一種超聲輔助-催化合成灰樹(shù)花多糖硫酸酯的方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種超聲輔助-催化合成灰樹(shù)花多糖硫酸酯的方法，該方法以灰樹(shù)花多糖為原料，以三氧化硫-吡啶作為磺化劑，在4-二甲氨基吡啶的催化作用下制備灰樹(shù)花多糖硫酸酯。進(jìn)一步地，該方法還包括將灰樹(shù)花多糖在N，N-二甲基甲酰胺中的超聲溶脹的步驟。本發(fā)明采用超聲輔助-催化的方法合成灰樹(shù)花多糖硫酸酯，降低了酯化溫度，縮短了酯化時(shí)間，提高了硫酸基團(tuán)取代度，取代度為1.07～2.13。采用本發(fā)明的方法反應(yīng)條件安全可控，反應(yīng)速度較快。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種超聲輔助-催化合成灰樹(shù)花多糖硫酸酯的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種超聲輔助-催化合成灰樹(shù)花多糖硫酸酯的方法，屬于中藥多糖結(jié)構(gòu)修飾【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]人體細(xì)胞的各種活動(dòng)與糖類(lèi)密切相關(guān)，多糖是生物體內(nèi)除蛋白質(zhì)和核酸以外的又一類(lèi)重要的生物大分子，具有非特異性免疫增強(qiáng)功能，能提高機(jī)體免疫力，具有抗感染、抗腫瘤、抗氧化和防治病毒性肝炎、艾滋病等功能。多糖的生物活性與其結(jié)構(gòu)、分子量、溶解度等因素密切相關(guān)，特別是引入某些化學(xué)基團(tuán)使糖鏈的柔韌性和空間結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，從而引起多糖溶解度及生物活性發(fā)生改變或產(chǎn)生新的活性。
[0003]多糖的化學(xué)修飾主要有硫酸化、磷酸化等，而天然多糖硫酸酯，如硫酸軟骨素、肝素等，較易溶于水，具有抗凝血、抗病毒等生理功能。研究發(fā)現(xiàn)有的自身無(wú)抗病毒活性的多糖經(jīng)硫酸酯化之后表現(xiàn)出抗病毒特性，而對(duì)于具有抗病毒活性的某些多糖硫酸酯，在脫去其硫酸基團(tuán)之后，其抗病毒活性大大降低。這使得硫酸化多糖的研究受到重視。[0004]灰樹(shù)花(Grifola frondosa)為擔(dān)子菌亞門(mén)、多孔菌科植物，也叫栗子蘑、蓮花菌、千佛菌等，日本則稱(chēng)之為“舞茸”，其主要活性成份是灰樹(shù)花多糖，因其有β-α — 6)分支，具有顯著的生理活性，具有抑制腫瘤生長(zhǎng)、防止腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移、防止正常細(xì)胞癌變等作用。但前期研究結(jié)果表明，灰樹(shù)花多糖的生物活性與其分子量正相關(guān)，而分子量較大的灰樹(shù)花多糖片段難溶于水，而研究發(fā)現(xiàn)對(duì)灰樹(shù)花多糖進(jìn)行硫酸化改性之后，不僅其溶解度大大提聞，同時(shí)其抗癌活性也有很大提聞提聞。
