專利名稱：具有釋放生長激素特性的化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的化合物、其藥學上可接受的鹽、含有它們的組合物和它們用于治療由缺乏生長激素引起的醫(yī)學病癥的用途。
背景技術(shù)：
生長激素是一種刺激所有能夠生長的組織生長的激素。此外，已知生長激素對代謝過程具有許多作用，例如刺激蛋白質(zhì)合成和游離脂肪酸移動并且引起碳水化合物至脂肪酸代謝的能量代謝的轉(zhuǎn)換。生長激素缺乏可能導致許多嚴重的醫(yī)學病癥，例如侏儒癥。
生長激素從腦垂體中釋放。該釋放是在許多激素和神經(jīng)遞質(zhì)直接或者間接地緊緊控制之下。生長激素的釋放可以通過生長激素釋放激素(GHRH)刺激以及通過生長素抑制素來抑制。在這兩種情況下，激素均從丘腦下部釋放，但是它們的作用主要通過位于腦垂體中特定的受體調(diào)節(jié)。其他刺激生長激素從腦垂體中釋放的化合物也有描述。例如精氨酸、L3，4二羥基苯丙氨酸(L-多巴)、高血糖素、后葉加壓素、PACAP(腦垂體腺苷?；h(huán)化酶激活的肽)、蕈毒鹼受體激動劑以及合成的六肽、GHRP(釋放生長激素的肽)或者通過直接作用于腦垂體上或者通過影響GHRH和/或生長素抑制素從丘腦下部中釋放內(nèi)生的生長激素。
在希望增加生長激素水平的病癥或狀況中，生長激素的蛋白質(zhì)性能使得除了腸胃外給藥之外任何方式均不可行。此外，其他直接作用的天然的促分泌劑例如GHRH和PACAP是較長的多肽，據(jù)此理由優(yōu)選腸胃外給藥。
以前曾建議使用一些化合物用于增加哺乳動物中生長激素的水平，例如在EP 18 072、EP 83 864、WO 8302272、WO 8907110、WO 8901711、WO 8910933、WO 8809780、WO 9118016、WO 9201711、WO 9304081、WO 9413696、WO 9517423、WO 9514666、WO 9615148、WO 9622997、WO 9635713、WO 9700894、WO 9722620、WO 9723508、WO 9740023和WO 9810653中建議的。
釋放生長激素化合物的組合物對于它們的生長激素釋放能力以及它們的生物可利用率是重要的。因此本發(fā)明目的在于提供具有釋放生長激素特性的新的化合物。此外，本發(fā)明的目的在于提供新的釋放生長激素的化合物(生長激素促分泌劑)，其是特異性的和/或有選擇性的并且沒有或基本上沒有副作用，例如釋放LH、FSH、TSH、ACTH、后葉加壓素、催產(chǎn)素、皮質(zhì)醇和/或催乳激素。本發(fā)明再一個目的在于提供具有好的口服生物可利用率的化合物。
發(fā)明概述根據(jù)本發(fā)明，提供一種在體外正常的實驗條件下直接作用在腦垂體細胞上以從其中釋放生長激素的新的化合物。
釋放生長激素的化合物可以在體外用作獨特的研究工具，用于理解特別是怎樣在腦垂體水平下調(diào)節(jié)生長激素的分泌。
此外，本發(fā)明釋放生長激素的化合物還可以在體內(nèi)給藥以增加內(nèi)生生長激素的釋放。
發(fā)明說明因此，本發(fā)明涉及通過如在實施例1中所述的方法可獲得的化合物，或其藥學上可接受的鹽。
此外，本發(fā)明涉及通過如在實施例1中所述的方法可獲得的化合物，該化合物是2-氨基-N-[(1R)-2-[(3R)-3-芐基-3-(N，N′，N′-三甲基肼基羰基)哌啶-1-基]-1-(1H-吲哚-3-基-甲基)-2-氧代乙基]-2-甲基丙酰胺 或其藥學上可接受的鹽。
此外，本發(fā)明涉及化合物2-氨基-N-[(1R)-2-[(3R)-3-芐基-3-(N，N′，N′-三甲基肼基羰基)哌啶-1-基]-1-(1H-吲哚-3-基-甲基)-2-氧代乙基]-2-甲基丙酰胺 或其藥學上可接受的鹽。
通過如在實施例1中所述的方法可獲得的化合物的結(jié)構(gòu)可以例如通過X射線衍射分析證明(例如在RemingtonThe Science and Practice ofPharmacy，第十九版(1995)、特別是第160和561562頁中所描述的那樣)。
這里所述的兩個或更多實施方案的任何一種可能的組合均包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。
一般方法該專利中使用的方法是基于本領(lǐng)域熟知的肽偶合，決不應該被解譯為以任何方式限制本發(fā)明。
在該方法中，在偶合氨基酸或肽殘基之前，可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法除去適當?shù)谋Ｗo基例如叔丁氧基羰基(Boc)。也可以避免使用保護基。適當?shù)陌被峥梢酝ㄟ^本領(lǐng)域已知的方法保護和脫保護，例如由T.W.Green所描述的(有機合成中的保護基團(Protective Groups in OrganicSynthesis)，2版，John Wiley and Sons，New York 1991)。
實施例1將詳細地描述該方法。通過拆分3芐基哌啶1，3二羧酸1叔丁基酯的外消旋混合物得到一個對映體化合物，通過該方法得到的最終化合物是非對映體2-氨基-N-[(1R)-2-[(3R)-3-芐基-3-(N，N′，N′-三甲基肼基羰基)哌啶-1-基]-1-(1H-吲哚-3-基-甲基)-2-氧代乙基]-2-甲基丙酰胺，
而不是兩個非對映體的混合物。
本發(fā)明的化合物對于通過酶蛋白水解的降解顯示增加的抵抗力，因為它是非天然的、尤其因為天然的酰胺鍵被非天然的酰胺鍵模擬物取代。與已知的激素釋放肽相比本發(fā)明化合物對于蛋白水解降解增加的抵抗力與在先文獻中提出的肽相比預計提高了其生物利用率。
