技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明具體涉及一種含硼藥物的制備工藝，以及在制備工藝在該含硼產(chǎn)品工業(yè)化生產(chǎn)中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
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蛋白酶體是泛素－蛋白酶體系統(tǒng)的重要組成部分，負責(zé)大多數(shù)細胞內(nèi)蛋白質(zhì)的調(diào)節(jié)和降解，蛋白質(zhì)先被泛素(多肽)標(biāo)記，然后被蛋白酶體識別和降解。蛋白酶體在調(diào)節(jié)細胞周期、細胞增殖和細胞凋亡方面起著核心作用。第一代蛋白酶體抑制劑硼替佐米(bortezomib)等已經(jīng)應(yīng)用于臨床多發(fā)性骨髓瘤治療，具有抑制多種腫瘤細胞生長及放療增敏作用。ixazomibcitrate(mln9708)是基于硼替佐米基礎(chǔ)上的第二代蛋白酶體抑制劑，是氮端加帽的二肽亮氨酸硼酸，抑制20s蛋白酶體的糜蛋白酶類(β5)水解位點。
mln9708是首個上市的口服蛋白酶體抑制劑，能通過抑制蛋白酶體而防止多種調(diào)控蛋白的退化，作用于細胞的多種信號通路、誘導(dǎo)凋亡。臨床試驗顯示，mln9708聯(lián)合來那度胺和地塞米松治療復(fù)發(fā)/難治mm患者以及聯(lián)合地塞米松治療復(fù)發(fā)/難治的輕鏈型淀粉樣變性患者均有較好的療效。在美國進行的ⅰ/ⅰ期臨床試驗顯示，mln9708聯(lián)合來那度胺和地塞米松治療62例初診mm患者的完全緩解或非常好的部分緩解率為76％、orr為94％，且此方案治療的耐受性良好，無4級毒性反應(yīng)發(fā)生。
mln9708的合成制備一直是重大的科學(xué)挑戰(zhàn)，mln9708的純化精制問題是該產(chǎn)品生產(chǎn)成本控制的難點。與硼替佐米的制備工藝難點一樣，一般的高溫條件下，碳硼化學(xué)鍵容易斷裂，使得mln9708的純化工藝中盡量避免采用高溫溶解重結(jié)晶的方法，這樣給mln9708的純化提出了更大的挑戰(zhàn)，如何盡量避免采用重結(jié)晶手段純化mln9708，一直困擾著化學(xué)家。
專利cn102066386中指出了化合物v的制備方法和主要純化方法：
以上專利cn102066386采用中間體v和中間體vi進行偶聯(lián)反應(yīng)得到化合物iv，化合物iv為油狀化合物，未經(jīng)純化直接投入下一步反應(yīng)，在混合溶劑(甲醇/己烷)中，采用2-甲基丙硼酸進行硼酸酯交換脫保護得到化合物iii的油狀粗品，然后，采用極性較小的正庚烷反相析晶的方法制備得到化合物iii的結(jié)晶， 顯然該方法無法去除制備工藝中引入的眾多雜質(zhì)。
以上方法存在諸多的缺點：
1、油狀中間體iv極難純化，反應(yīng)副產(chǎn)物雜質(zhì)極難去除。中間體iv為油狀化合物，該中間體無法采用重結(jié)晶或者“常溫打漿”的工藝進行純化。
2、化合物iii難純化，反應(yīng)副產(chǎn)物雜質(zhì)極難去除。專利cn102066386沒有公開化合物iii的純化方法，僅是化合物iii從油狀產(chǎn)物轉(zhuǎn)變?yōu)榻Y(jié)晶態(tài)產(chǎn)物的方法，該方法無法去除化合物iii制備工藝中引入的雜質(zhì)。
3、終產(chǎn)品i的質(zhì)量由化合物iii的質(zhì)量決定，然而化合物iii無法去除眾多雜質(zhì)。專利cn102066386公開的mln9708的制備工藝可以看出，終產(chǎn)品mln9708采用化合物iii與檸檬酸一步偶聯(lián)的方法制備得到，沒有采用任何的純化方法，因此，終產(chǎn)品mln9708的質(zhì)量由兩個原料iii和檸檬酸決定，最終由iii的質(zhì)量決定。
綜上所述，現(xiàn)有公開文獻中，產(chǎn)品mln9708的純化策略無法去除工藝雜質(zhì)，因此，開發(fā)和尋找制備mln9708的制備工藝和純化方案，一直是醫(yī)藥工業(yè)界需要克服的科學(xué)難題。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