[0005]專(zhuān)利文獻(xiàn)CN1563102A公開(kāi)了一種灰樹(shù)花多糖硫酸酯及其制備方法與應(yīng)用，其中灰樹(shù)花多糖硫酸酯的制備是通過(guò)將灰樹(shù)花水不溶性多糖加入到磺化劑中，在50-75°C下酯化反應(yīng)2-8小時(shí)，經(jīng)乙醇沉淀，中和，洗滌，干燥得到。該方法中所使用的磺化劑為氯磺酸與甲酰胺或吡啶反應(yīng)生成的。采用該方法得到的產(chǎn)品的分子量為10-20萬(wàn)道爾頓，有機(jī)硫含量為8-18%。在該專(zhuān)利文獻(xiàn)中多糖硫酸酯的合成采用氯磺酸作為磺化試劑，但是氯磺酸是一種強(qiáng)氧化劑，遇水會(huì)發(fā)生劇烈分解，放出大量的熱，有濃煙，有爆炸性危險(xiǎn)，屬于限制性化學(xué)品。氯磺酸與吡啶或甲酰胺反應(yīng)制備磺化劑需要在冰浴中進(jìn)行，氯磺酸需緩慢滴加，而且要嚴(yán)格控制反應(yīng)體系不能含水，操作要求較高，控制失當(dāng)容易發(fā)生爆炸危險(xiǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的在于提供一種新的安全可控的超聲輔助-催化合成灰樹(shù)花多糖硫酸酯的方法，降低酯化溫度，縮短酯化時(shí)間，提高硫酸基團(tuán)取代度。
[0007]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案:
[0008]一種超聲輔助-催化合成灰樹(shù)花多糖硫酸酯的方法，以灰樹(shù)花多糖為原料，以三氧化硫-吡啶作為磺化劑，在4- 二甲氨基吡啶的催化作用下制備灰樹(shù)花多糖硫酸酯。
[0009]優(yōu)選地，該方法還包括將灰樹(shù)花多糖在N，N- 二甲基甲酰胺中超聲溶脹的步驟。[0010]具體來(lái)講，本發(fā)明的方法包括以下步驟:
[0011](I)將三氧化硫-吡啶復(fù)合物溶解在有機(jī)溶劑吡啶中，得到酯化劑均相液A ;
[0012](2)將灰樹(shù)花多糖置于N，N-二甲基甲酰胺中，在頻率為40~IOOHz條件下超聲溶脹5~120min，得到灰樹(shù)花多糖的分散液B ;然后將催化劑4- 二甲氨基吡啶溶解在分散液B中，得到含4- 二甲氨基吡啶的灰樹(shù)花多糖的分散液C ；
[0013](3)將分散液C緩慢加入酯化劑均相液A中，在30~75°C油浴中反應(yīng)I~6h，反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫,將酯化反應(yīng)后的溶液中和至pH值為6~8,靜置,抽濾；
[0014](4)濾液濃縮后用乙醇進(jìn)行沉淀，沉淀經(jīng)乙醇洗滌后溶解在水中，溶液進(jìn)行透析純化，純化后的溶液經(jīng)濃縮后用乙醇進(jìn)行沉淀，沉淀經(jīng)洗滌、冷凍干燥得到灰樹(shù)花多糖硫酸酯。
[0015]優(yōu)選地，所述步驟(1)中有機(jī)溶劑吡啶的用量相對(duì)于三氧化硫-吡啶復(fù)合物的用量為3~10mL/g。
[0016]優(yōu)選地，所述步驟⑵中N，N-二甲基甲酰胺的用量相對(duì)于灰樹(shù)花多糖的用量為10~50mL/g;4-二甲氨基吡啶與灰樹(shù)花多糖的質(zhì)量比為1: 2~1: 20。
[0017]優(yōu)選地，所述步驟(3)中灰樹(shù)花多糖與三氧化硫-吡啶復(fù)合物的質(zhì)量比為1: 2~I: 10。
[0018]優(yōu)選地 ，所述步驟(3)中酯化反應(yīng)后的溶液用質(zhì)量百分比濃度為2%~10%的NaOH溶液進(jìn)行中和。
[0019]優(yōu)選地，所述步驟(4)中濾液或溶液濃縮時(shí)均濃縮至原體積的1/8~1/30，濃縮液用乙醇沉淀時(shí)，加入相對(duì)于濃縮液2~6倍體積的乙醇。
