釋該樣品，并且如以上那樣測定r848。

確定cpg的釋放類似于按照制備和檢測時間點的r848和卵清蛋白肽的測量。然而，通過以上說明的反相高效液相色譜方法測定在釋放介質(zhì)中的cpg的量。

實例37：用攜帶cpg佐劑的nc-nic免疫

按2周間隔(第0、14和28天)，用100μg的nc-nic免疫具有五只小鼠的組三次(皮下地，后肢)。nc-nic是在外表面上表現(xiàn)出煙堿的納米載體的一種組合物，并且對于除了組1的所有組小鼠，攜帶cpg-1826(硫代的)佐劑，它以不同的速率從這些納米載體釋放。根據(jù)以上提供的方法制備這些納米載體。然后在第26和40天測量血清抗煙堿抗體。在圖4中示出，如在針對聚賴氨酸-煙堿的標(biāo)準(zhǔn)elisa中測量，抗煙堿抗體的ec50。

將含有卵清蛋白肽和聚合物的nc-nicw/ocpg-1826給予組1的小鼠，它的75％是pla和25％是pla-peg-nic。將含有卵清蛋白肽、聚合物的nc-nic給予組2的小鼠，它的75％是pla和25％是pla-peg-nic，以及3.2％cpg-1826；在24小時的釋放速率：42μgcpg每mg的nc。將含有聚合物的nc-nic給予組3的小鼠，它的75％是pla和25％是pla-peg-nic，以及3.1％cpg-1826；在24小時的釋放速率：15μgcpg每mg的nc。在4.5的ph確定釋放。

在圖4中示出的結(jié)果證明對于針對nc-有關(guān)抗原的免疫應(yīng)答，封存佐劑至納米載體中是有益的，并且，此外，證明與由具有更慢釋放速率的cpg佐劑(一種tlr9激動劑)的nc誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答相比，在24小時，更高釋放速率的來自納米載體(nc)內(nèi)的封存的cpg佐劑產(chǎn)生升高的免疫應(yīng)答。

實例38：用攜帶兩種形式的cpg佐劑的nc-nic免疫

按4周間隔(第0、和28天)，用100μg的nc-nic免疫具有五只小鼠的組兩次(皮下地，后肢)，并且然后在第12、24和40天測量血清抗煙堿抗體。nc-nic是在外表面上表現(xiàn)出煙堿的納米載體的一種組合物，并且攜帶兩種形式的cpg-1826佐劑之一。根據(jù)以上提供的方法制備這些納米載體。在圖5中示出，如在針對聚賴氨酸-煙堿的標(biāo)準(zhǔn)elisa中測量，抗煙堿抗體的ec50。

將含有卵清蛋白肽、聚合物的nc-nic給予組1的小鼠，它的75％是pla和25％是pla-peg-nic，以及6.2％cpg-1826(硫代的)；在24小時的釋放速率：16.6μgcpg每mg的nc。將含有卵清蛋白肽、聚合物的nc-nic給予組2的小鼠，它的75％是pla和25％是pla-peg-nic，以及7.2％cpg-1826(硫代的)；在24小時的釋放速率：13.2μgcpg每mg的nc。將含有卵清蛋白肽、聚合物的nc-nic給予組3的小鼠，它的75％是pla和25％是pla-peg-nic，以及7.9％cpg-1826(磷酸二酯或po，非硫代的)；在24小時的釋放速率：19.6μgcpg每mg的nc。將含有卵清蛋白肽、聚合物的nc-nic給予組4的小鼠，它的75％是pla和25％是pla-peg-nic，以及8.5％cpg-1826(po，非硫代的)；在24小時的釋放速率：9.3μgcpg每mg的nc。在4.5的ph確定釋放。

圖5中示出的結(jié)果證明封存的佐劑(cpg，tlr9)從納米載體的釋放速率影響針對nc-結(jié)合抗原(煙堿)的抗體的產(chǎn)生，同時在24小時表現(xiàn)出更高釋放速率的納米載體誘導(dǎo)更強的體液免疫反應(yīng)(組1＞組2和組3＞組4)。不論使用的cpg形式，這都是真實的(更穩(wěn)定，硫代的或者更不穩(wěn)定，非硫代的)。