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本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是為了克服現(xiàn)有技術(shù)制備mln9708(化合物i)的工藝路線的缺點，提供一種新型的制備mln9708(化合物i)新方法。
在一定的反應(yīng)溫度條件下，一定的溶劑中，通式化合物ii和檸檬酸發(fā)生酯交換反應(yīng)直接得到化合物i；
其中，r1，r2獨立的為c1～c6的烷基或氫，或者r1和r2連接構(gòu)成烷烴環(huán)狀結(jié)構(gòu)；
本發(fā)明所述的制備化合物i的方法，其中r1，r2獨立的為c1～c6的烷基或氫，或者r1和r2連接構(gòu)成烷烴環(huán)狀結(jié)構(gòu)，選自：
本發(fā)明所述的化合物i的制備方法，其特征在于所述的反應(yīng)溶媒選自醚類，c1～c8醇類，c3～c8酮類，c1～c8酯類，c5～c8烷烴類，c1～c8鹵代烷烴類，芳香烷烴類中的一種或多種，步驟1，其特征在于所述反應(yīng)溫度為-10～100℃。
本發(fā)明所述的化合物i的制備方法，其特征在于所述的反應(yīng)溶媒優(yōu)先選自：叔丁基甲基醚，乙醚，四氫呋喃，二氧六環(huán)，二氯甲烷，三氯甲烷，四氯化碳，乙腈，二氯乙烷，正己烷，正戊烷，正庚烷，乙醇，甲醇，叔丁醇，正丁醇，丙酮，丁酮，乙酸乙酯，甲苯，苯，二甲苯中的一種或多種，所述反應(yīng)溫度為0～80℃。
本發(fā)明所述的化合物i的制備方法，其特征在于所述的反應(yīng)溶媒優(yōu)先選自：四氫呋喃，乙腈，乙酸乙酯，丙酮，甲醇，乙醇中的一種或多種，所述反應(yīng)溫度為優(yōu)選25～80℃。
本發(fā)明所述的化合物i的制備方法，其特征在于所述的反應(yīng)溶媒最優(yōu)選自乙酸乙酯，所述反應(yīng)溫度為優(yōu)選25～80℃。
本發(fā)明所述的化合物i的制備方法，
在25～80℃反應(yīng)溫度條件下，乙酸乙酯溶劑中，通式化合物ii和檸檬酸發(fā)生交換反應(yīng)直接得到化合物i。
本發(fā)明所述的化合物i的制備方法，其特征在于反應(yīng)完全后，直接過濾即可得高純度的固態(tài)化合物i。
綜上所述，與現(xiàn)有技術(shù)相比本發(fā)明的有益效果總結(jié)如下：
(1)、本發(fā)明公開的制備化合物i的工藝路線較短，采用容易獲得的固體化合物ii為原料，直接獲得化合物i，在經(jīng)濟、環(huán)保方面均有較高的效益。
(2)、本發(fā)明的制備工藝路線，產(chǎn)品的質(zhì)量更加容易控制：
首先，本發(fā)明中使用的起始化合物(ii)為固體，其質(zhì)量可以通過常規(guī)的純化方式進行控制，純度可達99％以上，從而為終產(chǎn)品的質(zhì)量提供了源頭上的保證。cn102066386公開的mln9708合成方法，所經(jīng)歷的中間體均難以通過純化獲得高純度的原料，為終產(chǎn)品的精制帶來壓力。
其次，mln9708以及含硼中間體的化學(xué)穩(wěn)定性差，在酸性、堿性、氧氣存在下及溶液中均不太穩(wěn)定，較長的反應(yīng)步驟及過多的精制步驟均為產(chǎn)品的質(zhì)量控制帶來更大的風(fēng)險。而本發(fā)明僅經(jīng)歷一個合成步驟即可直接獲得高純度的mln9708，極大地提高了工藝的耐受性和產(chǎn)品的質(zhì)量。
總之，本發(fā)明在mln9708的合成工藝路線改進中取得了顯著的結(jié)果，原料容易獲得，反應(yīng)步驟短，操作簡單，產(chǎn)品收率及純度高。該工藝路線適合工業(yè)化生產(chǎn)，相信其在降低mln9708原料藥價格方面會做出巨大的貢獻，有利于mln9708相關(guān)產(chǎn)品的價格的大幅度的降低，造福于廣大的患者。
具體實施方式：
下面用實施例來進一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不受其限制。
