用發(fā)酵過程得到的6-氨基己酸來制備己內(nèi)酰胺的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種用發(fā)酵過程得到的6-氨基己酸來制備己內(nèi)酰胺的方法，其包括：從包含生物質(zhì)的培養(yǎng)基中回收含有6-氨基己酸的混合物，隨后在過熱蒸汽的存在下使6-氨基己酸環(huán)化，從而形成己內(nèi)酰胺，其中所述混合物中碳水化合物與6-氨基己酸的重量比為0.03或更小。
【專利說明】用發(fā)酵過程得到的6-氨基己酸來制備己內(nèi)酰胺
[0001]本申請是申請日為2010年12月22日的中國專利申請201080059413.7 (PCT/NL2010/050878)的分案申請。
[0002]本發(fā)明涉及一種用生物化學(xué)制備的6-氨基己酸(下文稱作6-ACA)來制備ε -己內(nèi)酰胺(下文稱作“己內(nèi)酰胺”或CAP)的方法。
[0003]己內(nèi)酰胺是一種可以被用于生產(chǎn)聚酰胺(例如尼龍-6)的內(nèi)酰胺。由各種大宗化學(xué)品制備己內(nèi)酰胺的多種方式是本領(lǐng)域已知的，它們包括由甲苯或苯制備己內(nèi)酰胺。這些化合物通常得自礦物油?？紤]到使用更加可持續(xù)的技術(shù)來制備材料的日益增長的需要，人們期望提供一種方法，其中由能夠從生物可再生源獲得的中間產(chǎn)物化合物或至少由使用生物化學(xué)方法被轉(zhuǎn)化成己內(nèi)酰胺的中間化合物來制備己內(nèi)酰胺。另外，期望提供一種方法，所述方法較之利用來自石油化學(xué)來源的大宗化學(xué)品的傳統(tǒng)化學(xué)工藝具有更小的生態(tài)足跡，特別是與所述傳統(tǒng)轉(zhuǎn)化方法相比需要較少的能量和/或具有較低的二氧化碳排放量的方法。
[0004]在W02005/068643中公開了可以用在具有α，β -烯酸酯還原酶活性的酶存在下通過轉(zhuǎn)化6-氨基己-2-烯酸出-AHEA)以生物化學(xué)方式所制備的6-ACA來制備己內(nèi)酰胺。由6-ACA制備己內(nèi)酰胺引用了 US-A6，194，572。
[0005]US-A6, 194，572公開了通過在過熱蒸汽的存在下處理6-氨基己酸、6-氨基己酸酯或6-氨基己酰胺或包含這些化合物中的至少兩種的混合物來制備己內(nèi)酰胺，在所述過熱蒸汽中得到含有己內(nèi)酰胺和蒸汽的氣體混合物，其中該過程在不存在催化劑的條件下、在250-400°C的溫度和0.5- 2MPa的壓力下在環(huán)化反應(yīng)器中進行。在一個優(yōu)選的實施方式中，己內(nèi)酰胺用由6-氨基己酸、6-氨基己酸酯、6-氨基己酰胺、可選的己內(nèi)酰胺和所述化合物可選的低聚物組成的反應(yīng)混合物制成。
[0006]W02005/068643中沒有詳細(xì)描述具體針對通過使發(fā)酵過程得到的6-ACA環(huán)化來制備己內(nèi)酰胺的方法，也沒有描述所得己內(nèi)酰胺的提純。
[0007]本發(fā)明人得出的結(jié)論是，盡管可以將生物化學(xué)法的產(chǎn)物直接引入環(huán)化反應(yīng)器，但是如果使用典型的環(huán)化條件使發(fā)酵過程的直接產(chǎn)物(發(fā)酵液中的6-ACA)在環(huán)化反應(yīng)器中進行環(huán)化，那么己內(nèi)酰胺的產(chǎn)率相對較低。此外，本發(fā)明人得出的結(jié)論是，純化由此所得到的粗制己內(nèi)酰胺很有挑戰(zhàn)性。
[0008]本發(fā)明的一個目標(biāo)是提供一種由生物化學(xué)法得到的6-ACA制備己內(nèi)酰胺的新方法，特別地，所述方法具有令人滿意的己內(nèi)酰胺產(chǎn)率。
