一種低蛋白高純度海參多糖的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種低蛋白高純度海參多糖的制備方法，其是選取干海參為原料，粉碎后加入正己烷或石油醚進(jìn)行萃取脫脂處理；脫脂處理后的海參粉去除有機(jī)溶劑，加入乙醇萃取去除皂苷；干燥后置于酶解灌中，加入水，充分溶脹后，加入動(dòng)物蛋白水解酶和胰蛋白酶進(jìn)行一次酶解，滅酶；所得到的海參酶解液離心，超濾后所得的超濾液置于酶解罐中加入風(fēng)味蛋白水解酶進(jìn)行酶解處理，滅酶；調(diào)節(jié)pH值后冷卻低溫，靜置，離心，超濾，收集截留液干燥，得海參多糖干品。本發(fā)明的制備方法工藝合理，技術(shù)先進(jìn)，操作可行；采用本制備方法制取的海參多糖，經(jīng)測(cè)定：蛋白含量低于0.5%。
【專利說(shuō)明】一種低蛋白高純度海參多糖的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及多糖的制備，尤其是一種低蛋白高純度海參多糖的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]我們知道，海參多糖是海參體壁的重要組成成分，大量的文獻(xiàn)證實(shí)海參多糖具有抗凝血、抗腫瘤、增強(qiáng)免疫力、降血脂等多種生物活性。因此，在功能性食品和海洋藥物開(kāi)發(fā)方面展現(xiàn)出了良好的應(yīng)用前景。
[0003]海參多糖在海參體壁中以糖肽鍵與蛋白相連。蛋白是影響海參多糖品質(zhì)的主要雜質(zhì)，采用適當(dāng)方法降低產(chǎn)物中蛋白含量是制備高純度海參多糖的關(guān)鍵。去除蛋白的方法有多種，通常采用Sevage法及三氯乙酸法等，然而這些方法在去除蛋白時(shí)效率低，同時(shí)會(huì)造成多糖的大量損失，不利于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。
[0004]目前，還未見(jiàn)過(guò)到制備低蛋白含量海參多糖的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]為了克服現(xiàn)有技術(shù)中Sevage法及三氯乙酸法等方法制取多糖存在去除蛋白時(shí)效率低、多糖損失大的不足，本發(fā)明提供一種工藝合理、技術(shù)先進(jìn)、操作可行的低蛋白高純度海參多糖的制備方法。該制備方法是米用酶解_超濾_酶解_超濾偶聯(lián)法制備海參多糖，其提取所得多糖蛋白質(zhì)含量極低，具有純度高，免疫原性低等特性。
[0006]本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案是:一種低蛋白高純度海參多糖的制備方法，其特征在于:經(jīng)過(guò)下列工藝步驟:
Cl)原料選取與處理選取干海參為原料，進(jìn)行粉碎處理，過(guò)100~300目篩，得海參粉，備用；
(2)脫脂處理將步驟(1)所得到的海參粉加入正己烷或石油醚進(jìn)行萃取脫脂處理6~IOh ;其中，所述的正己燒或石油醚的用量為海參粉質(zhì)量的4~10倍；
(3)脫除皂苷將步驟(2)脫脂處理后的海參粉去除正己烷或石油醚，加入濃度為60~85%的乙醇萃取處理24~48h，脫除皂苷；其中，所述的乙醇的用量為脫脂處理后的海參粉質(zhì)量的6~20倍；
(4)一次酶解將步驟(3)中脫除皂苷后的海參粉去除乙醇，真空干燥后置于酶解灌中，加入脫除皂苷后的海參粉質(zhì)量的15~40倍的純凈水，充分溶脹后加熱至100°C保持20~30min，殺滅微生物；冷卻至45~55°C，加入動(dòng)物蛋白水解酶酶解2~3h ;其中，所述的動(dòng)物蛋白水解酶的酶用量為脫除皂苷后的海參粉質(zhì)量的0.3~5% ;調(diào)節(jié)pH值7.0~8.0,加入胰蛋白酶酶解5~6h，其中，所述的胰蛋白酶的酶用量為脫除皂苷后的海參粉質(zhì)量的0.3~5% ;酶解完畢后，加熱至100°C保持滅酶20~30min，得海參一次酶解液；
