專利名稱：促生長激素釋放類肽的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及促生長激素釋放類肽，是新的肽衍生物，包括它們的組合物，以及它們在治療由生長激素缺陷引起的疾病上的用途。屬于肽類化合物。
生長激素是刺激組織生長的激素。已知生長激素對代謝過程具有許多作用(例如，刺激蛋白質(zhì)合成和游離脂肪酸動員)和引起從碳水化合物至脂肪酸代謝的能量代謝轉(zhuǎn)換。生長激素缺陷可以導致一些嚴重的疾病，例如，侏儒癥。
生長激素從垂體釋放，這一釋放過程直接或間接地在一些激素與神經(jīng)遞質(zhì)的嚴格控制下。生長激素釋放可以受到生長激素釋放激素(CHRH)刺激和生長激素釋放抑制因子的抑制。在兩種情況下，所述激素從下丘腦釋放，但是它們的作用主要經(jīng)由位于垂體的特異性受體介導。例如精氨酸、L-3、4-二羥基苯丙氨酸、胰高血糖素、后葉加壓素、PACAP(垂體腺苷酰環(huán)化酶激活肽)、毒草鹼受體興奮劑和合成的六肽、GHRP(生長激素釋放肽)通過直接作用在垂體上或通過影響GHRH和/或生長激素釋放抑制因子從下丘腦的釋放來釋放內(nèi)源性生長激素。
在需要生長激素增加水平的疾病或病態(tài)中，目前生長激素的蛋白質(zhì)性質(zhì)決定只能腸胃外施用。此外，其他直接作用的天然促分泌劑(例如GHRH和PACAP)是高分子量的多肽，因此也只能腸胃外施用。經(jīng)檢索96l94947.3專利申請為該類化合物最新技術，但其分子大、易分解，也只能腸胃外施用，而且必須用固相合成法，不僅工藝控制難，而且收率低，成本高。
本發(fā)明的目的是提供一種分子結構簡單，易合成，成本低，口服時不易被酶或胃腸分解的小分子促生長激素釋放類肽。
發(fā)明概述通式I給出了化合物結構式A-B-C IA是氫或R′-(CH2)q-Xr(CH2)sCO-，其中q是0或選自下組的整數(shù)1、2、3、4、5；r是0或1；S是0或選自下組的整組1、2、3、4、5；R′是氫、咪唑基、胍基、哌嗪基、嗎啉代、哌啶子基或N(R2)-R3，其中R2和R3各自分別是氫或低級烷基(可被可不被一個或多個羥基、吡啶基或呋喃基取代的)；并且，當r是1時，X是-NH-、-CH2-、-CH＝CH-、-C(R4)(R5)-、-CH(N(R6)(R7))-、
或
其中R4、R5、R6和R7各自分別是氫或低級烷基；B是(G)t-(H)u，其中t和u各自分別是0或1；G和H是氨基酸殘基，該殘基選自由天然L-氨基酸或它們的相應的D-異構體或非天然氨基酸(例如1、4-二氨基丁酸、氨基異丁酸、1、3-二氨基丙酸、4-氨基苯丙氨酸、3-吡啶基丙氨酸、1、2、3、4-四氫異喹啉-3-羧酸、1、2、3、4-四氫降哈爾滿(norharman)-3-羧酸、N-甲基鄰氨基苯甲酸、鄰氨基苯甲酸、N-芐基甘氨酸、3-氨甲基苯甲酸、3-氨基-3-甲基丁酸、肌氨酸、3-哌啶甲酸或異-3-哌啶甲酸)組成的；并且，當t和u都是1時，G和H之間的酰胺鍵可被可不被Y-NR8-替代，其中Y是-CO-或-CH2-，且R8是氫低級烷基或低級芳烷基；
C是-(CH2)K-R9；其中K是0、1、2、3、4或5；R9是-N(R10)(R11)、
或
并且以上所有環(huán)上可被可不被一個或多個低級烷基、低級烷氧基、鹵素或羥基取代。其中R10和R11是低級烷基(可被可不被一個或多個鹵素、羥基取代的。)在上述的結構式和本說明書全文中，下列術語具有所指出的含義以上所限定的低級烷基部分旨在包括那些指定長度(優(yōu)選地具有1-6個碳原子)的線性、支鏈或環(huán)狀構型的烷基部分，線性烷基的例子是甲基、乙基、正丙基、丁基、戊基和已基。支鏈烷基的例子是異丙基、仲丁基、叔丁基、異戊基或異已基。環(huán)狀烷基的例子是環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基和環(huán)已基。