[0009]因此，本發(fā)明涉及一種用于制備己內(nèi)酰胺的方法，該方法包括:從包含生物質(zhì)的培養(yǎng)基中回收含有6-氨基己酸的混合物，隨后在過熱蒸汽的存在下使6-氨基己酸環(huán)化，從而形成己內(nèi)酰胺，其中所述混合物中碳水化合物與6-氨基己酸的重量比為0.03或更小。特別地,所述重量比可以為0.025或更小，或0.02或更小，或0.01或更小，或甚至小于0.005。所述重量比可以為O或更大，特別地為0.001或更大。因而該重量比在0-0.03的范圍內(nèi)。
[0010]具體地，培養(yǎng)基可以是在發(fā)酵過程中制備6-ACA所用的培養(yǎng)基。在本文中使用時，術(shù)語“發(fā)酵”在本文中以工業(yè)過程中的含義使用，其中使用有機體將至少一種(有機)物質(zhì)轉(zhuǎn)化成至少一種其他(有機)物質(zhì)。發(fā)酵過程可以在有氧條件、限氧條件和厭氧條件下進行。
[0011]在發(fā)酵過程中得到發(fā)酵產(chǎn)物。該產(chǎn)物包含6-ACA、生物質(zhì)和發(fā)酵液中通常存在的幾種其他組分(營養(yǎng)物、緩沖鹽等以及(副)產(chǎn)物，例如乙醇、甘油、乙酸酯等)。本發(fā)明人想到了，在環(huán)化之前從6-ACA中分離出一種或更多種特定組分或者在產(chǎn)生低豐度的所述組分的條件下進行發(fā)酵，可能就足夠了。不想束縛于任何理論，被認(rèn)為可能影響己內(nèi)酰胺產(chǎn)率的組分包括:碳水化合物，具體是來自己糖和戊糖組中的單糖，其低聚物及其聚合物，更具體是葡萄糖、果糖、甘露糖、蔗糖、乳糖、異麥芽糖、麥芽糖、核糖、阿拉伯糖、木糖、淀粉，寡糖和多糖(例如淀粉、糖原、纖維素、甲殼質(zhì))J*6-ACA之外的含有胺的化合物(特別是不同于6-ACA的氨基酸)，蛋白質(zhì)和其他肽；有機酸；無機酸；無機鹽，特別是磷酸鹽、硫酸鹽；以及生物質(zhì)(細(xì)胞)。
[0012]通常，使6-ACA環(huán)化之前，含有6-ACA的混合物要經(jīng)歷一個或更多個預(yù)處理步驟。通常，從6-ACA中分離生物質(zhì)。此外，水和/或來自發(fā)酵培養(yǎng)基的其他組分可以從6-ACA中分離。6-ACA進行環(huán)化時的濃度(環(huán)化濃度)或至少被引入環(huán)化反應(yīng)器的含有6-ACA的進料的濃度(進料濃度)可以在較寬的范圍內(nèi)選擇。
[0013]通常，6-ACA環(huán)化濃度或進料濃度為至少50g/16_ACA，具體地至少100g/l，更具體地至少150g/l或者至少250g/l。甚至更優(yōu)選地，6-ACA環(huán)化濃度或進料濃度為至少250g/1，最優(yōu)選至少400g/l。該上限并不重要。原則上，進料可以包含固體6-ACA，只要進料保持可處理便可以。通常，6-ACA環(huán)化濃度或進料濃度為950g/l或更小，具體地為750g/l或更小，更具體地為500g/l或更小。
[0014]當(dāng)在本文中提到“6-ACA環(huán)化濃度或進料濃度”時，其包括6-ACA單體和6-ACA低聚物，在環(huán)化之前如果加熱進料，可能已形成該低聚物。
[0015] 盡管原則上在使6-ACA環(huán)化之前,培養(yǎng)基中基本上所有殘留組分(營養(yǎng)物、未反應(yīng)的原料以及除了水和6-ACA之外的其他組分)都可以被除去，但是實際上6-ACA的環(huán)化通常在一種或多種除水之外的其他殘余組分的存在下進行。通常，作為6-ACA環(huán)化濃度或進料濃度的百分比，殘留組分(除了水之外)的總濃度小于40wt.%，具體地小于30wt.%，更具體地小于20wt.%或小于1wt.%。作為6-ACA環(huán)化濃度或進料濃度的百分比，殘留組分(除了水之外)的總濃度具體地可以為至少2wt.至少5wt.%或至少8wt.%。余量(如果有的話)通過水形成。