實例39：用攜帶r848的nc-nic免疫

按2周間隔(第0、14和28天)，用100μg的nc-nic免疫具有五只小鼠的組三次(皮下地，后肢)，并且然后在第26、40和54天測量血清抗煙堿抗體。根據(jù)以上提供的方法制備這些納米載體。在圖6中示出，如在針對聚賴氨酸-煙堿的標(biāo)準(zhǔn)elisa中測量，抗煙堿抗體的ec50。

將含有卵清蛋白肽和聚合物的nc-nic給予組1的小鼠，它的75％是pla和25％是pla-peg-nic，但是沒有佐劑。將含有卵清蛋白肽、聚合物的nc-nic給予組2的小鼠，它的75％是pla和25％是pla-peg-nic，以及1.0％r848；在2小時釋放它的92％，并且在6小時釋放多于96％。將含有卵清蛋白肽、聚合物的nc-nic給予組3的小鼠，它的75％是pla-r848和25％是pla-peg-nic，以及1.3％r848，在6小時釋放它的29.4％，并且在24小時釋放67.8％。將含有卵清蛋白肽、聚合物的nc-nic給予組4的小鼠，它的75％是pla-r848和25％是pla-peg-nic，以及1.4％r848，在6小時釋放它的20.4％，并且在24小時釋放41.5％。將含有卵清蛋白肽、聚合物的nc-nic給予組5的小鼠，它的25％是pla-peg-r848，50％pla，和25％是pla-peg-nic，以及0.7％r848；在24小時釋放小于它的1％。在4.5的ph確定釋放。

在圖6中示出的結(jié)果證明包含在nc中的r848佐劑(一種tlr7/8激動劑)增強針對nc-有關(guān)抗原的體液免疫反應(yīng)(組2-5＞＞組1)。此外，r848的快釋放(組2)亦或慢釋放(組5)沒有提高免疫應(yīng)答至與以中間速率的nc釋放r848相同的水平(組3≈組4＞組2≈組5)。

以下內(nèi)容對應(yīng)于母案申請的原始權(quán)利要求書：

1.一種包括如在化學(xué)式(i)中的結(jié)構(gòu)的化合物：

其中r1＝h、oh、sh、nh2，或者是取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；

r2＝h、烷基、或取代的烷基；

y＝n或c；

如果y＝n那么r3不存在；或者如果y＝c，那么r3是h、烷基、取代的烷基、或者與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；

在不與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)時，r4是h、或取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r4或者與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；并且

r8是可生物降解的聚合物或其單元。

2.如項1所述的化合物，其中該生物可降解的聚合物或其單元包括一種聚酯、聚碳酸酯、或一種聚酰胺、或其單元。

3.如項2所述的化合物，其中該生物可降解的聚合物或其單元包括聚(乳酸)、聚(乙醇酸)、聚(乳酸-乙醇酸)共聚物、或聚己酸內(nèi)酯、或其單元。

4.一種包括如在化學(xué)式(ii)中的結(jié)構(gòu)的化合物：

其中r1＝h、oh、sh、nh2，或者是取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；

r2＝h、烷基、或取代的烷基；

y＝n或c；

如果y＝n那么r3不存在；或者如果y＝c，那么r3是h、烷基、取代的烷基、或者與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；

在不與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)時，r4是h、或取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r4或者與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；

r5是一種聚合物或其單元；

x＝c、n、o、或s；

r6和r7中每一個獨立地是不存在、是h、或被取代；并且

r9、r10、r11、和r12每一個獨立地是h、鹵素、oh、硫、nh2、或取代的或未取代的烷基、芳基、雜環(huán)的、烷氧基、芳氧基、烷硫基、芳硫基、烷氨基、或芳氨基。