[0020]優(yōu)選地，所述步驟(4)中的透析純化過(guò)程為:將溶液裝入截留量為5kD~IOkD的透析袋中，流水透析12~36h ;然后用超純水透析48~96h,超純水透析過(guò)程中每3~6h
換一次水。
[0021 ] 優(yōu)選地，所述冷凍干燥的條件為:在-50~_20°C、I~5Pa條件下冷凍干燥24~36h。
[0022]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于:
[0023]本發(fā)明采用超聲輔助-催化的方法合成灰樹(shù)花多糖硫酸酯，降低了酯化溫度，縮短了酯化時(shí)間，提高了硫酸基團(tuán)取代度，取代度為1.07~2.13。
[0024]本發(fā)明采用三氧化硫-吡啶復(fù)合物作為磺化劑合成灰樹(shù)花多糖硫酸酯，只需將三氧化硫-吡啶復(fù)合物室溫溶解于吡啶試劑中即可得到磺化劑，水的存在對(duì)安全性不會(huì)有影響，因而反應(yīng)條件相對(duì)溫和可控，反應(yīng)速度較快。
【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0025]圖1為灰樹(shù)花多糖和灰樹(shù)花多糖硫酸酯的紅外譜圖，其中曲線I為灰樹(shù)花多糖原糖的紅外譜圖，曲線2為灰樹(shù)花多糖硫酸酯的紅外譜圖，橫坐標(biāo)為波數(shù)，cm~，縱坐標(biāo)為透
光度％。
【具體實(shí)施方式】
[0026]以下通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明，但本發(fā)明并不限于以下實(shí)施例。[0027]如無(wú)特殊說(shuō)明，以下實(shí)施例中所用原料和試劑均可從商業(yè)途徑獲得，所涉及的儀器和設(shè)備均為本領(lǐng)域常規(guī)設(shè)備。以下實(shí)施例中所使用的灰樹(shù)花多糖的相對(duì)分子量為20kD~30kD，純度在90%以上，可以從市場(chǎng)購(gòu)買(mǎi)，也可以采用以下方法進(jìn)行制備:
[0028](I)將灰樹(shù)花子實(shí)體粉碎，過(guò)5~20目篩，稱(chēng)取顆粒度為5~20目的灰樹(shù)花子實(shí)體粉，加10倍超純水浸泡30min，置于微波萃取釜中，1400W微波輻射30min，收集微波萃取液和萃余物；
[0029](2)稱(chēng)取適量木瓜蛋白酶、纖維素酶和果膠酶，按質(zhì)量比為2: 2: I的比例混合，超純水溶解，得酶解液，備用；
[0030](3)將微波萃取液和萃余物在一容器中混合，置于50°C水浴，按復(fù)合酶與灰樹(shù)花粉質(zhì)量比為0.4%的比例加入酶解液，調(diào)pH為6.0,酶解90分鐘；酶提取液100°C滅酶IOmin ;滅酶結(jié)束，冷卻至室溫，過(guò)濾，取濾液，得酶提多糖溶液；
[0031](4)每升酶解液加40g濕S-8樹(shù)脂，在40°C條件下吸附脫色；脫色多糖溶液，經(jīng)截留分子量分別為30kD和20kD的微濾組件和超濾組件，得純化灰樹(shù)花多糖；純化灰樹(shù)花多糖用95%乙醇沉淀，靜置24h，4000r/min離心15min，傾去上清，得沉淀，沉淀乙醇洗滌，離心，傾去上清，得沉淀，反復(fù)3次，真空干燥，得灰樹(shù)花多糖。
[0032]實(shí)施例1
[0033](I)稱(chēng)取6.0g三氧化硫-吡啶復(fù)合物于配有冷凝、攪拌、加熱裝置的反應(yīng)器中，向其中加入60mL吡啶，室溫?cái)嚢瑁谷趸?吡啶復(fù)合物充分溶解，得酯化劑均相液A。
