專利名稱：一種肝素鈉的生產(chǎn)新工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種肝素鈉的生產(chǎn)新工藝。
背景技術(shù)：
肝素鈉是一種粘多糖硫酸酯雷抗凝血藥，主要用于治療急性心梗塞，能夠減輕不穩(wěn)定型心絞痛、抗血栓形成及降血脂、降膽固醇的作用。1916年人們在肝臟中首次發(fā)現(xiàn)了肝素，接著，又發(fā)現(xiàn)該物質(zhì)廣泛的存在于動物肝、肺和小腸粘膜中。由于我國豬資源豐富，小腸粘膜價格低廉，因此，人們常以豬小腸為原料生產(chǎn)肝素鈉。目前，傳統(tǒng)的肝素鈉提取工藝包括原料處理、酶解提取、離子交換吸附、洗滌、洗 脫、沉淀蛋白、精制，該工藝存在水解不完全、產(chǎn)品純度低和生產(chǎn)效率低等缺點。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種肝素鈉的生產(chǎn)新工藝。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為一種肝素鈉的生產(chǎn)新工藝，其特征在于在于包括以下步驟
O酶解取新鮮豬小腸粘膜用清水洗凈，由絞肉機絞成肉糜狀，向其中加水，水與豬小腸粘膜的質(zhì)量比為8-10:1，再加入O. 2-0. 3wt%的胰蛋白酶，加堿調(diào)節(jié)pH值至8. 5-9之間，攪拌反應(yīng)30-60min后，再加入3_5%的氯化鈉溶液，置于微波爐中，微波功率為300-400W，提取時間為12_15min，結(jié)束后，過濾，得到酶解液；
2)絮凝處理在上述酶解液中加入3-5wt%的絮凝劑，以100-150r/min的速度攪拌混合液15-30min，室溫靜置5_6h后，送入離心機離心過濾，離心速度為2000-3000r/min，時間為IOmin,除去固體雜質(zhì)后得到含有肝素鈉的上清液；
3)樹脂吸附和洗脫采用強堿性陰離子交換樹脂D208吸附上清液，樹脂的用量占母液的質(zhì)量比為5%，在35-40°C下，以100r/min的攪拌速度，吸附4_5小時，濾出樹脂，以3倍體積的6-8%的氯化鈉溶液洗脫，洗脫時間為2-3h，第二次用2倍體積的3-4%的氯化鈉洗脫3_4h，收集兩次洗脫液合并；
4)醇沉將上述洗脫液，加入2倍體積的85-90%的乙醇，沉淀處理18-24h，收集沉淀物，干燥后得到肝素鈉粗品；
5)精制過程將洗脫液濾液加入5-8wt%的大孔吸附樹脂，在常溫下，攪拌混合液，脫色處理3-4h后，濾出樹脂，收集澄清的濾液，以氫氧化鈉調(diào)節(jié)濾液pH值至10-11之間，再加入1-2%的過氧化氫，處理12h后，加入I. 2倍體積的95%的乙醇靜置沉淀，抽濾得沉淀物，最后用無水乙醇清洗2-3次，干燥后得到肝素鈉精品。優(yōu)選地，步驟2所述絮凝劑為殼聚糖或脫乙酰殼聚糖衍生物。本發(fā)明的優(yōu)點在于在酶解過程采用微波法促進豬小腸內(nèi)肝素的釋放至酶解液中，并對酶解液進行絮凝處理，除去大部分的雜質(zhì)，再經(jīng)樹脂吸附和洗脫、醇沉干燥得粗品，然后將大孔吸附樹脂和雙氧水結(jié)合起來對產(chǎn)品脫色精制，通過這些工序制得的肝素鈉效價大于150U/mg，該工藝簡單，產(chǎn)品純度高。
具體實施例方式為了使公眾能充分了解本發(fā)明的技術(shù)實質(zhì)和有益效果，申請人將在下面對本發(fā)明的具體實施方式
詳細描述，但申請人對實施例的描述不是對技術(shù)方案的限制，任何依據(jù)本發(fā)明構(gòu)思作形式而非實質(zhì)的變化都應(yīng)當視為本發(fā)明的保護范圍。實施例I
O酶解取新鮮豬小腸粘膜用清水洗凈，由絞肉機絞成肉糜狀，向其中加水，水與豬小腸粘膜的質(zhì)量比為8:1，再加入O. 2wt%的胰蛋白酶，加堿調(diào)節(jié)pH值至8. 5之間，攪拌反應(yīng)30min后，再加入3%的氯化鈉溶液，置于微波爐中，微波功率為300W，提取時間為12min，結(jié)束后，過濾，得到酶解液；· 2)絮凝處理在上述酶解液中加入5wt%的殼聚糖絮凝劑，以150r/min的速度攪拌混合液15-30min，室溫靜置5-6h后，送入離心機離心過濾，離心速度為2000r/min，時間為lOmin，除去固體雜質(zhì)后得到含有肝素鈉的上清液；
3)樹脂吸附和洗脫采用強堿性陰離子交換樹脂D208吸附上清液，樹脂的用量占母液的質(zhì)量比為5%，在35-40°C下，以100r/min的攪拌速度，吸附4小時，濾出樹脂，以3倍體積的6%的氯化鈉溶液洗脫，洗脫時間為2-3h，第二次用2倍體積的3%的氯化鈉洗脫3-4h，收集兩次洗脫液合并；
4)醇沉將上述洗脫液，加入2倍體積的85%的乙醇，沉淀處理18h，收集沉淀物，干燥后得到肝素鈉粗品；