5.如項4所述的化合物，其中該聚合物或其單元包括一種聚酯、聚碳酸酯、聚酰胺、或一種聚醚、或其單元。

6.如項5所述的化合物，其中該聚合物或其單元包括聚(乳酸)、聚(乙醇酸)、聚(乳酸-乙醇酸)共聚物、聚己酸內(nèi)酯、或聚(乙二醇)、或其單元。

7.如項4-6中任意一項所述的化合物，其中該聚合物是生物可降解的。

8.如項1-7中任意一項所述的化合物，其中r1是h，r2是異丁基，y＝c，并且r3與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成苯環(huán)。

9.如項1-7中任意一項所述的化合物，其中r1是乙氧基甲基，r2是羥基異丁基，y＝c，并且r3與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成苯環(huán)。

10.如項1-7中任意一項所述的化合物，其中r1是乙氧基甲基，r2是甲磺酰氨基異丁基，y＝c，并且r3與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成苯環(huán)。

11.如項1-7中任意一項所述的化合物，其中r1是oh，r2是苯甲基，y＝n，r3不存在，并且r4是丁氧基。

12.如項1-7中任意一項所述的化合物，其中y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是丁基氨基。

13.如項1-7中任意一項所述的化合物，其中y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是丁氧基。

14.如項1-7中任意一項所述的化合物，其中y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是芐基氨基。

15.如項1-7中任意一項所述的化合物，其中y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是戊基。

16.如項1-15中任意一項所述的化合物，其中在ph＝7.4并且在25℃，該聚合物在水中是不可溶的。

17.如項1-16中任意一項所述的化合物，其中如使用凝膠滲透色譜法確定的那樣，該聚合物具有范圍從800道爾頓至10,000道爾頓的重均分子量。

18.如項1-17中任意一項所述的化合物，其中該聚合物或其單元并不包括聚縮酮或其單元。

19.一種組合物，包括如項1-18中任意一項所述的化合物。

20.如項17所述的組合物，進(jìn)一步包括一種藥學(xué)上可接受的賦形劑。

21.一種包括如項1-18中任意一項所述的化合物的合成納米載體。

22.如項21所述的合成納米載體，其中該合成納米載體進(jìn)一步包括一種b細(xì)胞抗原和/或一種t細(xì)胞抗原。

23.如項21或22所述的合成納米載體，其中該合成納米載體進(jìn)一步包括一種抗原遞呈細(xì)胞(apc)靶向特征。

24.如項21-23中任意一項所述的合成納米載體，其中該合成納米載體是一種樹枝狀化合物，巴奇球，納米線，肽或蛋白基納米顆粒，包括納米材料、球狀納米顆粒、立方納米顆粒、錐形納米顆粒、長方形納米顆粒、圓柱形納米顆粒、或環(huán)形納米顆粒的一種組合的納米顆粒。

25.一種組合物，包括如項21-24中任意一項所述的合成納米載體。

26.如項25所述的組合物，進(jìn)一步包括一種藥學(xué)上可接受的賦形劑。

27.一種組合物，包括一種疫苗，該疫苗包括如項1-18中任意一項所述的化合物。

28.一種組合物，包括一種疫苗，該疫苗包括如項19、20、和25-27中任意一項所述的組合物。

29.一種組合物，包括一種疫苗，該疫苗包括如項21-24中任意一項所述的合成納米載體。

30.一種方法，包括：

將如項1-18中任意一項所述的化合物給予一個受試者。

31.一種方法，包括：

將如項19、20、以及25-29中任意一項所述的組合物給予一個受試者。

32.一種方法，包括：

將如項21-24中任意一項所述的合成納米載體給予一個受試者。

33.如項30-32中任意一項所述的方法，其中在該受試者中誘導(dǎo)或增強一種免疫應(yīng)答。

34.一種用于制造包括如在化學(xué)式(i)中那樣的結(jié)構(gòu)的結(jié)合物的方法：

包括：

活化一種可生物降解的聚合物或其單元，并且

將該活化的可生物降解的聚合物或其單元和包括如在化學(xué)式(iii)中那樣的結(jié)構(gòu)的一種化合物暴露于一種堿和/或溶劑：

其中r1＝h、oh、sh、nh2，或者是取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；

r2＝h、烷基、或取代的烷基；

y＝n或c；

如果y＝n那么r3不存在；或者如果y＝c，那么r3是h、烷基、取代的烷基、或者與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；

