肝素鈉的精制工藝的制作方法
【技術領域】
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[0001]本發(fā)明涉及一種肝素鈉的精制工藝，屬于生化技術領域。
【背景技術】
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[0002]肝素鈉是肝素的鈉鹽形式產(chǎn)物，是一種含有硫酸基的酸性粘多糖類天然抗凝血物質(zhì)?？蓮V泛用于防治各種心腦血管疾病，在臨床應用中廣受青睞。
[0003]肝素鈉廣泛存在于哺乳動物的腸粘膜、肺、肝中，特別是豬小腸粘膜中含量最高。目前我國生產(chǎn)的肝素鈉主要以豬小腸粘膜為原料進行提取，由于肝素鈉在動物體內(nèi)多以肝素鈉-蛋白質(zhì)復合物的形式存在，故使得粗品中會殘留一定量的蛋白質(zhì)，影響了產(chǎn)品的品質(zhì)。
[0004]肝素的精制過程主要是對粗品肝素鈉進行除蛋白提純和脫色，達到國家藥典標準要求。在我國肝素的精制多采用高錳酸鉀和過氧化氫兩步氧化法或過氧化氫分次加入的二次氧化法生產(chǎn)工藝；同時也有資料報道，采用酶解結合氧化法精制肝素的記載。但是上述幾種工藝都存在不足；第一種高錳酸鉀和過氧化氫兩步氧化法存在二氧化錳吸食肝素，使肝素活性損失大，回收率低；過濾困難，生產(chǎn)周期長，色澤不好，質(zhì)量差等缺點；第二種過氧化氧分次加入的二次氧化法工藝，因產(chǎn)品色澤較好，目前被普遍采用。但該工藝主要存在二次氧化氫處理對肝素結構造成破壞，難以得到較高效價的精品肝素產(chǎn)品的不足；第三種酶解結合氧化法工藝，雖有報道但未被廣泛采用，同時存在酶解條件、氧化條件與結合運用生物制品萃取、分離、純化技術等工藝設計優(yōu)選問題的不足。

【發(fā)明內(nèi)容】

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[0005]本發(fā)明目的是，用來彌補現(xiàn)有技術的不足，而提供一種肝素鈉的精制工藝。
[0006]為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術方案如下:
[0007]肝素鈉的精制工藝，包括以下幾個步驟:
[0008](I)預處理:將粗品肝素鈉溶解在濃度為3-5%的氯化鈉水溶液中，過濾取上清液，用超濾膜再次過濾所述上清液，得到清液；
[0009](2)過柱:將清液過分離柱，用10%的乙醇水溶液淋洗，然后用無水乙醇洗脫分離柱，得到洗脫液；
[0010](3)氧化:向洗脫液中加入過氧化氫，調(diào)節(jié)PH為8-9，攪拌反應2-3h，粗過濾后用納濾膜再次過濾得到氧化液；
[0011](4)沉淀:向氧化液中加入無水乙醇，靜置24h，離心后得到沉淀，丙酮脫水后真空干燥得到精制肝素鈉。
[0012]所述的肝素鈉的精制工藝，步驟(I)中，粗品肝素鈉與氯化鈉水溶液的重量比為2-4:1Oo
[0013]所述的肝素鈉的精制工藝，步驟(2)中采用的分離柱為陽離子交換樹脂，洗脫用無水乙醇的重量為清液重量的2-3倍。
[0014]所述的肝素鈉的精制工藝，步驟(3)中，過氧化氫的加入量為洗脫液的重量的1-3%。
[0015]所述的肝素鈉的精制工藝，步驟(4)中離心時溫度為4°C，轉速為5000r/min。
[0016]本發(fā)明的有益效果如下:
[0017]本發(fā)明的肝素鈉的精制工藝，步驟簡單，成本低，超濾膜能去除部分大分子量的雜質(zhì)，通過分離柱去除粗品中的蛋白質(zhì)，避免了酶解反應中強酸對于肝素鈉造成的失活，且分離效果良好，去除蛋白質(zhì)徹底；通過氧化脫色，脫色效果好，且通過納濾膜過濾，小分子量物質(zhì)去除徹底。
[0018]本發(fā)明工藝得到的精制肝素鈉，色白，單位效價為180_200U/mg，產(chǎn)品中紫外區(qū)雜質(zhì)(260nm, 280nm)符合藥典要求。
【具體實施方式】
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[0019]為了使本發(fā)明實現(xiàn)的技術手段、創(chuàng)作特征、達成目的與功效易于明白了解，下面結合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。
[0020]實施例1
[0021]本實施例中，肝素鈉的精制工藝，包括以下幾個步驟:
[0022](I)預處理:將粗品肝素鈉溶解在濃度為3-5%的氯化鈉水溶液中，過濾取上清液，用超濾膜再次過濾所述上清液，得到清液；