5)精制過程將洗脫液濾液加入5wt%的大孔吸附樹脂，在常溫下，攪拌混合液，脫色處理3-4h后，濾出樹脂，收集澄清的濾液，以氫氧化鈉調(diào)節(jié)濾液pH值至10之間，再加入1-2%的過氧化氫，處理12h后，加入I. 2倍體積的95%的乙醇靜置沉淀，抽濾得沉淀物，最后用無水乙醇清洗3次，干燥后得到肝素鈉精品，效價為158 U/mg。實施例2
O酶解取新鮮豬小腸粘膜用清水洗凈，由絞肉機絞成肉糜狀，向其中加水，水與豬小腸粘膜的質(zhì)量比為10:1，再加入O. 3wt%的胰蛋白酶，加堿調(diào)節(jié)pH值至9之間，攪拌反應(yīng)60min后，再加入5%的氯化鈉溶液，置于微波爐中，微波功率為400W，提取時間為15min，結(jié)束后，過濾，得到酶解液；
2)絮凝處理在上述酶解液中加入5wt%的脫乙酰殼聚糖衍生物絮凝劑，以150r/min的速度攪拌混合液15-30min，室溫靜置5_6h后，送入離心機離心過濾，離心速度為3000r/min，時間為lOmin，除去固體雜質(zhì)后得到含有肝素鈉的上清液；
3)樹脂吸附和洗脫采用強堿性陰離子交換樹脂D208吸附上清液，樹脂的用量占母液的質(zhì)量比為5%，在35-40°C下，以100r/min的攪拌速度，吸附4_5小時，濾出樹脂，以3倍體積的8%的氯化鈉溶液洗脫，洗脫時間為2-3h，第二次用2倍體積的4%的氯化鈉洗脫3-4h，收集兩次洗脫液合并；
4)醇沉將上述洗脫液，加入2倍體積的85-90%的乙醇，沉淀處理18-24h，收集沉淀物，干燥后得到肝素鈉粗品；
5)精制過程將洗脫液濾液加入8wt%的大孔吸附樹脂，在常溫下，攪拌混合液，脫色處理4h后，濾出樹脂，收集澄清的濾液，以氫氧化鈉調(diào)節(jié)濾液pH值至11之間，再加入1-2%的 過氧化氫，處理12h后，加入I. 2倍體積的95%的乙醇靜置沉淀，抽濾得沉淀物，最后用無水 乙醇清洗3次，干燥后得到肝素鈉精品，效價為164U/mg。
權(quán)利要求
1.一種肝素鈉的生產(chǎn)新工藝，其特征在于在于包括以下步驟 1)酶解取新鮮豬小腸粘膜用清水洗凈，由絞肉機絞成肉糜狀，向其中加水，水與豬小腸粘膜的質(zhì)量比為8-10:1，再加入O. 2-0. 3wt%的胰蛋白酶，加堿調(diào)節(jié)pH值至8. 5-9之間，攪拌反應(yīng)30-60min后，再加入3_5%的氯化鈉溶液，置于微波爐中，微波功率為300-400W，提取時間為12_15min，結(jié)束后，過濾，得到酶解液； 2)絮凝處理在上述酶解液中加入3-5wt%的絮凝劑，以100-150r/min的速度攪拌混合液15-30min，室溫靜置5_6h后，送入離心機離心過濾，離心速度為2000-3000r/min，時間為IOmin,除去固體雜質(zhì)后得到含有肝素鈉的上清液； 3)樹脂吸附和洗脫采用強堿性陰離子交換樹脂D208吸附上清液，樹脂的用量占母液的質(zhì)量比為5%，在35-40°C下，以100r/min的攪拌速度，吸附4_5小時，濾出樹脂，以3倍體積的6-8%的氯化鈉溶液洗脫，洗脫時間為2-3h，第二次用2倍體積的3-4%的氯化鈉洗脫3_4h，收集兩次洗脫液合并； 4)醇沉將上述洗脫液，加入2倍體積的85-90%的乙醇，沉淀處理18-24h，收集沉淀物，干燥后得到肝素鈉粗品； 5)精制過程將洗脫液濾液加入5-8wt%的大孔吸附樹脂，在常溫下，攪拌混合液，脫色處理3-4h后，濾出樹脂，收集澄清的濾液，以氫氧化鈉調(diào)節(jié)濾液pH值至10-11之間，再加入1-2%的過氧化氫，處理12h后，加入I. 2倍體積的95%的乙醇靜置沉淀，抽濾得沉淀物，最后用無水乙醇清洗2-3次，干燥后得到肝素鈉精品。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種肝素鈉酶解液的絮凝處理方法，其特征在于步驟2所述絮凝劑為殼聚糖或脫乙酰殼聚糖衍生物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種肝素鈉的生產(chǎn)新工藝，包括酶解、絮凝處理、樹脂吸附和脫附、醇沉和精制過程，在酶解過程采用微波法促進豬小腸內(nèi)肝素的釋放至酶解液中，并對酶解液進行絮凝處理，除去大部分的雜質(zhì)，再經(jīng)過樹脂吸附和洗脫、醇沉干燥得粗品，然后將大孔吸附樹脂和雙氧水結(jié)合起來對產(chǎn)品脫色精制，通過這些工序制得的肝素鈉效價大于150U/mg，該工藝簡單，產(chǎn)品純度高。
文檔編號C08B37/10GK102952204SQ201210378760
公開日2013年3月6日 申請日期2012年10月9日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月9日
發(fā)明者顧永軍 申請人:江蘇聯(lián)眾腸衣有限公司