在不與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)時，r4是h、或取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r4或者與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；并且

r8是一種可生物降解的聚合物或其單元。

35.如項34所述的方法，其中該生物可降解的聚合物或其單元包括一種聚酯、聚碳酸酯、或一種聚酰胺、或其單元。

36.如項35所述的方法，其中該生物可降解的聚合物或其單元包括聚(乳酸)、聚(乙醇酸)、聚(乳酸-乙醇酸)共聚物、或聚己酸內(nèi)酯、或其單元。

37.一種用于制造包括如在化學(xué)式(i)中那樣的結(jié)構(gòu)的結(jié)合物的方法：

包括：

將包括聚合物或其單元的一種組合物和包括如在化學(xué)式(iii)中那樣的結(jié)構(gòu)的一種化合物暴露于偶聯(lián)劑和堿和/或溶劑：

其中r1＝h、oh、sh、nh2，或者是取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；

r2＝h、烷基、或取代的烷基；

y＝n或c；

如果y＝n那么r3不存在；或者如果y＝c，那么r3是h、烷基、取代的烷基、或者與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；

在不與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)時，r4是h、或取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r4或者與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；并且

r8是一種聚合物或其單元。

38.一種用于制造包括如在化學(xué)式(ii)中那樣的結(jié)構(gòu)的結(jié)合物的方法：

包括：

將一種醇、一種催化劑、和包括如在化學(xué)式(iv)中那樣的結(jié)構(gòu)的一種化合物進(jìn)行合并：

其中r1＝h、oh、sh、nh2，或者是取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；

r2＝h、烷基、或取代的烷基；

y＝n或c；

如果y＝n那么r3不存在；或者如果y＝c，那么r3是h、烷基、取代的烷基、或者與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；

在不與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)時，r4是h、或取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r4或者與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；

r5是一種聚合物或其單元；

x是c、n、o、或s；

r6和r7中每一個獨立地是h或被取代；并且

r9、r10、r11、和r12每一個獨立地是h、鹵素、oh、硫、nh2、或取代的或未取代的烷基、芳基、雜環(huán)的、烷氧基、芳氧基、烷硫基、芳硫基、烷氨基、或芳氨基；并且

加熱該醇、催化劑、和化合物。

39.如項38所述的方法，其中在一種溶劑存在下，加熱該醇、催化劑、和化合物。

40.一種用于制造包括如在化學(xué)式(ii)中那樣的結(jié)構(gòu)的結(jié)合物的方法：

包括：

將一種醇和包括如在化學(xué)式(iv)中那樣的結(jié)構(gòu)的一種化合物進(jìn)行合并：

其中r1＝h、oh、sh、nh2，或者是取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；

r2＝h、烷基、或取代的烷基；

y＝n或c；

如果y＝n那么r3不存在；或者如果y＝c，那么r3是h、烷基、取代的烷基、或者與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；

在不與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)時，r4是h、或取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r4或者與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；

r5是一種聚合物或其單元；

x是c、n、o、或s；

r6和r7中每一個獨立地是h或被取代；并且

r9、r10、r11、和r12每一個獨立地是h、鹵素、oh、硫、nh2、或取代的或未取代的烷基、芳基、雜環(huán)的、烷氧基、芳氧基、烷硫基、芳硫基、烷氨基、或芳氨基；

加熱該醇和化合物；并且

添加一種催化劑。

41.如項40所述的方法，在同時和/或在添加該催化劑以后，加熱該醇、化合物、和催化劑。

42.一種用于制造包括如在化學(xué)式(ii)中那樣的結(jié)構(gòu)的結(jié)合物的方法：

包括：

將一種醇、一種催化劑、和包括如在化學(xué)式(iv)中那樣的結(jié)構(gòu)的一種化合物進(jìn)行合并：

其中r1＝h、oh、sh、nh2，或者是取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；

r2＝h、烷基、或取代的烷基；

y＝n或c；

如果y＝n那么r3不存在；或者如果y＝c，那么r3是h、烷基、取代的烷基、或者與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；

