專利名稱：α－促黑激素的環(huán)狀類似肽及其應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及多肽及其應用，特別是涉及一種α-促黑激素的環(huán)狀類似肽、它的鹽和衍生物，及其這些物質在制藥中的應用。
背景技術：
通常情況下，當人的皮膚經(jīng)常受到紫外線照射或人在過多享受日光浴時，紫外線會穿透人的表皮層，并對皮膚造成傷害。皮膚暴曬后，通常需要幾天的時間合成黑色素，以產(chǎn)生一種保護屏障。而在黑色素合成的這段時間，皮膚很容易曬傷。若皮膚經(jīng)常曬傷則容易誘發(fā)皮膚癌。據(jù)統(tǒng)計，目前皮膚癌占癌癥總病例的1.4％，對人類健康構成嚴重威脅，而且全世界范圍內(nèi)皮膚癌的患病率有不斷增高的趨勢，患者的年齡則越來越小。世界衛(wèi)生組織的統(tǒng)計數(shù)據(jù)表明，世界上每年有2-3百萬由非黑素瘤誘發(fā)的皮膚癌患者以及13萬惡性黑素瘤患者，并且患病率還在不斷升高。這類疾病在我國沿海和高山地區(qū)較多見。因此，預防皮膚癌的藥品具有廣闊的市場前景。
人體皮膚中分布有大量的黑色素細胞，它分泌出黑色素的顆粒散布于皮膚之中，使皮膚顯出顏色，而顏色的深淺主要取決于黑色素細胞的數(shù)量和功能保持穩(wěn)定，以維持正常膚色。但在某些基因變異情況下，黑色素細胞內(nèi)酪氨酸酶遭到破壞，使得黑色素合成速度變慢，甚至黑色素的形成中斷，導致皮膚患白癜風等色素性脫失性疾病。據(jù)統(tǒng)計，在南亞和非洲國家，白癜風的發(fā)病率約為3-4％，在美、歐等地區(qū)該病的發(fā)病率約為1％，在我國則為1-2％。因此，治療白癜風等色素性脫失性疾病的藥品也具有廣闊的市場前景。
此外，人們把皮膚黝黑看成是健康、美麗、成功、和性感的象征。但是如果依靠曬太陽來達到變黑的效果，則會付出代價，因為紫外線會曬傷皮膚，甚至會誘發(fā)皮膚癌?，F(xiàn)已經(jīng)有相當一部分人通過tanning美容的方式使自己擁有健康黝黑的皮膚，這種美容方式在西方國家尤為盛行。
皮膚癌的預防、白癜風的治療以及tanning美容都是通過皮膚致黑實現(xiàn)的。皮膚致黑的主要調(diào)控因子之一是天然激素α-促黑激素(α-MSH)。α-MSH是一種十三肽，氨基酸序列為Ac-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly10-Lys-Pro-Val-NH2，來源于其前體前阿黑皮素(pro-opiomelanocortin，POMC)，主要是在腦垂體中產(chǎn)生，此外亦可在胃腸道，皮膚，性腺等外周部位中產(chǎn)生。α-MSH作用于黑素細胞上的MC1受體，激活酰苷環(huán)化酶，從而引起細胞內(nèi)cAMP含量的增加。cAMP通過蛋白激酶A激活酪氨酸酶-合成黑色素的關鍵酶，從而催化黑色素的合成。合成的黑色素可以通過黑素細胞伸出的樹枝狀結構擴散到臨近的角質細胞中，使皮膚顯現(xiàn)黑色。
α-MSH在體內(nèi)易被血清蛋白酶分解，其作用沒有持續(xù)性。在過去的幾十年中，人們研究了一系列的α-MSH的類似肽，希望找到效果更好且持續(xù)作用時間更長的多肽。人們對α-MSH的類似肽的研究主要集中在變黑強度和持續(xù)效果兩個方面。研究表明His-Phe-Arg-Trp序列是α-MSH與其受體相互作用的核心序列，也是α-MSH與其受體相互作用的最小序列，因此現(xiàn)在大多數(shù)人研究α-MSH類似肽時，主要集中在不改變其氨基酸核心序列的前提下進行設計多肽。在眾多的已知α-MSH類似肽中，Melanotan I(MT I)，序列為[Nle4，Dphe7]-α-MSH以及Melanotan II(MT II)，序列為Ac-Nle-cyclo(Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Lys)-NH2有較好的效果，其致黑強度分別是天然α-MSH的26倍和100倍，并且在體內(nèi)不易被血清蛋白酶分解，因此有較好的持續(xù)效果。毒理學研究也沒有發(fā)現(xiàn)懸殊毒性作用。MT I和MT II均已經(jīng)進入臨床實驗。然而，MT I和MT II也不是十分理想，其致黑強度和持續(xù)效果都有待進一步改進，副作用也較明顯。因此，尋找比MT I和MTII致黑效果更好、副作用更小的α-MSH類似肽是研究熱點之一。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種α-促黑激素的環(huán)狀類似肽。
本發(fā)明所提供的α-促黑激素的環(huán)狀類似肽，是包含式I氨基酸殘基序列的由8-30個氨基酸殘基組成的環(huán)化多肽Xaa7-cyclo(Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Gly-Xaa6)(式I)其中，Xaa7為Nle(正亮氨酸)或Ac-Nle(乙?；恼涟彼?；Xaa1為Asp、Glu或它們中之一的修飾物；Xaa2為His、Phe、Tyr，、Trp、Pro或它們中之一的修飾物；Xaa3為Phe、Tyr、Trp或它們中之一的修飾物；Xaa4為Arg、Lys或它們中之一的修飾物；Xaa5為Trp、Phe、Tyr、His、Pro或它們中之一的修飾物；Xaa6為Lys、Orn、Dab(2，4-二氨基丁酸)、Dpr(2，3-二氨基丙酸)或它們中之一的酰胺化物；Xaa1與Xaa6之間通過酰氨鍵形成環(huán)肽。
