本發(fā)明涉及芐基醇(benzylhydroxyde)衍生物、其制備方法以及其治療用途。
本發(fā)明的化合物為線粒體呼吸鏈的復(fù)合物1的直接安全抑制劑以及低氧應(yīng)激下低氧誘導(dǎo)因子(hypoxiainduciblefactor,hif-1)穩(wěn)定化的間接抑制劑。
線粒體復(fù)合物i，也稱為nadh:泛醌氧化還原酶，是呼吸鏈的重要組成部分。線粒體復(fù)合物1有助于在能量支撐細(xì)胞過程的起源處形成偶聯(lián)至atp合成的膜電位。由基因組和線粒體dna兩者編碼的45個(gè)亞基組成的復(fù)合物1存在于所有哺乳動(dòng)物細(xì)胞的線粒體內(nèi)膜中并且是三羧酸循環(huán)(krebscycle)中生成的nadh的主要消費(fèi)者和細(xì)胞中nadh/nad+穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)物。
由于其功能，復(fù)合物1負(fù)責(zé)途徑中涉及的許多種不同細(xì)胞代謝物(例如，amp/atp和nadh/nad+比例、α-酮戊二酸(酯/鹽)、琥珀酸(酯/鹽)和氧)的間接調(diào)節(jié)，所述途徑在特定應(yīng)激下支持細(xì)胞增殖、生長(zhǎng)和適應(yīng)。
在氧化應(yīng)激下，線粒體復(fù)合物1作為線粒體呼吸鏈中氧自由基(ros)產(chǎn)生的主要來源參與誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡(lietal,2003)。
通過α酮戊二酸(酯/鹽)、琥珀酸(酯/鹽)和氧濃度的間接調(diào)節(jié)，線粒體復(fù)合物1也參與導(dǎo)致低氧誘導(dǎo)因子(hif)在常氧下降解的脯氨酰羥化酶活性(phd)的調(diào)節(jié)。在低氧或tca的某些酶(琥珀酸脫氫酶、富馬酸水合酶)的功能障礙情況下，phd被抑制，hif-1a穩(wěn)定化并易位至細(xì)胞核。hif1a充當(dāng)導(dǎo)致癌癥進(jìn)展、血管生成、細(xì)胞存活、葡萄糖代謝和侵襲的許多方面中涉及的靶基因上調(diào)的轉(zhuǎn)錄因子。目前已鑒定出超過70種推測(cè)的hif-1靶基因(s.s.hong&al.,2004)。
在1920年代，ottowarburg證明，與原代細(xì)胞相比，腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)特定的代謝：在常氧條件(有氧糖酵解)下細(xì)胞葡萄糖親和力增加(warburg效應(yīng))。幾年以來，代謝失調(diào)最終被定義為癌癥的出現(xiàn)標(biāo)志(hanahanetal.(2011)cell,144)。而這種觀察結(jié)果已被更多地轉(zhuǎn)化至臨床，其中由于其葡萄糖親和力而在現(xiàn)今常診斷侵襲性腫瘤(fdgpetscan)。了解應(yīng)激下的代謝適應(yīng)并開發(fā)靶標(biāo)特定腫瘤細(xì)胞代謝的策略現(xiàn)在似乎是普遍的跡象。
許多癌癥展示出一種糖酵解轉(zhuǎn)變(warburg效應(yīng))，其與腫瘤侵襲性和預(yù)后差相關(guān)。例如，在大部分成膠質(zhì)細(xì)胞瘤或三陰性乳腺癌、轉(zhuǎn)移性頭頸癌或轉(zhuǎn)移性黑色素瘤中就是如此。在另一方面，某些腫瘤依賴氧化磷酸化代謝(oxphos，線粒體)生長(zhǎng)。依靠丙酮酸、谷氨酰胺或脂質(zhì)生長(zhǎng)的腫瘤可依賴oxphos代謝以支持atp的產(chǎn)生、氧化還原穩(wěn)態(tài)和提供氨基酸。例如，激素依賴性乳腺腫瘤、一些肺腫瘤、肝癌、胃腸腫瘤、過度表達(dá)c-myc的腫瘤諸如一些淋巴瘤應(yīng)當(dāng)幾乎被認(rèn)為是oxphos依賴性腫瘤。此外，新的證據(jù)支持這樣的事實(shí)：在靶向支持糖酵解代謝途徑的一些“靶向療法”后發(fā)生的治療抗性可通過腫瘤代謝至oxphos依賴性的轉(zhuǎn)變來實(shí)現(xiàn)。進(jìn)行研究以鑒定一些用于診斷那些腫瘤類型的新方式，其通過特定的創(chuàng)新的活組織檢查呼吸測(cè)定或?qū)et掃描生物標(biāo)志物例如18f-谷氨酰胺或11c-乙酸(酯/鹽)的特定開發(fā)。
除了支持oxphos腫瘤代謝的主要作用外，復(fù)合物1還參與朝著建立低氧條件下通過hif1穩(wěn)定觸發(fā)的侵襲性模式的腫瘤的發(fā)展。目前清楚的是，對(duì)線粒體功能活性的調(diào)節(jié)導(dǎo)致對(duì)hif1穩(wěn)定的調(diào)節(jié)：復(fù)合物1的抑制在低氧條件下減少hif-1a穩(wěn)定化，盡管復(fù)合物2(琥珀酸脫氫酶)抑制導(dǎo)致在常氧下增加hif-1a穩(wěn)定化(sdh或fh突變通過hif穩(wěn)定化導(dǎo)致癌癥發(fā)展)。負(fù)責(zé)使代謝向無氧糖酵解轉(zhuǎn)變的涉及細(xì)胞內(nèi)ph調(diào)節(jié)、腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的多種酶(wenger,r.h.,2000)直接受hif-1a控制。且在診斷性腫瘤活組織檢查中增加的hif-1a水平與膀胱癌、腦癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、子宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌、頭/頸癌、肺癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、直腸癌和胃癌的死亡率的風(fēng)險(xiǎn)增加相關(guān)。此外，增加hif-1a表達(dá)的實(shí)驗(yàn)操作導(dǎo)致腫瘤生長(zhǎng)增加，而hif活性的喪失導(dǎo)致腫瘤生長(zhǎng)降低(semenza,g.l.,2010)。以相同的方式，無hif-1a的腫瘤展現(xiàn)出生長(zhǎng)遲緩和肺轉(zhuǎn)移減少(liaod.,etal.,2007)。通過hif1a脫穩(wěn)定化防止oxphos依賴性生長(zhǎng)、代謝適應(yīng)和腫瘤血管形成并用特定和安全的線粒體復(fù)合物1抑制劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡似乎是處理那些腫瘤的一種新方式。
本發(fā)明提供呈堿、對(duì)映異構(gòu)體、非對(duì)映異構(gòu)體包括外消旋混合物和與酸的加成鹽形式的式(i)化合物：
其中
a表示包含1至3個(gè)雜原子的5元雜芳基，其中至少一個(gè)雜原子選自硫原子和氮原子，a未經(jīng)取代或取代有一個(gè)或多個(gè)(c1-c4)烷基，每個(gè)(c1-c4)烷基未經(jīng)取代或取代有雜環(huán)基，
r1、r2、r1’和r2’各自獨(dú)立地表示氫原子或(c1-c4)烷基，且
r3、r4、r5、r3’、r4’和r5’各自獨(dú)立地選自氫原子、鹵素原子、-o-氟甲基和(c1-c4)烷氧基，其中r3、r4和r5中至少一個(gè)表示(c1-c4)烷氧基且r3'、r4'和r5'中至少一個(gè)表示(c1-c4)烷氧基。
式(i)化合物可含有一個(gè)或多個(gè)不對(duì)稱碳原子。因此，它們可以對(duì)映異構(gòu)體或非對(duì)映異構(gòu)體的形式存在。這些對(duì)映異構(gòu)體和非對(duì)映異構(gòu)體及其混合物，包括外消旋混合物，形成本發(fā)明的一部分。
非對(duì)映異構(gòu)體可通過例如色譜分離成單獨(dú)的異構(gòu)體。外消旋化合物可通過常規(guī)方法例如通過手性相上的色譜分離成兩種對(duì)映異構(gòu)體。
式(i)化合物可以堿或與酸的加成鹽形式存在。這種加成鹽構(gòu)成本發(fā)明的一部分。
這些鹽可用藥學(xué)上可接受的酸制備，盡管例如用于純化或分離式(i)化合物的其它酸的鹽也形成本發(fā)明的一部分。
在本發(fā)明的上下文中，某些術(shù)語具有以下定義：
鹵素原子：氟、氯、溴或碘；
烷基：直鏈或支鏈飽和烴基。實(shí)例包括基團(tuán)甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基等；
氟烷基：其中一個(gè)或多個(gè)氫原子已被氟原子取代的烷基；
烷氧基：-o-烷基，其中所述烷基如上文所定義；
雜芳基：含有2至4個(gè)碳原子并含有1至3個(gè)諸如氮、氧或硫的雜原子的環(huán)狀芳族基團(tuán)。雜芳基的實(shí)例包括噁唑基、噻唑基、噻吩基、噁二唑基、噻二唑基或吲哚基；
雜環(huán)基：含有5至10個(gè)碳原子并含有1至3個(gè)諸如氮、氧或硫的雜原子的飽和環(huán)狀基團(tuán)。雜環(huán)基的實(shí)例包括嗎啉基。
在作為本發(fā)明主題的式(i)化合物中，第一組化合物由其中a包含氧原子的化合物構(gòu)成。
在作為本發(fā)明主題的式(i)化合物中，第二組化合物由其中a表示噁唑基、噻唑基、噻吩基、噁二唑基、噻二唑基或咪唑基的化合物構(gòu)成。
在作為本發(fā)明主題的式(i)化合物中，第三組化合物由其中a未經(jīng)取代的化合物構(gòu)成。
在作為本發(fā)明主題的式(i)化合物中，第四組化合物由其中a取代有一個(gè)或多個(gè)甲基的化合物構(gòu)成。
