本發(fā)明涉及生物工程技術(shù)，特別涉及轉(zhuǎn)運(yùn)rna片段及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

血管新生(angiogenesis)是指在原有血管的基礎(chǔ)上內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移和重塑形成新血管的生物學(xué)過(guò)程，其在生物體發(fā)育、生長(zhǎng)過(guò)程中十分普遍，并廣泛參與創(chuàng)傷修復(fù)、各種缺血性疾病和腫瘤生長(zhǎng)侵襲等病理生理過(guò)程。深入研究血管新生的調(diào)控機(jī)制對(duì)促進(jìn)組織修復(fù)、抑制腫瘤生長(zhǎng)和遷移都具有重要的指導(dǎo)意義。已有研究表明多種非編碼rna，包括mirna、pirna、lncrna等都參與血管新生的調(diào)控。

轉(zhuǎn)運(yùn)rna(trna)是一類(lèi)長(zhǎng)73-94核苷酸的小分子rna，是細(xì)胞活動(dòng)不可或缺的組成部分，他們主要負(fù)責(zé)將信使rna(mrna)序列翻譯成氨基酸序列合成蛋白。除此之外，trna還參與細(xì)胞交流、反轉(zhuǎn)錄和蛋白降解等過(guò)程。隨著測(cè)序技術(shù)的進(jìn)步，在最近幾年中，研究人員在多種細(xì)胞系及組織中發(fā)現(xiàn)了一批來(lái)源于trna序列的更短的片段，主要包括以下幾類(lèi)：剪切于成熟trna反義密碼子前，產(chǎn)生5′trnahalves和3′trnahalves，每段有30-35個(gè)核苷酸的長(zhǎng)度；剪切于d環(huán)或t環(huán)分別產(chǎn)生5’-trfs和3’-trfs，長(zhǎng)約20個(gè)核苷酸。此外，trna前體剪切也可產(chǎn)生多種小片段rna。研究表明，多種生理病理刺激包括缺氧、高滲、射線照射、病毒感染等均可導(dǎo)致trna剪切片段的產(chǎn)生，并且這些片段參與如翻譯起始調(diào)控、細(xì)胞增殖、凋亡、遷移等多種生物學(xué)過(guò)程，說(shuō)明trna片段并非隨機(jī)剪切產(chǎn)生的垃圾rna，而是經(jīng)過(guò)精密調(diào)控剪切產(chǎn)生的具有特定生物活性的非編碼小rna。這類(lèi)小rna是否參與血管新生尚未見(jiàn)報(bào)道。我們的研究發(fā)現(xiàn)在缺氧條件下多種組織都會(huì)發(fā)生trna的剪切，產(chǎn)生trna片段(參見(jiàn)圖1，圖2)，在內(nèi)皮細(xì)胞中過(guò)表達(dá)這些片段可通過(guò)抑制內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移、成管等功能，從而抑制血管新生(參見(jiàn)圖3)。在種植腫瘤細(xì)胞的老鼠中注射本發(fā)明的轉(zhuǎn)運(yùn)rna片段，可抑制腫瘤的生長(zhǎng)(參見(jiàn)圖4)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的，就是為了提供一種轉(zhuǎn)運(yùn)rna片段及其應(yīng)用。

本發(fā)明的目的可以通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)：轉(zhuǎn)運(yùn)rna片段，是來(lái)源于以下全長(zhǎng)序列的包含20-55核苷酸的片段：trna-val、trna-gly、trna-glu或trna-his；其中，trna-val的全長(zhǎng)序列如seqidno1所示；trna-gly的全長(zhǎng)序列如seqidno2所示；trna-glu的全長(zhǎng)序列如seqidno3所示；trna-his的全長(zhǎng)序列如seqidno4所示。

來(lái)源于trna-val的轉(zhuǎn)運(yùn)rna片段包括seqidno5-seqidno7所示的trna-val片段序列，以及seqidno8-seqidno10所示的trna-val片段反義序列。

來(lái)源于trna-gly的轉(zhuǎn)運(yùn)rna片段包括seqidno11-seqidno13所示的trna-gly片段序列，以及seqidno14-seqidno16所示的trna-gly片段反義序列。

來(lái)源于trna-glu的轉(zhuǎn)運(yùn)rna片段包括seqidno17-seqidno19所示的trna-glu片段序列，以及seqidno20-seqidno22所示的trna-glu片段反義序列。

來(lái)源于trna-his的轉(zhuǎn)運(yùn)rna片段包括seqidno23-seqidno25所示的trna-his片段序列，以及seqidno26-seqidno28所示的trna-his片段反義序列。

上述轉(zhuǎn)運(yùn)rna片段在治療腫瘤中的應(yīng)用；所述腫瘤包括肝癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、腦瘤、黑色素瘤或骨肉瘤。