在不與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)時，r4是h、或取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r4或者與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；

r5是一種聚合物或其單元；

x是c、n、o、或s；

r6和r7中每一個獨立地是h或被取代；并且

r9、r10、r11、和r12每一個獨立地是h、鹵素、oh、硫、nh2、或取代的或未取代的烷基、芳基、雜環(huán)的、烷氧基、芳氧基、烷硫基、芳硫基、烷氨基、或芳氨基。

43.如項38-42中任意一項所述的方法，其中該醇是具有末端羥基基團(tuán)的一種聚合物或其單元。

44.如項37或43所述的方法，其中該聚合物或其單元包括一種聚酯、聚碳酸酯、聚酰胺、或一種聚醚、或其單元。

45.如項44所述的方法，其中該聚合物或其單元包括聚(乳酸)、聚(乙醇酸)、聚(乳酸-乙醇酸)共聚物、聚己酸內(nèi)酯、或聚(乙二醇)、或其單元。

46.如項38-45中任意一項所述的方法，其中該催化劑是一種磷嗪堿、1，8-二氮雜二環(huán)十一碳-7-烯、1，4，7-三氮雜二環(huán)癸烯、或n-甲基-1，4，7-三氮雜二環(huán)癸烯。

47.如項34-46中任意一項所述的方法，其中如使用凝膠滲透色譜法確定的那樣，該聚合物具有范圍從800道爾頓至10,000道爾頓的重均分子量。

48.如項34-47中任意一項所述的方法，其中在ph＝7.4并且在25℃，該聚合物在水中是不可溶的。

49.如項34-48中任意一項所述的方法，其中該聚合物或其單元并不包括聚縮酮或其單元。

50.如項34-49中的任意一項所述的方法，其中r1是h，r2是異丁基，y＝c，并且r3與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成苯環(huán)。

51.如項34-49中任意一項所述的方法，其中r1是乙氧基甲基，r2是羥基異丁基，y＝c，并且r3與r4結(jié)合以以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成苯環(huán)。

52.如項34-49中任意一項所述的方法，其中r1是乙氧基甲基，r2是甲磺酰氨基異丁基，y＝c，并且r3與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成苯環(huán)。

53.如項34-49中任意一項所述的方法，其中r1是oh，r2是苯甲基，y＝n，r3不存在，并且r4是丁氧基。

54.如項34-49中任意一項所述的方法，其中y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是丁基氨基。

55.如項34-49中任意一項所述的方法，其中y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是丁氧基。

56.如項34-49中任意一項所述的方法，其中y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是芐基氨基。

57.如項34-49中任意一項所述的方法，其中y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是戊基。

58.一種包括如在化學(xué)式(iv)中的結(jié)構(gòu)的化合物：

其中r1＝h、oh、sh、nh2，或者是取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；

r2＝h、烷基、或取代的烷基；

y＝n或c；

如果y＝n那么r3不存在；或者如果y＝c，那么r3是h、烷基、取代的烷基、或者與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；

在不與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)時，r4是h、或取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r4或者與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；

x是c、n、o、或s；

r6和r7中每一個獨立地是h或被取代；并且

r9、ri0、r11、和r12每一個獨立地是h、鹵素、oh、硫、nh2、或取代的或未取代的烷基、芳基、雜環(huán)的、烷氧基、芳氧基、烷硫基、芳硫基、烷氨基、或芳氨基。

59.如項58所述的化合物，其中r1是h，r2是異丁基，y是c，并且r3與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成苯環(huán)。

60.如項58所述的化合物，其中r1是乙氧基甲基，r2是羥基異丁基，y＝c，并且r3與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成苯環(huán)。

61.如項58所述的化合物，其中r1是乙氧基甲基，r2是甲磺酰氨基異丁基，y＝c，并且r3與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成苯環(huán)。