`[0034](2)稱(chēng)取經(jīng)脫色、分級(jí)純化處理的灰樹(shù)花多糖3.0g,向其中加入45mL N，N-二甲基甲酰胺(DMF)，于超聲反應(yīng)器中，在頻率為40Hz條件下超聲溶脹60min，得到灰樹(shù)花多糖分散液B。
[0035](3)室溫下將1.0g4_ 二甲氨基吡啶(DMAP)溶解于灰樹(shù)花多糖分散液B中，得到含DMAP的灰樹(shù)花多糖分散液C。
[0036](4)酯化反應(yīng):將步驟(3)得到的灰樹(shù)花多糖分散液C緩慢加入A中，在50°C油浴中反應(yīng)3h，反應(yīng)結(jié)束，冰水冷卻至室溫，5% NaOH調(diào)pH值為6，靜置，抽濾，濾液旋蒸濃縮至原體積的1/15，再加入6倍體積的乙醇，充分混合，室溫靜置12小時(shí)，離心，棄去上清液，沉淀物用乙醇洗滌，抽濾，沉淀蒸餾水溶解，得溶液D。
[0037](5)將溶液D裝入截留量為5kD的透析袋中，流水透析24h，超純水透析72h，每6h換一次水。透析結(jié)束，透析袋內(nèi)的液體旋蒸濃縮至原體積的1/10，濃縮液中加入5倍體積的乙醇進(jìn)行沉淀，室溫靜置過(guò)夜，離心，抽濾，濾餅乙醇洗滌，在_40°C、5Pa條件下冷凍干燥36h，得到灰樹(shù)花多糖硫酸酯，其中硫酸根的取代度為1.07。
[0038]如圖1所示為灰樹(shù)花多糖和灰樹(shù)花多糖硫酸酯的紅外譜圖，其中曲線I為灰樹(shù)花多糖原糖的紅外譜圖，曲線2為灰樹(shù)花多糖硫酸酯的紅外譜圖。橫坐標(biāo)為波數(shù)，cnT1，縱坐標(biāo)為透光度％?？梢钥闯龌覙?shù)花多糖硫酸酯在1231CHT1和1050CHT1處的吸收分別為S = O的彎曲振動(dòng)和伸縮振動(dòng)，在813CHT1處的吸收峰為C-O-S的拉伸振動(dòng)，在2930CHT1處的羥基吸收峰明顯降低，表明部分羥基己被硫酸基團(tuán)取代。
[0039]實(shí)施例2
[0040](I)稱(chēng)取9.0g三氧化硫-吡啶復(fù)合物于配有冷凝、攪拌、加熱裝置的反應(yīng)器中，向其中加入60mL吡啶，室溫?cái)嚢?，使三氧化?吡啶復(fù)合物充分溶解，得酯化劑均相液A。[0041](2)稱(chēng)取經(jīng)脫色、分級(jí)純化處理的灰樹(shù)花多糖3.0g,向其中加入45mL N，N_ 二甲基甲酰胺(DMF)，于超聲反應(yīng)器中，在頻率為80Hz條件下超聲溶脹40min，得到灰樹(shù)花多糖分散液B。
[0042](3)室溫下將1.0g DMAP溶解于灰樹(shù)花多糖分散液B中，得到含DMAP的灰樹(shù)花多糖分散液C。
[0043](4)酯化反應(yīng):將步驟(3)得到的灰樹(shù)花多糖分散液C緩慢加入A中，在60°C油浴中反應(yīng)3h，反應(yīng)結(jié)束，冰水冷卻至室溫，5% NaOH調(diào)pH值為6，靜置，抽濾，濾液旋蒸濃縮至原體積的1/15，再加入5倍體積的乙醇，充分混合，室溫靜置12小時(shí)，離心，棄去上清液，沉淀物用乙醇洗滌，抽濾，沉淀蒸餾水溶解，得溶液D。
[0044](5)將溶液D裝入截留量為5kD的透析袋中，流水透析24h，超純水透析72h，每6h換一次水。透析結(jié)束，透析袋內(nèi)的液體旋蒸濃縮至原體積的1/10，濃縮液中加入5倍體積的乙醇進(jìn)行沉淀，室溫靜置過(guò)夜，離心，抽濾，濾餅乙醇洗滌，在_40°C、5Pa條件下冷凍干燥36h，得到灰樹(shù)花多糖硫酸酯，其中硫酸根的取代度為1.43。