在作為本發(fā)明主題的式(i)化合物中，第五組化合物由其中r1、r2、r1’和r2’各自表示氫原子或甲基的化合物構(gòu)成。
在作為本發(fā)明主題的式(i)化合物中，第六組化合物由其中r3、r4和r5中至少兩個(gè)表示-och3且r3'、r4'和r5'中至少兩個(gè)表示-och3的化合物構(gòu)成。
具體地，在第六組化合物中，可提及其中r3、r4和r5中兩個(gè)表示-och3且r3'、r4'和r5'中兩個(gè)表示-och3的化合物。
在作為本發(fā)明主題的式(i)化合物中，第七組化合物由其中r3、r4、r5、r3'、r4'和r5'中至少一個(gè)表示-ochf2的化合物構(gòu)成。
在作為本發(fā)明主題的式(i)化合物中，第八組化合物由其中r1＝r1'、r2＝r2'、r3＝r3'、r4＝r4'且r5＝r5'的化合物構(gòu)成。
在作為本發(fā)明主題的式(i)化合物中，可具體提及以下化合物：
1-(3,4-二甲氧基苯基)-2-[4-[2-[4-[2-(3,4-二甲氧基苯基)-2-羥基-乙氧基]苯基]-5-甲基-噁唑-4-基]苯氧基]乙醇；
1-(3,4-二甲氧基苯基)-2-[4-[2-[4-[2-(3,4-二甲氧基苯基)-2-羥基-1,1-二甲基-乙氧基]苯基]-5-甲基-噁唑-4-基]苯氧基]-2-甲基-丙-1-醇；
1-(3,4-二甲氧基苯基)-2-[4-[2-[4-[2-(3,4-二甲氧基苯基)-2-羥基-乙氧基]苯基]-4-甲基-噁唑-5-基]苯氧基]乙醇；
1-(3,4-二甲氧基苯基)-2-[4-[2-[4-[2-(3,4-二甲氧基苯基)-2-羥基-1,1-二甲基-乙氧基]苯基]-5-甲基-噻唑-4-基]苯氧基]-2-甲基-丙-1-醇；
1-(3,4-二甲氧基苯基)-2-[4-[2-[4-[2-(3,4-二甲氧基苯基)-2-羥基-乙氧基]苯基]-5-甲基-噻唑-4-基]苯氧基]乙醇；
1-(3,4-二甲氧基苯基)-2-[4-[2-[4-[2-(3,4-二甲氧基苯基)-2-羥基-1,1-二甲基-乙氧基]苯基]-5-甲基-噻唑-4-基]苯氧基]-2-甲基-丙-1-醇；
1-(3,4-二甲氧基苯基)-2-[4-[2-[4-[2-(3,4-二甲氧基苯基)-2-羥基-乙氧基]苯基]-5-甲基-噻唑-4-基]苯氧基]乙醇；
1-(3,4-二甲氧基苯基)-2-[4-[2-[4-[2-(3,4-二甲氧基苯基)-2-羥基-1-甲基-乙氧基]苯基]噁唑-4-基]苯氧基]丙-1-醇；
1-(3,4-二甲氧基苯基)-2-[4-[2-[4-[2-(3,4-二甲氧基苯基)-2-羥基-乙氧基]苯基]噁唑-4-基]苯氧基]乙醇；
1-(4-氯-3-甲氧基-苯基)-2-[4-[2-[4-[2-(4-氯-3-甲氧基-苯基)-2-羥基-乙氧基]苯基]噁唑-4-基]苯氧基]乙醇；
1-(4-氟-3-甲氧基-苯基)-2-[4-[2-[4-[2-(4-氟-3-甲氧基-苯基)-2-羥基-乙氧基]苯基]噁唑-4-基]苯氧基]乙醇；
1-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-2-[4-[2-[4-[2-(3-氟-4-甲氧基-苯基)-2-羥基-乙氧基]苯基]噁唑-4-基]苯氧基]乙醇；
1-(3,4-二甲氧基苯基)-2-[4-[2-[4-[2-(3,4-二甲氧基苯基)-2-羥基-1,1-二甲基-乙氧基]苯基]噁唑-4-基]苯氧基]-2-甲基-丙-1-醇；
2-[4-[2-[4-[2-羥基-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)乙氧基]苯基]噁唑-4-基]苯氧基]-1-(3,4,5-三甲氧基苯基)乙醇；
1-(3,4-二甲氧基苯基)-2-[4-[2-[4-[2-(3,4-二甲氧基苯基)-2-羥基-乙氧基]苯基]噻唑-4-基]苯氧基]乙醇；
1-(3,4-二甲氧基苯基)-2-[4-[2-[4-[2-(3,4-二甲氧基苯基)-2-羥基-1,1-二甲基-乙氧基]苯基]噻唑-4-基]苯氧基]-2-甲基-丙-1-醇；
1-(3,4-二甲氧基苯基)-2-[4-[2-[4-[2-(3,4-二甲氧基苯基)-2-羥基-1-甲基-乙氧基]苯基]噻唑-4-基]苯氧基]丙-1-醇；
1-(3,4-二甲氧基苯基)-2-[4-[2-[4-[2-(3,4-二甲氧基苯基)-2-羥基-乙氧基]苯基]噻唑-4-基]苯氧基]乙醇；
1-(3,4-二甲氧基苯基)-2-[4-[4-[4-[2-(3,4-二甲氧基苯基)-2-羥基-乙氧基]苯基]噻唑-2-基]苯氧基]-2-甲基-丙-1-醇；
1-(3,4-二甲氧基苯基)-2-[4-[2-[4-[2-(3,4-二甲氧基苯基)-2-羥基-乙氧基]苯基]噻唑-4-基]苯氧基]-2-甲基-丙-1-醇；
1-(3,4-二甲氧基苯基)-2-[4-[5-[4-[2-(3,4-二甲氧基苯基)-2-羥基-1,1-二甲基-乙氧基]苯基]-3-噻吩基]苯氧基]-2-甲基-丙-1-醇；
1-(3,4-二甲氧基苯基)-2-[4-[5-[4-[2-(3,4-二甲氧基苯基)-2-羥基-乙氧基]苯基]-3-噻吩基]苯氧基]乙醇；
1-(3,4-二甲氧基苯基)-2-[4-[5-[4-[2-(3,4-二甲氧基苯基)-2-羥基-乙氧基]苯基]-1,2,4-噁二唑-3-基]苯氧基]乙醇；
1-(3,4-二甲氧基苯基)-2-[4-[5-[4-[2-(3,4-二甲氧基苯基)-2-羥基-1,1-二甲基-乙氧基]苯基]-1,2,4-噁二唑-3-基]苯氧基]-2-甲基-丙-1-醇；
1-(3,4-二甲氧基苯基)-2-[4-[5-[4-[2-(3,4-二甲氧基苯基)-2-羥基-1-甲基-乙氧基]苯基]-1,2,4-噻二唑-3-基]苯氧基]丙-1-醇；
1-(3,4-二甲氧基苯基)-2-[4-[5-[4-[2-(3,4-二甲氧基苯基)-2-羥基-乙氧基]苯基]-1,2,4-噻二唑-3-基]苯氧基]乙醇；
1-(3,4-二甲氧基苯基)-2-[4-[5-[4-[2-(3,4-二甲氧基苯基)-2-羥基-1,1-二甲基-乙氧基]苯基]-1,2,4-噻二唑-3-基]苯氧基]-2-甲基-丙-1-醇；
1-(3,4-二甲氧基苯基)-2-[4-[5-[4-[2-(3,4-二甲氧基苯基)-2-羥基-1,1-二甲基-乙氧基]苯基]-1,2,4-噻二唑-3-基]苯氧基]-2-甲基-丙-1-醇；
1-(3,4-二甲氧基苯基)-2-[4-[2-[4-[2-(3,4-二甲氧基苯基)-2-羥基-1-甲基-乙氧基]苯基]噁唑-5-基]苯氧基]丙-1-醇；
1-(3,4-二甲氧基苯基)-2-[4-[2-[4-[2-(3,4-二甲氧基苯基)-2-羥基-乙氧基]苯基]-1h-咪唑-4-基]苯氧基]乙醇；
1-(3,4-二甲氧基苯基)-2-[4-[2-[4-[2-(3,4-二甲氧基苯基)-2-羥基-1,1-二甲基-乙氧基]苯基]-1h-咪唑-4-基]苯氧基]-2-甲基-丙-1-醇；
1-(3,4-二甲氧基苯基)-2-[4-[2-[4-[2-(3,4-二甲氧基苯基)-2-羥基-1,1-二甲基-乙氧基]苯基]-1-甲基-咪唑-4-基]苯氧基]-2-甲基-丙-1-醇；
1-(3,4-二甲氧基苯基)-2-[4-[2-[4-[2-(3,4-二甲氧基苯基)-2-羥基-乙氧基]苯基]-1-甲基-咪唑-4-基]苯氧基]乙醇；
1-(3,4-二甲氧基苯基)-2-[4-[2-[4-[2-(3,4-二甲氧基苯基)-2-羥基-1,1-二甲基-乙氧基]苯基]-1-(2-嗎啉代乙基)咪唑-4-基]苯氧基]-2-甲基-丙-1-醇；
1-(3,4-二甲氧基苯基)-2-[4-[2-[4-[2-(3,4-二甲氧基苯基)-2-羥基-乙氧基]苯基]-1-(2-嗎啉代乙基)咪唑-4-基]苯氧基]乙醇鹽酸鹽；
1-(3,4-二甲氧基苯基)-2-[4-[2-[4-[2-(3,4-二甲氧基苯基)-2-羥基-乙氧基]苯基]-4-甲基-噁唑-5-基]苯氧基]乙醇；
1-(3,4-二甲氧基苯基)-2-[4-[5-[4-[2-(3,4-二甲氧基苯基)-2-羥基-乙氧基]苯基]-1,2,4-噁二唑-3-基]苯氧基]乙醇；
1-[3-(二氟甲氧基)-4-甲氧基-苯基]-2-[4-[2-[4-[2-[3-(二氟甲氧基)-4-甲氧基-苯基]-2-羥基-乙氧基]苯基]噻唑-4-基]苯氧基]乙醇；和
1-[4-(二氟甲氧基)-3-甲氧基-苯基]-2-[4-[2-[4-[2-[4-(二氟甲氧基)-3-甲氧基-苯基]-2-羥基-乙氧基]苯基]噻唑-4-基]苯氧基]乙醇。
根據(jù)本發(fā)明，可取決于取代基a的性質(zhì)通過以下方法制備通式(i)的化合物。
在下文中，保護(hù)基pg是使得如下情況變得可能的基團(tuán)：一方面在合成過程中保護(hù)反應(yīng)性官能團(tuán)，諸如羥基或胺，且在另一方面在合成結(jié)束時(shí)允許反應(yīng)性官能團(tuán)恢復(fù)完整。保護(hù)基團(tuán)的實(shí)例以及保護(hù)和脫保護(hù)的方法在“protectivegroupsinorganicsynthesis”,greeneetal.,4edition(johnwiley&sons,inc.,newyork)中給出。
適于具有不同于咪唑的取代基a且其中r1＝r1'、r2＝r2'、r3＝r3'、r4＝r4'和r5＝r5'的化合物的方案1
第一合成途徑從單或雙保護(hù)的二酚1起始，取決于所使用的保護(hù)基團(tuán)(pg可為例如甲基、bn、乙?；?、tbps或h)而使用經(jīng)典和公知的方法將其脫保護(hù)為二酚2。用相應(yīng)的溴酮3將二酚2進(jìn)行二烷基化。然后使用合適的還原劑還原所得式(ii)的二酮。在這方面，兩種方法可用于式(i)化合物的合成：