62.如項58所述的化合物，其中r1是oh，r2是苯甲基，y＝n，r3不存在，并且r4是丁氧基。

63.如項58所述的化合物，其中y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是丁基氨基。

64.如項58所述的化合物，其中y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是丁氧基。

65.如項58所述的化合物，其中y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是芐基氨基。

66.如項58所述的化合物，其中y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是戊基。

67.一種組合物，包括如項58-66中任意一項所述的化合物。

68.一種用于制造包括如在化學(xué)式(iv)中那樣的結(jié)構(gòu)的化合物的方法：

包括：

在一種溶劑存在下和/或加熱條件下，合并包括如在化學(xué)式(iii)中的結(jié)構(gòu)的一種化合物：

以及

包括如在化學(xué)式(v)中的結(jié)構(gòu)的一種化合物：

其中r1＝h、oh、sh、nh2，或者是取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；

r2＝h、烷基、或取代的烷基；

y＝n或c；

如果y＝n那么r3不存在；或者如果y＝c，那么r3是h、烷基、取代的烷基、或者與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；

在不與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)時，r4是h、或取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r4或者與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；

x是c、n、o、或s；

r6和r7中每一個獨立地是h或被取代；并且

r9、r10、r11、和r12每一個獨立地是h、鹵素、oh、硫、nh2、或取代的或未取代的烷基、芳基、雜環(huán)的、烷氧基、芳氧基、烷硫基、芳硫基、烷氨基、或芳氨基。

69.如項68所述的方法，其中r1是h，r2是異丁基，y是c，并且r3與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成苯環(huán)。

70.如項68所述的方法，其中r1是乙氧基甲基，r2是羥基異丁基，y＝c，并且r3與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成苯環(huán)。

71.如項68所述的方法，其中r1是乙氧基甲基，r2是甲磺酰氨基異丁基，y＝c，并且r3與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成苯環(huán)。

72.如項68所述的方法，其中r1是oh，r2是苯甲基，y＝n，r3不存在，并且r4是丁氧基。

73.如項68所述的方法，其中y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是丁基氨基。

74.如項68所述的方法，其中y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是丁氧基。

75.如項68所述的方法，其中y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是芐基氨基。

76.如項68所述的方法，其中y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是戊基。

77.一種用于制造包括如在化學(xué)式(vi)中那樣的結(jié)構(gòu)的結(jié)合物的方法：

包括：

合并一種催化劑、一種具有化學(xué)式(vii)的二醇：

ho-聚合物-oh(vii)，

以及包括如在化學(xué)式(iv)中的結(jié)構(gòu)的一種化合物：

其中r1＝h、oh、sh、nh2，或者是取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；

r2＝h、烷基、或取代的烷基；

y＝n或c；

如果y＝n那么r3不存在；或者如果y＝c，那么r3是h、烷基、取代的烷基、或者與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；

在不與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)時，r4是h、或取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r4或者與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；

x是c、n、o、或s；

r6和r7中每一個獨立地是h或被取代；并且

r9、r10、r11、和r12每一個獨立地是h、鹵素、oh、硫、nh2、或取代的或未取代的烷基、芳基、雜環(huán)的、烷氧基、芳氧基、烷硫基、芳硫基、烷氨基、或芳氨基；并且

加熱該醇、催化劑、和化合物。

78.如項77所述的方法，其中在一種溶劑存在下，加熱該醇、催化劑、和化合物。

79.用于制造包括如在化學(xué)式(vi)中那樣的結(jié)構(gòu)的結(jié)合物的一種方法：

包括：

合并一種具有化學(xué)式(vii)的二醇：

ho-聚合物-oh(vii)，

以及包括如在化學(xué)式(iv)中的結(jié)構(gòu)的一種化合物：

其中r1＝h、oh、sh、nh2，或者是取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；

r2＝h、烷基、或取代的烷基；

y＝n或c；

如果y＝n那么r3不存在；或者如果y＝c，那么r3是h、烷基、取代的烷基、或者與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；

在不與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)時，r4是h、或取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r4或者與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；

x是c、n、o、或s；

r6和r7中每一個獨立地是h或被取代；并且

r9、r10、r11、和r12每一個獨立地是h、鹵素、oh、硫、nh2、或取代的或未取代的烷基、芳基、雜環(huán)的、烷氧基、芳氧基、烷硫基、芳硫基、烷氨基、或芳氨基；