藥物組合物本發(fā)明的化合物可以任選是藥學上可接受的鹽的形式例如本發(fā)明化合物的藥學上可接受的酸加成鹽，其包括那些通過式I化合物與無機或有機酸例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、乙酸、磷酸、乳酸、馬來酸、扁桃酸、鄰苯二甲酸、檸檬酸、戊二酸、葡糖酸、甲磺酸、水楊酸、琥珀酸、酒石酸、甲苯磺酸、三氟乙酸、氨基磺酸或富馬酸和/或水反應制備的鹽。
本發(fā)明的化合物可以以藥學上可接受的酸加成鹽形式，或如合適時以為堿金屬或堿土金屬或低級烷基銨鹽形式給藥。這種鹽的形式被認為顯示與游離堿形式大約相同等級的活性。
在另-方面，本發(fā)明涉及包括作為活性成分的本發(fā)明化合物或其藥學上可接受的鹽和藥學上可接受的載體或稀釋劑的藥物組合物。
含有本發(fā)明化合物的藥物組合物可以通過常規(guī)技術(shù)來制備，例如按照在Remington′s Pharmaceutical Sciences，1985或RemingtonThe Scienceand Practice of Pharmacy，第十九版(1995)中所描述的方法制備。該組合物可以以常用的形式存在，例如膠囊劑、片劑、氣霧劑、溶液、懸浮液或局部給藥制劑。
使用的藥物載體或稀釋劑可以是常用的固體或液體載體。固體載體的例子是乳糖、白土、蔗糖、環(huán)糊精、滑石、明膠、瓊脂、果膠、阿拉伯膠、硬脂酸鎂、硬脂酸或纖維素低級烷基醚。液體載體的例子是糖漿、花生油、橄欖油、磷脂、脂肪酸、脂肪酸酰胺、聚氧乙烯或水。
同樣，載體或稀釋劑可以包括本領(lǐng)域已知的任何持續(xù)釋放材料，例如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯，單獨或與蠟混合。
如果固體載體用于口服，制劑可以被壓片以粉狀或小藥丸形式放入硬明膠膠囊中，或者它可以是錠劑或糖錠形式。固體載體的量變化較廣，但是通常為大約25毫克-大約1克。如果使用液體載體，制劑可以是糖漿、乳狀液、軟明膠膠囊或者無菌的可注射的液體例如含水的或不含水的液體懸浮液或者溶液。
可以通過常用的壓片技術(shù)制備的典型的片劑可以含有核心活性化合物(以游離化合物或其鹽)10毫克膠體二氧化硅(Aerosil) 1.5毫克微晶纖維素(Avicel)70毫克改性的纖維素樹膠(AcDiSol) 7.5毫克硬脂酸鎂包衣HPMC 大約9毫克*Mywacett 9-40T 大約0.9毫克*用作薄膜包衣增塑劑的?；膯嗡岣视王?。
對于鼻內(nèi)給藥，制劑可以含有溶解或懸浮在液體載體、對于氣霧劑尤其是含水的載體中的本發(fā)明化合物。該載體可以含有添加劑例如增溶劑例如丙二醇、表面活性劑、吸收增強劑例如卵磷脂(磷脂酰膽堿)或環(huán)糊精，或防腐劑例如對羥基苯甲酸酯類。
通常，本發(fā)明的化合物以單位劑型配藥，每單位劑量包括50200毫克活性成分和藥學上可接受的載體。
當給病人例如人作為藥物給藥時，根據(jù)本發(fā)明化合物的劑量適合為0.01500毫克/天，例如大約5-大約50毫克、例如大約10毫克/劑量。
在另一方面，本發(fā)明涉及單位劑量形式的藥物組合物，包括作為活性成分的大約10-大約200毫克通式I化合物或其藥學上可接受的鹽。
已經(jīng)證明本發(fā)明的化合物具有在體內(nèi)釋放內(nèi)生的生長激素的能力。因此該化合物可以用于治療例如在生長激素缺乏的人或過了中年的病人或家畜中需要增加血漿生長激素水平的病癥。
因此，在一特別方面，本發(fā)明涉及用于刺激生長激素從腦垂體中釋放的藥物組合物，該組合物包括作為活性成分的本發(fā)明的化合物或其藥學上可接受的鹽和藥學上可接受的載體或稀釋劑。
在另一方面，本發(fā)明涉及用于刺激生長激素從腦垂體中釋放的方法，該方法包括向需要的患者給藥有效量的本發(fā)明的化合物或其藥學上可接受的鹽。
在另一方面，本發(fā)明涉及本發(fā)明化合物或其藥學上可接受的鹽用于制備刺激生長激素從腦垂體中釋放的藥物的用途。
對于本領(lǐng)域技術(shù)人員，熟知人的生長激素的當前和潛在的用途是不同的和各式各樣的。因此，本發(fā)明的化合物可以用于刺激生長激素從腦垂體中釋放的目的給藥，于是具有類似于生長激素本身的效果或用途。本發(fā)明的化合物用于刺激老年人生長激素的釋放，預防糖皮質(zhì)激素分解代謝的副作用，預防和治療骨質(zhì)疏松癥，治療慢性疲勞綜合癥(CFS)，治療急性的疲勞綜合癥和選擇性手術(shù)之后肌肉損耗，刺激免疫系統(tǒng)，加速傷口愈合，加速骨折恢復，加速復雜性骨折例如內(nèi)脫位的骨生成，治療骨折繼發(fā)性消瘦，治療生長遲緩，治療由腎衰竭或機能不全引起的生長遲緩，治療心肌病，治療與慢性肝病有關(guān)的消瘦，治療血小板減少癥，治療與克羅恩氏病有關(guān)的生長遲緩，治療短腸綜合征，治療與慢性阻塞性肺病有關(guān)的消瘦(COPD)，治療與移植有關(guān)的并發(fā)癥，治療生理學上的短身材包括生長激素缺乏的孩子和與慢性病有關(guān)的短身材，治療肥胖和與肥胖有關(guān)的生長遲緩，治療厭食，治療與PraderWilli綜合癥和特納氏綜合征有關(guān)的生長遲緩；提高患有部分生長激素不敏感綜合癥病人的生長速度，加速恢復和減少燒傷病人的住院治療；治療宮內(nèi)生長遲緩、骨骼發(fā)育異常、皮質(zhì)醇過多癥和柯興綜合征；誘導脈動的生長激素釋放；替換有壓力病人的生長激素，治療骨軟骨發(fā)育不良、Noonan綜合癥、精神分裂癥、抑郁癥、阿爾茨海默氏病、遲延的傷口愈合和社會心理的喪失，治療與肺機能不良和呼吸依賴性有關(guān)的異化作用；治療心臟衰竭或相關(guān)的血管機能不良，治療損害的心臟功能，治療或預防心肌梗死，降低血壓，預防心室機能不良或預防再灌注現(xiàn)象；治療處于長期透析之中的成人；減弱大手術(shù)之后蛋白質