[0045]實(shí)施例3
[0046](I)稱(chēng)取12g三氧化硫-吡啶復(fù)合物于配有冷凝、攪拌、加熱裝置的反應(yīng)器中，向其中加入60mL吡啶，室溫?cái)嚢?，使三氧化?吡啶復(fù)合物充分溶解，得酯化劑均相液A。
[0047](2)稱(chēng)取經(jīng)脫色、分級(jí)純化處理的灰樹(shù)花多糖3g，向其中加入45mLN，N- 二甲基甲酰胺(DMF)，于超聲反應(yīng)器中，在頻率為60Hz條件下超聲溶脹60min，得到灰樹(shù)花多糖分散液B。
[0048](3)室溫下將1.0g DMAP溶解于灰樹(shù)花多糖分散液B中，得到含DMAP的灰樹(shù)花多糖分散液C。
[0049](4)酯化反應(yīng):將步驟(3)得到的灰樹(shù)花多糖分散液C緩慢加入A中，在70°C油浴中反應(yīng)4h，反應(yīng)結(jié)束，冰水冷卻至室溫，5% NaOH調(diào)pH值為6，靜置，抽濾，濾液旋蒸濃縮至原體積的1/15，再加入5倍體積的乙醇，充分混合，室溫靜置12小時(shí)，離心，棄去上清液，沉淀物用乙醇洗滌，抽濾，沉淀蒸餾水溶解，得溶液D。
[0050](5)將溶液D裝入截留量為5kD的透析袋中，流水透析24h，超純水透析72h，每6h換一次水。透析結(jié)束，透析袋內(nèi)的液體旋蒸濃縮至原體積的1/15，濃縮液中加入6倍體積的乙醇進(jìn)行沉淀，室溫靜置過(guò)夜，離心，抽濾，濾餅乙醇洗滌，在_30°C、5Pa條件下冷凍干燥36h，得到灰樹(shù)花多糖硫酸酯，其中硫酸根的取代度為1.98。
[0051]實(shí)施例4
[0052](I)稱(chēng)取12g三氧化硫-吡啶復(fù)合物于配有冷凝、攪拌、加熱裝置的反應(yīng)器中，向其中加入60mL吡啶，室溫?cái)嚢瑁谷趸?吡啶復(fù)合物充分溶解，得酯化劑均相液A。
[0053](2)稱(chēng)取經(jīng)脫色、分級(jí)純化處理的灰樹(shù)花多糖3g，向其中加入45mL N，N_ 二甲基甲酰胺(DMF)，于超聲反應(yīng)器中，在頻率為60Hz條件下超聲溶脹60min，得到灰樹(shù)花多糖分散液B。
[0054](3)室溫下將1.5g DMAP溶解于灰樹(shù)花多糖分散液B中，得到含DMAP的灰樹(shù)花多糖分散液C。
[0055](4)酯化反應(yīng):將步驟(3)得到的灰樹(shù)花多糖分散液C緩慢加入A中，在70°C油浴中反應(yīng)4h，反應(yīng)結(jié)束，冰水冷卻至室溫，5% NaOH調(diào)pH值為6，靜置，抽濾，濾液旋蒸濃縮至原體積的1/15，再加入5倍體積的乙醇，充分混合，室溫靜置12小時(shí)，離心，棄去上清液，沉淀物用乙醇洗滌，抽濾，沉淀蒸餾水溶解，得溶液D。
[0056](5)將溶液D裝入截留量為5kD的透析袋中，流水透析24h，超純水透析72h，每6h換一次水。透析結(jié)束，透析袋內(nèi)的液體旋蒸濃縮至原體積的1/15，濃縮液中加入6倍體積的乙醇進(jìn)行沉淀，室溫靜置過(guò)夜，離心，抽濾，濾餅乙醇洗滌，在_30°C、5Pa條件下冷凍干燥36h，得到灰樹(shù)花多糖硫酸酯，其中硫酸根的取代度為2.13。
[0057]比較例I
[0058](I)稱(chēng)取12g三氧化硫-吡啶復(fù)合物于配有冷凝、攪拌、加熱裝置的反應(yīng)器中，向其中加入60mL吡啶，室溫?cái)嚢?，使三氧化?吡啶復(fù)合物充分溶解，得酯化劑均相液A。
