本發(fā)明涉及制備β-胡蘿卜素晶體的方法，尤其是一種微生物來源的β-胡蘿卜素晶體的制備方法。
背景技術：
類胡蘿卜素是一種廣泛存在于植物、動物、微生物中，與人體的健康密切相關的營養(yǎng)物質，它主要包括β-胡蘿卜素、番茄紅素、葉黃素等。類胡蘿卜素不僅具有抗癌、抗氧化等很高的藥用價值，而且還是人體維生素A的重要來源。類胡蘿卜素作為食品添加劑和營養(yǎng)增強劑，已經得到FDA、歐洲共同體、WHO等國際組織的認可，近年來更是被廣泛地應用于醫(yī)藥、食品、保健品及化妝品等領域。
天然的類胡蘿卜素主要來自于植物。但是，植物性原料存在供應不足，含量低等缺點，無法在工業(yè)上進行大規(guī)模利用。微生物具有生長繁殖快、含量高、不受季節(jié)性影響等優(yōu)點，因此，利用微生物發(fā)酵生產類胡蘿卜素是一種理想的方法。
目前，提取三孢布拉霉菌中的類胡蘿卜素的主要工藝包括：濕菌體與水混合經高壓均質提取，濕、干菌體與有機溶劑提取。得到粗提物后，分離純化等步驟得到高含量的晶體。中國專利第01804173.6號公開了一種類胡蘿卜素晶體的分離，采用濕菌體與水混合后經高壓均質機均質破碎提取類胡蘿卜素的混合物，再用乙醇、鹽水洗滌混合物。此方法提取類胡蘿卜素時的溫度高，極易造成類胡蘿卜素氧化降解，且分離純化困難，收率極低。中國專利申請第201210180281.4號公開了一種采用高壓蒸汽破壁提取β-胡蘿卜素的方法。但是，此方法使用的溫度和壓力都較高，容易使β-胡蘿卜素氧化，造成產品收率低，且影響產品的品質。
現有的以微生物發(fā)酵的方式制備β-胡蘿卜素晶體大都存在以下缺點：干燥或提取過程中需要經高溫處理，極易造成類胡蘿卜素的見光、氧化降解，造成收率低，產品品質差。因此，需要考慮一種改良的方式來避免類胡蘿卜素在制備過程中的損失。
技術實現要素：
本發(fā)明的目的是提供一種能降低β-胡蘿卜素氧化、提高收率和品質的制備β-胡蘿卜素晶體的方法。
為實現上述目的，本發(fā)明的制備β-胡蘿卜素晶體的方法，包括如下步驟：
(1) 將微生物菌種接種發(fā)酵，
(2) 將發(fā)酵液進行固液分離，得到濕菌體；
(3) 將濕菌體干燥后得到干菌體；
(4) 使用有機溶劑對干菌體進行萃取
(5) 固液分離后得到萃取液；
(6) 萃取液經蒸發(fā)結晶得到結晶母液；
(7) 結晶母液經過固液分離，得到粗濕晶體；
(8) 粗濕晶體經有機溶劑洗滌后，真空干燥得到β-胡蘿卜素晶體；
步驟(3)、(4)、(6)的至少一個步驟中，加入抗氧化劑。
如前所述的制備β-胡蘿卜素晶體的方法，步驟(1)中，微生物菌種為三孢布拉霉、杜氏鹽藻或酵母。
如前所述的制備β-胡蘿卜素晶體的方法，步驟(3)中，抗氧化劑的添加量為濕菌體重量的0.1%～5%。
如前所述的制備β-胡蘿卜素晶體的方法，步驟(4)或(6)中，抗氧化劑的添加量為干菌體重量的0.1%～5%。
如前所述的制備β-胡蘿卜素晶體的方法，步驟(4)中，干菌體與有機溶劑質量體積比為1:3-1:30。
如前所述的制備β-胡蘿卜素晶體的方法，步驟(4)中，萃取同時使用機械破碎的工藝，機械破碎后菌體的平均粒徑不高于300μm。
如前所述的制備β-胡蘿卜素晶體的方法，步驟(4)中，有機溶劑為己烷、二氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯或丙酮。