加熱該醇和化合物；并且

添加一種催化劑。

80.如項79所述的方法，在同時和/或在添加該催化劑以后，加熱該醇、化合物、和催化劑。

81.用于制造包括如在化學(xué)式(vi)中那樣的結(jié)構(gòu)的結(jié)合物的一種方法：

包括：

合并一種催化劑、一種具有化學(xué)式(vii)的二醇：

ho-聚合物-oh(vii)，

以及包括如在化學(xué)式(iv)中的結(jié)構(gòu)的一種化合物：

其中r1＝h、oh、sh、nh2，或者是取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；

r2＝h、烷基、或取代的烷基；

y＝n或c；

如果y＝n那么r3不存在；或者如果y＝c，那么r3是h、烷基、取代的烷基、或者與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；

在不與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)時，r4是h、或取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r4或者與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；

x是c、n、o、或s；

r6和r7中每一個獨立地是h或被取代；并且

r9、r10、r11、和r12每一個獨立地是h、鹵素、oh、硫、nh2、或取代的或未取代的烷基、芳基、雜環(huán)的、烷氧基、芳氧基、烷硫基、芳硫基、烷氨基、或芳氨基。

82.如項77-81中任意一項所述的方法，其中具有化學(xué)式(vii)的該化合物是選自下組，該組由以下各項組成：聚縮酮二醇、聚(乙)二醇、聚己酸內(nèi)酯二醇、二嵌段聚丙交酯聚(乙)二醇共聚物、二嵌段聚丙交酯/聚乙醇酸交酯聚(乙)二醇共聚物、二嵌段聚乙醇酸交酯聚(乙)二醇共聚物、聚(丙)二醇、聚(碳酸六亞甲基酯)二醇、以及聚(四氫呋喃)。

83.如項77-82中任意一項所述的方法，其中該催化劑是磷嗪堿、1，8-二氮雜二環(huán)十一碳-7-烯、1，4，7-三氮雜二環(huán)癸烯、或n-甲基-1，4，7-三氮雜二環(huán)癸烯。

84.如項77-83中任意一項所述的方法，其中如使用凝膠滲透色譜法確定的那樣，該聚合物具有范圍從800道爾頓至10,000道爾頓的重均分子量。

85.如項77-84中任意一項所述的方法，其中在ph＝7.4并且在25℃，該聚合物在水中是不可溶的。

86.如項77-85中任意一項所述的方法，其中該聚合物并不包括聚縮酮或其單元。

87.如項77-85中的任意一項所述的方法，其中r1是h，r2是異丁基，y＝c，并且r3與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成苯環(huán)。

88.如項77-85中任意一項所述的方法，其中r1是乙氧基甲基，r2是羥基異丁基，y＝c，并且r3與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成苯環(huán)。

89.如項77-85中任意一項所述的方法，其中r1是乙氧基甲基，r2是甲磺酰氨基異丁基，y＝c，并且r3與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成苯環(huán)。

90.如項77-85中任意一項所述的方法，其中r1是oh，r2是苯甲基，y＝n，r3不存在，并且r4是丁氧基。

91.如項77-85中任意一項所述的方法，其中y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是丁基氨基。

92.如項77-85中任意一項所述的方法，其中y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是丁氧基。

93.如項77-85中任意一項所述的方法，其中y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是芐基氨基。

94.如項77-85中任意一項所述的方法，其中y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是戊基。

95.一種包括如在化學(xué)式(iv)中的結(jié)構(gòu)的化合物：

其中r1＝h、oh、sh、nh2，或者是取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；

r2＝h、烷基、或取代的烷基；

y＝n或c；

如果y＝n那么r3不存在；或者如果y＝c，那么r3是h、烷基、取代的烷基、或者與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；

在不與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)時，r4是h、或取代的或未取代的烷基、烷氧基、烷硫基、或烷氨基；r4或者與r3結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成碳環(huán)或雜環(huán)；

x是c、n、o、或s；

r6和r7中每一個獨立地是h或被取代；并且

r9、r10、r11、和r12每一個獨立地是h、鹵素、oh、硫、nh2、或取代的或未取代的烷基、芳基、雜環(huán)的、烷氧基、芳氧基、烷硫基、芳硫基、烷氨基、或芳氨基。