-可使用適當(dāng)?shù)氖中源呋瘎?a、4b，進(jìn)行式(ii)的二酮的對(duì)映選擇性還原。該方法受文獻(xiàn)方法(j.org.chem.2009,74,4195–4202)啟發(fā)，但進(jìn)行式(ii)的二酮的雙重還原，以獲得式(i)的手性化合物。使用2種異構(gòu)體螺甲硼烷4a和4b中的一個(gè)作為手性還原催化劑進(jìn)行以下實(shí)施例中描述的所有對(duì)映選擇性還原。它們的合成使用文獻(xiàn)已經(jīng)描述的方案進(jìn)行。
-式(ii)的二酮的外消旋還原可用nabh4進(jìn)行，以獲得式(i)的外消旋化合物。
適于具有不同于咪唑的取代基a的化合物的方案2
為了能獲得在分子的每一側(cè)具有不同取代的衍生物，發(fā)明人已經(jīng)確定了兩種不同的路線，其允許依序取代苯酚并產(chǎn)生不對(duì)稱碳原子。
從單乙酸酯保護(hù)的酚5起始，方案2的第一個(gè)步驟是在堿性條件(例如：k2co3)下用相應(yīng)的溴酮2進(jìn)行烷基化。然后用前述還原劑(方案1的4a或4b)使該酮6經(jīng)受不對(duì)稱還原步驟并在同一步驟中脫保護(hù)。然后將所得苯酚7在堿性條件(例如：k2co3)下用相應(yīng)的溴酮2'進(jìn)行烷基化，這得到式(iii)化合物，然后進(jìn)行與方案1中所述的最后一個(gè)還原步驟相同的另一還原步驟以獲得式最終的(i)化合物。
適于具有咪唑a取代基的化合物的方案3
考慮到咪唑環(huán)的反應(yīng)性，用特定途徑制備其中a＝2,4-二芳基咪唑基的化合物。
在堿性條件(k2co3)下，將市售脒8與市售溴酮9環(huán)化以得到化合物10。使用bbr3條件進(jìn)行化合物10的脫保護(hù)得到二酚11。然后用甲硅烷基保護(hù)基團(tuán)保護(hù)二酚11(化合物12)并用boc基團(tuán)保護(hù)咪唑環(huán)(化合物13)。甲硅烷基脫保護(hù)并烷基化二酚14得到式(ii)的二酮，其可還原得到式(i)化合物，或者對(duì)式(ii)的二酮進(jìn)行烷基化，然后使用與方案1所述的最后還原步驟相同的條件還原，以得到最終的式(i)化合物。
雜環(huán)二酚化合物的合成
2,4-二芳基噁唑和2,4-二芳基噻唑環(huán)合成
市售經(jīng)取代的酰胺或硫代酰胺16與溴酮17在適當(dāng)條件反應(yīng)，以便環(huán)化為噁唑或噻唑衍生物18，并且那些化合物可直接用作最終的式(i)化合物的通用合成的起始物質(zhì)。
2,4-二芳基噻吩環(huán)合成
市售二氯噻吩19在alcl3存在下與甲氧基苯基反應(yīng)并得到4-芳基噻吩20，其與硼酸在suzuki反應(yīng)條件進(jìn)行反應(yīng)，獲得2,4-二芳基噻吩21。該化合物可直接用作方案1中的起始物質(zhì)。
3,5-二芳基噁二唑環(huán)合成
在羥胺存在下使用氰基衍生物22進(jìn)行二聚反應(yīng)制備噁二唑化合物23，并且該化合物可直接用作方案1中的起始物質(zhì)。
2,5-二芳基噁唑環(huán)合成
以化合物24與溴苯甲醚25在cui存在下進(jìn)行鈀偶聯(lián)反應(yīng)得到化合物26，并且該化合物可直接用作方案1中的起始物質(zhì)。
在方案1-3中，當(dāng)不描述它們制備的方法時(shí)，起始化合物和反應(yīng)混合物為市售的或述于文獻(xiàn)中，或者可通過其中所述或本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法來制備。
在另一方面，本發(fā)明還提供式(ii)和(iii)化合物。這些化合物可用作合成用于式(i)化合物的中間體。
實(shí)施例
以下實(shí)施例描述了某些本發(fā)明化合物的制備。這些實(shí)施例不是限制性的，并且僅僅示例說明本發(fā)明。示例性的化合物編號(hào)匹配在下文表中給出的那些，其示例說明一些本發(fā)明化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)和物理性質(zhì)。
使用以下縮寫和實(shí)驗(yàn)式：
acoet乙酸乙酯
boc叔丁基氧基羰基
cui碘化亞銅
dcm二氯甲烷
dmap4-二甲基氨基吡啶
dmfn,n-二甲基甲酰胺
dmso二甲基亞砜
etsna乙基硫化鈉
etoh乙醇
hcl氯化氫
hplc高效液相色譜
lcms液相色譜/質(zhì)譜
meoh甲醇
nacl氯化鈉
nabh4硼氫化鈉
na2so4硫酸鈉
tbdpsicl叔丁基二苯基甲硅烷基氯
tbps三(聯(lián)苯-4-基)甲硅烷基
tfa三氟乙酸
thf四氫呋喃
thp四氫吡喃基
℃攝氏度
rt室溫
rt保留時(shí)間
min分鐘
ml毫升
mmol毫摩爾
ppm百萬分之一
使用根據(jù)方案1中所述的外消旋還原獲得的異構(gòu)體混合物鑒定能夠分離化合物的手性hplc方法，然后用于確定所有描述的化合物的手性u(píng)v純度。
在下文所述實(shí)施例中，使用以下分析方法：
在bruker光譜儀(250、400和500mhz)上在dmso-d6或dccl3中記錄質(zhì)子核磁共振譜(1hnmr)。化學(xué)位移δ以百萬分之一(ppm)表示。以下縮寫用于解釋光譜：s：?jiǎn)畏?，d：二重峰，t：三重峰，q：四重峰，quint：五重峰，sext：六重峰，m：多重峰，dd：雙二重峰，br：寬峰。
其中使用的不同lcuvms方法詳述如下。
方法1：
uplc220nm
柱acquityuplcbehc18(2.1x50mm)1.7μm
洗脫劑a＝h2o+0.02％hcooh。
洗脫劑b＝ch3cn+0.02％hcooh。
t℃:55℃。
梯度：t02％b,t4min98％b,t4.5min98％b,t4.6min2％b,t5.0min2％b。
流速＝1ml/min
方法2：
hplc1100極性模式uv＝220nm,柱daicelchiralpakib(250mmx4.6)5μm,100％甲醇,流速1ml/min,t＝25℃,注射10μl,0.5mg/mlmeoh
方法3：
hplc1100極性模式uv＝210nm,柱daicelchiralpakic(250mmx4.6)5μm,100％乙腈,流速1ml/min,t＝25℃,注射10μl,0.5mg/mlmeoh
方法4：
hplcagilent1100uv＝210nm,柱daicelchiralpakod-h(100mmx4.6)5μm,100％meoh,流速0.8ml/min,t＝25℃,注射2μl,0.5mg/mlmeoh
方法5：
儀器：watershplc:alliance2695,uv:pda996,ms:zq(單四級(jí)桿(simplequad))zq2
軟件：masslynx,openlynx
lc條件：
柱：lunac18(2)-hstphenomenex(30x2mm)2.5μm
柱溫：50℃
洗脫劑a:h2o+0.05％tfa(v/v)
洗脫劑b:ch3cn+0.035％tfa(v/v)
梯度：t00％b,t2.5min100％b,t3.5min100％b,t3.6min0％b,t5min0％b
流速:1ml/min
裂分:1/3至ms源
注射：2μl
uv檢測(cè)：提取(extraction)220nm
ms條件：
離子化模式：正性電噴霧es+
毛細(xì)張力：3.5kv
錐張力(conetension)：30v
去溶劑化溫度：300℃
源溫度：130℃
方法6:
儀器：watersuplc:acquity,uv:acquitypda,ms:sqd(單四級(jí)桿)sqw
軟件：masslynx,openlynx
lc條件：
柱：behc18waters(50x2.1mm)1.7μm
柱溫：55℃
洗脫劑a:h2o+0.05％tfa(v/v)
洗脫劑b:ch3cn+0.035％tfa(v/v)
梯度：t02％b,t2.4min98％b,t3.0min98％b,t3.03min2％b,t3.5min2％b
流速:0.8ml/min
注射：0.3μl
uv檢測(cè)：提取220nm
ms條件：
離子化模式：正性電噴霧es+
毛細(xì)管張力：3kv
錐張力：30v
去溶劑化溫度：500℃
源溫度：150℃
根據(jù)方案1制備的實(shí)施例
實(shí)施例1：2,4-二-(4-羥基苯基)-噻唑的合成
將2,4-二-(4-甲氧基苯基)-噻唑1(1當(dāng)量,5g,16.81mmol)溶于50mldmf，然后添加etsna(6當(dāng)量,8.49g,100.88mmol)并在室溫?cái)嚢琛⒎磻?yīng)混合物溫?zé)嶂?20℃且保持12h，然后冷卻至室溫。添加200mlacoet并過濾所獲得的混懸液。將固體與200mlacoet和200ml1mhcl溶液在室溫?cái)嚢?6h，然后過濾混懸液并減壓干燥該固體，得到3.5g(77％產(chǎn)率)2,4-二-(4-羥基苯基)-噻唑。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm9.20(br.s,2h)7.84(d,j＝1.8hz,2h)7.82(d,j＝1.8hz,2h)7.76(s,1h)6.89(d,j＝8.7hz,2h)6.84(d,j＝8.7hz,2h)
lcms(方法3)：100％(在210nm的純度)rt＝5min
實(shí)施例2：1-(3,4-二甲氧基-苯基)-2-[4-(4-{4-[2-(3,4-二甲氧基-苯基)-2-氧代-乙氧基]-苯基}-噻唑-2-基)-苯氧基]-乙酮ii-1的合成