上述轉(zhuǎn)運(yùn)rna片段反義序列或其組合在治療缺血性疾病中的應(yīng)用；所述缺血性疾病包括腦缺血、心肌缺血、下肢缺血或腎缺血。

包含上述轉(zhuǎn)運(yùn)rna片段的藥物組合物，包括由所述轉(zhuǎn)運(yùn)rna片段合成的核酸片段及堿基修飾，激活或抑制轉(zhuǎn)運(yùn)rna片段表達(dá)的試劑，以及藥學(xué)試劑能接受的載體。

可用于局部注射或靜脈注射的權(quán)利要求1所述轉(zhuǎn)運(yùn)rna片段的懸液。

包含上述轉(zhuǎn)運(yùn)rna片段的復(fù)合物，通過(guò)將所述轉(zhuǎn)運(yùn)rna片段錨定、注入載體表面或內(nèi)部，形成形狀固定、可供植入的復(fù)合物，該復(fù)合物植入后，所述轉(zhuǎn)運(yùn) rna片段緩釋或可控釋放。

在內(nèi)皮細(xì)胞中過(guò)表達(dá)本發(fā)明的轉(zhuǎn)運(yùn)rna片段，可通過(guò)抑制內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移、成管等功能，從而抑制血管新生。在腫瘤細(xì)胞中過(guò)表達(dá)本發(fā)明的轉(zhuǎn)運(yùn)rna片段，可抑制腫瘤細(xì)胞的增殖遷移。

附圖說(shuō)明：

圖1顯示northernblot(a)和定量pcr(b)分析驗(yàn)證trnaval-和trnagly來(lái)源的小rna在缺血腦組織中水平升高；

圖2顯示trna來(lái)源小片段在下肢缺血組織及缺氧內(nèi)皮細(xì)胞中水平升高。其中：(a)定量pcr檢測(cè)trnaval和trnagly來(lái)源的小rna在下肢缺血組織中的水平。(b)northernblot驗(yàn)證trnaval和trnagly來(lái)源的小rna在下肢缺血3天后的組織中水平升高。(c)定量pcr檢測(cè)trnaval和trnagly來(lái)源的小rna在缺氧內(nèi)皮細(xì)胞中的水平。(d)northernblot驗(yàn)證內(nèi)皮細(xì)胞缺氧48小時(shí)后小rna水平升高。

圖3顯示trna來(lái)源的小rna抑制血管新生。合成trnaval和trnagly來(lái)源的小rna模擬序列，轉(zhuǎn)染血管內(nèi)皮細(xì)胞24小時(shí)后檢測(cè)下列指標(biāo)：(a)轉(zhuǎn)染oligo-val和oligo-gly后抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖；(b-c)trnaval和trnagly來(lái)源的小rna抑制內(nèi)皮細(xì)胞遷移；(d-h)trnaval和trnagly來(lái)源的小rna抑制內(nèi)皮細(xì)胞成管。

圖4顯示trna-gly片段模擬物抑制胰腺癌生長(zhǎng)。

圖5、圖6顯示trna-gly片段反義序列促進(jìn)缺血下肢血管新生。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

trna-gly片段模擬物抑制胰腺癌生長(zhǎng)

將胰腺癌細(xì)胞懸液經(jīng)皮下注射入裸鼠腹股溝，隨機(jī)分為2組，每組5只老鼠，同時(shí)經(jīng)尾靜脈注射trna-gly片段模擬物序列，隔天注射至第30天，處死所有裸鼠，取出瘤體，檢查并測(cè)量。結(jié)果顯示注射trna-gly片段類(lèi)似物明顯抑制胰腺癌瘤體大小，參見(jiàn)圖4，圖4中上部三個(gè)瘤體是對(duì)照注射組的情況，下部三個(gè)瘤體是trna-gly片段模擬物注射組的情況。trna-gly片段模擬物序列為 gcattggtggttcagtggtagaattctcgcct(seqidno12)。

實(shí)施例2

定點(diǎn)注射trna-gly片段反義序列促進(jìn)缺血下肢血管新生

構(gòu)建10只小鼠下肢缺血模型，并隨機(jī)分為a、b兩組，a組注射對(duì)照無(wú)義序列rna，b組注射trna-gly片段反義序列，分別于第7天和第14天通過(guò)多普勒觀察血流恢復(fù)情況。結(jié)果顯示與對(duì)照組相比，注射trna-gly片段反義序列組血供明顯恢復(fù)，參見(jiàn)圖5、圖6，圖5是對(duì)照注射組的情況，圖6是trna-gly片段反義序列注射組的情況。說(shuō)明注射trna-gly片段反義序列可促進(jìn)缺血下肢血管新生。trna-gly片段反義序列為aggcgagaattctaccactgaaccaccaatgc(seqidno15)。