專利名稱：從林蛙油中提取多糖的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及多糖的提取，具體涉及從林蛙油中提取多糖的方法。
背景技術(shù)：
林蛙油俗稱田雞油、哈什蟆油、蛤螞油，系蛙科動(dòng)物中國(guó)林蛙雌蛙的輸卵管經(jīng)采制 干燥得到。主要含有蛋白質(zhì)、水分、糖類(包括多糖)、脂肪，還有蛙醇、膽固醇、磷脂、維生 素、脂肪酸、人體必需的10種氨基酸、微量元素及激素等，多糖是林蛙油的重要成分之一， 具有抗衰老、抗氧化、提高免疫及抗腫瘤等多種生物功效。目前，提取多糖的常用方法有熱 水浸提法、稀酸浸提法、稀堿浸提法和酶解法等。熱水浸提法提取效率不高；用稀酸浸提時(shí)， 要求時(shí)間短、溫度低，條件控制不好易使多糖發(fā)生降解；稀堿提取，雖然可以提高多糖的得 率，但對(duì)多糖的生物活性有很大影響。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種多糖提取率較高，提取的多糖純度較高、 生物活性較好的從林蛙油中提取多糖的方法。 本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為從林蛙油中提取多糖的方法，包 括下述步驟 1)發(fā)制在每克林蛙油中加入100 150ml去離子水，攪拌后在40 55。C溫度條 件下發(fā)制9 12小時(shí)，得到發(fā)制液；發(fā)制后糖蛋白被水包圍，有利于提取，使多糖的提取率 得到提高； 2)輻照將上述發(fā)制液裝入塑料袋中并封口，然后用照射劑量為10 15Kgy的 Co60輻照該塑料袋，得到輻照液；用10Kgy以上輻照基本上可以使糖與蛋白質(zhì)之間連接斷 開，讓蛋白質(zhì)分子斷裂為肽段，斷鏈效果優(yōu)于酶解法、酸或堿浸提法，且對(duì)多糖的生物活性 影響較??； 3)醇沉按體積比2 : 1在上述輻照液中加入濃度為95%的乙醇醇沉，離心過濾 得到沉淀物； 4)脫肽按重量比1 : 50在上述沉淀物中加水溶解配成水溶液，按體積比4 : 1 比例由氯仿和正丁醇配成有機(jī)脫肽液，脫多肽方法為按體積比5 : 2在所述水溶液中加入 所述有機(jī)脫肽液，振蕩20 40min，靜置讓水溶液與有機(jī)脫肽液分層，取上層的水溶液重復(fù) 上述用有機(jī)脫肽液脫多肽方法，脫多肽4 5次后脫肽完畢，最后取得上層的水溶液為多 糖溶液；用該有機(jī)脫肽液經(jīng)4 5次脫肽，一般能把斷開的肽段與多糖分離，使多糖純度提 高； 5)純化將上述多糖溶液用二乙氨乙基纖維素(DEAE)-52層析柱層析，層析后用 水、0. lmol/LNaCl溶液、0. 3mol/L的NaCl溶液依次梯度洗脫，混合各次洗脫液，洗脫液用旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮后，用去離子水透析36小時(shí)除去洗脫液中NaCl，然后真空干燥洗脫液得 到多糖；純化使多糖的雜質(zhì)降低，多糖的純度較離。
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與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于從林蛙油中提取多糖的方法，通過林蛙油用 水發(fā)制、Co6°輻照、乙醇醇沉、有機(jī)脫肽液脫多肽和DEAE層析柱層析純化；這樣有利于多糖 的提取，有利于多糖與蛋白質(zhì)之間連接斷開，有利于肽段與多糖的分離，有利于提高多糖的 純度，且提取過程對(duì)多糖的生物活性影響較少，多糖提取率可以達(dá)到34%，多糖的純度可以 達(dá)到98. 26%。因此本發(fā)明是一種多糖提取率較高，提取的多糖純度較高、生物活性較好的 從林蛙油中提取多糖的方法。
具體實(shí)施例方式