(5)—次超濾將步驟(4)中所得到的海參一次酶解液離心，收取上清液；將上清液通過(guò)分子量為1000ODa的濾膜超濾，收集截留液，得海參一次超濾液；
(6)二次酶解將步驟(5)收集的海參一次超濾液置于酶解罐中，加入超濾液體積的3~6倍的純凈水，加熱至45~55°C，加入風(fēng)味蛋白水解酶酶解3~4h，其中，所述的風(fēng)味蛋白水解酶的酶用量為脫除皂苷后的海參粉質(zhì)量的0.3~5% ;酶解完畢后，加熱至100°C保持滅酶20~30min ;得海參二次酶解液；
(7)二次超濾將步驟(6)所得到海參二次酶解液調(diào)節(jié)pH值4~5，冷卻至2~5°C，靜置6~12h ;離心，收取上清液；將上清液通過(guò)分子量為1000ODa的濾膜超濾，收集截留液，得海參二次超濾液；
(8)干燥將步驟(7)所得到的海參二次超濾液噴霧干燥，得海參多糖干品。
[0007]本發(fā)明選取干海參為原料，粉碎后加入正己烷或石油醚進(jìn)行萃取脫脂處理；脫脂處理后的海參粉去除有機(jī)溶劑，加入乙醇萃取去除皂苷；干燥后置于酶解灌中，加入水，充分溶脹后，加入動(dòng)物蛋白水解酶和胰蛋白酶進(jìn)行一次酶解，滅酶；所得到的海參酶解液離心，超濾后所得的超濾液置于酶解罐中加入風(fēng)味蛋白水解酶進(jìn)行酶解處理，滅酶；調(diào)節(jié)PH值后冷卻低溫，靜置，離心，超濾，收集截留液干燥，得海參多糖干品。本發(fā)明采用酶膜偶聯(lián)的方法，其蛋白質(zhì)脫除率高，對(duì)多糖損失少；其采用有機(jī)溶劑正己烷或石油醚進(jìn)行脫脂處理；采用乙醇萃取去除皂苷，使所得到的海參多糖純度高。采用本發(fā)明的制備方法制取的海參多糖，經(jīng)測(cè)定:蛋白含量低于0.5%。并經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，所提取所得海參多糖免疫原性低。本發(fā)明的低蛋白高純度海參多糖的制備方法，其工藝合理，技術(shù)先進(jìn)，操作可行，適合大規(guī)模工廠化生產(chǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0008]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明。
[0009]實(shí)施例1
一種低蛋白高純度海參多糖的制備方法，經(jīng)過(guò)下列工藝步驟:
(1)原料選取與處理選取干海參為原料，進(jìn)行粉碎處理，過(guò)200目篩，得海參粉，備
用；
(2)脫脂處理將步驟(1)所得到的海參粉加入海參粉質(zhì)量6倍的正己烷，萃取脫脂處理8h ；
(3)脫除皂苷將步驟(2)脫脂處理后的海參粉抽濾去除正己烷，再加入濃度為80%的乙醇萃取處理36h，脫除皂苷；其中，乙醇的用量為脫脂處理后的海參粉質(zhì)量的14倍；
(4)一次酶解將步驟(3)中脫除皂苷后的海參粉去除乙醇，真空干燥，干燥后置于酶解灌中，加入脫除皂苷后的海參粉質(zhì)量的30倍的純凈水，充分溶脹后加熱至100°C保持25min,殺滅微生物；冷卻至50°C，加入脫除皂苷后的海參粉質(zhì)量1.5%的動(dòng)物蛋白水解酶酶解2.2h ;調(diào)節(jié)pH值7.5，加入脫除皂苷后的海參粉質(zhì)量1%的胰蛋白酶酶解5.5h ;酶解完畢后，加熱至100°C保持滅酶25min，得海參一次酶解液；
(5)一次超濾將步驟(4)中所得到的海參一次酶解液采用三足式離心機(jī)，控制轉(zhuǎn)速2000rpm,離心，收取上清液；上清液再采用碟片式離心機(jī)，控制轉(zhuǎn)速4000rpm,離心，收取上清液；將上清液通過(guò)分子量為1000ODa的濾膜超濾，收集截留液，得海參一次超濾液；
