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一種磁性復(fù)合納米顆粒及其制備方法和應(yīng)用與流程

文檔序號(hào):12108929閱讀:來源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.一種磁性復(fù)合納米顆粒,由內(nèi)向外依次包括磁核、二氧化硅殼層和生物分子修飾層,所述磁核為鐵磁性納米顆粒,所述二氧化硅殼層為表面修飾有羧基的二氧化硅,所述生物分子修飾層為親和素及與之結(jié)合的生物素化的含有脫堿基空位的雙鏈DNA。

2.如權(quán)利要求1所述的磁性復(fù)合納米顆粒,其特征在于,所述鐵磁性納米顆粒為四氧化三鐵納米顆?;颚?三氧化二鐵納米顆粒。

3.如權(quán)利要求1所述的磁性復(fù)合納米顆粒,其特征在于,所述磁性復(fù)合納米顆粒的TEM粒徑為40-60nm,其DLS粒徑為65-75nm。

4.如權(quán)利要求1所述的磁性復(fù)合納米顆粒,其特征在于,所述磁性復(fù)合納米顆粒的表達(dá)式為Fe3O4@SiO2@AVD-AP-DNA或γ-Fe2O3@SiO2@AVD-AP-DNA,其中Fe3O4代表四氧化三鐵磁核,γ-Fe2O3則代表γ-三氧化二鐵磁核;SiO2代表二氧化硅殼層;AVD代表親和素層;AP-DNA代表生物素化的含有脫堿基空位的雙鏈DNA層。

5.如權(quán)利要求1所述的磁性復(fù)合納米顆粒,其特征在于,所述生物素化的含有脫堿基空位的雙鏈DNA的兩條單鏈的序列分別為:

5’-GGGGACGACTCCATCGACCTCAAGCAGTTGATCCTTTGGAAAAAAA-Biotin-3’和5’-GTCGATGGAGXCGTCCCC-FAM-3’,其中X表示脫堿基位點(diǎn),Biotin表示生物素標(biāo)記,F(xiàn)AM為羧基熒光素標(biāo)記。

6.權(quán)利要求1-5任意一項(xiàng)所述的磁性復(fù)合納米顆粒的制備方法,包括:先在二氧化硅殼層的外層共價(jià)連接上親和素,然后通過親和素與生物素的強(qiáng)親和作用,將生物素化的含U堿基的雙鏈DNA修飾在二氧化硅包覆的鐵磁性納米顆粒表面,最后再利用UDG酶將U堿基切除,產(chǎn)生含脫堿基空位的雙鏈DNA。

7.如權(quán)利要求6所述的制備方法,其特征在于,具體步驟如下:

1)將羧基修飾的二氧化硅殼層包覆的鐵磁性納米顆粒超聲分散在純水中,分別加入EDC和NHS,室溫下震蕩反應(yīng),作為溶液A;

2)在溶液A中加入親和素,室溫下震蕩反應(yīng),磁分離洗滌除去未反應(yīng)的物質(zhì),然后將得到的反應(yīng)物重新超聲分散在純水中,作為溶液B;

3)在溶液B中加入生物素化的含U堿基的雙鏈DNA,室溫下孵育30-90分鐘,磁分離并洗滌,除去未反應(yīng)的物質(zhì),然后將得到的含U堿基的雙鏈DNA修飾的磁性納米顆粒重新超聲分散在PBS溶液中,作為溶液C;

4)將溶液C加入到buffer 1.1緩沖溶液中,加入U(xiǎn)DG酶切除DNA雙鏈中的U堿基,得到磁性復(fù)合納米顆粒。

8.如權(quán)利要求7所述的制備方法,其特征在于,步驟1)中,羧基修飾的二氧化硅殼層包覆的鐵磁性納米顆粒超聲分散在純水中的終濃度為0.5-2mg/mL;EDC的濃度為0.5-2mg/mL,NHS的濃度為1-5mg/mL,EDC、NHS與羧基修飾的二氧化硅殼層包覆的鐵磁性納米顆粒的重量比為4:10:1。

9.如權(quán)利要求7所述的制備方法,其特征在于,步驟2)中親和素的濃度為0.1-0.2mg/mL,加入親和素使納米顆粒與親和素在混合溶液中終濃度的比為5:1,室溫下震蕩反應(yīng)8-12個(gè)小時(shí);步驟3)中,加入的生物素化的含U堿基的雙鏈DNA在溶液B中的終濃度為0.2-1μM;步驟4)中,加入的UDG酶在包含溶液C的buffer 1.1緩沖溶液中的終濃度1.0-100U/mL,反應(yīng)時(shí)間范圍是0.5-10min。

10.權(quán)利要求1-5任意一項(xiàng)所述的磁性復(fù)合納米顆粒在體外酶活性測(cè)定、活細(xì)胞內(nèi)核酸修復(fù)酶的原位成像中的應(yīng)用。

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