(zhì)分解代謝的反應，減少惡病質(zhì)和由于慢性病如癌癥或愛滋病導致的蛋白質(zhì)的損失；治療血胰島素增多包括胰島細胞增殖癥，用于誘導排卵的輔助治療；刺激胸腺的發(fā)育和預防與年齡有關(guān)的胸腺功能的下降，治療免疫抑制病人；治療sarcopenia，治療與愛滋病有關(guān)的消瘦；改善肌力、可動性，保持虛弱老人的皮膚厚度、代謝的體內(nèi)平衡和腎臟的體內(nèi)平衡，刺激成骨細胞、骨頭改型和軟骨生長；調(diào)整食物攝入；刺激配對動物的免疫系統(tǒng)和治療配對動物的衰老病癥，促進家畜生長和刺激綿羊的羊毛生長，提高家畜的產(chǎn)奶量，治療代謝綜合癥(綜合癥X)，治療抗胰島素性包括哺乳動物例如人中的NIDDM，治療心臟中的抗胰島素性，改善睡眠質(zhì)量和矯正由于REM睡眠(REMsleep)的高度增加和REM潛伏的減少的相對的衰老hyposomatotropism，治療低體溫，治療與年齡有關(guān)的虛弱，治療充血性心力衰竭，治療髖部骨折，治療T4/T8細胞比例降低的個體的免疫缺乏，治療肌肉萎縮，治療過了中年的人的肌與骨的損傷，提高蛋白激酶B(PKB)的活性，改善總的肺機能，治療睡眠障礙，治療與氣喘有關(guān)的生長遲緩，治療與青少年風濕性關(guān)節(jié)炎有關(guān)的生長遲緩和治療與囊性纖維化有關(guān)的生長遲緩。
對于上述適應癥，劑量將根據(jù)給藥方式和所希望的治療而改變。然而，通常向病人和動物給藥在0.0001和100毫克/千克體重/天之間的劑量水平以達到內(nèi)生性生長激素有效的釋放。此外當以上述劑量水平給藥時，本發(fā)明的化合物沒有或基本上沒有副作用，這種副作用是例如釋放LH、FSH、TSH、ACTH、后葉加壓素、催產(chǎn)素、皮質(zhì)醇和/或催乳激素。通常，適合于口服、鼻內(nèi)、肺或經(jīng)皮膚的給藥劑量包括大約0.0001毫克-大約100毫克，優(yōu)選大約0.001毫克-大約50毫克本發(fā)明化合物與藥學上可接受的載體或稀釋劑。
可選擇的是，本發(fā)明的藥物組合物可以包括本發(fā)明化合物與一個或多個顯示不同活性的化合物例如抗生素或其他藥理學的活性物質(zhì)相結(jié)合。
給藥途徑可以是能夠有效地將活性化合物傳輸至適當?shù)幕蛩Ｍ淖饔梦恢玫娜魏瓮緩剑缈诜?、鼻?nèi)、肺的、經(jīng)皮膚的或腸胃外的給藥途徑，優(yōu)選口服途徑。
本發(fā)明化合物除了藥學用途外，也可以用于研究生長激素釋放規(guī)則的體外工具。
本發(fā)明的化合物還可以用于評價腦垂體釋放生長激素能力的體內(nèi)工具。例如，可以在向人給藥化合物之前和之后提取血清樣品測定生長激素。比較每個血清樣品中的生長激素將直接測定病人腦垂體釋放生長激素的能力。
本發(fā)明的化合物向商業(yè)上重要的動物給藥以提高它們的生長速度和程度以及提高產(chǎn)奶量。
本發(fā)明化合物另外的用途是與其他促分泌劑例如GHRP(2或6)、GHRH及其類似物、生長激素及其類似物或生長調(diào)節(jié)素包括IGF1和IGF2結(jié)合使用。
藥理學方法本發(fā)明化合物可以在體外評價其對于大鼠腦垂體原始培養(yǎng)物中釋放生長激素的效力和能力，這種評價可以按照如下所述的方法進行。
大鼠腦垂體細胞的分離是對O.Sartor等人方法(Endocrinology 116，1985，第952957頁)的改變。雄性患白化病的SpragueDawley大鼠(250+/25克)從Mollegaard，Lille Skensved，Denmark購買。將大鼠放在幾組籠中(四個動物/籠)并且放入12小時光循環(huán)的房間中。室溫變化范圍為1924℃，濕度為3060％。
將鼠去頭然后解剖腦垂體。除去neurointermediate葉，立即將剩下的組織放入冰冷的分離緩沖劑(Gey′s介質(zhì)(Gibco 04104030)，補充有0.25％D葡萄糖、2％非必需氨基酸(Gibco 04301140)和1％牛血清白蛋白(BSA)(SigmaA4503))中。將組織切成小塊，轉(zhuǎn)移到補充有3.8毫克/毫升胰蛋白酶(Worthington & num；3707 TRL3)和330毫克/毫升DNase(Sigma D4527)的分離緩沖劑中。該混合物在70轉(zhuǎn)/分鐘、37℃下和95/5％O2/CO2氣氛中培養(yǎng)35分鐘。然后將該組織在上述緩沖劑中洗滌三次。然后使用標準巴斯德移液管將該組織抽吸至單個細胞中。分散之后，通過尼龍過濾器(160毫米)過濾細胞除去未消化的組織。該細胞懸浮液用補充有胰蛋白酶抑制劑(0.75毫克/毫升，Worthington # 2829)的分離緩沖劑洗滌3次，最后再懸浮在培養(yǎng)介質(zhì)補充有25mM HEPES(Sigma H3375)、4mM谷氨酰胺(Gibco 04305030H)、0.075％碳酸氫納(Sigma S8875)、0.1％非必需氨基酸、2.5％胎牛血清胎牛血清(FCS，Gibco 01106290)、3％馬血清(Gibco 03406050)、10％新鮮的大鼠血清、1nM T3(Sigma T2752)和40毫克/升地塞米松(Sigma D4902)的pH7.3的DMEM中至密度為2x×105細胞/毫升。該細胞接種至微量滴定板(Nunc，Denmark)中，其中200毫升ml/穴，在37℃和8％CO2下培養(yǎng)3天。
化合物測試培養(yǎng)之后，該細胞用刺激緩沖劑(補充有1％BSA(Sigma A4503)、0.25％D-葡萄糖(Sigma G5250)和25mM HEPES(Sigma H3375)的pH7.3的Hanks平衡鹽水(Gibco 04104020))洗滌兩次，在37℃下預培養(yǎng)1小時。該緩沖劑與90ml刺激緩沖劑(37℃)交換。加入十毫升測試化合物的溶液，該板在37℃和5％CO2下培養(yǎng)15分鐘。潷析出介質(zhì)，在rGH SPA測試系統(tǒng)中分析GH含量。