(6)二次酶解將步驟(5)收集的海參一次超濾液置于酶解罐中，加入超濾液體積的4倍的純凈水，加熱至50°C`，加入脫除皂苷后的海參粉質(zhì)量2%的風(fēng)味蛋白水解酶酶解3.5h ；酶解完畢后，加熱至100°C保持滅酶25min ;得海參二次酶解液；(7)二次超濾將步驟(6)所得到海參二次酶解液調(diào)節(jié)pH值4.5，冷卻至4°C，靜置IOh ;采用管式離心機(jī)，控制轉(zhuǎn)速12000rpm，離心，收取上清液；將上清液通過(guò)分子量為1000ODa的濾膜超濾，收集截留液，得海參二次超濾液；
(8)干燥將步驟(7)所得到的海參二次超濾液噴霧干燥，得海參多糖干品。
[0010]本實(shí)施例所給出的制備方法，其工藝合理，技術(shù)先進(jìn)，操作可行；采用本制備方法制取的海參多糖，經(jīng)測(cè)定:蛋白含量為0.40%。
[0011]實(shí)施例2
一種低蛋白高純度海參多糖的制備方法，經(jīng)過(guò)下列工藝步驟:
(1)原料選取與處理選取干海參為原料，進(jìn)行粉碎處理，過(guò)300目篩，得海參粉，備
用；
(2)脫脂處理將步驟(1)所得到的海參粉加入海參粉質(zhì)量10倍的石油醚，萃取脫脂處理6h ； (3)脫除皂苷將步驟(2)脫脂處理后的海參粉離心去除石油醚，加入濃度為85%的乙醇萃取處理24h，脫除皂苷；其中，所述的乙醇的用量為脫脂處理后的海參粉質(zhì)量的6倍；
(4)一次酶解將步驟(3)中脫除皂苷后的海參粉抽濾去除乙醇，海參粉真空干燥，干燥后置于酶解灌中，加入脫除皂苷后的海參粉質(zhì)量的40倍的純凈水，充分溶脹后加熱至100°C保持20min，殺滅微生物；冷卻至55°C，加入脫除皂苷后的海參粉質(zhì)量5%的動(dòng)物蛋白水解酶酶解2h ;調(diào)節(jié)pH值8.0，加入脫除皂苷后的海參粉質(zhì)量0.3%的胰蛋白酶酶解6h ;酶解完畢后，加熱至100°C保持滅酶30min，得海參一次酶解液；
(5)一次超濾將步驟(4)中所得到的海參一次酶解液采用三足式離心機(jī)，控制轉(zhuǎn)速2000rpm，離心，收集上清液；上清液再采用管式離心機(jī)，控制轉(zhuǎn)速12000rpm，離心，收取上清液；將上清液通過(guò)分子量為1000ODa的濾膜超濾，收集截留液，得海參一次超濾液；
(6)二次酶解將步驟(5)收集的海參一次超濾液置于酶解罐中，加入超濾液體積的6倍的純凈水，加熱至55°C，加入脫除皂苷后的海參粉質(zhì)量5%的風(fēng)味蛋白水解酶酶解3h ;酶解完畢后，加熱至100°C保持滅酶30min ;得海參二次酶解液；
(7)二次超濾將步驟(6)所得到海參二次酶解液調(diào)節(jié)pH值5，冷卻至5°C，靜置6h;采用管式離心機(jī)，控制轉(zhuǎn)速12000rpm，離心，收取上清液；將上清液通過(guò)分子量為1000ODa的濾膜超濾，收集截留液，得海參二次超濾液；
(8)干燥將步驟(7)所得到的海參二次超濾液噴霧干燥，得海參多糖干品。
[0012]本實(shí)施例所給出的制備方法，其工藝合理，技術(shù)先進(jìn)，操作可行；采用本制備方法制取的海參多糖，經(jīng)測(cè)定:蛋白含量為0.44%。
[0013]實(shí)施例3
一種低蛋白高純度海參多糖的制備方法，經(jīng)過(guò)下列工藝步驟:
(1)原料選取與處理選取干海參為原料，進(jìn)行粉碎處理，過(guò)100目篩，得海參粉，備
用；
(2)脫脂處理將步驟(1)所得到的海參粉加入海參粉質(zhì)量4倍的石油醚，萃取脫脂處理 IOh ；
(3)脫除皂苷將步驟(2)脫脂處理后的海參粉離心去除石油醚，加入濃度為60%的乙醇萃取處理48h，脫除皂苷；其中，所述的乙醇的用量為脫脂處理后的海參粉質(zhì)量的20倍；(4)一次酶解將步驟(3)中脫除皂苷后的海參粉抽濾去除去除乙醇，海參粉真空干燥后置于酶解灌中，加入脫除皂苷后的海參粉質(zhì)量的15倍的純凈水，充分溶脹后加熱至100°C保持30min，殺滅微生物；冷卻至45°C，加入脫除皂苷后的海參粉質(zhì)量0.3%的動(dòng)物蛋白水解酶酶解3h ;調(diào)節(jié)pH值7.0，加入脫除皂苷后的海參粉質(zhì)量5%的胰蛋白酶酶解5h ;酶解完畢后，加熱至100°C保持滅酶20min，得海參一次酶解液；