本發(fā)明制備β-胡蘿卜素的方法具有以下有益效果：由于β-胡蘿卜素氧化降解主要生成一系列揮發(fā)性致香物質，如β-紫羅蘭酮、二氫獼猴桃內酯、異佛爾酮、氧化異佛爾酮等。這些氧化降解產物的大量存在對β-胡蘿卜素的純化存在較大影響，會影響β-胡蘿卜素的純度，因此在干燥、固液分離和蒸發(fā)結晶的過程中，部分或者全部添加抗氧化劑，既降低了提取過程中β-胡蘿卜素的損失，提升了β-胡蘿卜素的收率，又能制得純度更高，品質更好的β-胡蘿卜素晶體。
具體實施方式
下面結合具體實例，對本發(fā)明作進一步的詳細說明。
收率計算及檢測純度的標準或者方法
1、菌體重β-胡蘿卜素含量的的檢測方法：準確稱取0.01～0.03g樣品，精確0.0001g，
經玻璃勻漿器破壁后，用乙酸乙酯提取，反復抽提至樣品完全無色，定容到25ml。再用
移液管取1ml稀釋至一定的倍數后定容。以乙酸乙酯為參比，將定容后的溶液倒入比色
皿中，在455 nm±2 nm 范圍內的最大吸收波長處測定吸光度，然后根據β-胡蘿卜素標準
曲線計算出菌體中的β-胡蘿卜素含量。
2、β-胡蘿卜素提取率的計算方法：
提取率(%)=m1/ (m2* w)
式中：m1：得到β-胡蘿卜素晶體重量；
m2：β-胡蘿卜素干菌體的重量；
w：β-胡蘿卜素干菌體中β-胡蘿卜素的含量。
3、β-胡蘿卜素晶體純度的檢測方法：參照GB 28310-2012 食品安全國家標準 食品添加劑 β-胡蘿卜素(發(fā)酵法) 。
實施例1
以杜氏鹽藻為發(fā)酵菌種，依次按下列步驟操作：
1)將杜氏鹽藻接種發(fā)酵，將發(fā)酵液離心得到水量為75.7%濕菌體，
2)取1kg濕菌體，向濕菌體中加入1g二丁基羥基甲苯(抗氧化劑)，并混合均勻，真空干燥得到269.3g干菌體，真空干燥條件為：溫度80℃，負壓-0.085MPa。
3)取200g上述干燥的菌體，加入到3L的四頸燒瓶中，并加入600mL二氯甲烷，用高速剪切機破碎至菌體平均粒徑為181um，抽濾得到一萃萃取液和濕菌渣，濕菌渣用2L二氯甲烷進行二次萃取，抽濾得到二萃萃取液。
4)合并兩次萃取液，在50℃，-0.08MPa條件下蒸發(fā)結晶，得到結晶母液。
5)將結晶母液抽濾得到濕晶體，濕晶體用20ml乙酸乙酯洗滌，再次抽濾得到濕晶體，濕晶體在80℃，-0.085MPa條件下，真空干燥2h，得到成品類胡蘿卜素晶體。經檢測，β-胡蘿卜素晶體的提取率為66.1%，經檢測β-胡蘿卜素純度為97.3%。
6)按上述相同的工藝，不添加抗氧化劑進行對照試驗，經計算β-胡蘿卜素晶體的提取率為60.9%，經檢測β-胡蘿卜素純度為95.9%。
實施例2
以酵母為發(fā)酵菌種，依次按下列步驟操作：
1)將酵母接種發(fā)酵，將發(fā)酵液離心得到含水量為80.3%的濕菌體；
2)取上述10kg濕菌體，濕菌體重加入75g維生素E(抗氧化劑)，充分混合攪拌均勻，經冷凍干燥得到2.17kg干菌體，冷凍干燥條件為：真空20Pa，捕集器溫度為-40℃，干燥18h。
3)取1kg干菌體，投入到50L的反應釜中，再加入30L正己烷，用砂磨機循環(huán)破碎至菌體平均粒徑為217um，離心分離得到一萃萃取液和濕菌渣，濕菌渣繼續(xù)加入30L正己烷，在55℃萃取1h，離心得到二萃萃取液和濕菌渣。
4)合并一萃和二萃萃取液，在43℃，-0.085MPa的條件下蒸發(fā)結晶，得到結晶母液。