[0059](2)稱(chēng)取經(jīng)脫色、分級(jí)純化處理的灰樹(shù)花多糖3g，向其中加入45mL N，N_ 二甲基甲酰胺(DMF)，于超聲反應(yīng)器中，在頻率為60Hz條件下超聲溶脹60min，得到灰樹(shù)花多糖分散液B。
[0060](3)酯化反應(yīng):將灰樹(shù)花多糖分散液B緩慢加入A中，在70°C油浴中反應(yīng)4h，反應(yīng)結(jié)束，冰水冷卻至室溫，5% NaOH調(diào)pH值為6，靜置，抽濾，濾液旋蒸濃縮至原體積的1/15，再加入5倍體積的乙醇，充分混合，室溫靜置12小時(shí)，離心，棄去上清液，沉淀物用乙醇洗滌，抽濾，沉淀蒸餾水溶解，得溶液D。
[0061](4)將溶液D裝入截留量為5kD的透析袋中，流水透析24h，超純水透析72h，每6h換一次水。透析結(jié)束，透析袋內(nèi)的液體旋蒸濃縮至原體積的1/15，濃縮液中加入6倍體積的乙醇進(jìn)行沉淀，室溫靜置過(guò)夜，離心，抽濾，濾餅乙醇洗滌，在_30°C、5Pa條件下冷凍干燥36h，得到灰樹(shù)花多糖硫酸酯，其中硫酸根的取代度為0.86。
[0062]比較例2`[0063](I)稱(chēng)取12g三氧化硫-吡啶復(fù)合物于配有冷凝、攪拌、加熱裝置的反應(yīng)器中，向其中加入60mL吡啶，室溫?cái)嚢?，使三氧化?吡啶復(fù)合物充分溶解，得酯化劑均相液A。
[0064](2)稱(chēng)取經(jīng)脫色、分級(jí)純化處理的灰樹(shù)花多糖3g，向其中加入45mL N，N_ 二甲基甲酰胺(DMF)，攪拌12h，使灰樹(shù)花多糖充分容散，得到灰樹(shù)花多糖分散液B。
[0065](3)酯化反應(yīng):將灰樹(shù)花多糖分散液B緩慢加入A中，在70°C油浴中反應(yīng)4h，反應(yīng)結(jié)束，冰水冷卻至室溫，5% NaOH調(diào)pH值為6，靜置，抽濾，濾液旋蒸濃縮至原體積的1/15，再加入5倍體積的乙醇，充分混合，室溫靜置12小時(shí)，離心，棄去上清液，沉淀物用乙醇洗滌，抽濾，沉淀蒸餾水溶解，得溶液D。
[0066](4)將溶液D裝入截留量為5kD的透析袋中，流水透析24h，超純水透析72h，每6h換一次水。透析結(jié)束，透析袋內(nèi)的液體旋蒸濃縮至原體積的1/15，濃縮液中加入6倍體積的乙醇進(jìn)行沉淀，室溫靜置過(guò)夜，離心，抽濾，濾餅乙醇洗滌，在_30°C、5Pa條件下冷凍干燥36h，灰樹(shù)花多糖硫酸酯，其中硫酸根的取代度為0.69。
[0067]如表1所示，為以上實(shí)施例1~4及比較例1、2在相應(yīng)工藝條件下合成灰樹(shù)花多糖硫酸酯的數(shù)據(jù)結(jié)果。
[0068]表1
[0069]
【權(quán)利要求】
1.一種超聲輔助-催化合成灰樹(shù)花多糖硫酸酯的方法，其特征在于，以灰樹(shù)花多糖為原料，以三氧化硫-吡啶作為磺化劑，在4- 二甲氨基吡啶的催化作用下制備灰樹(shù)花多糖硫酸酯。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的超聲輔助-催化合成灰樹(shù)花多糖硫酸酯的方法，其特征在于，還包括將灰樹(shù)花多糖在N，N- 二甲基甲酰胺中的超聲溶脹的步驟。