(5)一次超濾將步驟(4)中所得到的海參一次酶解液采用三足式離心機(jī)，控制轉(zhuǎn)速2000rpm，離心，收集上清液；上清液再采用管式離心機(jī)，控制轉(zhuǎn)速12000rpm，離心，收取上清液；將上清液通過(guò)分子量為1000ODa的濾膜超濾，收集截留液，得海參一次超濾液；
(6)二次酶解將步驟(5)收集的海參一次超濾液置于酶解罐中，加入超濾液體積的3倍的純凈水，加熱至45°C，加入脫除皂苷后的海參粉質(zhì)量0.3%的風(fēng)味蛋白水解酶酶解4h ；酶解完畢后，加熱至100°C保持滅酶20min ;得海參二次酶解液； (7)二次超濾將步驟(6)所得到海參二次酶解液調(diào)節(jié)pH值4，冷卻至2°C，靜置12h;采用管式離心機(jī)，控制轉(zhuǎn)速12000rpm，離心，收取上清液；將上清液通過(guò)分子量為1000ODa的濾膜超濾，收集截留液，得海參二次超濾液；
(8)干燥將步驟(7)所得到的海參二次超濾液噴霧干燥，得海參多糖干品。
[0014]本實(shí)施例所給出的制備方法，其工藝合理，技術(shù)先進(jìn)，操作可行；采用本制備方法制取的海參多糖，經(jīng)測(cè)定:蛋白含量為0.42%。
【權(quán)利要求】
1.一種低蛋白高純度海參多糖的制備方法，其特征在于:經(jīng)過(guò)下列工藝步驟: (1)原料選取與處理選取干海參為原料，進(jìn)行粉碎處理，過(guò)100~300目篩，得海參粉，備用； (2)脫脂處理將步驟(1)所得到的海參粉加入正己烷或石油醚進(jìn)行萃取脫脂處理.6~IOh ;其中，所述的正己燒或石油醚的用量為海參粉質(zhì)量的4~10倍； (3)脫除皂苷將步驟(2)脫脂處理后的海參粉去除正己烷或石油醚，加入濃度為60~85%的乙醇萃取處理24~48h，脫除皂苷；其中，所述的乙醇的用量為脫脂處理后的海參粉質(zhì)量的6~20倍； (4)一次酶解將步驟(3)中脫除皂苷后的海參粉去除乙醇，真空干燥后置于酶解灌中，加入脫除皂苷后的海參粉質(zhì)量的15~40倍的純凈水，充分溶脹后加熱至100°C保持20~30min，殺滅微生物；冷卻至45~55°C，加入動(dòng)物蛋白水解酶酶解2~3h ;其中，所述的動(dòng)物蛋白水解酶的酶用量為脫除皂苷后的海參粉質(zhì)量的0.3~5% ;調(diào)節(jié)pH值7.0~8.0,加入胰蛋白酶酶解5~6h，其中，所述的胰蛋白酶的酶用量為脫除皂苷后的海參粉質(zhì)量的.0.3~5% ;酶解完畢后，加熱至100°C保持滅酶20~30min，得海參一次酶解液； (5)—次超濾將步驟(4)中所得到的海參一次酶解液離心，收取上清液；將上清液通過(guò)分子量為1000ODa的濾膜超濾，收集截留液，得海參一次超濾液； (6)二次酶解將步驟(5)收集的海參一次超濾液置于酶解罐中，加入超濾液體積的3~6倍的純凈水，加熱至45~55°C，加 入風(fēng)味蛋白水解酶酶解3~4h，其中，所述的風(fēng)味蛋白水解酶的酶用量為脫除皂苷后的海參粉質(zhì)量的0.3~5% ;酶解完畢后，加熱至100°C保持滅酶20~30min ;得海參二次酶解液； (7)二次超濾將步驟(6)所得到海參二次酶解液調(diào)節(jié)pH值4~5，冷卻至2~5°C，靜置6~12h ;離心，收取上清液；將上清液通過(guò)分子量為1000ODa的濾膜超濾，收集截留液，得海參二次超濾液； (8)干燥將步驟(7)所得到的海參二次超濾液噴霧干燥，得海參多糖干品。
【文檔編號(hào)】C08B37/00GK103724442SQ201310649424
【公開(kāi)日】2014年4月16日 申請(qǐng)日期:2013年12月6日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月6日
【發(fā)明者】袁文鵬, 張綿松, 胡煒, 劉昌衡, 孫永軍, 孟秀梅, 王志偉, 鞠文明, 唐曉波, 畢春雨 申請(qǐng)人:山東好當(dāng)家海洋發(fā)展股份有限公司, 山東省科學(xué)院生物研究所