Xaa7優(yōu)選為Ac-Nle；Xaa1優(yōu)選為Asp或其修飾物；Xaa2優(yōu)選為His、Pro或所述氨基酸的修飾物，更優(yōu)選為His或其修飾物，His的修飾物可為His(Fmoc)、His(Trt)等；Xaa3優(yōu)選為Phe、Tyr或所述氨基酸的修飾物，更優(yōu)選為Phe或其修飾物，Phe的修飾物可為Phe(4-Br)、Phe(4-Cl)、Phe(2-Cl)、Phe(2，4-diCl)、Phe(3，4-diCl)、Phe(3，4-diF)、Phe(3，4-di-OMe)、Phe(4-Me)等；Xaa4為Arg、Lys或它們中之一的修飾物，Arg的修飾物可為Arg(Tos)、Arg(Pbf)、Arg(Mtr)、Arg(Me)、Arg(Pmc)等，Lys的修飾物可為Lys(2-Cl-Z)、Lys(Ac)、Lys(Boc)、Lys(Dnp)、Lys(Tfa)、Lys(Trt)等；Xaa5優(yōu)選為Trp、Phe、Tyr或所述氨基酸的修飾物，更優(yōu)選為Trp或其修飾物，Trp的修飾物可為Trp(Boc)、Trp(For)等。
構成本發(fā)明環(huán)化多肽的氨基酸殘基可為右旋(D型)或左旋(L型)構象，其中Xaa3尤其優(yōu)選為右旋的Phe(D-Phe)。
所述α-促黑激素的環(huán)狀類似肽優(yōu)選為具有下述氨基酸殘基序列之一的環(huán)化八肽1)Ac-Nle-cyclo(Asp-His-D-Phe-Lys-Trp-Gly-Lys)；2)Ac-Nle-cyclo(Asp-His-D-Phe-Lys-Trp-Gly-Orn)；3)Ac-Nle-cyclo(Asp-His-D-Phe-Lys-Trp-Gly-Dab)；4)Ac-Nle-cyclo(Asp-His-D-Phe-Lys-Trp-Gly-Dpr)；5)Ac-Nle-cyclo(Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys)；6)Ac-Nle-cyclo(Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-Orn)；7)Ac-Nle-cyclo(Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-Dab)；8)Ac-Nle-cyclo(Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-Dpr)；9)Ac-Nle-cyclo(Glu-His-D-Phe-Lys-Trp-Gly-Lys)；10)Ac-Nle-cyclo(Glu-His-D-Phe-Lys-Trp-Gly-Orn)；11)Ac-Nle-cyclo(Glu-His-D-Phe-Lys-Trp-Gly-Dab)；12)Ac-Nle-cyclo(Glu-His-D-Phe-Lys-Trp-Gly-Dpr)；13)Ac-Nle-cyclo(Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys)；14)Ac-Nle-cyclo(Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-Orn)；15)Ac-Nle-cyclo(Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-Dab)；16)Ac-Nle-cyclo(Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-Dpr)。
所述α-促黑激素的環(huán)狀類似肽最優(yōu)選的氨基酸殘基序列Ac-Nle-cyclo(Asp-His-D-Phe-Lys-Trp-Gly-Lys)。
本發(fā)明的α-促黑激素的環(huán)狀類似肽包括由八個氨基酸殘基組成的七元環(huán)肽，該七元環(huán)肽是通過酸性氨基酸Xaa1與堿性氨基酸Xaa6的有活性的側鏈半族之間生成共價鍵而獲得的。本發(fā)明包括但不限于八個氨基酸，可以該環(huán)化八肽為核心，向兩邊擴展至三十個氨基酸殘基的長度，以八到二十個氨基酸殘基為佳。設計思路是保持核心序列七元環(huán)不變，在兩端添加其它氨基酸序列，只要α-促黑激素環(huán)狀類似肽與MC1受體的結合強度不減弱，那么它的生物學活性也不會減弱。所述α-促黑激素的環(huán)狀類似肽的衍生物和類似物也屬于本發(fā)明的保護范圍。
本發(fā)明的α-促黑激素的環(huán)狀類似肽，可以采用常規(guī)的化學合成法、天然合成法、重組DNA技術、利用生物化學的方法或酶分裂大分子得到；優(yōu)選為化學合成法，采用化學合成法，可以加入在自然狀態(tài)下側鏈中很難出現(xiàn)的氨基酸，比如可對N端或C端進行修飾，而且合成的肽具有更高的穩(wěn)定性，更明確的表達式，且不易被蛋白酶降解；所述化學合成法優(yōu)選為多肽固相合成法(J.M.Stewart & J.D.Young，Solid PhasePeptide Synthesis，2ndedition，Pierce Chemical Co.，Rockford，111.1984)，固相合成過程是將C末端氨基酸的羧基偶聯(lián)到樹脂上并不斷加入N-a保護的氨基酸，所述保護基團可為本領域中任意一種可用的保護基團。在每加入一個新的氨基酸增長鏈之前，先前加入的氨基酸要去保護，將氨基酸偶聯(lián)到適當?shù)臉渲姆椒蓞⒁妼＠枮?,224,946的美國專利，此類固相合成的實例可參考Merrifield，1964，J.Am.Chem.Soc.852149；Vale等，1981；Science 2131394-1397，Marki等，1981；J.Am.Chem.Soc.1033178和專利號為4,316,891的美國專利。
用上述方法合成的α-促黑激素的環(huán)狀類似肽可采用層析法(包括離子交換層析法，親和層析法，體積柱層析法等)、高效液相色譜(HPLC)或差示溶解度法等任一可用的純化蛋白的方法，優(yōu)選為反相HPLC法。