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的超聲輔助-催化合成灰樹(shù)花多糖硫酸酯的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟: (1)將三氧化硫-吡啶復(fù)合物溶解在有機(jī)溶劑吡啶中，得到酯化劑均相液A； (2)將灰樹(shù)花多糖置于1^二甲基甲酰胺中，在頻率為40-100取條件下超聲溶脹5~120min,得到灰樹(shù)花多糖的分散液B ;然后將催化劑4- 二甲氨基吡啶溶解在分散液B中，得到含4- 二甲氨基吡啶的灰樹(shù)花多糖的分散液C ； (3)將分散液C緩慢加入酯化劑均相液A中，在30~75°C油浴中反應(yīng)I~6h，反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫,將酯化反應(yīng)后的溶液中和至pH值為6~8,靜置,抽濾； (4)濾液濃縮后用乙醇進(jìn)行沉淀，沉淀經(jīng)乙醇洗滌后溶解在水中，溶液進(jìn)行透析純化，純化后的溶液經(jīng)濃縮后用乙醇進(jìn)行沉淀，沉淀經(jīng)洗滌、冷凍干燥得到灰樹(shù)花多糖硫酸酯。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的超聲輔助-催化合成灰樹(shù)花多糖硫酸酯的方法，其特征在于，所述步驟⑴中有機(jī)溶劑 吡啶的用量相對(duì)于三氧化硫-吡啶復(fù)合物的用量為3~10mL/g。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的超聲輔助-催化合成灰樹(shù)花多糖硫酸酯的方法，其特征在于，所述步驟⑵中N，N-二甲基甲酰胺的用量相對(duì)于灰樹(shù)花多糖的用量為10~50mL/g ;4-二甲氨基吡啶與灰樹(shù)花多糖的質(zhì)量比為1: 2~1: 20。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的超聲輔助-催化合成灰樹(shù)花多糖硫酸酯的方法，其特征在于，所述步驟(3)中灰樹(shù)花多糖與三氧化硫-吡啶復(fù)合物的質(zhì)量比為1: 2~1: 10。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的超聲輔助-催化合成灰樹(shù)花多糖硫酸酯的方法，其特征在于，所述步驟(3)中酯化反應(yīng)后的溶液用質(zhì)量百分比濃度為2%~10%的NaOH溶液進(jìn)行中和。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的超聲輔助-催化合成灰樹(shù)花多糖硫酸酯的方法，其特征在于，所述步驟(4)中濾液或溶液濃縮時(shí)均濃縮至原體積的1/8~1/30，濃縮液用乙醇沉淀時(shí)，加入相對(duì)于濃縮液2~6倍體積的乙醇。
9.根據(jù)權(quán)利要求3所述的超聲輔助-催化合成灰樹(shù)花多糖硫酸酯的方法，其特征在于，所述步驟(4)中的透析純化過(guò)程為:將溶液裝入截留量為5kD~IOkD的透析袋中，流水透析12~36h ;然后用超純水透析48~96h,用超純水透析過(guò)程中每3~6h換一次水。
10.根據(jù)權(quán)利要求3所述的超聲輔助-催化合成灰樹(shù)花多糖硫酸酯的方法，其特征在于，所述冷凍干燥的條件為:在-50~-20°C、1~5Pa條件下冷凍干燥24~36h。
【文檔編號(hào)】C08B37/00GK103819573SQ201410082155
【公開(kāi)日】2014年5月28日 申請(qǐng)日期:2014年3月7日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月7日
【發(fā)明者】劉紅梅 申請(qǐng)人:北京聯(lián)合大學(xué)