5)將上述結晶母液離心分離得到濕晶體，濕晶體用500ml正己烷攪拌洗滌，再次離心得到濕晶體，濕晶體在80℃，-0.085MPa條件下真空干燥2h得到成品類胡蘿卜素晶體。經計算類胡蘿卜晶體收率為69.1%，經檢測β-胡蘿卜素純度為97.7%。
6)按上述相同的工藝，不添加抗氧化劑進行對照試驗，經計算β-胡蘿卜素晶體的收率為62.1%，經檢測β-胡蘿卜素純度為96.1%。
實施例3
以酵母為發(fā)酵菌種，依次按下列步驟操作：
1)將酵母接種發(fā)酵，將發(fā)酵液離心得到含水量為80.1%的濕菌體；
2)取上述50kg濕菌體，濕菌體重加入150g維生素C棕櫚酸酯(抗氧化劑)，充分混合攪拌均勻，進行噴霧干燥得到20.78kg干菌體，噴霧干燥條件為：熱風溫度130℃，物料溫度65℃，風機頻率為45Hz，進料速度為5kg/h。
3)取5kg干菌體，投入到100L的反應釜中，再加入50L正己烷，用砂磨機循環(huán)破碎至菌體平均粒徑為193um，離心分離得到一萃萃取液和濕菌渣，濕菌渣繼續(xù)加入50L正己烷，在55℃萃取1h，離心得到二萃萃取液和濕菌渣。
4)合并一萃和二萃萃取液，在43℃，-0.085MPa的條件下蒸發(fā)結晶，得到結晶母液。
5)將上述結晶母液離心分離得到濕晶體，濕晶體用250ml乙醇攪拌洗滌，再次離心得到濕晶體，濕晶體在80℃，-0.085MPa條件下真空干燥2h得到成品類胡蘿卜素晶體。經計算類胡蘿卜晶體收率為69.1%，經檢測β-胡蘿卜素純度為97.7%。
6)按上述相同的工藝，不添加抗氧化劑進行對照試驗，經計算β-胡蘿卜素晶體的收率為61.7%，經檢測β-胡蘿卜素純度為96.1%。
實施例4
以三孢布拉霉菌種作為發(fā)酵菌種，依次按下列步驟操作：
1)將三孢布拉霉接種發(fā)酵，將發(fā)酵液經板框壓濾后得到含水量為55.1%濕菌體，
2)取500kg濕菌體用粉碎機破碎，加入25kg對羥基苯甲酸乙酯(抗氧化劑)混合均勻，再經沸騰干燥得241.1kg干菌體，沸騰干燥條件為：熱風溫度120℃，物料溫度55℃，風機頻率50Hz。
3)取5kg上述干燥的菌體，投入到200L反應釜中，并加入100L二氯甲烷，用高剪切膠體磨循環(huán)破碎至菌體平均粒徑為300um，升溫至55℃攪拌萃取1h，經沉降分離后，上層萃取液用5um袋式過濾器和0.5um濾棒過濾器過濾得到一萃萃取液，下層濕菌渣繼續(xù)加入100L石油醚，在55℃萃取1.5h，萃取混合液用5um袋式過濾器和0.5um濾棒過濾器過濾得到二萃萃取液和濕菌渣。
4)合并兩次萃取液，在48℃，-0.08MPa條件下蒸發(fā)結晶，得到結晶母液。
5)將結晶母液抽濾得到粗濕晶體，粗濕晶體用500ml石油醚洗滌，再次抽濾得到濕晶體，濕晶體在80℃，-0.085MPa條件下，真空干燥2h，得到成品類胡蘿卜素晶體。經計算類胡蘿卜素晶體的提取率為73.3%，經檢測β-胡蘿卜素純度為98.1%。
6)按上述相同的工藝，不添加抗氧化劑進行對照試驗，經計算β-胡蘿卜素晶體的提取率為62.9%，經檢測β-胡蘿卜素純度為96.9%。
實施例5
以杜氏鹽藻為發(fā)酵菌種，依次按下列步驟操作：
1)將杜氏鹽藻接種發(fā)酵，將發(fā)酵液離心得到水量為75.7%濕菌體，
2)取1kg濕菌體，真空干燥得到269.3g干菌體，真空干燥條件為：溫度80℃，負壓-0.085MPa。