本發(fā)明的第二個目的是提供一種促進皮膚黑色素合成的藥物，其活性成分為上述α-促黑激素的環(huán)狀類似肽。該藥物專一性地作用于黑皮質素(melanocortin)的受體，可用于皮膚的美容，使用劑量(α-促黑激素的環(huán)狀類似肽/kg體重/day)范圍為0.1ug-10mg，優(yōu)選范圍為1ug-1mg，最優(yōu)選范圍為10ug-100ug，療程為10-30天。
本發(fā)明的第三個目的是提供一種皮膚癌的預防和治療性藥物，其活性成分為上述α-促黑激素的環(huán)狀類似肽。該藥物專一性地作用于melanocortin的受體，可減少因紫外線照射而引起皮膚表皮層細胞損傷。α-促黑激素的環(huán)狀類似與人體中的MC1受體相互作用，刺激色素細胞，使色素擴散，達到使皮膚整體變黑，達到阻止紫外線對皮膚的損傷，從而起到預防皮膚癌的功效，使用劑量(α-促黑激素的環(huán)狀類似肽/kg體重/day)范圍為1ug-100mg，優(yōu)選范圍為10ug-20mg，最優(yōu)選范圍為100ug-5mg，療程為20-60天。
本發(fā)明的第四個目的是提供一種因色素分泌失調(diào)導致的色素型疾病的治療性藥物，其活性成分為上述α-促黑激素的環(huán)狀類似肽。該藥物專一性地作用于melanocortin的受體，可用于對白癜風或后天性色素著色不足色素疾病，如糠疹、白糠疹、花斑癬、自發(fā)的滴狀黑色素過少癥以及脫色痔等色素性疾病的治療。激活黑色素細胞的活性是治愈此類疾病關鍵，而α-促黑激素的環(huán)狀類似肽和MC1受體結合后，可激活酪氨酸酶，使白斑處黑色素細胞逐漸被活躍，形成密集型小黑點，最終達到治愈的目的，使用劑量(α-促黑激素的環(huán)狀類似肽/kg體重/day)范圍為0.2ug-20mg，優(yōu)選范圍為2ug-2mg，最優(yōu)選范圍為20ug-200ug，療程為15-45天。
本發(fā)明所提供的上述藥物的活性成分均為α-促黑激素的環(huán)狀類似肽。
在藥物制備過程中，所述α-促黑激素的環(huán)狀類似肽也可以藥學上可接受的鹽的形式存在，藥劑學上可接受的鹽包括由有機或無機堿，有機或無機酸得到的鹽。由無機堿得到的鹽包括鋁鹽，銨鹽，鈣鹽，銅鹽，鐵鹽，亞鐵鹽，鋰鹽，鎂鹽，錳鹽，亞錳鹽，鉀鹽，鈉鹽，鋅鹽等，效果較好的為銨鹽，鉀鹽，鈣鹽，鋰鹽，鎂鹽，和鈉鹽。藥劑學上可接受的無毒的有機堿鹽包括伯胺鹽，仲胺鹽和叔胺鹽，其中，胺是可以被替換的，包括天然被替換的胺，環(huán)胺，和堿性離子交換樹脂，如精氨酸，甜菜堿(三甲銨乙內(nèi)酯)，咖啡因，膽堿，N，N’一聯(lián)芐基乙(撐)二胺(N，N’-dibenzylethylenediamine)，二乙基胺(diethylamine)，2-二乙基氨基乙醇(2-diethylaminoethanol)，2--甲基氨基乙醇(2-dimethylaminoethanol)，氨基乙醇，乙(撐)二胺，N-乙烷基-嗎啉(N-ethyl-morpholine)，N-乙烷基哌啶(N-ethylpiperidine)，葡糖胺，gluxosamine，組氨酸，hydrabamine，異丙胺，賴氨酸，甲基葡糖胺(methylglucamine)，嗎啉，哌嗪，哌啶，聚胺樹脂，普魯卡因，嘌呤，可可堿，三乙胺，三甲胺，tripropylamine，tromethamine等。與本發(fā)明α-促黑激素的環(huán)狀類似肽反應的酸可以是鹽酸、磷酸、乙酸、草酸或酒石酸等，優(yōu)選為乙酸鹽。
本發(fā)明的藥物可采用口服給藥、經(jīng)皮給藥、皮下注射給藥、靜脈內(nèi)給藥、肌肉內(nèi)給藥、經(jīng)肺吸入給藥、舌下給藥或經(jīng)鼻給藥等多種給藥方式。
根據(jù)采用的給藥方式，可將本發(fā)明的藥物制成合適的劑型，如注射液、片劑、粉劑、粒劑、膠囊、口服液、糖漿、可用于皮膚表面的油膏和藥貼、氣霧膠以及鼻噴劑等多種形式。上述各種劑型的藥物均可以按照藥學領域的常規(guī)方法制備。
需要的時候，在上述藥物中可以加入一種或多種藥學上可接受的載體。所述載體包括但不限于水、鹽溶液，例如生理鹽水、緩沖液、葡萄糖、甘油、乙醇以及它們的結合物等?？山邮艿乃幬镙d體包括藥學領域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、保護劑、吸收促進劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、表面活性劑、吸附載體等。所述賦形劑可為明膠、羥基纖維素、氯化鈉和聚乙二醇，優(yōu)選為氯化鈉；所述保護劑可為EDTA或苯甲烷銨，優(yōu)選為苯甲烷銨；所述促吸收劑可為聚山梨酯-80、氮酮、羧甲基纖維素、9-十二烷基醚等，優(yōu)選為氮酮。
本發(fā)明在已知的α-促黑激素的環(huán)狀類似肽MT-II基礎上進行了非常規(guī)改造，在環(huán)內(nèi)增加了一個Gly進行了擴環(huán)，變六元氨基酸為七元氨基酸環(huán)，并改變了其核心序列，其效果出乎意料，所得到的一系列a-MSH類似肽表現(xiàn)出了比MT-II更優(yōu)越的致黑活性。使皮膚變黑強度顯著增加，變黑持續(xù)時間顯著延長，并增加了α-促黑激素的環(huán)狀類似肽在體內(nèi)的血漿穩(wěn)定性，使有效使用劑量降低，從而避免了因藥劑用量帶來的藥物副作用。通過給實驗動物注射有效劑量的本發(fā)明的α-促黑激素的環(huán)狀類似肽或其藥物學上可接受的鹽，證實能夠實現(xiàn)a-MSH的生物學活性。本發(fā)明的α-促黑激素的環(huán)狀類似肽可作為a-MSH的替代品，用于現(xiàn)行相關疾病的診斷、治療和基礎研究中。在診斷領域，尤其是那些已經(jīng)用了放射性碘標記的或者已與r輻射放射體相偶聯(lián)的化合物，特別適用于在黑素瘤細胞核中，依據(jù)α-促黑激素的環(huán)狀類似肽與向黑素受體的結合來定位或分辨出這種黑素瘤細胞。此外，本發(fā)明化合物的血漿穩(wěn)定性高(藥物持久性好)，使其在由指定的靶組織向黑素受體選擇性藥物傳輸系統(tǒng)中成為首選的候選藥品。