本發(fā)明涉及4-[(2-氯乙基-2-羥乙基)氨基-]-l-苯丙氨酸鹽酸鹽(即單羥基美法侖鹽酸鹽)的制備方法與應(yīng)用，單羥基美法侖鹽酸鹽是鹽酸美法侖原料或制劑工藝中的重要雜質(zhì)。
背景技術(shù)：
美法侖(melphalan)，又叫4-(雙(2-氯乙基)-氨基)-l-苯丙氨酸)及其鹽酸鹽是已知的抗腫瘤藥。1964年1月17日，2mg美法侖片劑在美國上市，其活性成分為美法侖；1992年11月18日，鹽酸美法侖注射劑alkeran在美國上市，活性成分為美法侖鹽酸鹽。由于苯丙氨酸基團(tuán)的存在，其易于進(jìn)入腫瘤細(xì)胞內(nèi)發(fā)生作用，從而有效地抑制和阻止惡性腫瘤細(xì)胞的增生和成熟。美法侖及其鹽酸一鹽的應(yīng)用十分廣泛，可用于多發(fā)性骨髓瘤、乳腺癌、卵巢癌、慢性淋巴細(xì)胞和粒細(xì)胞型白血病、惡性淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤。
鹽酸美法侖的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如式1所示：
美法侖及其類似物結(jié)構(gòu)中的氯原子屬于易離去基團(tuán)，操作復(fù)雜且制備周期過長易使氯乙基降解成羥乙基，生成雙羥基美法侖(式3所示)或單羥基美法侖鹽酸鹽(式2所示)；使得最終產(chǎn)品質(zhì)量難以保證。
對美法侖、鹽酸美法侖原料和制劑的質(zhì)量控制，必須有質(zhì)量合格的雜質(zhì)對照品。關(guān)于單羥基美法侖鹽酸鹽(式2所示化合物)，目前暫未檢索到該化合物的具體制備。因此有必要開發(fā)一種穩(wěn)定、便捷、純度高的制備單羥基美法侖的方法。
本發(fā)明的4-[(2-氯乙基-2-羥乙基)氨基-]-l-苯丙氨酸鹽酸鹽為鹽酸美法侖雜質(zhì)，可以作為雜質(zhì)對照品控制鹽酸美法侖原料或制劑的純度。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明一方面提供了式2化合物的制備方法，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如式2所示，化學(xué)名為4-[(2-氯乙基-2-羥乙基)氨基-]-l-苯丙氨酸鹽酸鹽。
專利us3032584涉及美法侖化合物專利，其制備方法，公開了以4-硝基苯丙氨酸或l-4-硝基苯丙氨酸為原料合成美法侖。在該合成方法中，首先要對原料的氨基酸部分進(jìn)行保護(hù)(乙酯化保護(hù)羧基；苯酐保護(hù)氨基)得到一個較穩(wěn)定的全保護(hù)物，將對位的硝基部分修飾后，再通過加氫氣還原，羥乙基化，氯化三步反應(yīng)得到美法侖的有效基團(tuán)氮芥，最后采用鹽酸回流的方法對氨基酸部分進(jìn)行脫保護(hù)，得到美法侖產(chǎn)品。
本發(fā)明是在參考上述專利us3032584制備得到鹽酸美法侖的基礎(chǔ)上，開發(fā)出的鹽酸美法侖雜質(zhì)—單羥基美法侖鹽酸鹽的合成新方法，通過一步水解和純化得到單羥基美法侖，解決了該雜質(zhì)獲得的便捷性和穩(wěn)定性；尤其重要的是，本發(fā)明對單羥基美法侖純化方法進(jìn)行了詳細(xì)研究，篩選出了更加穩(wěn)定的柱層析分離條件，單羥基美法侖hplc純度可達(dá)95％以上。本發(fā)明的制備條件溫和可控，可快捷方便地制備得到單羥基美法侖。
單羥基美法侖的制備步驟：(1)將式1的美法侖在反應(yīng)溶液中進(jìn)行水解反應(yīng)；(2)水解反應(yīng)后再通過柱層析方法分離得到單羥基美法侖，濃縮、冷凍干燥得到單羥基美法侖鹽酸鹽。
進(jìn)一步地，步驟(1)中所述的反應(yīng)溶液為水或堿性溶液。
進(jìn)一步地，所述的堿性溶液選自碳酸鉀、碳酸鈉、碳酸銫、碳酸氫鉀、碳酸氫鈉、氫氧化鉀或氫氧化鈉的一種或幾種的水溶液，堿性溶液重量百分濃度不大于5％。
進(jìn)一步地，步驟(1)中所述水解反應(yīng)溫度為25-70℃，反應(yīng)時間為1-3h。