測試化合物的劑量范圍為10pM至100mM。使用Hill等式(Fig P，Biosoft)建立劑量-反應關(guān)系。效力(最大的GH釋放，Emax)用GHRP-6的％Emax表示。能力(EC50)被確定為誘導最大刺激GH釋放一半的濃度。
本發(fā)明化合物使用如下所述的方法評價其代謝穩(wěn)定性將化合物溶解在濃度為1毫克/毫升的水中。將25毫升該溶液加入到175毫升相應的酶溶液中(結(jié)果形成酶基質(zhì)比例(w/w)大約為1∶5)。該溶液在37℃下放置過夜。相對相應的零-樣品使用帶有選擇的分子離子離子監(jiān)控器的流動注射電噴霧質(zhì)譜法(ESMS)分析10毫升不同的降解溶液。如果與零-樣品相比信號降低20％以上，為了明確地確定降解程度和位置通過HPLC和質(zhì)譜法分析剩余溶液。
為了證明不同的溶液降解肽的能力，在穩(wěn)定性測試中已經(jīng)包括了幾種標準的肽(ACTH410，血管緊張素114和胰高血糖素)。
標準的肽(血管緊張素114，ACTH 410和胰高血糖素)從Sigma，MO，USA購買。
酶(胰蛋白酶、糜蛋白酶、彈性蛋白酶氨基肽酶M和羧肽酶Y和B)全部從Boehririger Mannheim GmbH(Mannheim Germany)購買。
胰酶混合物100mM碳酸氫銨中的胰蛋白酶、糜蛋白酶和彈性蛋白酶pH8.0(所有濃度均為0.025毫克/毫升)。
羧肽酶混合物50mM乙酸銨中的羧肽酶Y和B pH4.5(所有濃度均為0.025毫克/毫升)。
氨基肽酶M溶液100mM碳酸氫銨中的氨基肽酶M(0.025毫克/毫升)pH8.0使用兩個不同的質(zhì)譜儀進行質(zhì)譜分析。裝有電子噴霧離子源的Sciex API III三倍四極LCMS儀器(Sciex儀器，Thornhill，Ontario)和Biolon 20飛行時間血漿解吸儀器(Biolon Nordic AB，Uppsala，Sweden)。
在API III儀器上使用上述帶有流動注射被分析物的分子離子的單個離子監(jiān)控器進行化合物的定量分析(降解前后)。通過ABI 140B HPLC設備(PerkinElmer Applied Biosystems Divisions，F(xiàn)oster City，CA)控制液體流量(甲醇∶水1∶1)為100毫升/分鐘。儀器參數(shù)被設定為標準操作條件，使用最強的分子離子(在大多數(shù)情況下相當于雙倍電荷的分子離子)進行SIM監(jiān)測。
此外降解產(chǎn)物的鑒定涉及使用在硝化纖維素涂覆的靶上點樣的血漿解吸質(zhì)譜法(PDMS)和標準的儀器裝置。在此測定的質(zhì)量準確度通常比0.1％好。
使用具有標準的乙腈TFA分離梯度的HYTACH C18反相4.6×105mm HPLC柱(Hewlett-Packard Company，Palo Alto，CA)進行降解產(chǎn)物的分離和離析。所用的HPLC體系是HP1090M(Hewlett-Packard Company，Palo Alto，CA)。
+穩(wěn)定(在24小時之后降解溶液中的SIM信號減少小于20％)-不穩(wěn)定(在24小時之后降解溶液中的SIM信號減少大于20％)藥動學方法本發(fā)明化合物可以評價其口服的生物利用率，這樣的評價可以按照如下所述的方法進行。
本發(fā)明化合物的藥動學可以在禁食的長耳短腿小獵犬(Beagle dogs)中進行研究。
通過一周沖洗，分離靜脈內(nèi)給藥和口服測試化合物的5％葡萄糖溶液。
在給藥藥物之前(計時起點)和給藥之后0.08、0.25、0.50、0.75、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、5.0和6.0小時立即收集血樣。
血漿樣品冷凍儲存(＜18℃)待分析。
帶有固相提取和UV檢測的HPLC方法用于血漿中化合物的定量。
本發(fā)明化合物的口服有效性為大約50％。
通過非區(qū)室化(noncompartmental)方法使用基于PC的藥動學軟件WinNonlin，1.1版本(Scientific Consulting Inc.，Apex，NC，USA)計算化合物的藥動學參數(shù)。
這里所述的任何新的特征或特征的結(jié)合被認為對本發(fā)明是必需的。
實施例制備本發(fā)明化合物和含有該化合物制劑的方法在下面實施例中進一步說明，然而這些實施例不能被理解為限制本發(fā)明。
化合物的結(jié)構(gòu)通過高效液相色譜法(HPLC)、核磁共振(NMR，Bruker400MHz)或者液相色譜-質(zhì)譜法(LCMS)確定。NMR位移(d)以百萬分之幾(ppm)為單位給出，僅給出選擇的峰。mp是熔點并且以℃為單位給出。柱色譜法使用W.C.Still等人，J.Org.Chem.1978，43，29232925中所述的技術(shù)在Merck硅膠60(Art 9385)上進行。用作原料的化合物或者是已知的化合物或者是可以通過本身已知的方法很容易制備的化合物。所用的甲醇/氨溶液是甲醇中10％氨的溶液。
HPLC分析方法A1.
在42℃下以1毫升/分鐘的速度洗脫的218TP544.6毫米×250毫米5m C18二氧化硅柱(The Seperations Group，Hesperia)上使用在214、254、276和301nm處的UV檢測進行RP分析。該柱用在緩沖液中的5％乙腈平衡，所述緩沖液由0.1M硫酸銨組成的、用4M硫酸調(diào)節(jié)至pH2.5。注射之后，樣品通過在相同的緩沖液中的5％-60％乙腈的梯度溶液洗脫50分鐘。
方法B1.