本發(fā)明的主要優(yōu)點為與其它能使皮膚致黑的melanocortin受體專一性制劑相比它的有效作用劑量更小，且在沒有毒副作用的劑量時仍能產(chǎn)生有用功效，其中的毒副作用包括惡心，困倦，嗜睡，食欲不佳以及其它Melanotan II會產(chǎn)生的毒副作用；與其它能使皮膚致黑的melanocortin受體專一性制劑相比，它的有效作用時間更長，用其制備的使皮膚致黑的melanocortin受體專一性多肽藥物作用效果更快，且可以在小劑量發(fā)揮效果，可通過透皮給藥、鼻腔給藥、肺吸入給藥和黏膜給藥等給藥系統(tǒng)來達到使皮膚致黑的效果，而不用依賴于傳統(tǒng)的靜脈注射、皮下注射、肌肉注射等?；谏鲜鰞?yōu)點，本發(fā)明可用于制備預防和治療由紫外照射導致的皮膚癌藥物，因色素缺失造成的色素型疾病(如白癜風等)的治療性藥物以及皮膚美容藥物，在醫(yī)藥學領域具有廣闊的應用前景。


圖1為給牛蛙注射高劑量(40ug肽/100g蛙)的α-促黑激素的環(huán)狀類似肽后2小時拍攝的圖片圖2為給牛蛙注射低劑量(1ug肽/100g蛙)的α-促黑激素的環(huán)狀類似肽后2小時拍攝的圖片圖3為給牛蛙注射低劑量(1ug肽/100g蛙)的α-促黑激素的環(huán)狀類似肽后20小時拍攝的圖片圖4為黑色素在黑素細胞中的五個擴散狀態(tài)，及所對應的MI值(黑色素指數(shù))圖5為不同α-促黑激素的環(huán)狀類似肽的MI值活性檢測結果圖6為F肽與MTII的生物學活性比較結果
具體實施例方式
下述實施例中所用方法如無特別說明均為常規(guī)方法。
實施例中涉及到的肽的序列及簡稱如下1、A肽(商品名PT141，購于上海吉爾生化公司，用于對照)Ac-Nle-cyclo(Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Lys)-OH2、E肽(商品名MTII，購于上海吉爾生化公司，用于對照)Ac-Nle-cyclo(Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Lys)-NH23、B肽(本發(fā)明肽)Ac-Nle-cyclo(Asp-Hi s-D-Phe-Lys)-Trp-Lys-OH4、D肽(本發(fā)明肽)Ac-Nle-cyclo(Asp-His-D-Phe-Lys-Trp-Lys)-OH5、F肽(本發(fā)明肽)Ac-Nle-cyclo(Asp-His-D-Phe-Lys-Trp-Gly-Lys)-OH6、H肽(本發(fā)明肽)Ac-Nle-cyclo(Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys)-NH27、I肽(本發(fā)明肽)Ac-Nle-cyclo(Asp-His-D-Phe-Lys-Trp-Gly-Lys)-NH28、J肽(本發(fā)明肽)Ac-Nle-cyclo(Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys)-OH9、K肽(本發(fā)明肽)Ac-Nle-cyclo(Asp-His-D-Phe-Lys-Trp-Gly-Lys)-Pro-Val-Ser-Tyr-Gly-His-Phe-Arg-Ser-Ile-Pro-Gly-OH10、L肽(本發(fā)明肽)Ac-Nle-cyclo(Asp-His-D-Phe-Lys-Trp-Gly-Lys)-Pro-Val-His-Phe-Arg-Ser-Ile-Pro-Gly-Gly-Gly-Tyr-Ala-Arg-Ala--Ala-Ala-Arg-Gln-Ala-Arg-Ala-OH實施例1、固相合成法合成F肽1)在固相反應器(美國Bio Rad公司)中加入0.1mmol Fmoc-Lys(Mtt)-Wang Resin(0.53mM/g，MERK公司)，然后在反應器中加入2mL DMF(西安華辰生物科技公司)膨化1小時。
2)除去Fmoc保護基團加入20％的哌啶/(“/”表示和)二甲基甲酰氨(西安華辰生物科技公司)2mL，先洗滌震蕩反應5分鐘，然后抽濾，再用DMF洗滌5次，此操作重復一次，以徹底去除保護基。
3)加入5倍于樹脂量的Fmoc-Gly-OH(西安華辰生物科技公司)，并加入適量的催化劑HOBT、DIPEA(西安華辰生物科技公司)，震蕩反應2-3小時。
4)用水合茚三酮檢測，如果為陰性，即進入下一步驟，如果為陽性，則重復步驟3)。
5)然后重復步驟2)-4)，依次連接剩下的氨基酸衍生物。在最后一個氨基酸Fmoc-Nle-OH接上后，仍然用20％哌啶/二甲基甲酰氨除去保護基Fmoc。
6)用三倍體積的混合比例為1∶1的乙酸酐/DMAP混合物在二甲基甲酰氨中乙?；?br> 7)充分干燥反應產(chǎn)物，除去Lys和Asp的保護基后，加入3倍體積的混合比例為1∶1的HOBT和TBTU(西安華辰生物科技公司)的混合物，在常溫下振蕩反應12-24小時。
8)環(huán)化后，依次用二甲基甲酰氨，二氯甲烷，無水甲醇，各洗滌8次，用氮氣吹干。
9)用標準的三氟乙酸/二氯甲烷方法，并加入適量的硫基試劑裂解。
10)將最終產(chǎn)物用冰乙醚沉淀，用EP管收集。
11)5000rpm離心5min，倒出乙醚，用氮氣吹干，用水溶解，冷凍干燥，得到呈白色粉末狀的目的粗產(chǎn)物。
所合成的F肽的分子量為1053，經(jīng)MALDI-TOF(Bruker)質譜鑒定合成產(chǎn)物正確。
實施例2、固相合成法合成H肽1)在固相反應器中加入0.1mM的P-MBHA樹脂(0.7mM/g)(西安華辰生物科技公司)和2mL二甲基甲酰氨，機械振蕩10分鐘后加入三倍體積的BOC-Lys(2-Cl-Z)(吉爾生化有限公司)和相同量的HOBT，在室溫機械振蕩反應3小時。
2)用水合茚三酮檢測，如果檢測結果為陽性，再反應1小時，如果仍為陽性，用相當于2倍樹脂體積的乙酸酐/砒碇/二氯甲烷(1∶1∶2V/V)，室溫下反應30分鐘，去除多余的氨基。
3)水合茚三酮檢測陰性。