[0016]特別地，基于其中6-ACA在發(fā)酵培養(yǎng)基中環(huán)化的實驗，本發(fā)明人預(yù)期，在不存在碳水化合物或碳水化合物的濃度較低時進行環(huán)化很有利。因此，在一個優(yōu)選的實施方式中，混合物包含小于5g/l的碳水化合物。在一個特別優(yōu)選的實施方式中，含有6-ACA的混合物包含小于2g/l、具體小于lg/Ι、更具體小于0.5g/l的碳水化合物。
[0017]在一個實施方式中，不同于碳水化合物的碳源被用作6-ACA在發(fā)酵過程的碳源，例如脂肪酸、氨基酸、甘油、乙酸、乙醇。在這些碳源中，預(yù)計它們不易于與6-ACA或己內(nèi)酰胺反應(yīng)形成可能難以除去的副產(chǎn)物。
[0018]在另一個實施方式中，使用分批補料式發(fā)酵過程。其中，碳源(例如碳水化合物或另一種碳源)在6-ACA的制備過程中逐步添加到發(fā)酵培養(yǎng)基中。
[0019]為了得到通過使碳水化合物發(fā)酵而制備的含有6-ACA的混合物(碳水化合物含量相對較低的產(chǎn)物)，可以進行分離步驟，從而將6-ACA從碳水化合物中分離。
[0020]根據(jù)本發(fā)明，不需要在0.03或更小的總碳水化合物與6-氨基己酸的比例下進行發(fā)酵過程，也不需要在低碳水化合物濃度下進行整個發(fā)酵過程。在含有環(huán)化的6-ACA的回收混合物中所述比例為0.03或更小便足以。但是，有利的是在0.03或更小的比例下至少終止發(fā)酵過程和/或在低碳水化合物濃度(具體地濃度小于5g/l)下終止發(fā)酵。通過限制碳水化合物的進料(或者不加料任何碳水化合物)，在發(fā)酵過程的某一時刻，微生物將導(dǎo)致碳水化合物的濃度降低，因為它們將碳水化合物作為碳源進行代謝(例如以產(chǎn)生6-ACA)。因而，可能達到所述比例和/或低碳水化合物濃度，而且當(dāng)在所述比例和/或碳水化合物濃度較高的條件下開始時也能達到。
[0021]在一個實施方式中，在整個發(fā)酵過程中或者至少在發(fā)酵過程的末期，在碳受限條件(即，在其中微生物的生長受到限制碳營養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)的限制)下進行發(fā)酵過程。這種方法被認(rèn)為特別有利，因為如果需要，可省略從過量營養(yǎng)物質(zhì)中分離6-ACA的具體分離步驟。據(jù)設(shè)想，碳受限條件在碳水化合物被用作碳源的情況下特別有利。碳受限條件(其中尤其是碳水化合物的濃度很低)可以直接導(dǎo)致含有6-ACA的混合物中碳水化合物濃度低。在一個具體的實施方式中，在碳受限條件下進行發(fā)酵過程之前，不在非碳受限條件下進行所述發(fā)酵過程。因而，可以利用最初的生長條件(其中碳源可能開始被加料到體系中)，這可能對6-ACA的生產(chǎn)速率有利。當(dāng)微生物已轉(zhuǎn)化大量碳源使其濃度變成碳受限濃度時(通常在停止任何碳源進料之后)，條件變成碳受限的。
[0022]在一個實施方式中，含有6-ACA的混合物的回收包括在預(yù)處理步驟中從細(xì)胞群分離6-ACA，特別是通過選自下列組中的技術(shù):切向流過濾、微濾、其他形式的過濾、和離心。
[0023]在一個實施方式中，含有6-ACA的混合物的回收包括在預(yù)處理步驟中從一種或更多種含有胺的化合物中分離6-ACA，特別是從一種或更多種選自其他氨基酸、肽和蛋白質(zhì)的組的化合物中。
[0024]預(yù)期特別是在其中含有6-ACA的混合物具有低碳水化合物含量的方法中，分離一種或更多種含有胺的化合物和6-ACA的分離步驟可被省略，同時保持相對較高的產(chǎn)率和/或使通過環(huán)化得到的己內(nèi)酰胺產(chǎn)物的提純相對簡單。
