一種云芝多糖的提取工藝的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種云芝多糖的提取工藝，其從云芝中提取出水溶性多糖，經(jīng)脫色后，加入纖維素酶和中性蛋白酶，其中酶濃度為1.5%的纖維素酶的加入量是上清液的4-6%，酶濃度為1.5%的蛋白酶的加入量是上清液的2-4%，調(diào)節(jié)pH6.5，溫度45-55℃，時(shí)間60-90min，減壓濃縮至原體積的70%，抽濾取其清液；而后用無(wú)水乙醇洗滌、沉淀，干燥得云芝提取物，其中云芝多糖含量為32%-45%。本發(fā)明經(jīng)過(guò)雙酶酶解發(fā)酵提取云芝提取物，其工藝簡(jiǎn)單，成本較低，提取率高。特別是通過(guò)纖維素酶進(jìn)行破壁處理，蛋白酶進(jìn)行去蛋白處理，避免了大分子蛋白帶來(lái)的溶解度低等缺點(diǎn)，增加了云芝多糖的生物活性，能更好地被人體吸收和利用。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
一種云芝多糖的提取工藝

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種云芝有效成分的提取方法，具體地說(shuō)是一種云芝多糖的提取工藝。

【背景技術(shù)】
[0002]云芝多糖是從擔(dān)子菌雜色云芝菌種提取的多糖，也可以從人工培養(yǎng)的菌絲體中分離得到。具有多種生物活性。研究表明云芝多糖具有免疫調(diào)節(jié)功能，是良好的免疫增強(qiáng)劑，具有增強(qiáng)免疫細(xì)胞功能和識(shí)別能力，提高IgM的量等作用；云芝多糖同時(shí)具有保肝護(hù)肝作用，可顯著降低血清轉(zhuǎn)氨酶，對(duì)肝組織病變和肝壞死有明顯的修復(fù)作用。相關(guān)的多糖制劑已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于臨床。傳統(tǒng)的云芝多糖的提取方法有熱水提取法，其將云芝浸泡在熱水中，從云芝中提取出水溶性多糖。但此方法耗時(shí)長(zhǎng)，多糖的提取率較低，成本高。特別是云芝提取物中大分子蛋白質(zhì)含量高，因云芝多糖是含蛋白質(zhì)的葡聚糖，而大分子的蛋白質(zhì)會(huì)影響其溶解性和吸收率，影響其生物活性。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種工藝簡(jiǎn)單，提取率高，成本低的云芝多糖的提取工藝。
[0004]本發(fā)明解決上述技術(shù)問(wèn)題采用的技術(shù)方案是:一種云芝多糖的提取工藝，其特征在于:其具體步驟如下:
1)稱(chēng)取一定質(zhì)量的云芝粉末，按料液比1:20-25加入的水，浸泡60-90min，于50-60°C恒溫水浴下回流，浸提兩次；
2)將步驟I)所得溶液離心過(guò)濾，取其上清液，然后經(jīng)過(guò)樹(shù)脂吸附脫去顏色，靜置24h；
3)將步驟2)得到的上清液加入纖維素酶和中性蛋白酶進(jìn)行酶解，其中酶濃度為1.5%的纖維素酶的加入量是上清液的4-6%，酶濃度為1.5%的蛋白酶的加入量是上清液的2-4%，調(diào)節(jié)pH6.5，溫度45-55°C，時(shí)間60_90min，減壓濃縮至原體積的70%，抽濾取其清液；
4)將步驟3)得到的清液用四倍體積的無(wú)水乙醇洗滌、沉淀，干燥得云芝提取物，其中云芝多糖含量為32%-45%。
[0005]進(jìn)一步，本發(fā)明所述步驟3)中上清液加入纖維素酶和中性蛋白酶進(jìn)行酶解，其中酶濃度為1.5%的纖維素酶的加入量是上清液的5.5%，酶濃度為1.5%的蛋白酶的加入量是上清液的3%，調(diào)節(jié)pH6.5，溫度50°C，時(shí)間90min。
[0006]本發(fā)明經(jīng)過(guò)雙酶酶解發(fā)酵提取云芝提取物，其中云芝多糖含量為32%_45%。對(duì)照現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明工藝簡(jiǎn)單，成本較低，提取率高。特別是通過(guò)纖維素酶進(jìn)行破壁處理，蛋白酶進(jìn)行去蛋白處理，避免了大分子蛋白帶來(lái)的溶解度低等缺點(diǎn)，增加了云芝多糖的生物活性，能更好地被人體吸收和利用。