96.如項95所述的化合物，其中該聚合物選自下組，該組由以下各項組成：聚縮酮二醇、聚(乙)二醇、聚己酸內(nèi)酯二醇、二嵌段聚丙交酯聚(乙)二醇共聚物、二嵌段聚丙交酯/聚乙醇酸交酯聚(乙)二醇共聚物、二嵌段聚乙醇酸交酯聚(乙)二醇共聚物、聚(丙)二醇、聚(碳酸六亞甲基酯)二醇、以及聚(四氫呋喃)。

97.如項95或96所述的化合物，其中如使用凝膠滲透色譜法確定的那樣，該聚合物具有范圍從800道爾頓至10,000道爾頓的重均分子量。

98.如項95-97中任意一項所述的化合物，其中在ph＝7.4并且在25℃，該聚合物在水中是不可溶的。

99.如項95-98中任意一項所述的化合物，其中該聚合物并不包括聚縮酮或其單元。

100.如項95-99中的任意一項所述的化合物，其中r1是h，r2是異丁基，y＝c，并且r3與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成苯環(huán)。

101.如項95-99中任意一項所述的化合物，其中r1是乙氧基甲基，r2是羥基異丁基，y＝c，并且r3與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成苯環(huán)。

102.如項95-99中任意一項所述的化合物，其中r1是乙氧基甲基，r2是甲磺酰氨基異丁基，y＝c，并且r3與r4結(jié)合以與它們所連接的吡啶環(huán)上的碳原子形成苯環(huán)。

103.如項95-99中任意一項所述的化合物，其中r1是oh，r2是苯甲基，y＝n，r3不存在，并且r4是丁氧基。

104.如項95-99中任意一項所述的化合物，其中y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是丁基氨基。

105.如項95-99中任意一項所述的化合物，其中y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是丁氧基。

106.如項95-99中任意一項所述的化合物，其中y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是芐基氨基。

107.如項95-99中任意一項所述的化合物，其中y是n，r1是oh，r2是苯甲基，r3不存在，并且r4是戊基。

108.一種組合物，包括如項95-107中任意一項所述的化合物。

109.如項108所述的組合物，進(jìn)一步包括一種藥學(xué)上可接受的賦形劑。

110.一種包括如項95-108中任意一項所述的化合物的合成納米載體。

111.如項110所述的合成納米載體，其中該合成納米載體進(jìn)一步包括一種b細(xì)胞抗原和/或一種t細(xì)胞抗原。

112.如項110或111所述的合成納米載體，其中該合成納米載體進(jìn)一步包括一種抗原遞呈細(xì)胞(apc)靶向特征。

113.如項110-112中任意一項所述的合成納米載體，其中該合成納米載體是一種樹枝狀化合物，巴奇球，納米線，肽或蛋白基納米顆粒，包括納米材料、球狀納米顆粒、立方納米顆粒、錐形納米顆粒、長方形納米顆粒、圓柱形納米顆粒、或環(huán)形納米顆粒的一個組合的納米顆粒。

114.一種組合物，包括如項110-113中任意一項所述的合成納米載體。

115.如項114所述的組合物，進(jìn)一步包括一種藥學(xué)上可接受的賦形劑。

116.一種組合物，包括一種疫苗，該疫苗包括如項95-107中任意一項所述的化合物。

117.一種組合物，包括一種疫苗，該疫苗包括如項108、109、和114-116中任意一項所述的組合物。

118.一種組合物，包括一種疫苗，該疫苗包括如項110-113中任意一項所述的合成納米載體。

119.一種方法，包括：

將如項95-107中任意一項所述的化合物給予一個受試者。

120.一種方法，包括：

將如項108、109、以及114-118中任意一項所述的組合物給予一個受試者。

121.一種方法，包括：

將如項110-113中任意一項所述的合成納米載體給予一個受試者。

122.如項119-121中任意一項所述的方法，其中在該受試者中誘導(dǎo)或增強一種免疫應(yīng)答。