4)用2份2mL二氯甲烷洗滌產(chǎn)物每次1分鐘。
5)用3mL 50％三氟乙酸/二氯甲烷裂解，除去保護基BOC，第一次處理5分鐘，第二次處理20分鐘。
6)用2份20mL二氯甲烷洗滌產(chǎn)物，每次1分鐘。
7)用兩份3mL7％的二異丙乙胺/二氯甲烷中和產(chǎn)物，每次搖動2分鐘。
8)用4份2mL二氯甲烷洗滌產(chǎn)物，每次1分鐘。
9)加入過量的3倍于樹脂量(摩爾量)的BOC氨基酸衍生物(上海吉爾生化)、HOBT(西安華辰科技有限公司)和DDC(吉爾生化公司)的混合物，在2mL二氯甲烷中將該混合物在室溫下震蕩3小時，進行偶聯(lián)反應。
10)偶聯(lián)后(水合茚三酮檢測陰性)用三份3mL二氯甲烷洗滌產(chǎn)物，每次2小時。
11)用兩份4mL二甲基甲酰氨洗滌，每次2分鐘。
12)重復步驟3)-11)，依次連接剩下的氨基酸衍生物，在最后一個Boc-Nle-OH(MERK公司)連接上以后，仍然用50％三氟乙酸/二氯甲烷除去保護基Boc，用二氯甲烷和二甲基甲酰氨洗滌產(chǎn)物。
13)洗滌產(chǎn)物用2倍體積的混合比例為1∶1的乙酸酐/砒碇混合物，在二氯甲烷中乙酸化，充分干燥反應產(chǎn)物。
14)除去Lys和Asp的保護基后，加入二甲基甲酰氨和二苯磷酰基疊氮化物(SIGMA公司)，0℃下攪拌該混合物2-4小時，12℃下攪拌反應12-24小時。
15)環(huán)化后洗滌產(chǎn)物。
16)用標準Low-High HF方法裂解，加入5毫升氟化氫、二甲基硫醚和對甲苯酚，三種試劑混合比例為25∶65∶10(V/V)，0℃下反應2小時。將氟化氫蒸發(fā)后又加入10mL氟化氫、對甲苯酚和對甲硫酚(FLUKA)，三種試劑比例為95∶3.75∶1.25(V/V)，0℃下反應1小時。將氟化氫蒸發(fā)后，最終產(chǎn)物用乙醚沉淀，過濾。
17)將過濾產(chǎn)物冷凍干燥，得到白色粉末，即為粗肽制品。
18)用C18HPLC反相柱(Waters公司)分離純化，然后再冷凍干燥，得到白色粉末狀的純肽。
所合成的H肽的分子量為1081，經(jīng)MALDI-TOF(Bruker)質譜鑒定合成產(chǎn)物正確。
實施例3、固相合成法合成J肽1)在固相反應器中加入0.1mmol Fmoc-Lys(Mtt)-Wang Resin(0.53mM/g，MERK公司)，然后在反應器中加入2mL的DMF膨化1小時。
2)除去Fmoc保護基團加入20％的哌啶/二甲基甲酰氨2mL，先洗滌震蕩反應5分鐘，然后抽濾，再用DMF洗滌5次，此操作重復一次，以徹底去除保護基。
3)加入5倍于樹脂量的Fmoc-Gly-OH(西安華辰生物科技公司)，并加入適量的催化劑HOBT、DIPEA(西安華辰生物科技公司)，震蕩反應2-3小時。
4)用水合茚三酮檢測，呈陰性，如果為陽性，重復步驟3)。
5)重復步驟2)-4)，依次連接剩下的氨基酸衍生物。在最后一個氨基酸Fmoc-Nle-OH接上后，仍然用20％哌啶/二甲基甲酰氨除去保護基Fmoc。
6)用三倍體積的混合比例為1∶1的乙酸酐/DMAP混合物在二甲基甲酰氨中乙?；?br> 7)充分干燥反應產(chǎn)物，除去Lys和Asp的保護基后，加入3倍體積的混合比例為1∶1的HOBT和TBTU混合物，在常溫下振蕩反應12-24小時。
8)環(huán)化后，依次用二甲基甲酰氨，二氯甲烷，無水甲醇，各洗滌8次，用氮氣吹干。
9)用標準的三氟乙酸/二氯甲烷方法，并加入適量的硫基試劑裂解。
10)最終產(chǎn)物用冰乙醚沉淀，用EP管收集。
11)5000rpm離心5min，倒出乙醚，用氮氣吹干，用水溶解，冷凍干燥，得到白色粉末狀的目的粗產(chǎn)物。
所合成的J肽的分子量為1082，經(jīng)MALDI-TOF(Bruker)質譜鑒定合成產(chǎn)物正確。
實施例4、固相合成法合成I肽1)在固相反應器中加入0.1mM的P-MBHA樹脂(0.7mM/g)(西安華辰生物科技公司)和2mL二甲基甲酰氨，機械振蕩10分鐘后加入三倍體積的BOC-Lys(2-Cl-Z)(吉爾生化有限公司)和相同量的HOBT，在室溫下機械振蕩反應3小時。
2)水合茚三酮檢測，如果檢測結果為陽性，再反應1小時，如果仍為陽性，用相當于樹脂2倍體積的乙酸酐/砒碇/二氯甲烷(1∶1∶2V/V)，室溫下反應30分鐘，去除多余的氨基。
3)水合茚三酮檢測呈陰性。
4)用2份2mL二氯甲烷洗滌產(chǎn)物，每次1分鐘。
5)用3mL 50％三氟乙酸/二氯甲烷裂解，除去保護基BOC，第一次處理5分鐘，第二次處理20分鐘。
6)用2份20mL二氯甲烷洗滌產(chǎn)物，每次1分鐘。
7)用兩份3mL 7％的二異丙乙胺/二氯甲烷中和產(chǎn)物，每次搖動2分鐘。
8)用4份2mL二氯甲烷洗滌產(chǎn)物，每次1分鐘。
9)分別加入3倍于樹脂質量的BOC氨基酸衍生物、HOBT(西安華辰生物科技公司)和DDC(吉爾生化公司)混合物，在2mL二氯甲烷中，將該混合物在室溫下震蕩3小時，進行偶聯(lián)反應。
10)偶聯(lián)后(水合茚三酮檢測陰性)用三份3mL二氯甲烷洗滌產(chǎn)物，每次2小時。
11)用兩份4mL二甲基甲酰氨洗滌，每次2分鐘。
12)重復步驟3)-11)，依次連接剩下的氨基酸衍生物，在最后一個Boc-Nle-OH(MERK公司)連接上以后，仍然用50％三氟乙酸/二氯甲烷除去保護基Boc，用二氯甲烷和二甲基甲酰氨洗滌產(chǎn)物。
13)將洗滌產(chǎn)物用2倍體積的混合比例為1∶1的乙酸酐/砒碇混合物，在二氯甲烷中乙酸化，充分干燥反應產(chǎn)物。
14)除去Lys和Asp的保護基后，加入二甲基甲酰氨和二苯磷酰基疊氮化物(SIGMA公司)，0℃下攪拌該混合物2-4小時，12℃下攪拌反應12-24小時。
15)環(huán)化后用二氯甲烷洗滌產(chǎn)物，抽濾。