以上所限定的低級烷基部分旨在包括那些指定長度(優(yōu)選地具有1-6個碳原子)的線性，支鏈或環(huán)狀構型的邊遠氧基部分。線性烷基的例子是甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基和已氧基。支鏈烷基氧基的例子是異丙氧基、伸丁氧基、叔丁氧基、異戊氧基和異已氧基。環(huán)狀烷基的例子是環(huán)丙氧基、環(huán)丁氧基、環(huán)戊氧基和環(huán)已氧基。
術語″鹵素″旨在包括F、CI、Br和I。
通用的三字母代碼用于代表天然氨基酸，例如ALa用于代表丙氨酸。
發(fā)明詳述在式I的化合物的優(yōu)選實例中，A是Aib、(pentyl)Aib或(2-hydroxyethy)Aib；t和u是1，G是D phe、D_Trp、D_a_Nal；H是Ala、D_pro、D_Hpro、D_His、Gly、D_Arg；C是piperidine、3-Methyl piperidine、diisobutylamide或dipentyamideamide。
本發(fā)明還優(yōu)選以下化合物或其藥學上可接受的鹽Aib-D_phe-D_pro-piperidineAib-D_Trp-D_pro-3 MethylpiperidineAib-D_Trp-D_pro-diiso butylamideAib-D_Trp-D_pro-dipentylamide amide(pentyl)-D_Trp-D_pro-diisobutylamide(2-hydroxy ethyl)Aib-D_Trp-D_pro-diissobutylamide。
本發(fā)明還包括多種藥物組合物，該組合物包含作為活性成份的按照上述任一的化合物或其藥學上可接受的鹽以及藥學上可接受的載體或稀釋劑的任意組合。
上述類肽的用途，用于刺激人的生長激素從垂體釋放或治療疾病時，可以上述一種化合物或其藥學上可接受的鹽單獨用，也可以將上述所涉及的化合物或其藥學上可接受的鹽中的任意幾種的組合物使用，其有效劑量為每天0.001-100mg/Kg體重。
上述用途，可通過口服、經(jīng)皮、鼻、肺部或腸胃外施用，優(yōu)選劑量是每天0.01-50mg/Kg體重。
上述類肽的用途，用于提高動物生長速度和程度，從而提高動物奶、毛產(chǎn)量或質(zhì)量或治療疾病時，包括將上述涉及的化合物或其藥學上可接受的鹽的每一種單獨使用或其中任意幾種的組合物使用均有效，其有效劑量是從0.0001-200mg/Kg體重。
本發(fā)明的優(yōu)點是分子結構簡單，可用液相合成法生產(chǎn)，工藝易控制，收率高，成本低，可口服，口服時不易被酶或胃腸道分解。
本發(fā)明的化合物的實施例舉下述幾種結構式1、Aib-D_phe-D_pro-pioperidine
2、Aib-D_Trp-D_pro-3 Methylpiperidine
3、Aib-D_Trp-D_pro-diiso butylamide
4、Aib-D_Trp-D_pro-dipentylamide amide
5、(pentyl)-D_Trp-D_Pro-diisobutylamide
6、(2 hydroxy ethy)Aib-D_Trp-D_pro-diisobutylamide
現(xiàn)以Aib-D_Trp-D_pro-3 MethylpiperidineA-氨基-異丁酰-D-色氨酰-D-脯氨酰-3-甲基哌啶為例敘述其制作方法將1mmol的DBP轉(zhuǎn)入100ml圓底燒瓶中，加30ml無水CH2CL2，然后加入1mmolHOBT，同時在冰浴條件下，通氮攪拌。