[0025]在一個實施方式中，含有6-ACA的混合物的回收包括分離6-ACA和一種或更多種聚合物，例如一種或更多種選自多糖、多肽和蛋白質(zhì)的組中的聚合物。超濾特別適用于該目的，其中在濾出液中回收6-ACA。對于超濾來說，通常選擇具有高于6-ACA的分子量和低于要從6-ACA中分離的聚合物的分子量的截止值的過濾器。
[0026]在一個實施方式中，含有6-ACA的混合物的回收包括在使6-ACA環(huán)化之前的除水步驟。通常，僅部分水被除去，含有6-ACA的混合物中剩余的水可能產(chǎn)生蒸汽，在該蒸汽的存在下進行6-ACA的環(huán)化。特別地，水的除去可以通過水的蒸發(fā)來實現(xiàn)。
[0027]在一個實施方式中，回收包括分離6-ACA和一種或更多種鹽。然而，可以進行根據(jù)本發(fā)明的方法，而沒有其中將6-ACA與一種或更多種鹽分離的步驟。預(yù)期環(huán)化可能適合在鹽的存在下進行，例如磷酸鹽或硫酸鹽，并且至少在一些實施方式中，鹽的存在可能很有利，因為鹽充當(dāng)環(huán)化催化劑。
[0028]原則上，環(huán)化工藝可能基于已知的環(huán)化工藝，例如如US6，194，572或US3，658，810中所述的。
[0029]通常，環(huán)化在250-400°C的溫度范圍內(nèi)進行。具體地,溫度可以為275°C或更高，280°C或更高，290°C或更高，或300°C或更高。具體地，溫度可以為375°C或更低，360°C或更低，340°C或更低，或330°C或更低。為了使副反應(yīng)的發(fā)生率低，相對低的溫度是優(yōu)選的；特別地高于330-340°C時，(例如)6-ACA的脫羧基化和/或脫氨基化可能成為一個問題。為了使反應(yīng)速度快，相對高的溫度是優(yōu)選的?？紤]到這些因素，溫度被具體地選擇在290-330°C的范圍內(nèi)。
[0030]通常，環(huán)化在0.3_2MPa的壓力范圍內(nèi)進行。具體地，壓力可以為0.5MPa或更高，
0.8MPa或更高，或1.0MPa或更高。具體地，壓力可以為1.5MPa或更低，1.4MPa或更低，或1.2MPa或更低。為了使反應(yīng)速度快，相對高的壓力是有利的。壓力可以通過在其中6-ACA被環(huán)化的環(huán)化反應(yīng)器中進料加壓的蒸汽而增大。其結(jié)果是，壓力越大，通常形成更多的冷凝水來稀釋產(chǎn)物?？紤]到這些因素，壓力被具體地選擇在0.8-1.5MPa的范圍內(nèi)。
[0031]本發(fā)明進一步涉及一種用于純化己內(nèi)酰胺的方法，其包括使本發(fā)明方法中得到的包含己內(nèi)酰胺的產(chǎn)物經(jīng)歷至少一個蒸餾步驟，從而得到富含己內(nèi)酰胺的餾分。優(yōu)選地，該方法包括至少一個從己內(nèi)酰胺中除去輕餾分(即，沸點比己內(nèi)酰胺低的化合物)的蒸餾步驟和至少一個從己內(nèi)酰胺中除去重餾分(即，沸點比己內(nèi)酰胺高的化合物)的蒸餾步驟。合適的工藝條件可以基于現(xiàn)有技術(shù)中已知的方法學(xué)，例如EP-A1062203。
[0032]優(yōu)選地，通過蒸餾得到的富含己內(nèi)酰胺的餾分經(jīng)歷結(jié)晶步驟，從而得到己內(nèi)酰胺晶體。己內(nèi)酰胺晶體可以通過本身已知的方法(例如過濾或離心)從剩余的液相中分離。
[0033]分離出的晶體可以進一步純化，例如以本身已知方式進行熔融和閃蒸。
[0034]之后，己內(nèi)酰胺可用于制備聚合物，特別是聚酰胺，所述制備包括使通過本發(fā)明方法得到的己內(nèi)酰胺聚合，可選存在一種或更多種其他可聚合化合物。
[0035]有關(guān)6-ACA的發(fā)酵生產(chǎn)，觀察到，可通過本身已知的方式進行。