3)取200g上述干燥的菌體，向其中加入0.2g維生素E(抗氧化劑)，加入到3L的四頸燒瓶中，并加入600mL乙酸乙酯，用高速剪切機破碎至菌體平均粒徑為151um，抽濾得到一萃萃取液和濕菌渣，濕菌渣用2L乙酸乙酯進行二次萃取，抽濾得到二萃萃取液。
4)合并兩次萃取液，在50℃，-0.08MPa條件下蒸發(fā)結晶，得到結晶母液。
5)將結晶母液抽濾得到濕晶體，濕晶體用20ml乙醇洗滌，再次抽濾得到濕晶體，濕晶體在80℃，-0.085MPa條件下，真空干燥2h，得到成品類胡蘿卜素晶體。經檢測，β-胡蘿卜素晶體的提取率為64.1%，經檢測β-胡蘿卜素純度為97.3%。
6)按上述相同的工藝，不添加抗氧化劑進行對照試驗，經計算β-胡蘿卜素晶體的提取率為60.9%，經檢測β-胡蘿卜素純度為95.9%。
實施例6
以酵母為發(fā)酵菌種，依次按下列步驟操作：
1)將酵母接種發(fā)酵，將發(fā)酵液離心得到含水量為80.5%的濕菌體；
2)取上述10kg濕菌體，充分混合攪拌均勻，經冷凍干燥得到2.07kg干菌體，冷凍干燥條件為：真空20Pa，捕集器溫度為-40℃，干燥20h。
3)取1kg干菌體，投入到30L的反應釜中，加入50g二丁基羥基甲苯(抗氧化劑)，再加入30L正己烷，用砂磨機循環(huán)破碎至菌體平均粒徑為133um，離心分離得到一萃萃取液和濕菌渣，濕菌渣繼續(xù)加入30L正己烷，在55℃萃取1h，離心得到二萃萃取液和濕菌渣。
4)合并一萃和二萃萃取液，在43℃，-0.085MPa的條件下蒸發(fā)結晶，得到結晶母液。
5)將上述結晶母液離心分離得到濕晶體，濕晶體用250ml正己烷攪拌洗滌，再次離心得到濕晶體，濕晶體在80℃，-0.085MPa條件下真空干燥2h得到成品類胡蘿卜素晶體。經計算類胡蘿卜晶體收率為69.1%，經檢測β-胡蘿卜素純度為97.7%。
6)按上述相同的工藝，不添加抗氧化劑進行對照試驗，經計算β-胡蘿卜素晶體的收率為63.3%，經檢測β-胡蘿卜素純度為96.1%。
實施例7
以酵母為發(fā)酵菌種，依次按下列步驟操作：
1)將酵母接種發(fā)酵，將發(fā)酵液離心得到含水量為80.1%的濕菌體；
2)取上述50kg濕菌體，充分混合攪拌均勻，進行噴霧干燥得到20.78kg干菌體，噴霧干燥條件為：熱風溫度130℃，物料溫度65℃，風機頻率為45Hz，進料速度為5kg/h。
3)取5kg干菌體，投入到100L的反應釜中，加入100g維生素C棕櫚酸酯(抗氧化劑)，再加入50L正己烷，用砂磨機循環(huán)破碎至菌體平均粒徑為153um，離心分離得到一萃萃取液和濕菌渣，濕菌渣繼續(xù)加入50L正己烷，在55℃萃取1h，離心得到二萃萃取液和濕菌渣。
4)合并一萃和二萃萃取液，在43℃，-0.085MPa的條件下蒸發(fā)結晶，得到結晶母液。
5)將上述結晶母液離心分離得到濕晶體，濕晶體用250ml乙酸乙酯攪拌洗滌，再次離心得到濕晶體，濕晶體在80℃，-0.085MPa條件下真空干燥2h得到成品類胡蘿卜素晶體。經計算類胡蘿卜晶體收率為69.1%，經檢測β-胡蘿卜素純度為97.7%。
6)按上述相同的工藝，不添加抗氧化劑進行對照試驗，經計算β-胡蘿卜素晶體的收率為63.3%，經檢測β-胡蘿卜素純度為96.1%。
實施例8
以三孢布拉霉菌種作為發(fā)酵菌種，依次按下列步驟操作：