在室溫將實(shí)施例1中獲得的二酚(1當(dāng)量,500mg,1.86mmol)溶于10mldmf中，添加k2co3(6當(dāng)量,1.54g,11.16mmol)和2-溴-1-(3,4-二甲氧基-苯基)-乙酮(1.16g,4.46mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?6h，然后過濾。減壓蒸發(fā)該溶液。然后將固體溶于dcm中并先后用飽和na2co3溶液和水洗滌。有機(jī)層經(jīng)na2so4干燥，過濾并減壓濃縮。通過硅膠色譜(洗脫劑：庚烷/acoet1/0至1/1)純化殘余物，蒸發(fā)后得到228mgii-1(20％產(chǎn)率)。
1hnmr(400mhz,氯仿-dδppm7.97(d,j＝8.3hz,2h)7.91(d,j＝8.3hz,2h)7.67(t,j＝6.0hz,2h)7.58(br.s.,2h)7.28(s,1h)7.01(d,j＝8.3hz,4h)6.93(d,j＝8.3hz,2h)5.30(s,2h)5.27(s,2h)3.97(s,6h)3.95(s,6h)
lcms(方法1):91.4％(在220nm的純度)rt＝2.64minm/z＝626.1
實(shí)施例3：1-(3,4-二甲氧基-苯基)-2-[4-(4-{4-[2-(3,4-二甲氧基-苯基)-2-羥基-乙氧基]-苯基}-噻唑-2-基)-苯氧基]-乙醇(異構(gòu)體2)化合物i-23的合成
將甲硼烷催化劑4a(33.3mg,0.1mmol)溶于1mlthf中，然后滴加0.34ml(0.69mmol)2mbh3/me2s溶液并將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?h。在-20℃，在氮?dú)庀?，添加?shí)施例2中獲得二酮ii-1(0.215g,0.34mmol)于1.5mlthf中的混懸液。將反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝夭⒃谠摐囟葦嚢?0h。添加5ml甲醇并真空濃縮該混合物。添加20mlacoet并將混合物用1mhcl水溶液(2x20ml)、30ml水和30mlnacl(飽和溶液)洗滌，然后經(jīng)na2so4干燥，過濾并減壓濃縮。通過硅膠色譜(洗脫劑：acoet/環(huán)己烷15/85至1/1)純化殘余物，蒸發(fā)后得到1-(3,4-二甲氧基-苯基)-2-[4-(4-{4-[2-(3,4-二甲氧基-苯基)-2-羥基-乙氧基]-苯基}-噻唑-2-基)-苯氧基]-乙醇(化合物i-23)。
產(chǎn)率：301mg,75％
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm7.94(d,j＝6.7hz,2h)7.92(d,j＝6.7hz,2h)7.90(s,1h)7.05-7.10(m,4h)7.02(d,j＝8.8hz,2h)6.98(dd,j＝8.3,1.4hz,2h)6.93(d,j＝8.3hz,2h)5.59(d,j＝4.5hz,1h)5.56(d,j＝4.5hz,1h)4.89(五重峰,j＝4.9hz,2h)4.07(d,j＝5.8hz,2h)4.04(d,j＝5.8hz,2h)3.77(s,6h)3.74(s,6h)
手性色譜(方法3)：98.9％(在210nm的純度)rt＝10.1min。
實(shí)施例4：1-(3,4-二甲氧基-苯基)-2-[4-(4-{4-[2-(3,4-二甲氧基-苯基)-2-羥基-乙氧基]-苯基}-噻唑-2-基)-苯氧基]-乙醇(異構(gòu)體1)化合物i-24的合成
使用實(shí)施例3中所描述的針對(duì)化合物i-23的方法，但用4b代替4a作為手性催化劑，獲得該化合物。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm7.94(d,j＝6.7hz,2h)7.92(d,j＝6.7hz,2h)7.90(s,1h)7.05-7.10(m,4h)7.02(d,j＝8.8hz,2h)6.98(dd,j＝8.3,1.4hz,2h)6.93(d,j＝8.3hz,2h)5.59(d,j＝4.5hz,1h)5.56(d,j＝4.5hz,1h)4.89(五重峰,j＝4.9hz,2h)4.07(d,j＝5.8hz,2h)4.04(d,j＝5.8hz,2h)3.77(s,6h)3.74(s,6h)
手性色譜(方法3)：81.2％(在210nm的純度)rt＝13.6min
實(shí)施例5：1-(3,4-二甲氧基-苯基)-2-[4-(4-{4-[2-(3,4-二甲氧基-苯基)-2-羥基-乙氧基]-苯基}-噻唑-2-基)-苯氧基]-乙醇(異構(gòu)體1、2、3和4)化合物i-69的合成
在室溫，在氮?dú)庀?，向二酮ii-1(0.4mg,1當(dāng)量)于meoh中的混懸液中添加13mlnabh4(0.241mg,10當(dāng)量)。3天后，添加5當(dāng)量nabh4并將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?4h。然后添加10ml1nhcl，蒸發(fā)meoh并添加dcm。分出有機(jī)層并用水洗滌。分離后，有機(jī)相經(jīng)na2so4干燥，過濾并減壓濃縮。通過硅膠色譜(洗脫劑：acoet/環(huán)己烷15/85至1/1)純化殘余物，蒸發(fā)后得到1-(3,4-二甲氧基-苯基)-2-[4-(4-{4-[2-(3,4-二甲氧基-苯基)-2-羥基-乙氧基]-苯基}-噻唑-2-基)-苯氧基]-乙醇(化合物i-69)。
產(chǎn)率：301mg,75％
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm7.92(5h)6.91-7.10(15h)5.56(2h)4.89(2h)4.06(4h)3.77(s,6h)3.74(s,6h)
手性色譜(方法3)：
異構(gòu)體1:25.8％(在210nm的純度)rt＝10.3min。
異構(gòu)體2:24.5％(在210nm的純度)rt＝11.5min。
異構(gòu)體3:25.1％(在210nm的純度)rt＝11.8min。
異構(gòu)體4:24.6％(在210nm的純度)rt＝13.6min。
根據(jù)方案2制備的實(shí)施例
實(shí)施例6：乙酸4-[2-(4-羥基-苯基)-噻唑-4-基]-苯基酯的合成
將1.66g4-羥基硫代苯甲酰胺(1當(dāng)量,6.46mmol)和0.99g乙酸4-(2-溴-乙?；?-苯基酯(1當(dāng)量,6.46mmol)溶于25mlch3cn中并在回流加熱1h。歷時(shí)2h冷卻至室溫后，濾出所形成的固體，用少量etoh洗滌并在40℃真空干燥過夜。獲得1.99g乙酸4-[2-(4-羥基-苯基)-噻唑-4-基]-苯基酯(99％產(chǎn)率)。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm10.29(br.s,1h)8.06(d,j＝8.7hz,2h)8.03(s,1h)7.86(d,j＝8.7hz,2h)7.23(d,j＝8.7hz,2h)6.90(d,j＝8.7hz,2h)2.30(s,3h)
lcuv-ms：99％(在220nm的純度)rt＝2.24minm/z＝312(方法5)
實(shí)施例7：乙酸4-(2-{4-[2-(3,4-二甲氧基-苯基)-2-氧代-乙氧基]-苯基}-噻唑-4-基)-苯基酯的合成
在室溫，將實(shí)施例6中所獲得的苯酚(1當(dāng)量,1g,3.21mmol)溶于16mldmf中，添加k2co3(4當(dāng)量,1.77g,12.85mmol)和2-溴-1-(3,4-二甲氧基-苯基)-乙酮(1.5當(dāng)量,1.25g,4.82mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?6h，然后過濾。減壓蒸發(fā)該溶液。然后將固體溶于dcm中并先后用飽和na2co3溶液和水洗滌。有機(jī)層經(jīng)na2so4干燥，過濾并減壓濃縮。通過硅膠色譜(洗脫劑：dcm/acoet1/0至96/4)純化殘余物，蒸發(fā)后得到736mg乙酸4-(2-{4-[2-(3,4-二甲氧基-苯基)-2-氧代-乙氧基]-苯基}-噻唑-4-基)-苯基酯(47％產(chǎn)率)。
1hnmr(600mhz,dmso-d6)δppm8.09(s,1h)8.08(d,j＝8.7hz,2h)7.97(d,j＝8.8hz,2h)7.76(dd,j＝8.5,2.1hz,1h)7.53(d,j＝2.1hz,1h)7.25(d,j＝8.7hz,2h)7.15(d,j＝8.5hz,1h)7.12(d,j＝8.8hz,2h)5.65(s,2h)3.89(s,3h)3.86(s,3h)2.31(s,3h)
lcuv-ms：99％(在220nm的純度)rt＝2.56minm/z＝489.9(方法5)
實(shí)施例8：4-(2-{4-[2-(3,4-二甲氧基-苯基)-2-羥基-乙氧基]-苯基}-噻唑-4-基)-苯酚(異構(gòu)體2)的合成