[0036]在一個具體的實施方式中，6-ACA由6-氨基己-2-酸或6-氨基-2-羥基-己酸發(fā)酵生產(chǎn)，例如如W02005/068643所述在發(fā)酵條件下使用宿主細(xì)胞。
[0037]在進一步具體的實施方式中，6-ACA由α-酮庚二酸生產(chǎn)，例如以W02009/113855中所公開的方式，使用具有脫羧活性和/或轉(zhuǎn)氨酶活性的生物催化劑。
[0038]現(xiàn)在通過對比例和一些實施例說明本發(fā)明，但本發(fā)明本身不限于實施例的范圍。
[0039]對比例A
[0040]由用于商業(yè)酶生產(chǎn)的使用Ε.Coli的發(fā)酵過程得到發(fā)酵液。通過微濾從發(fā)酵液中除去生物質(zhì)。隨后通過超濾除去生物聚合物(包含目標(biāo)產(chǎn)物)。向剩余的發(fā)酵液中添加6-ACA，制備用于6-ACA發(fā)酵過程的發(fā)酵液模型，其中在150g/l的滴定濃度下得到6-ACA。該混合物中碳水化合物的總含量為6.3g/l (即，碳水化合物與6-ACA的重量比為0.042)。使所得到的產(chǎn)物混合物在強制循環(huán)蒸發(fā)器中在真空和40°C下濃縮。濃縮的混合物包含48.3wt.%的水、42.lwt.6-ACA、1.8wt.%的碳水化合物和7.8wt.%的其他發(fā)酵液組分(有機酸、無機酸等)。
[0041]將I千克所得到的濃縮產(chǎn)物混合物加料到2升攪拌釜反應(yīng)器中。合上反應(yīng)器，通過氮氣吹掃使反應(yīng)器內(nèi)的物質(zhì)惰性化。在整個實驗中，反應(yīng)器頂部的蒸汽出口管線內(nèi)的反應(yīng)器壓力控制器保持為1.2MPa。以lOOOr.p.m的速度開動攪拌器之后，在約25分鐘內(nèi)用壁電加熱使反應(yīng)器內(nèi)容物逐步加熱到315°C。在該時間段內(nèi)，存在于產(chǎn)物混合物中的水逐漸蒸發(fā)，并在位于蒸汽出口管線內(nèi)的蒸汽冷卻器中冷凝。將回收的冷凝餾分稱重并使用HPLC分析其中的6-ACA、CAP以及線性和環(huán)狀低聚物。當(dāng)反應(yīng)器內(nèi)容物達到約315°C的目標(biāo)溫度時，開始加入水并控制速度為400-800g/hr。水通過攪拌器下的進料管進料，其中當(dāng)水與熱的反應(yīng)器內(nèi)容物接觸時原位產(chǎn)生蒸汽。蒸汽和蒸汽汽提的產(chǎn)物通過反應(yīng)器頂部的蒸汽出口管線離開反應(yīng)器中。將冷凝的餾分稱重并通過HPLC分析其中的6-ACA、CAP以及線性和環(huán)狀低聚物含量。以這種方式完成反應(yīng)花費約5小時。在該實驗中得到的己內(nèi)酰胺產(chǎn)率為67摩爾％(用回收的產(chǎn)物冷凝物中分析得到的己內(nèi)酰胺的總量相對于初始加料到反應(yīng)器內(nèi)的6-ACA的總量來計算)。
[0042]實施例1
[0043]用與對比例A所述的相似方式制備發(fā)酵液，不同之處在于，初始的發(fā)酵被延長至足夠的時間以獲得在發(fā)酵液中較低的殘留碳水化合物含量。以這種方法制備與實施例A類似的發(fā)酵混合物模型，但是現(xiàn)在該發(fā)酵液模型的碳水化合物濃度為1.3g/l，并且碳水化合物與6-ACA的重量比為0.0087。使用與對比例A所述的將6-ACA轉(zhuǎn)化為己內(nèi)酰胺用的相同過程，最終得到的己內(nèi)酰胺產(chǎn)率為85摩爾％。
[0044]實施例2
[0045]重復(fù)實施例1，不同之處在于最終所得發(fā)酵液模型中的殘留碳水化合物濃度進一步降至0.3g/l (通過延長發(fā)酵時間);因此碳水化合物與6-ACA的重量比降至0.0020。使用與對比例A所述的將6-ACA轉(zhuǎn)化為己內(nèi)酰胺用的相同過程，最終得到的己內(nèi)酰胺產(chǎn)率為94摩爾％。
