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HER1靶向性的嵌合抗原受體和NKT細胞及其制法和應(yīng)用的制作方法

文檔序號:12198999閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種嵌合抗原受體(CAR),其特征在于,所述嵌合抗原受體以CD8的絞鏈區(qū)和跨膜區(qū)及CD137和CD3ζ的胞內(nèi)信號結(jié)構(gòu)域串聯(lián)而成的結(jié)構(gòu)為信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域。

2.如權(quán)利要求1嵌合抗原受體(CAR),其特征在于,所述嵌合抗原受體為HER1ScFv-CD8-CD137-CD3ζ,由HER1ScFv、CD8的鉸鏈區(qū)和跨膜區(qū)、CD137的胞內(nèi)信號結(jié)構(gòu)域和CD3ζ的胞內(nèi)信號結(jié)構(gòu)域串聯(lián)構(gòu)成。

3.如權(quán)利要求1嵌合抗原受體(CAR),其特征在于,所述嵌合抗原受體的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

4.如權(quán)利要求1嵌合抗原受體(CAR),其特征在于,所述CD8的鉸鏈區(qū)和跨膜區(qū)選自下組:

(A)具有SEQ ID NO:17所示氨基酸序列的多肽;

(B)具有與SEQ ID NO:17所示氨基酸序列≥80%同源性(優(yōu)選地,≥90%的同源性;等優(yōu)選地≥95%的同源性;最優(yōu)選地,≥97%的同源性)的多肽;(C)將SEQ ID NO:17中任一所示氨基酸序列經(jīng)過1-5個氨基酸殘基的取代、缺失或添加而形成的衍生多肽;和/或

所述CD137的胞內(nèi)信號結(jié)構(gòu)域選自下組:

(A)具有SEQ ID NO:18所示氨基酸序列的多肽;

(B)具有與SEQ ID NO:18所示氨基酸序列≥80%同源性(優(yōu)選地,≥90%的同源性;優(yōu)選地≥95%的同源性;最優(yōu)選地,≥97%的同源性),并且能夠轉(zhuǎn)導(dǎo)效應(yīng)子功能信號的多肽;

(C)將SEQ ID NO:18中任一所示氨基酸序列經(jīng)過1-5個氨基酸殘基的取代、缺失或添加而形成的衍生多肽;和/或

所述CD3ζ的胞內(nèi)信號結(jié)構(gòu)域選自下組:

(A)具有SEQ ID NO:19所示氨基酸序列的多肽;

(B)具有與SEQ ID NO:19所示氨基酸序列≥80%同源性(優(yōu)選地,≥90%的同源性;等優(yōu)選地≥95%的同源性;最優(yōu)選地,≥97%的同源性),并且能夠轉(zhuǎn)導(dǎo)效應(yīng)子功能信號的多肽;

(C)將SEQ ID NO:19中任一所示氨基酸序列經(jīng)過1-5個氨基酸殘基的取代、缺失或添加而形成的衍生多肽。

5.一種核酸分子,其特征在于,所述核酸分子編碼權(quán)利要求1所述的嵌合抗原受體(CAR)。

6.一種載體,其特征在于,所述的載體含有權(quán)利要求2中所述的核酸分子;優(yōu)選地,所述載體為慢病毒載體。

7.一種細胞,其特征在于,所述的細胞中含有權(quán)利要求6中所述的載體或染色體中整合有外源的權(quán)利要求5中所述的核酸分子。

8.一種藥物組合物,其特征在于,所述組合物含有藥學(xué)上可接受的載體以及權(quán)利要求1中所述的嵌合抗原受體、權(quán)利要求5中所述的核酸分子、權(quán)利要求6中所述的載體、或權(quán)利要求7中所述的宿主細胞。

9.權(quán)利要求1中所述的嵌合抗原受體、權(quán)利要求5中所述的核酸分子、權(quán)利要求6中所述的載體、或權(quán)利要求7中所述的宿主細胞的用途,其特征在于,用于制備治療腫瘤的藥物或制劑;優(yōu)選地,所述的腫瘤包括肺癌。

10.一種治療疾病的方法,其特征在于,包括給需要治療的對象施用適量的權(quán)利要求1中所述的嵌合抗原受體、權(quán)利要求5中所述的核酸分子、權(quán)利要求6中所述的載體、權(quán)利要求7中所述的細胞、或權(quán)利要求8中所述的藥物組合物。

11.一種嵌合抗原受體,其特征在于,所述嵌合抗原受體以CD8的hinge區(qū)和跨膜區(qū)及CD137和CD3ζ的胞內(nèi)信號結(jié)構(gòu)域串聯(lián)而成的結(jié)構(gòu)為信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域,所述信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示。

12.一種NKT細胞群,其特征在于,所述NKT細胞群中:

CD3+CD8+NKT細胞/CD3+CD4+NKT細胞的比率為8/1~2/1(優(yōu)選為6/1~3/1);并且CD3+CD56+NKT細胞/CD3+CD8+NKT細胞的比率為1/18~10/18(優(yōu)選為5/18~10/18,如可以為1/8、1/6、1/4、1/3)。

13.一種制備權(quán)利要求13所述的NKT細胞群的方法,其特征在于,所述方法包括步驟:

(a)將單個核細胞(PBMCs)培養(yǎng)于NKT細胞培養(yǎng)基中,所述NKT細胞培養(yǎng)基含有抗CD3單克隆抗體、白介素-2、和白介素-15,進行第一階段培養(yǎng)。

14.如權(quán)利要求13所述的方法,其特征在于,所述方法還包括步驟:

(b)將所述第一階段培養(yǎng)的細胞轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶中,加入NKT細胞培養(yǎng)基,進行第二階段培養(yǎng),其中,所述NKT細胞培養(yǎng)基中含有白介素-2;優(yōu)選地,所述白介素-2的濃度為200U/mL-800U/mL(優(yōu)選為300U/mL-700U/mL,更優(yōu)選為400U/mL-600U/mL,最優(yōu)選為約500U/mL)。

15.一種信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域序列,所述信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域由CD8的絞鏈區(qū)和跨膜區(qū)及CD137和CD3ζ的胞內(nèi)信號結(jié)構(gòu)域串聯(lián)而成。

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