在室溫，在氮?dú)庀拢瑢?.86ml2mbh3-me2s/thf(4當(dāng)量,3.72mmol)和150.2mg硼酸酯4a(0.5當(dāng)量,0.464mmol)一起攪拌30min。將混合物冷卻至0℃，然后慢慢添加實(shí)施例7中所獲得的酮(1當(dāng)量,455mg,0.929mmol)于thf中的混懸液。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?2h。將反應(yīng)混合物傾倒在20mlmeoh上并將混合物蒸發(fā)至干。添加30mldcm并用hcl1n(20ml)洗滌該有機(jī)層。分出水層并用10mldcm萃取2次。合并有機(jī)層，用na2so4干燥并蒸發(fā)。通過硅膠色譜(洗脫劑：dcm/meoh1/0至97/3)純化殘余物，蒸發(fā)后得到362.8mg(87％產(chǎn)率)4-(2-{4-[2-(3,4-二甲氧基-苯基)-2-羥基-乙氧基]-苯基}-噻唑-4-基)-苯酚。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm9.61(s,1h)7.92(d,j＝8.8hz,2h)7.84(d,j＝8.7hz,2h)7.80(s,1h)7.07(d,j＝8.8hz,2h)7.07(d,j＝1.8hz,1h)6.98(dd,j＝8.3,1.8hz,1h)6.93(d,j＝8.3hz,1h)6.84(d,j＝8.7hz,2h)5.59(d,j＝4.7hz,1h)4.90(q,j＝5.4hz,1h)4.07(d,j＝5.8hz,2h)3.77(s,3h)3.75(s,3h)
手性色譜(方法4)：93,5％(在210nm的純度)rt＝3.9min。
實(shí)施例9：1-(3,4-二甲氧基-苯基)-2-[4-(2-{4-[2-(3,4-二甲氧基-苯基)-2-羥基-乙氧基]-苯基}-噻唑-4-基)-苯氧基]-乙酮(異構(gòu)體2)的合成
在室溫，將實(shí)施例8中所獲得的苯酚(1當(dāng)量,360mg,0.8mmol)溶于10mldmf中，添加k2co3(4當(dāng)量,442.7mg,3.2mmol)和2-溴-1-(3,4-二甲氧基-苯基)-乙酮(1.5當(dāng)量,327.6mg,1.2mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?6h，然后過濾。減壓蒸發(fā)該溶液。然后將固體溶于dcm并先后用飽和na2co3溶液和水洗滌。有機(jī)層經(jīng)na2so4干燥，過濾并減壓濃縮，蒸發(fā)后得到500mg1-(3,4-二甲氧基-苯基)-2-[4-(2-{4-[2-(3,4-二甲氧基-苯基)-2-羥基-乙氧基]-苯基}-噻唑-4-基)-苯氧基]-乙酮(式(iii)化合物,99％產(chǎn)率)。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm7.89-7.98(m,5h)7.75(dd,j＝8.5,1.9hz,1h)7.51(d,j＝1.9hz,1h)7.13(d,j＝8.5hz,1h)7.06(dd,j＝13.1,8.7hz,5h)6.98(dd,j＝8.2,1.7hz,1h)6.93(d,j＝8.2hz,1h)5.56-5.60(m,3h)4.90(q,j＝5.4hz,1h)4.07(d,j＝5.8hz,2h)3.87(s,3h)3.84(s,3h)3.77(s,3h)3.75(s,3h)
lcuv-ms：88％(在220nm的純度)rt＝2.59minm/z＝628(方法5)
手性色譜(方法3)：94％(在210nm的純度)rt＝8.9min。
實(shí)施例10：1-(3,4-二甲氧基-苯基)-2-[4-(4-{4-[2-(3,4-二甲氧基-苯基)-2-羥基-乙氧基]-苯基}-噻唑-2-基)-苯氧基]-乙醇(異構(gòu)體3)化合物i-61的合成
使用前述不對(duì)稱還原的通用方法獲得該化合物。60％產(chǎn)率。
在室溫，在氮?dú)庀拢瑢?.478ml2mbh3-me2s/thf(6當(dāng)量,0.956mmol)和46.34mg硼酸酯4a(0.9當(dāng)量,0.143mmol)一起攪拌15min。將混合物冷卻至-20℃，然后慢慢添加實(shí)施例9中所獲得的式(iii)的酮(1當(dāng)量,100mg,0.159mmol)于thf中的溶液。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?6h。將反應(yīng)混合物傾倒在15mlmeoh上并將混合物蒸發(fā)至干。添加30mldcm并用hcl1n(20ml)洗滌該有機(jī)層。分出水層并用10mldcm萃取2次。合并有機(jī)層，用na2so4干燥并蒸發(fā)。通過硅膠色譜(洗脫劑：dcm/meoh1/0至97/3)純化殘余物，蒸發(fā)后得到59.9mg(60％產(chǎn)率)1-(3,4-二甲氧基-苯基)-2-[4-(4-{4-[2-(3,4-二甲氧基-苯基)-2-羥基-乙氧基]-苯基}-噻唑-2-基)-苯氧基]-乙醇(化合物i-61)。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm7.94(d,j＝6.7hz,2h)7.92(d,j＝6.7hz,2h)7.90(s,1h)7.05-7.11(m,4h)7.02(d,j＝8.8hz,2h)6.98(dd,j＝8.3,1.0hz,2h)6.93(d,j＝8.3hz,2h)5.59(d,j＝4.7hz,1h)5.56(d,j＝4.7hz,1h)4.89(五重峰,j＝5.0hz,2h)4.07(d,j＝5.8hz,2h)4.04(d,j＝5.8hz,2h)3.77(s,6h)3.75(s,6h)
lcuv-ms：98％(在220nm的純度)rt＝2.39minm/z＝630(方法1)
手性色譜(方法2)：88.2％(在210nm的純度)rt＝22.7min。
實(shí)施例11：1-(3,4-二甲氧基-苯基)-2-[4-(4-{4-[2-(3,4-二甲氧基-苯基)-2-羥基-乙氧基]-苯基}-噻唑-2-基)-苯氧基]-乙醇(異構(gòu)體3)i-62的合成
進(jìn)行與實(shí)施例10所述相同的操作(第二合成路線：方案2)，但用硼酸酯4b代替4a進(jìn)行對(duì)映選擇性還原，以獲得其它對(duì)映異構(gòu)體(異構(gòu)體3)化合物i-62。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm7.94(d,j＝6.7hz,2h)7.92(d,j＝6.7hz,2h)7.90(s,1h)7.05-7.11(m,4h)7.02(d,j＝8.8hz,2h)6.98(dd,j＝8.3,1.0hz,2h)6.93(d,j＝8.3hz,2h)5.59(d,j＝4.7hz,1h)5.56(d,j＝4.7hz,1h)4.89(五重峰,j＝5.0hz,2h)4.07(d,j＝5.8hz,2h)4.04(d,j＝5.8hz,2h)3.77(s,6h)3.75(s,6h)
lcuv-ms：99.4％(在220nm的純度)rt＝2.39minm/z＝630(方法1)
手性色譜(方法2)：81.5％(在220nm的純度)rt＝21min。
根據(jù)方案3制備的實(shí)施例
實(shí)施例12：2,4-二-(4-甲氧基-苯基)-1h-咪唑10的合成
在0℃，向市售4-甲氧基硫代苯甲酰胺8(1當(dāng)量,9.1g,60.59mmol)于200ml乙腈中的混懸液中添加25gk2co3(3當(dāng)量,181.78mmol)和12.49g溴-1-(4-甲氧基苯基)-乙酮9(0.9當(dāng)量,54.53mmol)。將混合物在0℃攪拌8h，然后溫?zé)嶂潦覝剡^夜。將反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?0℃并保持1h，冷卻至室溫并過濾。將固體用乙腈洗滌，然后用水研磨并過濾，得到12.6g2,4-二-(4-甲氧基-苯基)-1h-咪唑(74％產(chǎn)率)。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm12.35(br.s.,0.7h)12.22(br.s,0.3h)7.95(d,j＝8.8hz,2h)7.76(d,j＝8.0hz,1.4h)7.68(br.s,0.6h)7.56(s,0.7h)7.28(br.s.,0.3h)7.03(d,j＝8.8hz,2h)6.94(d,j＝8.0hz,2h)3.81(s,3h)3.77(s,3h)(2種互變異構(gòu)體形式70/30)
lcuv-ms：rt＝1.64minm/z＝281(方法5)
實(shí)施例13：2,4-二-(4-羥基-苯基)-1h-咪唑11的合成
在-70℃，向2,4-二-(4-甲氧基-苯基)-1h-咪唑(1當(dāng)量,1g,3.57mmol)于dcm(90ml)中的混懸液中慢慢添加10.7mlbbr3(3當(dāng)量,10.7mmol)。將溶液溫?zé)嶂潦覝夭嚢?h。將混合物冷卻至-70℃并添加水(100ml)。在室溫添加乙酸乙酯和飽和nahco3溶液，然后先后用水和鹽水洗滌分離出的有機(jī)層，然后用na2so4干燥，過濾并在真空壓力下濃縮。獲得0.8g2,4-二-(4-羥基-苯基)-1h-咪唑(89％產(chǎn)率)。
hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm12.17(br.s.,0.7h)12.07(br.s.,0.3h)9.61(br.s.,0.7h)9.47(br.s.,0.3h)9.26(br.s.,1h)7.81-7.85(m,0.6h)7.78(d,j＝8.6hz,1.4h)7.62(d,j＝8.3hz,1.4h)7.51-7.58(m,0.6h)7.43(s,0.7h)7.17(br.s.,0.3h)6.82(d,j＝8.6hz,2h)6.75(d,j＝8.3hz,2h)(2種互變異構(gòu)體形式70/30)