以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述。
實(shí)施例 從林蛙油中提取多糖的方法，在每克林蛙油中加入100 150ml去離子水，攪拌后 在40 55t:溫度條件下發(fā)制9 12小時(shí)，得到發(fā)制液，將發(fā)制液裝入塑料袋中并封口，然 后用照射劑量為10 15Kgy的CcT輻照該塑料袋，得到輻照液，對(duì)輻照液進(jìn)行光譜分析， 只有-0H的官能團(tuán)的特征峰，說明蛋白質(zhì)斷鏈效果明顯，按體積比2 : l在輻照液中加入濃 度為95%的乙醇醇沉，離心過濾得到沉淀物，按重量比1 : 50在沉淀物中加水溶解配成水
溶液，然后按體積比5 : 2在水溶液加入有機(jī)脫肽液(4氯仿l正丁醇配制)，振蕩20
40min，靜置讓水溶液與有機(jī)脫肽液分層，取上層的水溶液重復(fù)用有機(jī)脫肽液脫多肽，脫多 肽4 5次后脫肽完畢，最后取得上層的水溶液為多糖溶液，多糖溶液用色譜或核磁分析， 有三個(gè)組份的多糖，主要組份由鼠李糖、巖藻糖、阿拉伯糖、木糖、果糖和半乳糖組成；將多 糖溶液用DEAE-52層析柱層析，層析后用水、0. lmol/LNaCl溶液、0. 3mol/L的NaCl溶液依 次梯度洗脫，混合各次洗脫液，洗脫液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮后，濃縮程度可以根據(jù)各技術(shù) 人員習(xí)慣，以目測(cè)到合適的透析濃度即可，用去離子水透析36小時(shí)除去洗脫液中NaCl，然 后真空干燥洗脫液得到多糖；用蒽酮_硫酸法檢測(cè)多糖含量，多糖提取率可以達(dá)到34% ，多 糖的純度可以達(dá)到98. 26%。
權(quán)利要求
從林蛙油中提取多糖的方法，其特征在于包括下述步驟1)發(fā)制在每克林蛙油中加入100～150ml去離子水，攪拌后在40～55℃溫度條件下發(fā)制9～12小時(shí)，得到發(fā)制液；2)輻照將上述發(fā)制液裝入塑料袋中并封口，然后用照射劑量為10～15Kgy的Co60輻照該塑料袋，得到輻照液；3)醇沉按體積比2∶1在上述輻照液中加入濃度為95％的乙醇醇沉，離心過濾得到沉淀物；4)脫肽按重量比1∶50在上述沉淀物中加水溶解配成水溶液，按體積比4∶1比例由氯仿和正丁醇配成有機(jī)脫肽液，脫多肽方法為按體積比5∶2在所述水溶液中加入所述有機(jī)脫肽液，振蕩20～40min，靜置讓水溶液與有機(jī)脫肽液分層，取上層的水溶液重復(fù)上述用有機(jī)脫肽液脫多肽方法，脫多肽4～5次后脫肽完畢，最后取得上層的水溶液為多糖溶液；5)純化將上述多糖溶液用二乙氨乙基纖維素(DEAE)-52層析柱層析，層析后用水、0.1mol/LNaCl溶液、0.3mol/L的NaCl溶液依次梯度洗脫，混合各次洗脫液，洗脫液減壓濃縮后用去離子水透析36小時(shí)除去洗脫液中NaCl，然后真空干燥洗脫液得到多糖。
全文摘要
本發(fā)明公開了從林蛙油中提取多糖的方法，通過林蛙油用水發(fā)制、Co60輻照、乙醇醇沉、有機(jī)脫肽液脫多肽和DEAE層析柱層析純化；這樣有利于多糖的提取，有利于多糖與蛋白質(zhì)之間連接斷開，有利于肽段與多糖的分離，有利于提高多糖的純度，且提取過程對(duì)多糖的生物活性影響較少，多糖提取率可以達(dá)到34％，多糖的純度可以達(dá)到98.26％；因此本發(fā)明是一種多糖提取率較高，提取的多糖純度較高、生物活性較好的從林蛙油中提取多糖的方法。
文檔編號(hào)C08B37/00GK101698683SQ20091015292
公開日2010年4月28日 申請(qǐng)日期2009年9月21日 優(yōu)先權(quán)日2009年9月21日
發(fā)明者史戈, 李妍妍, 王日昕, 蘇秀榕 申請(qǐng)人:寧波大學(xué)