在42℃下以1毫升/分鐘的流量洗脫的218TP54 4.6毫米×250毫米5m C18二氧化硅柱(The Seperations Group，Hesperia)上使用在214、254、276和301nm處的UV檢測進行RP分析。該柱用5％(乙腈+0.1％ TFA)的TFA水溶液(0.1％)平衡。注射之后，樣品通過在相同的含水緩沖劑中5％-60％(乙腈+0.1％TFA)的梯度溶液洗脫50分鐘。
方法h8在42℃下以1毫升/分鐘的流量洗脫的218TP544.6毫米×150毫米C18二氧化硅柱上使用在214和254nm處的UV檢測進行RP分析。該柱用5％乙腈、85％水和10％的0.5％三氟乙酸水溶液平衡，通過從5％乙腈、85％水和10％的0.5％三氟乙酸溶液至90％乙腈和10％的0.5％三氟乙酸的溶液的線性梯度溶液洗脫15分鐘。
Chirale HPLC在室溫下以0.7毫升/分鐘的流量洗脫的，裝有4.6毫米×80毫米Chiracel OJ前置柱的4.6毫米×250毫米Chiracel OJ柱(兩個柱均購買自Daicel Chemical Industries，LTD)上使用在225和254nm處的UV檢測進行Chiral HPLC。樣品用庚烷(92)異丙醇(8)TFA(0.1)的等度洗脫液洗脫。
LCMS-分析在PE Sciex API 100 LC/MS體系中使用Waters3毫米×150毫米3.5mC18對稱柱和20毫升/分鐘流量的正離子噴霧進行LCMS分析。該柱用線性梯度的590％乙腈、850％水和10％三氟乙酸(0.1％)/水以1毫升/分鐘的流量洗脫15分鐘。
縮寫TLC薄層色譜法DMSO 二甲亞砜min分鐘h 小時Boc叔丁氧基羰基DMF二甲基甲酰胺THF四氫呋喃EDAC N-乙基-N′二甲氨基丙基碳二亞胺鹽酸鹽HOAt 1-羥基-7氮雜苯并三唑DIEA 二異丙基乙胺TFA三氟乙酸結(jié)構(gòu)單元(Building blocks)用于下列實施例中的N甲基化氨基酸按照Can.J.Chem.1977，55，906中的方法制備。
甲酸-N′，N′-二甲基酰肼將50毫升甲酸甲酯和50毫升1，1-二甲基肼的混合物在室溫下攪拌3天。在真空中濃縮形成結(jié)晶，將其在EtOH(5)庚烷(95)中攪拌，在冰箱中冷卻過夜然后過濾50.7克(575毫摩爾)(收率88％)N，N，N′-三甲基肼，二鹽酸鹽向裝有磁力攪拌器和加料漏斗的2升三頸圓底燒瓶中裝入20.4克LiAlH4，抽空然后用氮氣沖洗。然后將加料漏斗裝上氮氣鼓泡器，緩慢地加入250毫升無水的四氫呋喃(放熱)。劇烈攪拌灰色的懸浮液，用1小時滴加含有40.0克甲酸N′，N′-二甲基酰肼的250毫升無水的四氫呋喃溶液。在室溫下攪拌過夜。反應通過TLC(CH2Cl2(100)MeOH(10)NH3(1))監(jiān)測。
向另一個裝有干冰冷凝器的2升三頸圓底燒瓶中裝入350毫升4.8MHCl/CH3OH，然后放入干冰浴(70℃)中。然后通過vigreux冷凝器將其連接到反應燒瓶上，反應燒瓶放置在油浴中。向該反應燒瓶中小心地加入200毫升四氫呋喃和200毫升MeOH的混合物。蒸餾產(chǎn)物和溶劑同時緩慢地加熱至130℃，結(jié)果收集結(jié)晶的三甲基肼的二鹽酸鹽(在70℃)。移去干冰浴，使得溫度上升到室溫。在真空中濃縮獲得稀薄的無色油，使用高真空泵將其干燥過夜45.2克(309毫摩爾)(收率68％)。在氮氣下保存該非常吸濕的產(chǎn)物。
其他原料可以從Aldrich購買。
實施例1制備化合物2-氨基-N-[(1R)-2-[(3R)-3-芐基-3-(N，N′，N′-三甲基肼基羰基)哌啶-1-基]-1-(1H-吲哚-3-基甲基)-2-氧代乙基]-2-甲基丙酰胺 或
2-氨基-N-[(1R)-2-[(3S)-3-芐基-3-(N，N′，N′-三甲基肼基羰基)哌啶-1-基]-1-(1H-吲哚-3-基甲基)-2-氧代乙基]-2-甲基丙酰胺的方法 步驟a哌啶-1，3-二羧酸1-叔丁酯3-乙酯 向裝有磁力攪拌器和加料漏斗的一頸圓底燒瓶(1升)中裝入NaOH顆粒(15.6克)、四氫呋喃(400毫升)和3-哌啶甲酸乙酯(50毫升，324毫摩爾)。向在室溫下攪拌的混合物中滴加溶于四氫呋喃(150毫升)中的Boc2O(84.9克，389毫摩爾)的溶液(1小時，白色固體沉淀，NaOH顆粒溶解，放熱)。混合物在室溫下攪拌過夜。將該混合物加入到乙酸乙酯(500毫升)和H2O(2000毫升)中，水層用乙酸乙酯(2×500毫升)反萃取，合并的有機層用鹽水(100毫升)洗滌，MgSO4干燥，過濾然后在真空中濃縮獲得哌啶-1，3-二-羧酸1-叔丁酯3-乙酯(82.5克)，為淺黃色油。
1HNMR(300MHz CDCl3)δ1.25(t，3H，CH3)；1.45(s，9H，3XCH3)；2.05(m，1H)；2.45(m，1H)；2.85(m，1H)；3.95(d(寬的)，1H)；4.15(q，2H，CH2)步驟b3-芐基哌啶-1，3-二羧酸1-叔丁酯3-乙酯(外消旋混合物) 將裝有磁力攪拌器、溫度計、氮氣鼓泡器和加料漏斗的三頸圓底燒瓶(2升)抽空，用氮氣沖洗，裝入無水四氫呋喃(500毫升)然后冷卻至70℃。然后加入二異丙胺鋰(164毫升2.0M四氫呋喃溶液，327毫摩爾)。用45分鐘向在70℃下攪拌的溶液中滴加含有哌啶-1，3-二羧酸1-叔丁酯3-乙酯(80克，311毫摩爾)的無水四氫呋喃(50毫升)溶液(溫度在70℃-60℃之間，澄清的紅色溶液)。該混合物攪拌20分鐘，隨后用40分鐘滴加含有芐基溴(37毫升，311毫摩爾)的無水四氫呋喃(250毫升)溶液(溫度在70℃-60℃之間)。該混合物在70℃下攪拌1小時，然后在室溫下放置過夜(淺橙色)。該反應混合物在真空中濃縮至大約300毫升，轉(zhuǎn)移到分液漏斗中，用CH2Cl2(900毫升)稀釋然后用H2O(900毫升)洗滌。由于不良分離，水層用CH2Cl2(200毫升)反萃取，合并的有機層用含水的NaHSO4(200毫升，10％)、含水的NaHCO3(200毫升，飽和的)、H2O(200毫升)、鹽水(100毫升)洗滌，MgSO4干燥，過濾然后在真空中濃縮獲得油狀物，將其溶于乙酸乙酯(1)庚烷(10)中然后放置(aged)過夜。通過過濾移去形成的固體，用庚烷洗滌，在真空中干燥得到3芐基哌啶-1，3-二羧酸1-叔丁酯3-乙酯的外消旋混合物(81.4克)。