進(jìn)一步地，步驟(2)中所述柱層析方法使用十八烷基硅烷鍵合硅膠(ods-c18)進(jìn)行分離，流動相選自乙腈與稀鹽酸、甲醇與鹽酸的混合液。
更進(jìn)一步地，鹽酸的ph為1～5。
更進(jìn)一步地，鹽酸的ph為2～3。
本發(fā)明制備的化合物4-[(2-氯乙基-2-羥乙基)氨基-]-l-苯丙氨酸鹽酸鹽可作為鹽酸美法侖的有關(guān)物質(zhì)檢測用對照品，用于鹽酸美法侖及其相關(guān)制劑的質(zhì)量控制。
本發(fā)明中所述的稀鹽酸為濃鹽酸和水混合后所得到的氯化氫水溶液，其摩爾濃度不大于12mol/l。本發(fā)明中稀鹽酸濃度控制在10-1～10-5mol/l之間，其ph值為1～5。
本發(fā)明采用的技術(shù)方案的有益效果是操作便捷，反應(yīng)條件溫和可控，大大提高反應(yīng)的穩(wěn)定性，反應(yīng)產(chǎn)物收率高、純度高。
具體實(shí)施方式
本發(fā)明將于下文通過實(shí)施例更加詳細(xì)的描述，這些實(shí)施例示例性地用于進(jìn)一步說明，且不應(yīng)當(dāng)視為對本發(fā)明的限制。
單羥基美法侖鹽酸鹽的制備
實(shí)施例1：
式1化合物(1g)和5％k2co315ml混合攪拌，加熱至25℃，反應(yīng)1小時，用3mol/l的鹽酸溶液調(diào)節(jié)ph到5，加入乙腈，過濾，母液濃縮至少量時，采用柱層析方法純化。具體柱層析條件：硅膠為十八烷基硅烷鍵合硅膠(ods-c18)，流動相為鹽酸(ph為5)：乙腈＝3:1(體積比)，流速為2ml/分鐘，收集相應(yīng)的組分，在10℃以下減壓濃縮后冷凍干燥，得0.35g化合物2，收率為36.7％，hplc純度96.5％。
式2化合物結(jié)構(gòu)經(jīng)核磁共振譜和質(zhì)譜確證，具體數(shù)據(jù)為：質(zhì)譜(ms)：m/z＝286[m+h]+，m/z＝284[m-h]+；1hnmr(dmso-d6)δ11.02(s,1h),7.13(d,2h),6.61(d,2h),5.11(s,2h),4.21(t,2h),4.10(s,1h),3.73(d,2h),3.65(s,1h),3.61(m,4h),,3.18(m,2h)；13c-nmr(dmso-d6)δ173.5,146.8,128.3,128.2,126.1,111.6,111.5,60.8,58.6,56.9,53.6,43.9,37.3。
實(shí)施例2：
式1化合物(4g)和5％nahco332ml混合攪拌，加熱至35℃，反應(yīng)2小時，用3mol/l的鹽酸溶液調(diào)節(jié)ph到2，加入乙腈，過濾，母液濃縮至少量時，采用柱層析方法純化。具體柱層析條件：硅膠為十八烷基硅烷鍵合硅膠(ods-c18)，流動相為鹽酸(ph為2)：乙腈＝3:1(體積比)，流速為5ml/分鐘，收集相應(yīng)的組分，在10℃以下減壓濃縮后冷凍干燥，得0.72g化合物2，收率為25.2％，hplc純度96.1％。
實(shí)施例3：
式1化合物(0.8g)和0.5％naoh5ml混合攪拌，加熱至25℃，反應(yīng)1小時，用3mol/l的鹽酸溶液調(diào)節(jié)ph到1，加入甲醇，過濾，母液濃縮至少量時，采用柱層析方法純化。具體柱層析條件：硅膠為十八烷基硅烷鍵合硅膠(ods-c18)，流動相為鹽酸(ph為3)：乙腈＝3:1(體積比)，流速為1ml/分鐘，收集相應(yīng)的組分，在10℃以下減壓濃縮后冷凍干燥，得0.13g化合物2，收率為27.4％，hplc純度95.2％。
實(shí)施例4：
式1化合物(7.5g)和水50ml混合攪拌，加熱至70℃，反應(yīng)3小時，降溫，加入甲醇使固體溶解后，經(jīng)過濃縮，采用柱層析方法純化。具體柱層析條件：硅膠為十八烷基硅烷鍵合硅膠(ods-c18)，流動相為鹽酸(ph為2.8)：乙腈＝3:1(體積比)，流速為6ml/分鐘，收集相應(yīng)的組分，在10℃以下減壓濃縮后冷凍干燥，得3.42g化合物2，收率為36.3％，hplc純度96.3％。