lcuv-ms：rt＝1.4minm/z＝253(方法5)
實(shí)施例14：2,4-二-[4-(叔丁基-二苯基-甲硅烷基氧基)-苯基]-1h-咪唑12的合成
向2,4-二-(4-羥基-苯基)-1h-咪唑(1當(dāng)量,1g,3.96mmol)于dcm中混懸液中添加0.809g咪唑(3當(dāng)量,11.89mmol)和2.63mltbdpsicl(2.5當(dāng)量,9.91mmol)。將混合物在室溫?cái)嚢?6h，然后過濾。先后用飽和nahco3溶液和水洗滌濾液，然后用na2so4干燥，過濾并在真空壓力下濃縮。用meoh研磨固體，過濾并用meoh洗滌固體，然后在50℃真空干燥。獲得1.86g2,4-二-[4-(叔丁基-二苯基-甲硅烷基氧基)-苯基]-1h-咪唑(64％產(chǎn)率)。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm12.26(s,0.7h)12.11(s,0.3h)7.66-7.72(m,10h)7.56(d,j＝8.6hz,2h)7.41-7.52(m,13h)6.79(d,j＝8.7hz,2h)6.72(d,j＝8.6hz,2h)1.06(s,9h)1.06(s,9h)(2種互變異構(gòu)體形式70/30)
lcuv-ms：rt＝2.91minm/z＝729(方法5)
實(shí)施例15：2,4-二-[4-(叔丁基-二苯基-甲硅烷基氧基)-苯基]-咪唑-1-羧酸叔丁酯13的合成
在室溫，向2,4-二-[4-(叔丁基-二苯基-甲硅烷基氧基)-苯基]-1h-咪唑(1當(dāng)量,1.3g,1.82mmol)于25ml乙腈中的混懸液中添加三乙胺(1.1當(dāng)量,280μl,2mmol)、(boc)2o(2當(dāng)量,0.82g,3.64mmol)和dmap(0.2當(dāng)量,44.5mg,0.36mmol)。將混合物攪拌4h，然后過濾并用乙腈洗滌固體。在50℃真空干燥固體。獲得2,4-二-[4-(叔丁基-二苯基-甲硅烷基氧基)-苯基]-咪唑-1-羧酸叔丁酯，產(chǎn)率41％。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm7.88(s,1h)7.65-7.73(m,8h)7.61(d,j＝8.6hz,2h)7.40-7.53(m,12h)7.34(d,j＝8.6hz,2h)6.78(d,j＝8.7hz,2h)6.74(d,j＝8.7hz,2h)1.30(s,9h)1.06(s,9h)1.05(s,9h)
lcuv-ms：rt＝2.66minm/z＝829(方法6)
實(shí)施例16：2,4-二-(4-羥基-苯基)-咪唑-1-羧酸叔丁酯14的合成
在0℃，將實(shí)施例15中所獲得的2,4-二-[4-(叔丁基-二苯基-甲硅烷基氧基)-苯基]-咪唑-1-羧酸叔丁酯(1當(dāng)量,1.09g,1.31mmol)溶于20mlthf中，然后添加2.63mltbaf(2當(dāng)量,2.63mmol)并將反應(yīng)混合物在0℃攪拌4h。添加乙酸乙酯和飽和nahco3溶液，然后用水和鹽水洗滌分離出的有機(jī)層，然后用na2so4干燥，過濾并在真空壓力下濃縮。通過硅膠色譜(洗脫劑：ch2cl2/meoh98/2至90/10)純化殘余物，蒸發(fā)后得到72％產(chǎn)率。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm9.73(br.s.,1h)9.47(br.s.,1h)7.85(s,1h)7.68(d,j＝8.7hz,2h)7.40(d,j＝8.6hz,2h)6.82(d,j＝8.7hz,2h)6.78(d,j＝8.6hz,2h)1.41(s,9h)
lcuv-ms：rt＝1.85minm/z＝353(方法5)
實(shí)施例17：2,4-二-{4-[2-(3,4-二甲氧基-苯基)-2-氧代-乙氧基]-苯基}-咪唑-1-羧酸叔丁酯15的合成
在室溫，將實(shí)施例16中所獲得的二酚(1當(dāng)量,450mg,1.28mmol)溶于10mldmf中，添加k2co3(6當(dāng)量,1.06g,7.66mmol)和2-溴-1-(3,4-二甲氧基-苯基)-乙酮(4當(dāng)量,1.32g,5.11mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?6h，然后過濾。減壓蒸發(fā)該溶液。然后將固體溶于dcm中并先后用飽和na2co3溶液和水洗滌。有機(jī)層經(jīng)na2so4干燥，過濾并減壓濃縮。通過硅膠色譜(洗脫劑：庚烷/acoet1/0至1/1)純化殘余物蒸發(fā)后得到2,4-二-{4-[2-(3,4-二甲氧基-苯基)-2-氧代-乙氧基]-苯基}-咪唑-1-羧酸叔丁酯，產(chǎn)率為66％。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm7.98(s,1h)7.79(d,j＝8.9hz,2h)7.74-7.77(m,1h)7.72-7.74(m,1h)7.49-7.54(m,4h)7.12(d,j＝8.6hz,1h)7.12(d,j＝8.5hz,2h)7.03(d,j＝8.8hz,2h)6.99(d,j＝8.9hz,2h)5.60(s,2h)5.55(s,2h)3.88(s,3h)3.87(s,3h)3.85(s,3h)3.84(s,3h)1.41(s,9h)
lcuv-ms：rt＝2.46minm/z＝709(方法5)
實(shí)施例18：1-(3,4-二甲氧基-苯基)-2-[4-(4-{4-[2-(3,4-二甲氧基-苯基)-2-氧代-乙氧基]-苯基}-1h-咪唑-2-基)-苯氧基]-乙酮的合成
將經(jīng)boc保護(hù)的二酮15(1當(dāng)量,0.55g,0.78mmol)溶于2mldcm中，然后添加3.88ml4nhcl于二噁烷中的溶液(20當(dāng)量,15.52mmol)。將混合物溫?zé)嶂?0℃并保持2h，然后冷卻至室溫，添加飽和nahco3溶液并將混懸液過濾。用水洗滌固體并在50℃真空干燥。獲得1-(3,4-二甲氧基-苯基)-2-[4-(4-{4-[2-(3,4-二甲氧基-苯基)-2-氧代-乙氧基]-苯基}-1h-咪唑-2-基)-苯氧基]-乙酮(式(ii)化合物)，產(chǎn)率為79％。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm14.64(br.s,2h)8.15(d,j＝9.0hz,2h)8.10(s,1h)7.89(d,j＝8.7hz,2h)7.74(dd,j＝8.4,1.9hz,2h)7.50(d,j＝1.9hz,2h)7.25(d,j＝9.0hz,2h)7.14(d,j＝8.7hz,2h)7.13(d,j＝8.4hz,2h)5.72(s,2h)5.63(s,2h)3.88(s,6h)3.85(s,6h)
lcuv-ms：rt＝1.97minm/z＝609(方法5)
實(shí)施例19：1-(3,4-二甲氧基-苯基)-2-[4-(2-{4-[2-(3,4-二甲氧基-苯基)-2-羥基-乙氧基]-苯基}-1h-咪唑-4-基)-苯氧基]-乙醇(異構(gòu)體1、2、3和4)化合物i-53的合成
在室溫，在氮?dú)庀拢驅(qū)嵤├?8中所獲得的二酮(1當(dāng)量,0.15mg,0.25mmol)于meoh中的混懸液中添加12mlnabh4(10當(dāng)量,0.093mg,2.46mmol)。在室溫16h后，添加5ml1nhcl，然后蒸發(fā)meoh并添加15mldcm。分出有機(jī)層并用水洗滌。分離后，有機(jī)相經(jīng)na2so4干燥，過濾并減壓濃縮。通過硅膠色譜(洗脫劑：dcm/meoh1/0至95/5)純化殘余物，蒸發(fā)后得到54mg1-(3,4-二甲氧基-苯基)-2-[4-(2-{4-[2-(3,4-二甲氧基-苯基)-2-羥基-乙氧基]-苯基}-1h-咪唑-4-基)-苯氧基]-乙醇(化合物i-53)。
產(chǎn)率：36％
1hnmr(400mhz,dmso-d6)(2種互變異構(gòu)體形式)δppm12.34(s,0.75h)12.23(s,0.25h)7.94(d,j＝8.8hz,0.5h)7.89(d,j＝8.8hz,1.5h)7.74(d,j＝8.7hz,1.5h)7.66(d,j＝8.7hz,0.5h)7.55(s,0.75h)7.28(s,0.25h)7.08-7.05(m,2h)7.02(d,j＝8.8hz,2h)6.95-7.00(m,2h)6.91-6.95(m,4h)5.56(d,j＝4.7hz,1.5h)5.53(d,j＝4.7hz,0.5h)4.88(五重峰,j＝5.4hz,2h)4.04(d,j＝5.9hz,2h)4.01(d,j＝5.9hz,2h)3.77(s,6h)3.75(s,6h)
lcuv-ms：95.6％純度(在210)rt＝1.42minm/z＝613(方法2)
手性色譜(方法2)：
異構(gòu)體1：23.7％(在210nm的純度)rt＝11.5min。
異構(gòu)體2+3：49.6％(在210nm的純度)rt＝13.6min。
異構(gòu)體4：26.7％(在210nm的純度)rt＝16.1min。
實(shí)施例20：1-(3,4-二甲氧基-苯基)-2-[4-(4-{4-[2-(3,4-二甲氧基-苯基)-2-氧代-乙氧基]-苯基}-1-甲基-1h-咪唑-2-基)-苯氧基]-乙酮的合成