HPLC(h8)Rt＝15.79分鐘。
LCMSRt＝7.67分鐘。(m+1)＝348.0步驟c3-芐基哌啶-1，3-二羧酸1-叔丁酯(外消旋混合物) 在裝有冷凝器和磁力攪拌器的一頸圓底燒瓶(1升)中將3芐基哌啶-1，3-二羧酸1-叔丁酯3-乙酯(81克，233毫摩爾)溶于EtOH(400毫升)和NaOH(400ml，16％水溶液)中。該混合物在氮氣下回流10小時，冷卻至室溫，在真空中濃縮至大約600毫升(固體沉淀)，用H2O(400毫升)稀釋，在冰浴中冷卻然后在劇烈攪拌下用4M H2SO4酸化直到pH＝3(最終溫度28℃)。混合物用乙酸乙酯(2×700毫升)萃取，合并的有機層用鹽水(200毫升)洗滌，MgSO4干燥，過濾然后在真空中濃縮獲得油狀物，將其溶于乙酸乙酯(1)庚烷(10)中然后放置過夜。通過過濾移去形成的結(jié)晶，用庚烷洗滌，在真空中干燥得到3芐基哌啶-1，3-二羧酸1叔丁酯的外消旋混合物(66.0克)。
HPLC(h8)Rt＝12.85分鐘。
LCMSRt＝5.97分鐘。(m+1)＝320.0Chirale HPLC(Chiracel OJ，庚烷(92)異丙醇(8)TFA(0.1))Rt＝8.29分鐘46.5％Rt＝13.69分鐘53.5％步驟d(3R)-3-芐基哌啶-1，3-二羧酸-1-叔丁酯或(3S)3芐基哌啶-1，3-二羧酸1-叔丁酯(拆分3-芐基哌啶-1，3-二羧酸1-叔丁酯) 或 在裝有磁力攪拌器的一頸燒瓶(5L)中將3-芐基哌啶-1，3-二羧酸1-叔丁酯(76克，238毫摩爾)溶于乙酸乙酯(3.0L)中。然后加入H2O(30毫升)、R(+)1苯乙胺(18.2毫升，143毫摩爾)和Et3N(13.2毫升，95毫摩爾)，混合物在室溫下攪拌過夜形成白色結(jié)晶的沉淀(41.9克)，通過過濾移去，用乙酸乙酯洗滌然后在真空中干燥。將該沉淀溶于含水的NaHSO4(300毫升，10％)和乙酸乙酯(600毫升)的混合物中，分層然后用乙酸乙酯(100毫升)反萃取水層。合并的有機層液用鹽水(100毫升)洗滌，MgSO4干燥然后過濾。在真空中除去溶劑獲得無色油，將其溶于乙酸乙酯(1)庚烷(10)中，然后陳化過夜。通過過濾移去已經(jīng)形成的結(jié)晶，用庚烷洗滌，在真空中干燥得到一個化合物，其或者是(3R)-3-芐基哌啶-1，3-二羧酸1-叔丁酯或者是(3S)3-芐基哌啶-1，3-二羧酸1-叔丁酯(27.8克)。
Chirale HPLC (Chiracel OJ，庚烷(92)異丙醇(8)TFA(0.1))Rt＝7.96分鐘。95.8％ ee步驟e(3R)-3-芐基-3-(N，N′，N′-三甲基肼基羰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯或(3S)-3-芐基-3-(N，N′，N′-三甲基肼基羰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯 或 在裝有大磁力攪拌器和加料漏斗/氮氣鼓泡器的一頸圓底燒瓶(1L)中將三甲基肼二鹽酸鹽(15.3克，104毫摩爾)懸浮在四氫呋喃(250毫升)中。然后將燒瓶放入水浴(溫度10-20℃)中，加入六氟磷酸溴-三-吡咯烷 (40.4克，86.7毫摩爾)，在劇烈攪拌下滴加二異丙基乙胺(59毫升，347毫摩爾)。混合物(含有重質(zhì)沉淀)攪拌5分鐘，用1.5小時緩慢地加入來自步驟d產(chǎn)物的四氫呋喃(250毫升)溶液，該產(chǎn)物或者是(3R)-3-芐基哌啶-1，3-二羧酸1-叔丁酯或者是(3S)-3-芐基哌啶-1，3-二羧酸1-叔丁酯(27.7克，86.7毫摩爾)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢柽^夜。反應混合物用乙酸乙酯(1000毫升)稀釋，用H2O(500毫升)、含水的NaHSO4(200毫升，10％)、含水的NaHCO3(200毫升，飽和的)、鹽水(200毫升)洗滌，MgSO4干燥，過濾然后在真空中濃縮獲得淺橙色油。將該混合物溶于乙酸乙酯(300毫升)中，加入到SiO2(150克)中然后在真空中濃縮至干燥粉末，將其施加到充滿SiO2(150克)的過濾器上，用庚烷(1升)洗滌，用乙酸乙酯(2.5升)析出所希望的化合物。在真空中濃縮之后，獲得橙色油狀產(chǎn)物，其或者是(3R)-3-芐基-3-(N，N′，N′-三甲基肼基羰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯或者是(3S)-3-芐基-3-(N，N′，N′-三甲基肼基羰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(49克)。
HPLC(h8)Rt＝14.33分鐘。
步驟f(3R)-3-芐基-哌啶-3-羧酸三甲基酰肼或(3S)-3-芐基-哌啶-3-羧酸三甲基酰肼 或 在裝有磁力攪拌器的一頸圓底燒瓶(2L)中將來自步驟e的產(chǎn)物(3R)-3-芐基-3-(N，N′，N′-三甲基肼基羰基)哌啶1羧酸叔丁酯或(3S)3芐基-3-(N，N′，N′-三甲基肼基羰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(56.7克，100.9毫摩爾)溶于乙酸乙酯(500毫升)(澄清的無色溶液)中。然后將該燒瓶放入水浴(溫度1020℃)中，將HCl氣體通過該溶液5分鐘(粉狀的沉淀)。攪拌1小時之后(沉淀大量的白色結(jié)晶)，該溶液用N2沖洗以除去過量的HCl。通過緩慢的過濾移去沉淀，用乙酸乙酯(2×100毫升)洗滌，在真空、40℃干燥過夜得到該產(chǎn)物，其或者是(3R)-3-芐基-哌啶-3-羧酸三甲基酰肼或者是(3S)-3-芐基-哌啶-3-羧酸三甲基酰肼(37.0克)。