[0023](2)過柱:將清液過分離柱，用10%的乙醇水溶液淋洗，然后用無水乙醇洗脫分離柱，得到洗脫液；
[0024](3)氧化:向洗脫液中加入過氧化氫，調(diào)節(jié)PH為8-9，攪拌反應2_3h，粗過濾后用納濾膜再次過濾得到氧化液；
[0025](4)沉淀:向氧化液中加入無水乙醇，靜置24h，離心后得到沉淀，丙酮脫水后真空干燥得到精制肝素鈉。
[0026]其中，步驟⑴中，粗品肝素鈉與氯化鈉水溶液的重量比為2:10 ;步驟⑵中采用的分離柱為陽離子交換樹脂，洗脫用無水乙醇的重量為清液重量的3倍；步驟(3)中，過氧化氫的加入量為洗脫液的重量的1% ;步驟(4)中離心時溫度為4°C，轉速為5000r/min。
[0027]實施例2
[0028]本實施例中，肝素鈉的精制工藝，包括以下幾個步驟:
[0029](I)預處理:將粗品肝素鈉溶解在濃度為3-5%的氯化鈉水溶液中，過濾取上清液，用超濾膜再次過濾所述上清液，得到清液；
[0030](2)過柱:將清液過分離柱，用10%的乙醇水溶液淋洗，然后用無水乙醇洗脫分離柱，得到洗脫液；
[0031](3)氧化:向洗脫液中加入過氧化氫，調(diào)節(jié)PH為8-9，攪拌反應2-3h，粗過濾后用納濾膜再次過濾得到氧化液；
[0032](4)沉淀:向氧化液中加入無水乙醇，靜置24h，離心后得到沉淀，丙酮脫水后真空干燥得到精制肝素鈉。
[0033]其中，步驟(I)中，粗品肝素鈉與氯化鈉水溶液的重量比為3:10 ;步驟
[0034](2)中采用的分離柱為陽離子交換樹脂，洗脫用無水乙醇的重量為清液重量的2倍；步驟(3)中，過氧化氫的加入量為洗脫液的重量的2% ;步驟(4)中離心時溫度為4°C，轉速為 5000r/min。
[0035]實施例3
[0036]本實施例中，肝素鈉的精制工藝，包括以下幾個步驟:
[0037](I)預處理:將粗品肝素鈉溶解在濃度為3-5%的氯化鈉水溶液中，過濾取上清液，用超濾膜再次過濾所述上清液，得到清液；
[0038](2)過柱:將清液過分離柱，用10%的乙醇水溶液淋洗，然后用無水乙醇洗脫分離柱，得到洗脫液；
[0039](3)氧化:向洗脫液中加入過氧化氫，調(diào)節(jié)PH為8-9，攪拌反應2_3h，粗過濾后用納濾膜再次過濾得到氧化液；
[0040](4)沉淀:向氧化液中加入無水乙醇，靜置24h，離心后得到沉淀，丙酮脫水后真空干燥得到精制肝素鈉。
[0041]其中，步驟⑴中，粗品肝素鈉與氯化鈉水溶液的重量比為4:10 ;步驟⑵中采用的分離柱為陽離子交換樹脂，洗脫用無水乙醇的重量為清液重量的2倍；步驟(3)中，過氧化氫的加入量為洗脫液的重量的3% ;步驟(4)中離心時溫度為4°C，轉速為5000r/min。
【主權項】
1.肝素鈉的精制工藝，其特征在于，包括以下幾個步驟: (1)預處理:將粗品肝素鈉溶解在濃度為3-5%的氯化鈉水溶液中，過濾取上清液，用超濾膜再次過濾所述上清液，得到清液； (2)過柱:將清液過分離柱，用10%的乙醇水溶液淋洗，然后用無水乙醇洗脫分離柱，得到洗脫液； (3)氧化:向洗脫液中加入過氧化氫，調(diào)節(jié)PH為8-9，攪拌反應2-3h，粗過濾后用納濾膜再次過濾得到氧化液； (4)沉淀:向氧化液中加入無水乙醇，靜置24h，離心后得到沉淀，丙酮脫水后真空干燥得到精制肝素鈉。
2.根據(jù)權利要求1所述的肝素鈉的精制工藝，其特征在于，步驟(I)中，粗品肝素鈉與氯化鈉水溶液的重量比為2-4:10。
3.根據(jù)權利要求1所述的肝素鈉的精制工藝，其特征在于，步驟(2)中采用的分離柱為陽離子交換樹脂，洗脫用無水乙醇的重量為清液重量的2-3倍。
4.根據(jù)權利要求1所述的肝素鈉的精制工藝，其特征在于，步驟(3)中，過氧化氫的加入量為洗脫液的重量的1-3%。
5.根據(jù)權利要求1所述的肝素鈉的精制工藝，其特征在于，步驟(4)中離心時溫度為4°C，轉速為 5000r/min。
【專利摘要】本發(fā)明公開了肝素鈉的精制工藝。工藝包括以下幾個步驟：（1）預處理；（2）過柱；（3）氧化；（4）沉淀。本發(fā)明的肝素鈉的精制工藝，步驟簡單，成本低，超濾膜能去除部分大分子量的雜質(zhì)，通過分離柱去除粗品中的蛋白質(zhì)，避免了酶解反應中強酸對于肝素鈉造成的失活，且分離效果良好，去除蛋白質(zhì)徹底；通過氧化脫色，脫色效果好，且通過納濾膜過濾，小分子量物質(zhì)去除徹底。
【IPC分類】C08B37-10
【公開號】CN104817651
【申請?zhí)枴緾N201510271496
【發(fā)明人】王芃
【申請人】蘇州鴻洋醫(yī)藥科技有限公司
【公開日】2015年8月5日
【申請日】2015年5月26日