在室溫，向?qū)嵤├?8所獲得的1-(3,4-二甲氧基-苯基)-2-[4-(4-{4-[2-(3,4-二甲氧基-苯基)-2-氧代-乙氧基]-苯基}-1h-咪唑-2-基)-苯氧基]-乙酮(1當(dāng)量)溶于dmf中的溶液中添加4當(dāng)量k2co3。將混懸液攪拌10min，然后添加適當(dāng)鹵代烷基衍生物(3當(dāng)量)并將混合物溫?zé)嶂?0-100℃且保持2h，冷卻至室溫16h，然后溫?zé)嶂?0-100℃并保持4h。向反應(yīng)混合物中添加水和乙酸乙酯，并用乙酸乙酯萃取水相。合并有機(jī)層，用水和鹽水萃取，然后用na2so4干燥，過濾并在真空壓力下濃縮。通過硅膠色譜(洗脫劑：ch2cl2/meoh100/0至95/5)純化殘余物，蒸發(fā)后得到1-(3,4-二甲氧基-苯基)-2-[4-(4-{4-[2-(3,4-二甲氧基-苯基)-2-氧代-乙氧基]-苯基}-1-甲基-1h-咪唑-2-基)-苯氧基]-乙酮(式(ii)化合物)。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm7.71-7.77(m,2h)7.67(d,j＝8.7hz,2h)7.64(d,j＝8.7hz,2h)7.57(s,1h)7.52(d,j＝1.9hz,1h)7.50(d,j＝1.9hz,1h)7.13(d,j＝4.8hz,1h)7.11(d,j＝4.8hz,1h)7.07(d,j＝8.8hz,2h)6.95(d,j＝8.8hz,2h)5.60(s,2h)5.51(s,2h)3.87(s,3h)3.87(s,3h)3.85(s,3h)3.84(s,3h)3.73(s,3h)
lcuv-ms：99.3％(uv在220nm的純度)rt＝1.45minm/z＝627(方法1)
實(shí)施例21：1-(3,4-二甲氧基-苯基)-2-[4-(4-{4-[2-(3,4-二甲氧基-苯基)-2-羥基-乙氧基]-苯基}-1-甲基-1h-咪唑-2-基)-苯氧基]-乙醇化合物i-58的合成
使用路線1中使用nabh4的還原方法，由1-(3,4-二甲氧基-苯基)-2-[4-(4-{4-[2-(3,4-二甲氧基-苯基)-2-氧代-乙氧基]-苯基}-1-甲基-1h-咪唑-2-基)-苯氧基]-乙酮起始，以獲得i-58，其為外消旋混合物。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm7.67(d,j＝8.7hz,2h)7.63(d,j＝8.7hz,2h)7.54(s,1h)7.02-7.09(m,4h)6.89-7.00(m,6h)5.57(d,j＝4.7hz,1h)5.52(d,j＝4.5hz,1h)4.82-4.92(m,2h)4.06(d,j＝5.8hz,2h)4.00(d,j＝5.8hz,2h)3.77(s,3h)3.77(s,3h)3.75(s,3h)3.74(s,3h)3.72(s,3h)
lcuv-ms：99.3％在220nm的純度rt＝1.45minm/z＝627(方法1)
手性色譜(方法2)：
異構(gòu)體1：24.6％(在210nm的純度)rt＝12.1min。
異構(gòu)體2：25.3％(在210nm的純度)rt＝13.3min。
異構(gòu)體3：24.6％(在210nm的純度)rt＝15.3min。
異構(gòu)體4：25.5％(在210nm的純度)rt＝16.9min。
雜環(huán)的制備
實(shí)施例22：2,4-二-(4-甲氧基-苯基)-噻唑的合成
將5g4-甲氧基硫代苯甲酰胺(1當(dāng)量,29.9mmol)和6.85g2-溴-1-(4-甲氧基苯基)-乙酮(1當(dāng)量,29.9mmol)溶于40mletoh中并在回流加熱2h。歷時(shí)2h冷卻至室溫后，濾除所形成的固體，用少量etoh洗滌并在40℃真空干燥過夜。獲得7.32g化合物2,4-二-(4-甲氧基-苯基)-噻唑(82％產(chǎn)率)。
1hnmr(250mhz,dmso-d6)δppm7.97(d,j＝8.8hz,2h)7.96(d,j＝8.8hz,2h)7.91(s,1h)7.08(d,j＝8.8hz,2h)7.03(d,j＝8.8hz,2h)3.84(s,3h)3.81(s,3h)
lcuv-ms：rt＝6.57min,m/z＝298,uv(220)純度＝97.7％(方法5)
實(shí)施例23：3-氯-4-(4-甲氧基-苯基)-噻吩20的合成
將10.68ml二氯噻吩19(1當(dāng)量,98.62mmol)溶于50mldcm中，然后添加32.32ml甲氧基苯(3當(dāng)量,295.86mmol)并在0℃攪拌。在該溫度按份添加12.49galcl3(0.95當(dāng)量,93.69mmol)并將混合物在5℃攪拌1h，然后溫?zé)嶂潦覝夭⒈３?h。將反應(yīng)混合物傾倒在水/冰上并用dcm萃取。合并有機(jī)層并用5％nahco3水溶液、水和鹽水洗滌。有機(jī)層經(jīng)na2so4干燥，過濾并減壓濃縮。通過硅膠色譜(洗脫劑：acoet/庚烷0/1至3/7)純化殘余物，蒸發(fā)后得到8.83g3-氯-4-(4-甲氧基-苯基)-噻吩(40％產(chǎn)率)。
1hnmr(250mhz,dmso-d6)δppm7.63(d,j＝8.8hz,2h)7.63(d,j＝1.8hz,1h)7.57(d,j＝1.8hz,1h)6.97(d,j＝8.8hz,2h)3.78(s,3h)
lcuv-ms：rt＝2.64minm/z＝225(方法5)
實(shí)施例24：2,4-二-(4-甲氧基-苯基)-噻吩21的合成
在密封管中，將3.33g實(shí)施例23中所獲得的3-氯-4-(4-甲氧基-苯基)-噻吩(1當(dāng)量,14.84mmol)溶于50ml二噁烷中，然后在室溫添加4.51g4-甲氧基苯基硼酸(2當(dāng)量,29.68mmol)、25mlh2o(93.5當(dāng)量,1387.7mmol)和9.67gcs2co3(2當(dāng)量,29.68mmol)。在ar下將混合物溫?zé)嶂?00℃且保持6h，然后冷卻18h至室溫。將沉淀物過濾并用acoet、h2o和meoh洗滌。將固體在50℃在真空壓力下干燥過夜，得到3g2,4-二-(4-甲氧基-苯基)-噻吩(68％產(chǎn)率)。
1hnmr(250mhz,dmso-d6)δppm7.79(d,j＝1.5hz,1h)7.70(d,j＝8.9hz,2h)7.65(d,j＝8.9hz,2h)7.63(d,j＝1.5hz,1h)7.01(d,j＝4.2hz,2h)6.98(d,j＝4.2hz,2h)3.80(s,3h)3.79(s,3h)
lcuv-ms：rt＝2.76minm/z＝297(方法5)
實(shí)施例25：3,5-二-(4-芐基氧基-苯基)-[1,2,4]噁二唑23的合成
在密封管中，向5g市售4-芐基氧基-苯甲腈22(1當(dāng)量,23.9mmol)于10ml乙二醇(ethyleneglycole)中的溶液中添加1.52gna2co3(0.6當(dāng)量,14.34mmol)、1.29ml水(3當(dāng)量,71.69mmol)和0.83mg鹽酸羥胺(0.5當(dāng)量,11.95mmol)。將混合物溫?zé)嶂?95℃并保持24h，然后添加水并將混懸液過濾。用水洗滌固體并在50℃在真空壓力下干燥。用meoh研磨固體，過濾并在40℃在真空壓力下干燥。獲得3,5-二-(4-芐基氧基-苯基)-[1,2,4]噁二唑，產(chǎn)率為37％。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δppm8.13(d,j＝8.7hz,2h)8.02(d,j＝8.7hz,2h)7.32-7.54(m,10h)7.28(d,j＝8.7hz,2h)7.22(d,j＝8.7hz,2h)5.25(s,2h)5.21(s,2h)
lcuv-ms：rt＝3.1minm/z＝435(方法5)
實(shí)施例26：2,5-二-(4-甲氧基-苯基)-噁唑26的合成
在氬氣下，在室溫，將1g市售5-(4-甲氧基苯基)-噁唑24(1當(dāng)量,5,71mmol)溶于12mldmf中。然后添加1.2g1-溴-4-甲氧基苯基25(1.2當(dāng)量,6.85mmol)、1.58gk2co3(2當(dāng)量,11.42mmol)、64.1mgpd(oac)2(0.05當(dāng)量,0.29mmol)和1.09gcui(1當(dāng)量,5.71mmol)并將反應(yīng)混合物溫?zé)嶂?40℃且保持6h。將混合物冷卻并經(jīng)用acoet洗滌的硅藻土過濾。有機(jī)層先后用h2o和鹽水洗滌，然后經(jīng)na2so4干燥，過濾并減壓濃縮。通過硅膠色譜(洗脫劑：dcm/meoh100/0至95/5)純化殘余物，蒸發(fā)后得到580mg2,5-二-(4-甲氧基-苯基)-噁唑(36％產(chǎn)率)。
1hnmr(250mhz,dmso-d6)δppm8.00(d,j＝8.9hz,2h)7.75(d,j＝8.9hz,2h)7.61(s,1h)7.10(d,j＝8.9hz,2h)7.06(d,j＝8.9hz,2h)3.84(s,3h)3.82(s,3h)
lcuv-ms：rt＝9.22min純度(uv220nm)97％mh+＝282(方法1)
下表示出了本發(fā)明化合物的一些實(shí)施例的化學(xué)結(jié)構(gòu)和物理性質(zhì)。
通常，將含有式(i)的最終化合物或中間體的反應(yīng)混合物進(jìn)行后處理，如果需要，然后通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)方法純化產(chǎn)物。例如，可使用公知的方法諸如結(jié)晶、色譜法或反相高效液相色譜法(rp-hplc)或其它分離方法(例如基于化合物的大小、電荷或疏水性的分離方法)純化合成的化合物。類似地，公知的方法諸如nmr、ir和質(zhì)譜(ms)可用于表征本發(fā)明化合物。