將1.05mmolWSCHCL溶入10mlCH2CL2中，然后快速滴加至前述溶液。
將1.1mmol的MP溶于10ml無水CH2CL2溶液中，并滴加至前述混合溶液中，將反應混合物室溫下攪拌18hr以上。
反應畢，將反應混合物用20ml 20％檸檬酸水溶液、20ml NaHCO3飽和水溶液、20mlNaCL飽和水溶液分別洗滌。分離有機相，并用無水MgSO4干燥。
過濾、真空濃縮，所得化合物以硅膠柱純化(用CHCL3∶MgOH＝95∶5為流動相)，得白色固體。
在通氮條件下，將以下固體溶于25ml CH2CL2中，在攪拌下加入10mlTFA，繼續(xù)攪拌30min。真空蒸干所有揮發(fā)物質(zhì)，并將所得固體溶入30mlCH2CL2中，用10ml飽和NaHCO3溶液洗滌；分離有機相。
將有機相用無水Na2SO4干燥、過濾、真空濃縮。用色譜柱(SiO2)純化(CHCL3∶MeOH85∶15為流動相)，得0.73mmol(73％)化合成PMP。
將此化合物用TLC和質(zhì)譜進行鑒定M+＝195.3將25ml無水CH2CL2轉(zhuǎn)入100ml圓底燒瓶中，并加入0.70mmolDBT，然后加入0.70mmolHOBT，在冰浴下通N2攪拌。
將0.75mmolWSCHCL溶入15ml無水CH2CL2中，然后快速滴加至前述溶液中，將反應物在0℃下攪拌1hr。
將0.71mmolPMP溶入20mlCH2CL2中，然后加滴至前述混合溶液中，繼續(xù)在室溫下攪拌18hr以上。
將反應混合物分別用20ml 20％檸檬酸水溶液、20ml飽和NaHCO3水溶液、20mlNaCL飽和水溶液洗滌。分離有機相，并以無水MgSO4干燥。
過濾、真空濃縮。用色譜柱(CHCL3∶MeOH＝95∶5)進一步純化，得白色固體。
在通氮條件下，將所得固體溶于25ml CH2CL2中，在攪拌條件下滴加10ml TFA，攪拌30min。真空抽干。所剩固體溶入30ml CH2CL2中，并用10ml飽和Na2HCO3溶液洗滌；分離有機相。
將有機相用無水NaHCO3干燥、過濾，將溶液真空抽干。用色譜柱(SiO2)純化(CHCL3∶MeOH＝85∶15)，得0.55mmol化合物TPMP。
用TLC及質(zhì)譜進行鑒定M+＝381.5將30ml無水CH2CL2轉(zhuǎn)入100ml圓底燒瓶中，并將0.50mmol BA溶入其中。冰溶下攪拌通N2加入0.51mmol HOBT。
將0.55mmol WSCHCL溶入20ml無水CH2CL2中，并快速滴加入前述溶液中，0℃下攪拌1hr。
將0.51mmol TPMP溶入15ml CH2CL2中，滴加入前述混合溶液中，在溫下攪拌18hrc h。
反應混合物分別用20ml20％檸檬酸水溶液、20ml飽和NaHCO3水溶液、20mlNaCL飽和水溶液洗滌。分離有機相，并以無水MgSO4干燥。
過濾、真空濃縮。用色譜柱(CHCL3∶MeOH＝95∶5)進一步純化，得白色固體。
在通氮條件下，將所得固體溶于30ml CH2CL2中，在攪拌條件下滴加10mlTFA，攪拌30min。真空抽干。所剩固體溶入30ml CH2CL中，并用10ml飽和NaHCO3溶液洗滌；分離有機相。
將有機相用無水Na2SO4干燥、過濾，將溶液真空抽干。用色譜柱(SiO2)純化(CHCL3∶MeOH＝85∶15)，得0.43mmol標題化合物。
用TLC及質(zhì)譜進行鑒定M+＝467.15其他化合物的制作工藝基本與上述方法相同。
縮寫DBP D-叔丁氧羰基-脯氨酸HOBT羥基苯并三唑WSCHCL 1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳化二亞胺鹽酸鹽MP 3-甲哌啶DBT D-叔丁氧羰基-色氨酸BA 叔丁氧羰基-a-氨基異丁酸。
權利要求