16)用標準Low-High HF方法裂解，加入5mL氟化氫、二甲基硫醚和對甲苯酚，三種試劑比例為25∶65∶10，0℃下反應2小時。將氟化氫蒸發(fā)后，再加入10mL氟化氫、對甲苯酚和對甲硫酚(FLUKA)，三種試劑混合比例為95∶3.75∶1.25，0℃反應1小時。將氟化氫蒸發(fā)后，最終產(chǎn)物用乙醚沉淀，過濾。
17)過濾產(chǎn)物后，冷凍干燥，得到白色粉末，即為粗肽制品。
18)用C18HPLC反相柱分離純化，然后在冷凍干燥，得到白色粉末狀的純肽。
所合成的I肽的分子量為1054，經(jīng)MALDI-TOF(Bruker)質譜鑒定合成產(chǎn)物正確。
實施例5、固相合成法合成K肽1)在固相反應器(美國Bio Rad公司)中加入0.1mmol Fmoc-Gly-Wang Resin(0.51mM/g，西安華辰生物科技公司)，然后在反應器中加入2mL DMF膨化1小時。
2)除去Fmoc保護基團加入20％的哌啶/(“/”表示和)二甲基甲酰氨2mL，先洗滌震蕩反應5分鐘，然后抽濾，再用DMF洗滌5次，此操作重復一次，以徹底去除保護基。
3)加入5倍于樹脂量的Fmoc-Pro-OH(西安華辰生物科技公司)，并加入適量的催化劑HOBT、DIPEA(西安華辰生物科技公司)，震蕩反應2-3小時。
4)用水合茚三酮檢測，如果為陰性，即進入下一步驟，如果為陽性，則重復步驟3)。
5)然后重復步驟2)-4)，依次連接剩下的氨基酸衍生物。在最后一個氨基酸Fmoc-Nle-OH接上去后，仍然用20％哌啶/二甲基甲酰氨除去保護基Fmoc。
6)用三倍體積的混合比例為1∶1的乙酸酐/DMAP混合物在二甲基甲酰氨中乙酰化。
7)充分干燥反應產(chǎn)物，除去Lys和Asp的保護基后，加入3倍體積的混合比例為1∶1的HOBT和TBTU(西安華辰生物科技公司)的混合物，在常溫下振蕩反應12-24小時。
8)環(huán)化后，依次用二甲基甲酰氨，二氯甲烷，無水甲醇，各洗滌8次，用氮氣吹干。
9)用標準的三氟乙酸/二氯甲烷方法，并加入適量的硫基試劑裂解。
10)將最終產(chǎn)物用冰乙醚沉淀，用EP管收集。
11)5000rpm離心5min，倒出乙醚，用氮氣吹干，用水溶解，冷凍干燥，得到呈白色粉末狀的目的粗產(chǎn)物。
所合成K肽的分子量為2352，經(jīng)MALDI-TOF(Bruker)質譜鑒定合成產(chǎn)物正確。
實例例6、高劑量α-促黑激素的環(huán)狀類似肽實驗蛙皮膚中促黑細胞中有黑色素，當黑色素聚集在細胞中部時，蛙皮膚顏色變淡，而當黑色素在細胞中擴散開時，蛙皮膚顏色變黑，故選用牛蛙作為試驗動物模型。
實驗動物牛蛙。
實施試劑A肽(PT141)、E肽(MTII)、F肽。
將牛蛙分四組，其中三組分別皮下注射上述三種肽，給藥劑量為40ug肽/100g蛙，另外一組為對照組，只注射相同劑量的0.9％生理鹽水。給藥后進行觀察，在注射藥物兩個小時后拍攝照片，結果如圖1所示。用軟件對這四種圖片進行分析計算，得到它們的灰度值，如表1所示表1軟件處理得到的照片灰度值 一般將白色的灰度值定義為255，黑色灰度值定義為0，而由黑到白之間的明暗度均勻地劃分為256個等級。從灰度值大小可知，F(xiàn)肽的致黑效果最好，而E肽次之，A肽最差。證明有效量的α-MSH的環(huán)狀類似肽F肽可作用于蛙的促黑細胞MC1受體，使黑色素在細胞中擴散，牛蛙皮膚顏色變黑。
實施例7、不同α-促黑激素的環(huán)狀類似肽活性的蛙體檢測實驗動物；牛蛙。
試驗試劑E肽(MTII)、A肽(PT141)、B肽、D肽、H肽、F肽。B肽、D肽、H肽、F肽為自行設計并用人工方法合成的α-促黑激素的環(huán)狀類似肽。
試驗前在日光燈下照射約一周時間，待每只牛蛙的體色趨于一致，再給藥注射。將牛蛙分7組，其中6組分別皮下注射上述6種肽，給藥劑量為1ug肽/100g蛙，另外一組為對照組，只注射相同劑量的0.9％生理鹽水。給藥后進行連續(xù)觀察，分別于給藥后2小時和20小時拍攝照片，照片如圖2-3所示，由圖2可知，F(xiàn)肽使皮膚變黑的生物學活性最強；黑色持續(xù)一段時間后，伴隨體內(nèi)多肽的降解，牛蛙皮膚黑色慢慢退失，如圖3所示，但經(jīng)F肽處理的蛙的皮膚還是最黑，表明F肽在體內(nèi)穩(wěn)定性較高，生物學活性強，致黑持續(xù)效果好。
實施例8、不同α-促黑激素的環(huán)狀類似肽的MI值活性檢測動物牛蛙。
試驗試劑D肽、F肽、H肽、E肽(MTII)。D肽、F肽、H肽為自行設計并用人工方法合成的α-促黑激素的環(huán)狀類似肽。
從微觀角度看，皮膚變黑是由體內(nèi)黑色素的擴散導致的，色素越分散，皮膚越黑。根據(jù)黑色素在黑素細胞中的擴散狀態(tài)，可以人為定義五種狀態(tài)，所對應的MI值(黑色素指數(shù))為1.0-5.0(14，15)，如圖4所示(紅色圖片是用顯微鏡拍攝的微觀照片)。1.0代表黑色素最聚集的狀態(tài)，此時蛙的皮膚顏色最淺；5.0代表黑色素最大擴散狀態(tài)，此時蛙的皮膚顏色最深。當大部分黑色素處于MI值為5.0的狀態(tài)，而有個別的黑素細胞中的黑色素處于4.0的狀態(tài)時，MI值為4.5。在活體蛙中，蛙蹼皮膚只有兩層。在光學顯微鏡下，蛙蹼中黑素細胞中的黑色素清晰可見。因此比較蛙蹼中黑色素的匯聚分散狀態(tài)，可以比較不同α-促黑激素的環(huán)狀類似肽的促黑效果。
將牛蛙分4組(每組4只)，分別皮下注射上述4種肽，給藥劑量為0.1ug肽/100g蛙，另外一組為對照組，只注射相同劑量的0.9％生理鹽水。給藥后連續(xù)觀察30-50h，同時記錄每個時間點的MI值，直至其MI值下降到原來水平。實驗結果如圖5所示，當MTII的Arg被Lys置換，并且C端是羧基，即變?yōu)镈肽時，生物學活性降低；而當在D肽第二個Lys前面加上一個Gly變成F肽時，生物學活性大大加強；當在MTII的Lys前面加上一個Gly，即變成H肽時，生物學活性較MTII明顯增強，持久活性約是MTII的兩倍；上述結果表明本發(fā)明的α-促黑激素的環(huán)狀類似肽打破了傳統(tǒng)的c-促黑激素的環(huán)狀類似肽的核心序列His-D-Phe-Arg-Trp，即加上一個Gly，以及把Arg置換成Lys，使生物學活性大大增強，具有促黑強度高，持續(xù)時間長的優(yōu)點。