由于其化學(xué)結(jié)構(gòu)以對(duì)映異構(gòu)體或非對(duì)映異構(gòu)體形式出現(xiàn)，式(i)化合物可使用對(duì)映異構(gòu)純的起始物質(zhì)以對(duì)映異構(gòu)純的形式制備，或者可通過以下方式拆分成純對(duì)映異構(gòu)體：通過手性固定相上的色譜法，或者借助于手性對(duì)映異構(gòu)純的化合物諸如氨基酸衍生化，分離由此獲得的非對(duì)映異構(gòu)體，并除去手性輔助基團(tuán)。
應(yīng)當(dāng)注意，當(dāng)使用手性還原性催化劑(如方案1所述)制備化合物時(shí)，其手性構(gòu)型沒有通過直接分析方法確定。因此，當(dāng)獲得相同化合物的不同異構(gòu)體時(shí)，它們被命名為“異構(gòu)體1”、“異構(gòu)體2”…。然而，公知使用的不對(duì)稱催化劑4a、4b導(dǎo)致具有與所述催化劑相同手性的最終化合物。
“手性試劑”一欄明確了在由式(ii)或(iii)化合物至式(i)化合物的還原步驟中使用的試劑。
*純化方法：lc制備型色譜，2根柱chiralpakic(300x4.6mm)20μm。條件：100％meoh-1ml/min–210nm–25℃
**純化方法：lc制備型色譜，bergerprepsfc(150x21mm5μm)uv＝210nm。條件：2-乙基吡啶-co2/甲醇
75％/25％70ml/min100巴260注射4,1mg
使用根據(jù)所述方案(ab109903:mitotox復(fù)合物1oxphos活性微板測(cè)定法)的商品化測(cè)定，使一些本發(fā)明化合物進(jìn)行生物化學(xué)研究以證明其抑制分離的蛋白質(zhì)上的線粒體復(fù)合物1活性的能力。
為了評(píng)價(jià)所有化合物的抑制活性，開發(fā)體外測(cè)定法，其讀出(readout)與線粒體復(fù)合物1抑制直接相關(guān)。由于線粒體復(fù)合物1有助于形成與線粒體atp合成偶聯(lián)的膜電位，所以復(fù)合物1抑制直接導(dǎo)致抑制細(xì)胞中線粒體atp產(chǎn)生。在糖酵解抑制劑(碘乙酸鈉)和/或線粒體抑制劑(f0f1-atp酶抑制劑：寡霉素或線粒體解偶聯(lián)劑：fccp)存在下測(cè)量細(xì)胞atp含量，以確定依賴于糖酵解代謝或線粒體代謝的atp產(chǎn)生部分。為了證明其抑制線粒體atp產(chǎn)生的能力，以劑量效應(yīng)評(píng)價(jià)本發(fā)明化合物。
線粒體atp分析
評(píng)價(jià)本發(fā)明化合物在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系nci-h460上抑制線粒體atp產(chǎn)生的能力，證明其氧化模式。
樣品制備
使用promegacelltiterglo試劑盒和方案測(cè)量atp?？傊?，將1,000個(gè)細(xì)胞以40μl接種在384孔板中。24小時(shí)后，在化合物存在下用20μl培養(yǎng)基代替介質(zhì)：?jiǎn)为?dú)或與碘乙酸鈉(100μm)組合，將細(xì)胞一式五份用對(duì)照(pbs)、寡霉素a(10μg/ml)、fccp(30μm)或本發(fā)明化合物以劑量效應(yīng)處理。孵育1小時(shí)后，向每孔中添加20μlcellttiter-glotm反應(yīng)混合物，最終體積為40μl。然后用perkinelmerenvision分析板的發(fā)光。通過比較不同條件，確定了整體atp及糖酵解和線粒體atp的百分比。
計(jì)算結(jié)果
以碘乙酸鹽處理下的剩余atp減去基礎(chǔ)atp(碘乙酸鹽和寡霉素處理下的atp含量)計(jì)算線粒體atp產(chǎn)生?；衔飳?duì)nci-h460細(xì)胞中線粒體atp的抑制活性表示為抑制50％線粒體atp產(chǎn)生所需的濃度(ic50,m)。
對(duì)于atp，ic50值通常低于10-06m，更具體在2.610-9m至8.310-6m之間，并且對(duì)于復(fù)合物1，通常低于10-06m，更具體在1.4至1710nm之間。
進(jìn)行涉及本發(fā)明化合物的體外活性的其它測(cè)試。
由于尋求確定化合物在低氧條件下抑制hif1a穩(wěn)定化的功效，將本發(fā)明化合物進(jìn)行生物化學(xué)研究，以確定其在低氧下降低hep3b細(xì)胞中hif穩(wěn)定化的能力(蛋白質(zhì)印跡模型(westernblotmodel))。
蛋白質(zhì)印跡模型
樣品制備
將hep3b細(xì)胞以300000個(gè)細(xì)胞/孔接種于補(bǔ)充有谷氨酰胺(2mm)和10％fcs(胎牛血清)的2mlmem的6孔培養(yǎng)板中，并在37℃在5％co2存在下孵育。翌日，使細(xì)胞與化合物接觸，并在37℃，在95％濕度和5％co2中，在密閉的厭氧工作站(hypoxystationh35-donwhitley-aeschemunex)中，在1％o2的低氧條件下孵育6小時(shí)。
免疫印跡
洗滌細(xì)胞(pbs)并在sds樣品緩沖液中裂解。在4-12％bis-tris凝膠上分離蛋白質(zhì)(25μg)并轉(zhuǎn)移到聚偏二氟乙烯膜(millipore)上。將膜用針對(duì)hif-1a(bd轉(zhuǎn)導(dǎo))的小鼠單克隆抗體和小鼠單克隆抗-β肌動(dòng)蛋白(sigma)進(jìn)行印跡。通過增強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光(promega)用辣根過氧化物酶(hrp)抗小鼠抗體(sigma)檢測(cè)免疫反應(yīng)性條帶。
計(jì)算結(jié)果
化合物在低氧條件下降低hep3b中hif1-a穩(wěn)定化的能力的抑制活性表示為相對(duì)于對(duì)照的百分?jǐn)?shù)范圍，其中：
-表示hif1-a穩(wěn)定化的降低小于30％
*表示hif1-a穩(wěn)定化的降低在30至50％之間
**表示hif1-a穩(wěn)定化的降低在50至70％之間
***表示hif1-a穩(wěn)定化的降低大于70％
大多數(shù)化合物誘導(dǎo)hif1-a的穩(wěn)定化降低至少30％。
因此，顯而易見的是，本發(fā)明化合物對(duì)線粒體呼吸鏈的復(fù)合物1和hif1-a具有抑制活性。
因此，本發(fā)明化合物可用于制備藥物，尤其是作為線粒體呼吸鏈復(fù)合物1的抑制劑的藥物。
因此，在本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提供藥物，所述藥物包含式(i)化合物或其與式(i)化合物的藥學(xué)上可接受的酸的加成鹽。
這些藥物在治療上尤其用于治療和預(yù)防癌癥，特別是具有依賴于氧化磷酸化的代謝的癌，諸如肺腫瘤且更具體為非小細(xì)胞肺癌、激素依賴性乳腺腫瘤、卵巢腫瘤、肝癌、胃腸腫瘤、胰腺腫瘤和結(jié)腸腫瘤，過表達(dá)c-myc的腫瘤諸如淋巴瘤、乳腺癌或結(jié)腸癌，高度至中度分化的腫瘤，誘導(dǎo)原發(fā)性淋巴結(jié)和肺轉(zhuǎn)移的癌癥，在其發(fā)展和代謝適應(yīng)(糖酵解轉(zhuǎn)移)過程中描述為存在低氧區(qū)域的早期癌癥諸如黑素瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、頭頸癌、白血病。
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明涉及藥物組合物，其包含作為活性成分的本發(fā)明化合物。這些藥物組合物包含有效劑量的至少一種本發(fā)明化合物，或所述化合物的藥學(xué)上可接受的鹽，以及至少一種藥學(xué)上可接受的賦形劑。
根據(jù)所需藥物形式和給藥方法，從本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)賦形劑中選擇所述賦形劑。
在用于口服、舌下、皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、表面(topical)、局部(local)、氣管內(nèi)、鼻內(nèi)、經(jīng)皮或直腸給藥的本發(fā)明的藥物組合物中，上述式(i)的活性成分或其鹽可以單位給藥形式以與常規(guī)藥物賦形劑的混合物形式給藥于動(dòng)物和人類，以用于治療上述病癥或疾病。
適當(dāng)?shù)膯挝唤o藥形式包括口服形式，諸如片劑、軟或硬凝膠膠囊、粉劑、顆粒劑和口服溶液劑或混懸液；舌下、口腔、氣管內(nèi)、眼內(nèi)和鼻內(nèi)給藥形式；用于吸入、局部、透皮、皮下、肌內(nèi)或靜脈內(nèi)給藥的形式；直腸給藥形式和植入物。對(duì)于局部應(yīng)用，可在乳膏劑、凝膠劑、軟膏劑或洗劑中使用本發(fā)明化合物。
作為實(shí)例，呈片劑形式的本發(fā)明化合物的單位給藥形式可包含以下組分：
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明還提供了一種治療上述病理學(xué)的方法，其包括向患者給藥有效劑量的本發(fā)明化合物或一種其藥學(xué)上可接受的鹽。