1.一種促生長激素釋放類肽，包括通式I的化合物或其藥學上可接受的鹽及其組合物A-B-C IA是氫或R′-(CH2)q-Xr-(CH2)sCO-，其中q是0或選自下組的整數(shù)1、2、3、4、5；r是0或1；S是0或選自下組的整數(shù)1、2、3、4、5；R′是氨、咪唑基、胍基、哌嗪基、嗎啉代、哌啶子基或N(R2)-R3，其中R2和R3各自分別是氫或低級烷基，可被可不被一個或多個羥基、吡啶基或呋喃基取代的；并且，當r是1時，X是-NH-、-CH2-、-CH＝CH-、-C(R4)(R5)-、-CH(N(R6)(R7))-、
或
其中R4、R5、R6和R7各自分別是氫或低級烷基；B是(G)t-(H)u，其中t和u各自分別是0或1；G和H是氨基酸殘基，該殘基選自由天然L-氨基酸或它們的相應的D-異構體或非天然氨基酸，例如1、4-二氨基丁酸、氨基異丁酸、1、3-二氨基丙酸、4-氨基苯丙氨酸、3-吡啶基氨酸、1、2、3、4-四氫異喹啉-3-羧酸、1、2、3、4-四氫降哈爾滿(norharman)-3-羧酸、N-甲基鄰氨基苯甲酸、鄰氨基苯甲酸、N-芐基甘氨酸、3-氨甲基苯甲酸、3-氨基-3-甲基丁酸、肌氨酸、3-哌啶甲酸或異-3-哌啶甲酸組成；并且，當t和u都是1時，G和H之間的酰胺鍵可被可不被Y-NR8-替代，其中Y是-CO-或-CH2-，且R8是氫、低級烷基或低級芳烷基；C是-(CH2)K-R9；其中K是0、1、2、3、4或5；R9是-N(R10)(R11)、
或
并且以上所有環(huán)上可被可不被一個或多個低級烷基、低級烷氧基、鹵素或羥基取代。其中R10和R11是低級烷基，可被可不被一個或多個鹵素或羥基取代的。
2.按照權利要求1的類肽，其化合物通式中A是Aib、penty Aib或2-hydroxyethyl Aib。
3.按照權利要求1的類肽，其化合物通式中t和u都是1，G是D Phe、D Tyr、D Trp、D a Nal；H是Ala、D Pro、D Hpro、D HiS、Gly、D Arg。
4.按照權利要求1的類肽，其化合物通式中C是piperidine、3-Methylpiperidine、diisobutyl amide或dipentylamide amide。
5.按照權利要求1的類肽，優(yōu)選以下化合物或其藥學上可接受的鹽Aib-D_phe-D_pro-piperidineAib-D_Trp-D_pro-3-MethylpiperidineAib-D_Trp-D_pro-dipentylaminde amide(penty)Aib-D_Trp-D_pro-diisobutylamide(2-hydroxy ethyl)Aib-D_Trp-D_pro-diisobutylamide
6.上述類肽的用途，用于刺激人的生長激素從垂體釋放或治療疾病時，可以每一種化合物或其藥學上可接受的鹽單獨用，也可以將權利要求1-5所涉及的化合物或其藥學上可接受的鹽中的任意幾種的組合物使用，其有效劑量從每天0.001-100mg/Kg體重。
7.按照權利要求6的用途，可通過口服，經(jīng)皮、鼻、肺部或腸胃外施用，優(yōu)選劑量是每天0.01-50mg/Kg體重。
8.上述類肽的用途，用于提高動物生長速度和程度，從而提高動物奶、毛產(chǎn)量或質(zhì)量或治療疾病時，包括將權利要求1-5所涉及的化合物或其藥學上可接受的鹽的每一種單獨使用或其中任意幾種的組合物使用均有效，其有效劑量是從0.0001-200mg/Kg體重。
全文摘要
本發(fā)明提供一種促生長激素釋放類肽,包括通式中的化合物或其藥學上可接受的鹽及其組合物,通式為:A－B－C,A是氫或R′(CH
文檔編號C07K5/065GK1269364SQ9911641
公開日2000年10月11日 申請日期1999年4月5日 優(yōu)先權日1999年4月5日
發(fā)明者徐進 申請人:徐進