實施例1：
(r)-2,2’-(2-(1-(2-(2,5-二氯苯甲酰氨基)乙酰氨基)-3-甲基丁基)-5-氧代-1,3,2-二氧雜硼烷-4,4-二基)二乙酸
步驟1：n-2,5-二氯苯甲酰-l-甘氨酸甲酯
將2,5-二氯苯甲酸(91.2g,477.5mm,1.0eq)、l-甘氨酸甲酯鹽酸鹽(60.0g,477.5mm,1.0eq)、tbtu(184.0g,573.2mm,1.2eq)和四氫呋喃(2l)的混合物冷卻到0℃，攪拌30min，開始滴加二異丙基乙胺(236.7ml,1432.5mm,3.0eq)。滴加完畢后，緩慢升至室溫，反應(yīng)過夜。經(jīng)tlc監(jiān)測反應(yīng)完全，濃縮反應(yīng)液，并加入乙酸乙酯，分別用飽和碳酸氫鈉水溶液、檸檬酸水溶液、水和飽和食鹽水洗滌，無水硫酸 鈉干燥，過濾并濃縮得到n-2,5-二氯苯甲酰-l-甘氨酸甲酯粗品。
步驟2：n-2,5-二氯苯甲酰-l-甘氨酸
將步驟1中所得n-2,5-二氯苯甲酰-l-甘氨酸甲酯粗品溶于丙酮(300ml)中，冷卻至0℃，滴加2n氫氧化鋰水溶液(200ml)，滴加完畢后，升至室溫(20-30℃)攪拌過夜。經(jīng)tlc監(jiān)測反應(yīng)完全，濃縮反應(yīng)液，并加入水，用乙酸乙酯萃取三次，將水層用濃鹽酸調(diào)ph至2-3左右，用乙酸乙酯萃取兩次，有機層分別用水和飽和食鹽水洗2次，無水硫酸鈉干燥，過濾并濃縮得到n-2,5-二氯苯甲酰-l-甘氨酸81.0g，收率68％。1hnmr(400mhz,dmso-d6):δ＝12.71(s,1h),8.90(s,1h),7.57–7.55(m,2h),7.50–7.47(m,1h),3.93(d,j＝10.5hz,2h)。
步驟3：n-2,5-二氯苯甲酰-l-甘氨酸-l-亮氨酸硼酸頻哪醇酯
參照文獻cn102066386方法制備：將n-2,5-二氯苯甲酰-l-甘氨酸(81.0g,326.5mm,1.0eq)、(r)-3-甲基-1-頻哪醇二酯硼基-1-丁基胺鹽酸鹽(81.5g,326.5mm,1.0eq)、tbtu(110.1g,342.8mm,1.05eq)和二氯甲烷(1.5l)的混合物冷卻到0℃，攪拌30min，開始滴加二異丙基乙胺(161.9ml,979.5mm,3.0eq)。滴加完畢后，緩慢升至室溫，反應(yīng)過夜。經(jīng)tlc監(jiān)測反應(yīng)完全，分別用水、1％磷酸水溶液、飽和碳酸氫鈉水溶液、水和飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，過濾并濃縮至干。將該產(chǎn)品純化后獲得產(chǎn)品1-6，收率64％。產(chǎn)品經(jīng)hplc檢測，純度大于99％。
步驟4：(r)-2,2’-(2-(1-(2-(2,5-二氯苯甲酰氨基)乙酰氨基)-3-甲基丁基)-5-氧代-1,3,2-二氧雜硼烷-4,4-二元)二乙酸
將檸檬酸(58g,302mm,1.2eq)溶于70℃的乙酸乙酯(2l)中，再加入步驟3所得產(chǎn)品111克(252mm)，在50℃下攪拌24小時，冷至室溫，過濾，用乙酸乙酯洗滌，干燥得到目標(biāo)產(chǎn)物120g，收率93％，經(jīng)hplc檢測，純度大于99％。1hnmr(400mhz,dmso-d6):δ＝10.71(s,1h),9.19–8.97(m,1h),7.69–7.62(m,1h),7.60–7.50(m,2h),4.27(s,2h),3.07–2.52(m,6h),1.78–1.58(m,1h),1.44–1.13(m,2h),0.87(d,j＝6.4hz,6h)；13cnmr(101mhz,dmso-d6):δ＝178.34,176.39,170.99,166.10,137.37,132.11,132.03,131.55,129.50,129.41,76.63,43.46,41.33,38.65,25.35,24.11,21.79。ms(esi),m/z:539.24(計算為c20h23bcl2n2o9na:539.08([m+na]+))。
參照以上所述的化合物i制備方法，也可由化合物1-6與檸檬酸在其它溶劑中反應(yīng)獲得，如四氫呋喃，丙酮，甲苯，乙腈，收率分別為87％，92％，63％，81％。