實施例9、F肽與MTII的生物學活性比較動物蟾蜍。
試驗試劑F肽、E肽(MTII)。F肽為自行設計并用人工方法合成的α-促黑激素的環(huán)狀類似肽。
將蟾蜍分2組，分別背部淋巴囊注射F肽及MTII，給藥劑量為0-0.2ug肽/100g蟾蜍(橫坐標所示)，給藥后連續(xù)觀察10-12h，同時記錄每個時間點的MI值，結果如圖6所示(■代表F肽的曲線，◆代表MT II的曲線；MI值以平均值±SEM標出，N＝5)，當達到半數(shù)最大值時，即MI值為2.5時，所需F肽的劑量是MT II的1/1.5?？芍狥肽的作用強度是MT II的1.5倍。當達到同樣的生物學效果時，所需要的F肽的劑量更小些，表明F肽的生物學活性強于傳統(tǒng)的MT II。
實施例10、α-促黑激素的環(huán)狀類似肽的初步毒性檢測配制以F肽為主要成分的溶液(1mg F肽/mL)，給DBA和金黃地鼠的幼鼠每天注射40ug的F肽，連續(xù)注射一周，持續(xù)觀察一個月，結果兩種小鼠均可正常生長成成鼠，并仍可繁殖后代，后代也均正常，初步證明本發(fā)明的α-促黑激素的環(huán)狀類似肽具有較小的毒副作用。
實施例11、以F肽為有效成分的皮下注射溶液的配制及應用首先將10mg的F肽溶解于少量的0.9％的生理鹽水中，然后用2M/L氫氧化鈉，用6M/L鹽酸調(diào)節(jié)PH到6.8，再用生理鹽水定容到10mL，攪拌均勻，得到1mg/mL的F多肽溶液，-20℃保存?zhèn)溆谩?br> 此溶液可用作上述實施例中蛙體實驗的試劑。
將DBA小鼠(購于上海斯萊克動物中心)分兩組，每組10只，實驗組每天皮下注射兩次上述注射液，每次劑量為40ug/kg鼠，空白對照組的老鼠每天相同時間注射相同劑量的蒸餾水，連續(xù)注射2-3周，觀察老鼠皮膚的變化，并加以記錄。結果實驗組的老鼠皮膚變黑，證明本發(fā)明的F肽可以使動物皮膚變黑。
實施例12、以F肽為活性成分的100mL鼻噴劑的制備及應用制備100mL以F肽為活性成分的鼻噴劑，具體方法為取0.9g氯化鈉，0.136g三水乙酸鈉，0.01mL苯甲烷銨，0.5mL氮酮，F(xiàn)肽100mg，補加水至100mL，調(diào)節(jié)PH至6.8，攪拌均勻，得到鼻噴霧劑。
上述以F肽為活性成分的鼻噴劑各組分的濃度為0.9％(m/v)氯化鈉，10mM乙酸鈉，0.01％(v/v)苯甲烷銨，0.5％(v/v)氮酮，F(xiàn)肽1mg/mL。
將金黃地鼠，(購于上海斯萊克動物中心)分兩組，每組10只，實驗組每天使用鼻噴劑0.5mL，空白對照組的老鼠每天相同時間使用相同劑量的蒸餾水，連續(xù)使用1周，觀察老鼠皮膚的變化，并加以記錄。結果實驗組老鼠面部皮膚會出現(xiàn)變黑跡象，如再堅持使用及控制劑量就可以達到理想的變黑程度，若用于人則會起到美容效果。
實施例13、以F肽為主要活性成分的治療白癜風的透皮溶液制劑的配制及應用取薄荷腦1克，丙二醇25mL，乙醇50mL，精制水25mL，F(xiàn)肽100mg，配成溶液使用，直接涂抹于皮膚即可。
將DBA(購于上海斯萊克動物中心)分兩組，每組10只，實驗前先除凈腹部部分鼠毛，裸露出皮膚，實驗組每天將上述配制的溶液涂抹于皮膚三次，對照組的老鼠不作任何處理，連續(xù)涂抹一個月，觀察老鼠皮膚的變化，并加以記錄。結果實驗組老鼠皮膚變黑。初步推斷是因薄荷腦增強了制劑透皮的效果，當它和F肽配成溶液時，能夠通過一些氫鍵、分子間作用力等相互作用一起進入皮膚里面，然后和MC1受體結合，再作用于色素細胞，從而能夠使皮膚變黑。
實施例14、以F肽為活性成分的預防和治療皮膚癌軟膏的配制及應用該軟膏的成分和百分含量如下單硬脂酸甘油酯(Glyceryl monostearate，購自上海恒信化學試劑有限公司) 7.5％羥丙基甲基纖維素(Hydroxypropyl methylcellulose，購自上海展望集團)0.5％肉豆蔻酸異丙酯(Isopropyl myristate，購自國藥集團化學試劑有限公司)10％尼泊金甲酯(Methylparaben，購自北京桑普生物化學技術有限公司) 0.5％尼泊金丙酯(Propylparaben，購自北京桑普生物化學技術有限公司) 0.5％硬脂酸聚烴氧(40)酯(Polyxyl-40-stearate，購自北京海淀會友精細化工廠) 12％水+F肽 69％按上述百分含量取料，攪拌混勻即可。該軟膏可直接涂抹于動物皮膚表面，它可通過毛囊進入皮膚內(nèi)部，然后和MC-1受體結合，作用于色素細胞，使皮膚變黑，從而形成一個阻礙紫外線傷害皮膚的屏障，達到預防和治療皮膚癌的作用。
實施例15、以L肽為主要活性成分的治療白癜風的透皮溶液制劑的配制及應用取丙二醇25mL，乙醇50mL，精制水25mL，L肽100mg，配成溶液使用，直接涂抹于皮膚即可。
將DBA小鼠(購于上海斯萊克動物中心)分兩組，每組10只，實驗前先除凈腹部部分鼠毛，裸露出皮膚，實驗組每天將上述配制的透皮溶液制劑涂抹于皮膚表面，一天三次，對照組的老鼠不作任何處理，連續(xù)涂抹一個月，觀察老鼠皮膚的變化，并加以記錄。結果實驗組老鼠皮膚變黑。經(jīng)推測是因該肽含有一段增進細胞膜穿透能力的特殊氨基酸序列(Tyr-Ala-Arg-Ala-Ala-Ala-Arg-Gln-Ala-Arg-Ala)，此特殊序列可以增進L肽在皮膚表面的吸收效果，增強藥效。
權利要求
1.一種α-促黑激素的環(huán)狀類似肽，是包含式I氨基酸殘基序列的由8-30個氨基酸殘基組成的環(huán)化多肽Xaa7-cyclo(Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Gly-Xaa6)(式I)其中，Xaa7為Nle或Ac-Nle；Xaa1為Asp、Glu或它們中之一的修飾物；Xaa2為His、Phe、Tyr，、Trp、Pro或它們中之一的修飾物；Xaa3為Phe、Tyr、Trp或它們中之一的修飾物；Xaa4為Arg、Lys或它們中之一的修飾物；Xaa5為Trp、Phe、Tyr、His、Pro或它們中之一的修飾物；Xaa6為Lys、Orn、Dab、Dpr或它們中之一的酰胺化物；Xaa1與Xaa6之間通過酰氨鍵形成環(huán)肽。