HPLC(h8)Rt＝7.84分鐘。
步驟g[(1R)-2-[(3R)-3-芐基-3-(N，N′，N′--三甲基肼基羰基)哌啶-1-基]-1-((1H-吲哚-3-基)甲基)-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯或[(1R)-2-[(3S)-3-芐基-3-(N，N′，N′-三甲基肼基羰基)哌啶-1-基]-1-((1H-吲哚-3-基)甲基)-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯 或 在裝有磁力攪拌器和氮氣鼓泡器的一頸圓底燒瓶(500毫升)中將BocDTrpOH(32.3克，106毫摩爾)溶于二甲基乙酰胺(250毫升)中。該溶液冷卻至05℃，加入1羥基-7氮雜苯并三唑(14.4克，106毫摩爾)、1-乙基-3-(3二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(20.3克，106毫摩爾)、N-甲基嗎啉(11.6毫升，106毫摩爾)。在05℃下攪拌20分鐘之后，加入來自步驟f的產(chǎn)物(3R)-3-芐基-哌啶3羧酸三甲基酰肼或者是(3S)3芐基-哌啶3羧酸三甲基酰肼(37.0克，106毫摩爾)和N甲基嗎啉(24.4毫升，223毫摩爾)。反應在室溫下攪拌過夜。然后將混合物加入到乙酸乙酯(750毫升)中，用含水的NaHSO4(300毫升，10％)洗滌。使得層分離，水層用乙酸乙酯(500毫升)反萃取。合并的有機層用H2O(100毫升)、含水的NaHCO3(300毫升，飽和的)、H2O(100毫升)、鹽水(300毫升)洗滌，MgSO4干燥，過濾然后在真空中濃縮獲得橙色油狀產(chǎn)物，其或者是[(1R)-2-[(3R)-3-芐基-3-(N，N′，N′-三甲基肼基羰基)哌啶-1-基]-1-((1H-吲哚-3-基)甲基)-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯或者是[(1R)-2-[(3S)-3-芐基-3-(N，N′，N′-三甲基肼基羰基)哌啶-1-基]-1-((1H-吲哚-3-基)甲基)-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(56.7克)。
HPLC(h8)Rt＝14.61分鐘。
LCMSRt＝7.35分鐘。(m+1)＝562.6步驟h1-[(2R)2-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)丙?；鵠(3R)-3-芐基哌啶-3-羧酸三甲基酰肼或1-[(2R)2-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)丙?；?3S)-3-芐基哌啶-3-羧酸三甲基酰肼 或
在裝有磁力攪拌器的一頸圓底燒瓶(2L)中將來自步驟g的產(chǎn)物[(1R)-2-[(3R)-3-芐基-3-(N，N′，N′-三甲基肼基羰基)哌啶-1-基]-1-((1H-吲哚-3-基)甲基)-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯或[(1R)-2-[(3S)-3-芐基-3-(N，N′，N′-三甲基肼基羰基)哌啶-1-基]-1-((1H-吲哚-3-基)甲基)-2-氧代乙基]氨基甲酸叔丁酯(56.7克，100.9毫摩爾)溶于乙酸乙酯(500毫升)中(澄清的無色溶液)。然后將該燒瓶放入水浴(溫度1020℃)中，將HCl氣體通過該溶液10分鐘(重質(zhì)沉淀的油)。該混合物用N2沖洗以除去過量的HCl，然后分離成油和乙酸乙酯層。丟棄乙酸乙酯層。將該油溶于H2O(500毫升)中，加入CH2Cl2(1000毫升)和固體Na2CO3直到pH＞7。分層，有機層用H2O(100毫升)、鹽水(100毫升)洗滌，MgSO4干燥，過濾然后在真空中濃縮獲得橙色泡沫狀的產(chǎn)物，其或者是1-[(2R)2-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)丙?；?3R)-3-芐基哌啶-3-羧酸三甲基酰肼或1-[(2R)2-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)丙?；?3S)-3-芐基哌啶-3-羧酸三甲基酰肼(27克)。
HPLC(h8)Rt＝10.03分鐘。
步驟i{1-[(1R)-2-[(3R)-3-芐基-3-(N，N′，N′-三甲基肼基羰基)哌啶1-基]-1-(1H-吲哚-3-基-甲基)-2-氧代乙基氨基甲?；鵠-1-甲基乙基}氨基甲酸叔丁酯或{1-[(1R)-2-[(3S)-3-芐基-3-(N，N′，N′-三甲基肼基羰基)哌啶-1-基]-1-(1H-吲哚-3-基甲基)-2-氧代乙基氨基甲酰基]-1-甲基乙基}氨基甲酸叔丁酯 或
在裝有磁力攪拌器和氮氣鼓泡器的一頸頸圓底燒瓶(500毫升)中將BocAibOH(11.9克，58.4毫摩爾)溶于二甲基乙酰胺(125毫升)中。向在室溫下攪拌的溶液中加入1羥基-7氮雜苯并三唑(7.95克，58.4毫摩爾)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(11.2克，58.4毫摩爾)和二異丙基乙胺(13.0毫升，75.8毫摩爾)。20分鐘之后(黃色沉淀)，加入含有來自步驟h產(chǎn)物1-[(2R)-2-氨基-3-[1H-吲哚-3-基)丙?；?3R)-3-芐基哌啶-3-羧酸三甲基酰肼或1-[(2R)-2-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)丙?；?(3S)-3-芐基哌啶-3-羧酸三甲基酰肼(27.0克，58.4毫摩爾)的二甲基乙酰胺(125毫升)溶液。