1)將三孢布拉霉接種發(fā)酵，將發(fā)酵液經板框壓濾后得到含水量為55.1%濕菌體，
2)取500kg濕菌體用粉碎機破碎，經沸騰干燥得233.1kg干菌體，沸騰干燥條件為：熱風溫度120℃，物料溫度55℃，風機頻率50Hz。
3)取50kg上述干燥的菌體，投入到1000L反應釜中，加入1kg迷迭香(抗氧化劑)，并加入500L石油醚，用高剪切膠體磨循環(huán)破碎至菌體平均粒徑為231um，升溫至55℃攪拌萃取1h，經沉降分離后，上層萃取液用5um袋式過濾器和0.5um濾棒過濾器過濾得到一萃萃取液，下層濕菌渣繼續(xù)加入500L石油醚，在55℃萃取1.5h，萃取混合液用5um袋式過濾器和0.5um濾棒過濾器過濾得到二萃萃取液和濕菌渣。
4)合并兩次萃取液，在48℃，-0.08MPa條件下蒸發(fā)結晶，得到結晶母液。
5)將結晶母液抽濾得到粗濕晶體，粗濕晶體用5L乙醇，再次抽濾得到濕晶體，濕晶體在80℃，-0.085MPa條件下，真空干燥2h，得到成品類胡蘿卜素晶體。經計算類胡蘿卜素晶體的提取率為73.3%，經檢測β-胡蘿卜素純度為98.1%。
6)按上述相同的工藝，不添加抗氧化劑進行對照試驗，經計算β-胡蘿卜素晶體的提取率為62.9%，經檢測β-胡蘿卜素純度為96.9%。
實施例9
以杜氏鹽藻為發(fā)酵菌種，依次按下列步驟操作：
1)將杜氏鹽藻接種發(fā)酵，將發(fā)酵液離心得到水量為75.9%濕菌體，
2)取1kg濕菌體，真空干燥得到267.3g干菌體，真空干燥條件為：溫度80℃，負壓-0.085MPa。
3)取200g上述干燥的菌體，加入到3L的四頸燒瓶中，并加入600mL二氯甲烷，用高速剪切機破碎至菌體平均粒徑為181um，抽濾得到一萃萃取液和濕菌渣，濕菌渣用2L二氯甲烷進行二次萃取，抽濾得到二萃萃取液。
4)合并兩次萃取液，向其中加入0.2g維生素E(抗氧化劑)，在50℃，-0.08MPa條件下蒸發(fā)結晶，得到結晶母液。
5)將結晶母液抽濾得到濕晶體，濕晶體用50ml乙醇洗滌，再次抽濾得到濕晶體，濕晶體在80℃，-0.085MPa條件下，真空干燥2h，得到成品類胡蘿卜素晶體。經檢測，β-胡蘿卜素晶體的提取率為64.1%，經檢測β-胡蘿卜素純度為97.3%。
6)按上述相同的工藝，不添加抗氧化劑進行對照試驗，經計算β-胡蘿卜素晶體的提取率為60.9%，經檢測β-胡蘿卜素純度為95.9%。
實施例10
以酵母為發(fā)酵菌種，依次按下列步驟操作：
1)將酵母接種發(fā)酵，將發(fā)酵液離心得到含水量為80.3%的濕菌體；
2)取上述10kg濕菌體，充分混合攪拌均勻，經冷凍干燥得到2.1kg干菌體，冷凍干燥條件為：真空20Pa，捕集器溫度為-40℃，干燥20h。
3)取1kg干菌體，投入到30L的反應釜中，再加入30L正己烷，用砂磨機循環(huán)破碎至菌體平均粒徑為300um，離心分離得到一萃萃取液和濕菌渣，濕菌渣繼續(xù)加入30L正己烷，在55℃萃取1h，離心得到二萃萃取液和濕菌渣。
4)合并一萃和二萃萃取液，加入50g二丁基羥基甲苯(抗氧化劑)，在43℃，-0.085MPa的條件下蒸發(fā)結晶，得到結晶母液。
5)將上述結晶母液離心分離得到濕晶體，濕晶體用250ml乙酸乙酯攪拌洗滌，再次離心得到濕晶體，濕晶體在80℃，-0.085MPa條件下真空干燥2h得到成品類胡蘿卜素晶體。經計算類胡蘿卜晶體收率為69.1%，經檢測β-胡蘿卜素純度為97.7%。