[0046] 上面的實施例表明如果發(fā)酵液中碳水化合物與6-ACA的重量比降至較低值，可實現(xiàn)高的己內(nèi)酰胺產(chǎn)率。
【權(quán)利要求】
1.一種用于制備己內(nèi)酰胺的方法，其包括:從包含生物質(zhì)的培養(yǎng)基中回收含有6-氨基己酸的混合物，所述培養(yǎng)基可包含一種或更多種碳水化合物；以及隨后，在過熱蒸汽的存在下使所述6-氨基己酸環(huán)化，從而形成己內(nèi)酰胺，其中所述混合物中所有的碳水化合物與6-氨基己酸的重量比為0.03或更小。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述混合物包含小于5g/l、優(yōu)選小于2g/l、更優(yōu)選小于0.5g/l的碳水化合物。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其中，所述混合物包含小于2g/l的碳水化合物。
4.如權(quán)利要求3所述的方法，其中，所述混合物包含小于0.5g/l的碳水化合物。
5.如前面的權(quán)利要求中任意一項所述的方法，其中，所述6-氨基己酸是微生物法制備的，其中微生物法制備至少在碳受限條件下終止。
6.如前面的權(quán)利要求中任意一項所述的方法，其中，所述6-氨基己酸是微生物法制備的，其中微生物法制備至少在所述培養(yǎng)基中總的碳水化合物濃度小于5g/l、優(yōu)選小于2g/1、更優(yōu)選小于0.5g/l時終止。
7.如前面的權(quán)利要求中任意一項所述的方法，其中，所述6-氨基己酸通過至少一種選自下列組中的技術(shù)從生物質(zhì)中分離:切向流過濾、微濾、其他形式的過濾、和離心。
8.如前面的權(quán)利要求中任意一項所述的方法，其中，所述混合物的回收包括分離6-氨基己酸和一種或更多種聚合物，例如一種或更多種選自多糖、多肽和蛋白質(zhì)的組中的聚合物。
9.如前面的權(quán)利要求中任意一項所述的方法，其中，通過超濾使所述6-氨基己酸與一種或更多種聚合物分離。
10.如前面的權(quán)利要求中任意一項所述的方法，其中，在使6-氨基己酸環(huán)化之前，使所述混合物經(jīng)歷除水步驟。
11.如前面的權(quán)利要求中任意一項所述的方法，其中，所述環(huán)化在250-400°C范圍內(nèi)的溫度下進行。
12.如前面的權(quán)利要求中任意一項所述的方法，其中，所述環(huán)化在0.3-2MPa范圍內(nèi)的壓力下進行。
13.一種用于純化己內(nèi)酰胺的方法，其包括，使通過前面權(quán)利要求中任意一項所述的方法得到的包含己內(nèi)酰胺的產(chǎn)物經(jīng)歷至少一個蒸餾步驟，從而得到富含己內(nèi)酰胺的餾分。
14.如權(quán)利要求12所述的方法，其中，一種或更多種沸點低于己內(nèi)酰胺的化合物和一種或更多種沸點高于己內(nèi)酰胺的化合物通過蒸餾與己內(nèi)酰胺分離，從而得到富含己內(nèi)酰胺的餾分，并且使所述餾分經(jīng)歷結(jié)晶步驟，從而得到己內(nèi)酰胺晶體。
15.一種用于制備聚合物的方法，其包括，使通過前面權(quán)利要求中任意一項所述的方法得到的己內(nèi)酰胺聚合，可選存在一種或更多種其他可聚合的化合物。
【文檔編號】C07D201/08GK104177282SQ201410284066
【公開日】2014年12月3日 申請日期:2010年12月22日 優(yōu)先權(quán)日:2009年12月22日
【發(fā)明者】魯?shù)婪颉し评账埂が旣悂啞す乓撂? 托馬斯·萬德杜斯, 羅拉納·麥德勒尼·拉姆斯多克 申請人:基因組股份公司