反應混合物在室溫下攪拌3小時。將混合物加入到乙酸乙酯(750毫升)中，用含水的NaHSO4(300毫升，10％)洗滌。使得層分離，水層用乙酸乙酯(500毫升)反萃取。合并的有機層用H2O(100毫升)、含水的NaHCO3(300毫升，飽和的)、H2O(100毫升)、鹽水(300毫升)洗滌，MgSO4干燥，過濾然后在真空中濃縮至大約500毫升。然后加入SiO2(150克)，在真空中除去剩余的乙酸乙酯得到干燥粉末，將其施加到充滿SiO2(150克)的過濾器上，用庚烷(1升)洗滌，用乙酸乙酯(2.5升)析出所希望的化合物。在真空中濃縮之后，獲得橙色泡沫狀的產(chǎn)物，其或者是{1-[(1R)-2-[(3R)-3-芐基-3-(N，N′，N′-三甲基肼基羰基)哌啶1-基]-1-(1H-吲哚-3-基甲基)-2-氧代乙基氨基甲?；鵠-1-甲基乙基}氨基甲酸叔丁酯或者是{1-[(1R)-2-[(3S)-3-芐基-3-(N，N′，N′-三甲基肼基羰基)哌啶1-基]-1-(1H-吲哚-3-基-甲基)-2-氧代-乙基氨基甲?；鵠-1-甲基乙基}氨基甲酸叔丁酯33.9克。
HPLC(h8)Rt＝14.05分鐘。
步驟j2-氨基-N-[(1R)-2-[(3R)-3-芐基-3-(N，N′，N′-三甲基肼基羰基)哌啶-1-基]-1-(1H-吲哚-3-基甲基)-2-氧代乙基]-2-甲基丙酰胺，富馬酸鹽或2-氨基-N-[(1R)-2-[(3S)-3-芐基-3-(N，N′，N′-三甲基肼基羰基)哌啶-1-基]-1-(1H-吲哚-3-基-甲基)-2-氧代乙基]-2-甲基丙酰胺，富馬酸鹽 或 在裝有磁力攪拌器的一頸圓底燒瓶(1L)中將來自步驟i的產(chǎn)物{1-[(1R)-2-[(3R)-3-芐基-3-(N，N′，N′-三甲基肼基羰基)哌啶1-基]-1-(1H-吲哚-3-基甲基)-2-氧代-乙基氨基甲?；鵠-1-甲基乙基}氨基甲酸叔丁酯或{1-[(1R)-2-[(3S)-3-芐基-3-(N，N′，N′-三甲基肼基羰基)哌啶1-基]-1-(1H-吲哚-3-基-甲基)-2-氧代-乙基氨基甲酰基]1甲基乙基}氨基甲酸叔丁酯(23.8克，36.8毫摩爾)溶于乙酸乙酯(800毫升)中(澄清的黃色溶液)。然后將該燒瓶放入水浴(溫度1020℃)中，將HCl氣體通過該溶液5分鐘(粉狀的沉淀)。攪拌1小時之后(沉淀出大量的黃色粉末)，該溶液用N2沖洗以除去過量的HCl。通過緩慢過濾移去沉淀，在真空40℃下干燥過夜。
將非結(jié)晶的沉淀溶于H2O(500毫升)中，用乙酸乙酯(100毫升)洗滌。然后加入CH2Cl2(1000毫升)和固體Na2CO3直到pH＞7。分離2層，水層用CH2Cl2(200毫升)反萃取。合并的有機層用鹽水(100毫升)洗滌，MgSO4干燥然后過濾。在減壓下蒸發(fā)溶劑，再溶解在裝有磁力攪拌器的一頸圓底燒瓶(1L)中的乙酸乙酯(500毫升)中。緩慢地加入(5分鐘)含有富馬酸(3.67克)的異丙醇(20毫升)和乙酸乙酯(50ml)的懸浮液，結(jié)果沉淀出白色結(jié)晶的鹽。1小時之后，通過過濾分離沉淀，在真空40℃下干燥過夜得到得到白色粉末狀的化合物2-氨基-N-[(1R)-2-[(3R)-3-芐基-3-(N，N′，N′-三甲基肼基羰基)哌啶-1-基]-1-(1H-吲哚-3-基甲基)-2-氧代乙基]-2-甲基丙酰胺或2-氨基-N-[(1R)-2-[(3S)-3-芐基-3-(N，N′，N′-三甲基肼基羰基)哌啶-1-基]1-(1H-吲哚-3-基甲基)-2-氧代乙基]-2-甲基丙酰胺的富馬酸鹽(13.9克)。
HPLC(A1)Rt＝33.61分鐘。
HPLC(B1)Rt＝34.62分鐘。
LCMSRt＝5.09分鐘。(m+1)＝547.權(quán)利要求
1.通過如在實施例1中所述的方法可獲得的化合物，或其藥學上可接受的鹽。
2.通過如在實施例1中所述的方法可獲得的化合物，該化合物是2-氨基-N-[(1R)-2-[(3R)-3-芐基-3-(N，N＇，N＇-三甲基肼基羰基)哌啶-1-基]-1-(1H-吲哚-3-基-甲基)-2-氧代乙基]-2-甲基丙酰胺 或其藥學上可接受的鹽。
3.一種藥物組合物，包括作為活性成分的根據(jù)權(quán)利要求12中任何一項的化合物或其藥學上可接受的鹽和藥學上可接受的載體或稀釋劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的用于刺激生長激素從腦垂體中釋放的藥物組合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求3或權(quán)利要求4的用于向動物給藥以增加它們的生長速度和程度、增加它們的奶和毛產(chǎn)量或用于治療疾病的藥物組合物。
6.刺激生長激素從哺乳動物的腦垂體中釋放的方法，該方法包括向所述的哺乳動物給藥有效量的根據(jù)權(quán)利要求1或2中任何一項的化合物或其藥學上可接受的鹽，或根據(jù)權(quán)利要求35中任何一項的組合物。
7.增加生長速度和程度，奶和毛產(chǎn)量或用于治療疾病的方法，該方法包括向需要的受治療者給藥有效量的根據(jù)權(quán)利要求1-2中任何一項的化合物或其藥學上可接受的鹽，或根據(jù)權(quán)利要求35中任何一項的組合物。
8.根據(jù)權(quán)利要求12中任何一項的化合物或其藥學上可接受的鹽用于制備藥物的用途。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的用途，其中該藥物用于刺激生長激素從哺乳動物的腦垂體中釋放。
全文摘要
本發(fā)明涉及新的非對映的化合物、其藥學上可接受的鹽、含有它們的組合物和它們用于治療由缺乏生長激素引起的醫(yī)學病癥的用途。
文檔編號C07D401/06GK1420878SQ00815145
公開日2003年5月28日 申請日期2000年11月10日 優(yōu)先權(quán)日1999年11月10日
發(fā)明者邁克爾·安克森 申請人:諾沃挪第克公司