實施例2：
步驟1：參照實施例1中1-6的合成合法，采用n-2,5-二氯苯甲酰-l-甘氨酸(24.7克，100mm)和(r)-3-甲基-1-[(3as,4s,6s,7ar)-3a,5,5-三甲基六氫-4,6-亞甲基-1,3,2-苯并二氧硼戊環(huán)-2-基]丁基-1-胺三氟乙酸鹽(45克，119mm，1.2eq)合成2-6，獲得33克，收率為68％。
步驟2：將檸檬酸(6.4g,33mm,1.2eq)溶于70℃的乙酸乙酯(400ml)中，再加入上步所得產(chǎn)品，在50℃下攪拌24小時，冷至室溫，過濾，用乙酸乙酯洗滌，干燥得到目標(biāo)產(chǎn)物11.9g，收率84％，hplc檢測其純度為97.4％。
實施例3：
步驟1：參照實施例1中1-6的合成合法，采用n-2,5-二氯苯甲酰-l-甘氨酸(24.7克，100mm)和(r)-1-(5,5-二甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)-3-甲基丁基-1-胺鹽酸鹽(28.2克，120mm，1.2eq)合成3-6，獲得26.1克，收率為61％。
步驟2：將檸檬酸(6.4g,33mm,1.2eq)溶于70℃的乙酸乙酯(400ml)中，再加入上步所得產(chǎn)品，在50℃下攪拌24小時，冷至室溫，過濾，用乙酸乙酯洗滌，干燥得到目標(biāo)產(chǎn)物12.6g，收率89％，hplc檢測其純度為98.3％。
實施例4：
步驟1：參照實施例1中1-6的合成合法，采用n-2,5-二氯苯甲酰-l-甘氨酸(24.7克，100mm)和(1r)-3-甲基-1-(4,4,6-三甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)丁基-1-胺鹽酸鹽(30克，120mm，1.2eq)合成4-6，獲得27.2克，收率為62％。
步驟2：將檸檬酸(6.4g,33mm,1.2eq)溶于70℃的乙酸乙酯(400ml)中，再加入上步所得產(chǎn)品，在50℃下攪拌24小時，冷至室溫，過濾，用乙酸乙酯洗滌，干燥得到目標(biāo)產(chǎn)物12.9g，收率91％，hplc檢測其純度為95.6％。
實施例5：
步驟1：參照實施例1中1-6的合成合法，采用n-2,5-二氯苯甲酰-l-甘氨酸(24.7克，100mm)和(r)-3-甲基-1-(4,4,6,6-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)丁基-1-胺鹽酸鹽(31.5克，120mm，1.2eq)合成5-6，獲得31克，收率為68％。
步驟2：將檸檬酸(6.4g,33mm,1.2eq)溶于70℃的乙酸乙酯(400ml)中，再加入上步所得產(chǎn)品，在50℃下攪拌24小時，冷至室溫，過濾，用乙酸乙酯洗滌，干燥得到目標(biāo)產(chǎn)物13.3g，收率94％，hplc檢測其純度為96.2％。
實施例6：
步驟1：參照實施例1中1-6的合成合法，采用n-2,5-二氯苯甲酰-l-甘氨酸(24.7克，100mm)和(r)-1-((4r,5r)-4,5-二環(huán)己基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)-3-甲基丁基-1-胺鹽酸鹽(42.8克，120mm，1.2eq)合成6-6，獲得29.1克，收率為53％。
步驟2：將檸檬酸(6.4g,33mm,1.2eq)溶于70℃的乙酸乙酯(400ml)中，再加入上步所得產(chǎn)品，在50℃下攪拌24小時，冷至室溫，過濾，用乙酸乙酯洗滌，干燥得到目標(biāo)產(chǎn)物12.3g，收率87％，hplc檢測其純度為95.1％。
雖然已通過上述具體實施方式和實施例詳細說明了本發(fā)明的多個方面和不同實施方案，但本領(lǐng)域技術(shù)人員基于上述教導(dǎo)，將很容易預(yù)見到本發(fā)明所述方法、反應(yīng)條件可具有適當(dāng)?shù)淖兓驼{(diào)整，以適應(yīng)具體的需要和實際情況，并且這些變化和調(diào)整均認為在本發(fā)明的范圍內(nèi)，即權(quán)利要求所限定的范圍內(nèi)。