【具體實(shí)施方式】
[0007]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明。
[0008]本發(fā)明一種云芝多糖的提取工藝，其步驟是:云芝樣品烘干一〉粉碎(過(guò)80目篩)一> 水解一> 保濕浸提一> 尚心一> 上清液一> 大孔樹(shù)脂吸附一> 酶解一> 減壓濃縮一>醇沉一〉烘干。具體步驟為:
I)稱(chēng)取一定質(zhì)量的云芝粉末，按料液比1:20-25加入的水，浸泡60-90min，于50-60°C恒溫水浴下回流，浸提兩次。
[0009]2)將步驟I)所得溶液離心過(guò)濾，取其上清液，然后經(jīng)過(guò)樹(shù)脂吸附脫去顏色，靜置24h。
[0010]3)將步驟2)得到的上清液加入纖維素酶和中性蛋白酶進(jìn)行酶解，其中兩種酶濃度均為1.5%，酶濃度為1.5%的纖維素酶的加入量是上清液的4-6%，酶濃度為1.5%的蛋白酶的加入量是上清液的2-4%。調(diào)節(jié)pH6.5，溫度45-55°C，時(shí)間60_90min，減壓濃縮至原體積的70%，抽濾取其清液。利用酶反應(yīng)具有高度專(zhuān)一性等特性，根據(jù)植物藥材細(xì)胞壁的構(gòu)成，纖維素酶能將細(xì)胞壁的組成成分水解或降解，破壞細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，使有效成分充分暴露出來(lái)，溶解、混懸或膠溶于溶劑中，從而達(dá)到提取細(xì)胞內(nèi)有效成分的目的。中性蛋白酶能進(jìn)行去蛋白處理，使蛋白質(zhì)沉淀，減少水溶性多糖中大分子蛋白的殘留。
[0011]4)將步驟3)得到的清液用四倍體積的無(wú)水乙醇洗滌、沉淀，干燥得云芝提取物，其中云芝多糖含量為32%-45%。
[0012]本發(fā)明從云芝中提取出水溶性多糖，經(jīng)脫色后，加入纖維素酶和中性蛋白酶。利用酶反應(yīng)具有高度專(zhuān)一性等特性，根據(jù)植物藥材細(xì)胞壁的構(gòu)成，纖維素酶能將細(xì)胞壁的組成成分水解或降解，破壞細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，使有效成分充分暴露出來(lái)，溶解、混懸或膠溶于溶劑中，從而達(dá)到提取細(xì)胞內(nèi)有效成分的目的。中性蛋白酶能進(jìn)行去蛋白處理，使蛋白質(zhì)沉淀，減少水溶性多糖中大分子蛋白的殘留。
[0013]本發(fā)明經(jīng)過(guò)雙酶酶解發(fā)酵提取云芝提取物，其中云芝多糖含量為32%_45%。其工藝簡(jiǎn)單，成本較低，提取率高。特別是通過(guò)纖維素酶進(jìn)行破壁處理，蛋白酶進(jìn)行去蛋白處理，避免了大分子蛋白帶來(lái)的溶解度低等缺點(diǎn)，增加了云芝多糖的生物活性，能更好地被人體吸收和利用。
[0014]實(shí)施例1:一種云芝多糖提取工藝，其具體步驟為:
I)稱(chēng)取處理的云芝粉末200g，加入4000ml的水，浸泡90min，于50°C恒溫水浴下回流，浸提兩次。
[0015]2)將步驟I)所得溶液離心過(guò)濾取其上清液，然后經(jīng)過(guò)大孔樹(shù)脂吸附脫去顏色，靜置 24h。
[0016]3)將步驟2)得到的上清液加入纖維素酶和蛋白酶，其中酶濃度為1.5%的纖維素酶的加入量是上清液的5.5%，酶濃度為1.5%的蛋白酶的加入量是上清液的3%，調(diào)節(jié)pH6.5，溫度50°C，時(shí)間90min，減壓濃縮至原體積的70%，抽濾取其清液。
[0017]4)將步驟3)清液用四倍體積的無(wú)水乙醇洗滌、沉淀，干燥得白色粉末云芝提取物24g。經(jīng)測(cè)定，其中云芝多糖含量為45%。