6)按上述相同的工藝，不添加抗氧化劑進行對照試驗，經計算β-胡蘿卜素晶體的收率為63.3%，經檢測β-胡蘿卜素純度為96.1%。
實施例11
以酵母為發(fā)酵菌種，依次按下列步驟操作：
1)將酵母接種發(fā)酵，將發(fā)酵液離心得到含水量為80.9%的濕菌體；
2)取上述50kg濕菌體，充分混合攪拌均勻，進行噴霧干燥得到20.78kg干菌體，噴霧干燥條件為：熱風溫度130℃，物料溫度65℃，風機頻率為45Hz，進料速度為5kg/h。
3)取5kg干菌體，投入到100L的反應釜中，再加入50L正己烷，用砂磨機循環(huán)破碎至菌體平均粒徑為300um，離心分離得到一萃萃取液和濕菌渣，濕菌渣繼續(xù)加入50L正己烷，在55℃萃取1h，離心得到二萃萃取液和濕菌渣。
4)合并一萃和二萃萃取液，加入100g維生素C棕櫚酸酯(抗氧化劑)，在43℃，-0.085MPa的條件下蒸發(fā)結晶，得到結晶母液。
5)將上述結晶母液離心分離得到濕晶體，濕晶體用250ml正己烷攪拌洗滌，再次離心得到濕晶體，濕晶體在80℃，-0.085MPa條件下真空干燥2h得到成品類胡蘿卜素晶體。經計算類胡蘿卜晶體收率為69.1%，經檢測β-胡蘿卜素純度為97.7%。
6)按上述相同的工藝，不添加抗氧化劑進行對照試驗，經計算β-胡蘿卜素晶體的收率為63.3%，經檢測β-胡蘿卜素純度為96.1%。
實施例12
以三孢布拉霉菌種作為發(fā)酵菌種，依次按下列步驟操作：
1)將三孢布拉霉接種發(fā)酵，將發(fā)酵液經板框壓濾后得到含水量為55.1%濕菌體，
2)取500kg濕菌體用粉碎機破碎，經沸騰干燥得233.1kg干菌體，沸騰干燥條件為：熱風溫度120℃，物料溫度55℃，風機頻率50Hz。
3)取50kg上述干燥的菌體，投入到2000L反應釜中，并加入1000L石油醚，用高剪切膠體磨循環(huán)破碎至菌體平均粒徑為231um，然后升溫至55℃，萃取1h，經沉降分離后，上層萃取混合液用5um袋式過濾器和0.5um濾棒過濾器過濾得到一萃萃取液，向下層濕菌渣中繼續(xù)加入600L石油醚，在55℃萃取1.5h，萃取混合液用5um袋式過濾器和0.5um濾棒過濾器過濾得到二萃萃取液和濕菌渣。
4)合并兩次萃取液，加入2kg迷迭香(抗氧化劑)，在48℃，-0.08MPa條件下蒸發(fā)結晶，得到結晶母液。
5)將結晶母液抽濾得到粗濕晶體，粗濕晶體用10L乙酸乙酯洗滌，再次抽濾得到濕晶體，濕晶體在80℃，-0.085MPa條件下，真空干燥2h，得到成品類胡蘿卜素晶體。經計算類胡蘿卜素晶體的提取率為73.1%，經檢測β-胡蘿卜素純度為98.1%。
6)按上述相同的工藝，不添加抗氧化劑進行對照試驗，經計算β-胡蘿卜素晶體的提取率為61.9%，經檢測β-胡蘿卜素純度為96.9%。
實施例13
以三孢布拉霉菌種作為發(fā)酵菌種，依次按下列步驟操作：
1)將三孢布拉霉接種發(fā)酵，將發(fā)酵液經板框壓濾后得到含水量為55.1%濕菌體，
2)取500kg濕菌體用粉碎機破碎，經沸騰干燥得233.1kg干菌體，沸騰干燥條件為：熱風溫度120℃，物料溫度55℃，風機頻率50Hz。