2.根據(jù)權利要求1所述的α-促黑激素的環(huán)狀類似肽，其特征在于所述Xaa7為Ac-Nle；Xaa1為Asp或其修飾物；Xaa2為His、Pro或所述氨基酸的修飾物；Xaa3為Phe、Tyr或所述氨基酸的修飾物；Xaa4為Arg、Lys或它們中之一的修飾物；Xaa5為Trp、Phe、Tyr或所述氨基酸的修飾物。
3.根據(jù)權利要求2所述的α-促黑激素的環(huán)狀類似肽，其特征在于所述Xaa2為His或其修飾物，His的修飾物為His(Fmoc)或His(Trt)；Xaa3為Phe或其修飾物，Phe的修飾物為Phe(4-Br)、Phe(4-Cl)、Phe(2-Cl)、Phe(2，4-diCl)、Phe(3，4-diCl)、Phe(3，4-diF)、Phe(3，4-di-OMe)或Phe(4-Me)；Xaa4為Arg、Lys或它們中之一的修飾物，Arg的修飾物為Arg(Tos)、Arg(Pbf)、Arg(Mtr)、Arg(Me)或Arg(Pmc)，Lys的修飾物可為Lys(2-Cl-Z)、Lys(Ac)、Lys(Boc)、Lys(Dnp)、Lys(Tfa)、Lys(Trt)等；Xaa5為Trp或其修飾物，Trp的修飾物為Trp(Boc)或Trp(For)。
4.根據(jù)權利要求3所述的α-促黑激素的環(huán)狀類似肽，其特征在于所述α-促黑激素的環(huán)狀類似肽為具有下述氨基酸殘基序列之一的環(huán)化八肽1)Ac-Nle-cyclo(Asp-His-D-Phe-Lys-Trp-Gly-Lys)；2)Ac-Nle-cyclo(Asp-His-D-Phe-Lys-Trp-Gly-Orn)；3)Ac-Nle-cyclo(Asp-His-D-Phe-Lys-Trp-Gly-Dab)；4)Ac-Nle-cyclo(Asp-His-D-Phe-Lys-Trp-Gly-Dpr)；5)Ac-Nle-cyclo(Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys)；6)Ac-Nle-cyclo(Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-Orn)；7)Ac-Nle-cyclo(Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-Dab)；8)Ac-Nle-cyclo(Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-Dpr)；9)Ac-Nle-cyclo(Glu-His-D-Phe-Lys-Trp-Gly-Lys)；10)Ac-Nle-cyclo(Glu-His-D-Phe-Lys-Trp-Gly-Orn)；11)Ac-Nle-cyclo(Glu-His-D-Phe-Lys-Trp-Gly-Dab)；12)Ac-Nle-cyclo(Glu-His-D-Phe-Lys-Trp-Gly-Dpr)；13)Ac-Nle-cyclo(Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys)；14)Ac-Nle-cyclo(Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-Orn)；15)Ac-Nle-cyclo(Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-Dab)；16)Ac-Nle-cyclo(Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-Dpr)。
5.權利要求1所述的α-促黑激素的環(huán)狀類似肽的鹽。
6.根據(jù)權利要求5所述的鹽，其特征在于所述鹽為鈉鹽，鉀鹽，銨鹽，鈣鹽，銅鹽，鐵鹽，亞鐵鹽，鋰鹽，鎂鹽，錳鹽，鋁鹽，亞錳鹽，鋅鹽，伯胺鹽，仲胺鹽或叔胺鹽。
7.權利要求1所述的α-促黑激素的環(huán)狀類似肽的衍生物和類似物。
8.一種促進皮膚黑色素合成的藥物，其活性成分為權利要求1所述的α-促黑激素的環(huán)狀類似肽。
9.一種預防和治療皮膚癌的藥物，其活性成分為權利要求1所述的α-促黑激素的環(huán)狀類似肽。
10.一種治療色素型疾病的藥物，其活性成分為權利要求1所述的α-促黑激素的環(huán)狀類似肽。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種α－促黑激素的環(huán)狀類似肽是包含式I氨基酸殘基序列的由8－30個氨基酸殘基組成的環(huán)化多肽Xaa7－cyclo(Xaa1－Xaa2－Xaa3－Xaa4－Xaa5－Gly－Xaa6)(式I)其中，Xaa7為Nle或Ac－Nle；Xaa1為Asp、Glu或它們中之一的修飾物；Xaa2為His、Phe、Tyr，、Trp、Pro或它們中之一的修飾物；Xaa3為Phe、Tyr、Trp或它們中之一的修飾物；Xaa4為Arg、Lys或它們中之一的修飾物；Xaa5為Trp、Phe、Tyr、His、Pro或它們中之一的修飾物；Xaa6為Lys、Orn、Dab(2，4－二氨基丁酸)、Dpr(2，3－二氨基丙酸)或它們中之一的酰胺化物；Xaa1與Xaa6之間通過酰氨鍵形成環(huán)肽。
文檔編號C07K7/00GK1709906SQ20051008398
公開日2005年12月21日 申請日期2005年7月15日 優(yōu)先權日2005年7月15日
發(fā)明者溫龍平, 高理錢, 孟丹 申請人:中國科學技術大學