[0018]云芝多糖含量測(cè)定方法是:稱(chēng)取干燥恒重的葡萄糖50g，置250ml容量瓶中加水溶解后稀釋成母液。分別吸取母液5.0、10.0、15.0,20.0,25.0ml加水稀釋成50ml。取各濃度的標(biāo)準(zhǔn)液Iml于試管中加入5%苯酹溶液0.3ml,再加濃硫酸3ml,搖勻,放置20min,以蒸懼水為空白，在490nm處測(cè)吸光度。并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。然后稱(chēng)取上述制備的云芝多糖提取物250mg加蒸餾水適量使溶解，置1ml量瓶中加蒸餾水定容至刻度線(xiàn)。然后再取Iml用蒸餾水定容至50ml，搖勻，測(cè)其吸光值。測(cè)定其中云芝多糖含量為45%。
[0019]實(shí)施例2:—種云芝多糖提取工藝，其具體步驟為:
I)稱(chēng)取處理的云芝粉末100g，加入2000ml的水，浸泡60min，于55°C恒溫水浴下回流，浸提兩次。
[0020]2)將步驟I)所得溶液離心過(guò)濾取其上清液，然后經(jīng)過(guò)大孔樹(shù)脂吸附脫去顏色，靜置 24h。
[0021]3)將步驟2)得到的上清液加入纖維素酶和蛋白酶，其中酶濃度為1.5%的纖維素酶的加入量是上清液的4%，酶濃度為1.5%的蛋白酶的加入量是上清液的4%，調(diào)節(jié)pH6.5，溫度45°C，時(shí)間60min，減壓濃縮至原體積的70%，抽濾取其清液。
[0022]4)將步驟3)清液用四倍體積的無(wú)水乙醇洗滌、沉淀，干燥得白色粉末云芝提取物10.5g，經(jīng)測(cè)定，其中云芝多糖含量為32%。
[0023]實(shí)施例3:—種云芝多糖提取工藝，其具體步驟為:
I)稱(chēng)取處理的云芝粉末200g，加入5000ml的水，浸泡80min，于60°C恒溫水浴下回流，浸提兩次。
[0024]2)將步驟I)所得溶液離心過(guò)濾取其上清液，然后經(jīng)過(guò)大孔樹(shù)脂吸附脫去顏色，靜置 24h。
[0025]3)將步驟2)得到的上清液加入纖維素酶和蛋白酶，其中酶濃度為1.5%的纖維素酶的加入量是上清液的6%，酶濃度為1.5%的蛋白酶的加入量是上清液的2%，調(diào)節(jié)pH6.5，溫度55°C，時(shí)間80min，減壓濃縮至原體積的70%，抽濾取其清液。
[0026]4)將步驟3)清液用四倍體積的無(wú)水乙醇洗滌、沉淀，干燥得白色粉末云芝提取物25g，經(jīng)測(cè)定，其中云芝多糖含量為38%。
[0027]通過(guò)對(duì)實(shí)施例1-3進(jìn)行云芝多糖含量測(cè)定，結(jié)合含量和云芝提取物得率，確定實(shí)施例I為優(yōu)化工藝。
【權(quán)利要求】
1.一種云芝多糖的提取工藝，其特征在于:其具體步驟如下: 1)稱(chēng)取一定質(zhì)量的云芝粉末，按料液比1:20-25加入的水，浸泡60-90min，于50-60°C恒溫水浴下回流，浸提兩次； 2)將步驟1)所得溶液離心過(guò)濾，取其上清液，然后經(jīng)過(guò)樹(shù)脂吸附脫去顏色，靜置24h； 3)將步驟2)得到的上清液加入纖維素酶和中性蛋白酶進(jìn)行酶解，其中酶濃度為1.5%的纖維素酶的加入量是上清液的4-6%，酶濃度為1.5%的蛋白酶的加入量是上清液的2-4%，調(diào)節(jié)pH6.5，溫度45-55°C，時(shí)間60_90min，減壓濃縮至原體積的70%，抽濾取其清液； 4)將步驟3)得到的清液用四倍體積的無(wú)水乙醇洗滌、沉淀，干燥得云芝提取物，其中云芝多糖含量為32%-45%。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的云芝多糖的提取工藝，其特征在于:所述步驟3)中上清液加入纖維素酶和中性蛋白酶進(jìn)行酶解，其中酶濃度為1.5%的纖維素酶的加入量是上清液的.5.5%，酶濃度為1.5%的蛋白酶的加入量是上清液的3%，調(diào)節(jié)pH6.5，溫度50°C，時(shí)間90min。
【文檔編號(hào)】C08B37/00GK104387496SQ201410785842
【公開(kāi)日】2015年3月4日 申請(qǐng)日期:2014年12月18日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月18日
【發(fā)明者】王麗娜, 蔡傳文, 張偉 申請(qǐng)人:威海百合生物技術(shù)股份有限公司