7)取200kg上述干燥的菌體，投入到5000L反應釜中，并加入2000L石油醚，用高剪切膠體磨循環(huán)破碎至菌體平均粒徑為231um，然后升溫至55℃，萃取1h，經沉降分離后，上層萃取混合液用5um袋式過濾器和0.5um濾棒過濾器過濾得到一萃萃取液，向下層濕菌渣中繼續(xù)加入2000L石油醚，在55℃萃取1.5h，萃取混合液用5um袋式過濾器和0.5um濾棒過濾器過濾得到二萃萃取液和濕菌渣。
3)合并兩次萃取液，加入5kg對羥基苯甲酸乙酯(抗氧化劑)，在48℃，-0.08MPa條件下蒸發(fā)結晶，得到結晶母液。
4)將結晶母液抽濾得到粗濕晶體，粗濕晶體用500ml二氯甲烷洗滌，再次抽濾得到濕晶體，濕晶體在80℃，-0.085MPa條件下，真空干燥2h，得到成品類胡蘿卜素晶體。經計算類胡蘿卜素晶體的提取率為73.3%，經檢測β-胡蘿卜素純度為98.1%。
5)按上述相同的工藝，不添加抗氧化劑進行對照試驗，經計算β-胡蘿卜素晶體的提取率為62.9%，經檢測β-胡蘿卜素純度為96.9%。
實施例14
以杜氏鹽藻為發(fā)酵菌種，依次按下列步驟操作：
1)將杜氏鹽藻接種發(fā)酵，將發(fā)酵液離心得到水量為75.7%濕菌體，
2)取1kg濕菌體，加入0.5g二丁基羥基甲苯(抗氧化劑)，混合均勻，真空干燥得到261.3g干菌體，真空干燥條件為：溫度80℃，負壓-0.085MPa。
3)取200g上述干燥的菌體，加入到3L的四頸燒瓶中，再加入0.5g維生素E(抗氧化劑)，加入600mL二氯甲烷，用高速剪切機破碎至菌體平均粒徑為181um，抽濾得到一萃萃取液和濕菌渣，濕菌渣用2L二氯甲烷進行二次萃取，抽濾得到二萃萃取液。
4)合并兩次萃取液，在50℃，-0.08MPa條件下蒸發(fā)結晶，得到結晶母液。
5)將結晶母液抽濾得到濕晶體，濕晶體用20ml二氯甲烷洗滌，再次抽濾得到濕晶體，濕晶體在80℃，-0.085MPa條件下，真空干燥2h，得到成品類胡蘿卜素晶體。經檢測，β-胡蘿卜素晶體的提取率為64.1%，經檢測β-胡蘿卜素純度為97.3%。
6)按上述相同的工藝，不添加抗氧化劑進行對照試驗，經計算β-胡蘿卜素晶體的提取率為60.9%，經檢測β-胡蘿卜素純度為95.9%。
實施例15
以酵母為發(fā)酵菌種，依次按下列步驟操作：
1)將酵母接種發(fā)酵，將發(fā)酵液離心得到含水量為80.9%的濕菌體；
2)取上述10kg濕菌體，加入50gVc棕櫚酸酯(抗氧化劑)，充分混合攪拌均勻，進行噴霧干燥得到2.18kg干菌體，噴霧干燥條件為：熱風溫度130℃，物料溫度65℃，風機頻率為45Hz，進料速度為5kg/h。
3)取2kg干菌體，投入到50L的反應釜中，再加入20L正己烷，用砂磨機循環(huán)破碎至菌體平均粒徑為300um，再在550攪拌萃取1h，離心分離得到一萃萃取液和濕菌渣，濕菌渣繼續(xù)加入20L正己烷，在55℃萃取1h，離心得到二萃萃取液和濕菌渣。
4)合并一萃和二萃萃取液，加入50g迷迭香(抗氧化劑)，在43℃，-0.085MPa的條件下蒸發(fā)結晶，得到結晶母液。
5)將上述結晶母液離心分離得到濕晶體，濕晶體用250ml正己烷攪拌洗滌，再次離心得到濕晶體，濕晶體在80℃，-0.085MPa條件下真空干燥2h得到成品類胡蘿卜素晶體。經計算類胡蘿卜晶體收率為69.1%，經檢測β-胡蘿卜素純度為97.7%。
6)按上述相同的工藝，不添加抗氧化劑進行對照試驗，經計算β-胡蘿卜素晶體的收率為63.3%，經檢測β-胡蘿卜素純度為96.1%。
實施例16
以三孢布拉霉菌種作為發(fā)酵菌種，依次按下列步驟操作：
1)將三孢布拉霉接種發(fā)酵，將發(fā)酵液經板框壓濾后得到含水量為55.1%濕菌體，
2)取50kg濕菌體用粉碎機破碎，經沸騰干燥得23.1kg干菌體，沸騰干燥條件為：熱風溫度120℃，物料溫度55℃，風機頻率50Hz。
3)取10kg上述干燥的菌體，投入到200L反應釜中，再加入250g對羥基苯甲酸乙酯(抗氧化劑)，并加入100L石油醚，用高剪切膠體磨循環(huán)破碎至菌體平均粒徑為231um，然后升溫至55℃，萃取1h，經沉降分離后，上層萃取混合液用5um袋式過濾器和0.5um濾棒過濾器過濾得到一萃萃取液，向下層濕菌渣中繼續(xù)加入100L石油醚，在55℃萃取1.5h，萃取混合液用5um袋式過濾器和0.5um濾棒過濾器過濾得到二萃萃取液和濕菌渣。
4)合并兩次萃取液，加入250g維生素E(抗氧化劑)，在48℃，-0.08MPa條件下蒸發(fā)結晶，得到結晶母液。
5)將結晶母液抽濾得到粗濕晶體，粗濕晶體用2L二氯甲烷洗滌，再次抽濾得到濕晶體，濕晶體在80℃，-0.085MPa條件下，真空干燥2h，得到成品類胡蘿卜素晶體。經計算類胡蘿卜素晶體的提取率為73.3%，經檢測β-胡蘿卜素純度為98.1%。
6)按上述相同的工藝，不添加抗氧化劑進行對照試驗，經計算β-胡蘿卜素晶體的提取率為62.9%，經檢測β-胡蘿卜素純度為96.9%。
實施例17
以三孢布拉霉菌種作為發(fā)酵菌種，依次按下列步驟操作：
7)將三孢布拉霉接種發(fā)酵，將發(fā)酵液經板框壓濾后得到含水量為55.1%濕菌體，
8)取500kg濕菌體用粉碎機破碎，加入2.5kg二丁基強基甲苯(抗氧化劑)，混合均勻，經沸騰干燥得233.1kg干菌體，沸騰干燥條件為：熱風溫度120℃，物料溫度55℃，風機頻率50Hz。
8)取200kg上述干燥的菌體，投入到5000L反應釜中，加入1kg維生素E(抗氧化劑)，并加入2000L石油醚，用高剪切膠體磨循環(huán)破碎至菌體平均粒徑為231um，然后升溫至55℃，萃取1h，經沉降分離后，上層萃取混合液用5um袋式過濾器和0.5um濾棒過濾器過濾得到一萃萃取液，向下層濕菌渣中繼續(xù)加入2000L石油醚，在55℃萃取1.5h，萃取混合液用5um袋式過濾器和0.5um濾棒過濾器過濾得到二萃萃取液和濕菌渣。
9)合并兩次萃取液，加入1kg對羥基苯甲酸乙酯(抗氧化劑)，在48℃，-0.08MPa條件下蒸發(fā)結晶，得到結晶母液。
10)將結晶母液抽濾得到粗濕晶體，粗濕晶體用500ml二氯甲烷洗滌，再次抽濾得到濕晶體，濕晶體在80℃，-0.085MPa條件下，真空干燥2h，得到成品類胡蘿卜素晶體。經計算類胡蘿卜素晶體的提取率為80.1%，經檢測β-胡蘿卜素純度為99.1%。
11)按上述相同的工藝，不添加抗氧化劑進行對照試驗，經計算β-胡蘿卜素晶體的提取率為61.9%，經檢測β-胡蘿卜素純度為96.9%。
本發(fā)明制備β-胡蘿卜素的方法具有以下有益效果：在干燥、固液分離和蒸發(fā)結晶的步驟中，部分或者全部添加抗氧化劑，降低了提取過程中β-胡蘿卜素的損失，提升了β-胡蘿卜素的收率，同時制得的β-胡蘿卜素晶體純度更高，品質更好。
本發(fā)明中所提及的抗氧化劑，不局限于實施例中所列舉的類型，其他在使用中具有相同效果的產品均屬于本發(fā)明的保護范圍。