采用高效液相色譜法測定己內(nèi)酰胺中氨基己酸含量的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于分析技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種測定氨基己酸含量的方法，具體為一種采用 高效液相色譜法在己內(nèi)酰胺生產(chǎn)過程中酰胺油中氨基己酸含量的分析方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 氨基己酸（C6H13NO2)，在己內(nèi)酰胺生產(chǎn)工藝中，主要是在酸性或堿性介質(zhì)中，在水 存在下己內(nèi)酰胺水解開環(huán)而得。
[0003] 在中和反應(yīng)器中，共有兩股物料，分別為重排液（含有濃硫酸）及氣氨，如果兩者 混合不均，勢必造成局部過酸或過堿，且中和過程產(chǎn)生了一定的水，使己內(nèi)酰胺水解的條件 成熟，產(chǎn)生一定量副產(chǎn)物氨基己酸。
[0004] 氨基己酸的密度介于己內(nèi)酰胺和硫酸銨之間，含量足夠高時，往往會造成有機(jī)相 與無機(jī)相的分層困難，出現(xiàn)明顯的乳化現(xiàn)象，不僅增加己內(nèi)酰胺與硫胺的消耗，還會加重后 續(xù)萃取分離的負(fù)荷，進(jìn)而影響成品己內(nèi)酰胺的質(zhì)量。因而己內(nèi)酰胺工藝過程中氨基己酸的 測定就顯得尤為重要。
[0005] 目前氨基己酸的測定集中在生物醫(yī)藥方面，在己內(nèi)酰胺行業(yè)的應(yīng)用尚未見報道； 且目前氨基己酸的測定方法多為柱前或柱后衍生后，再進(jìn)行測定，方法較為復(fù)雜。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是針對以上問題，提供采用高效液相色譜法測定己內(nèi)酰胺中氨基己 酸含量的方法。
[0007] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：一種采用高效液相色譜法測 定己內(nèi)酰胺中氨基己酸含量的方法，其特征在于，包括以下步驟：
[0008] 1)標(biāo)液制備：準(zhǔn)確稱取氨基己酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用純水溶解，定容后，再以體積濃度為 80%的乙腈為稀釋劑配制成不同濃度的標(biāo)液；
[0009] 2)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線：用樣品空白液校準(zhǔn)液相色譜儀零點，以測定樣品相同的液相色 譜條件測定步驟1)中的標(biāo)液，儀器自動繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0010] 3)樣品溶液制備：稱取被測樣品2. 5g±0.0 OOlg，用純水定容至25mL，得A液，再 從A液中取5mL，用體積濃度為80%的乙腈定容至25mL，得B液；
[0011] 4)樣品測定：待液相色譜儀器的基線穩(wěn)定后，測定標(biāo)液和B液，先注入標(biāo)液，兩次 注入標(biāo)液的面積變化小于1 %后，進(jìn)行B液測定，在兩次標(biāo)液注入的中間注入B液；
[0012] 5)分別記下步驟4)中每針標(biāo)液、B液的面積，用外標(biāo)法計算B液中氨基己酸的含 量，并根據(jù)稀釋倍數(shù)計算出樣品中氨基己酸含量。
[0013] 所述的液相色譜條件為：
[0014] 色譜柱：CAPCELL CORE PC S2. 7 ;
[0015] 流動相：混合溶液與lOmmol/L的緩沖鹽溶液按體積比98 :2配制，等度洗脫；
[0016] 流速：0· 4mL/min ；
[0017] 檢測波長：200nm;
[0018] 柱溫：40°C ;
[0019] 進(jìn)樣量：20 μ L。
[0020] 進(jìn)一步的，所述的混合溶液采用體積濃度為95%的乙腈溶液與lOmmol/L的緩沖 鹽溶液按體積比85 :15配制而成；所述lOmmol/L緩沖鹽溶液采用磷酸二氫鉀溶液和磷酸 氫二鈉溶液按體積比1:1混合配制而成。
[0021] 所述 CAPCELL CORE PC S2. 7 柱的規(guī)格為：2. lmml. dX 150_。
[0022] 步驟 1)中所述不同濃度分別為 200. 32mg/L、100. 16mg/L、40. 064mg/L、20. 032mg/ L、10. 016mg/L。
[0023] 所述被測樣品為己內(nèi)酰胺生產(chǎn)中粗酰胺油中間產(chǎn)品。
[0024] 本發(fā)明利用氨基己酸在紫外區(qū)域波長200nm處有吸收的原理，用帶有紫外檢測器 的液相色譜儀測定己內(nèi)酰胺生產(chǎn)中粗酰胺油中氨基己酸的含量。采用反相色譜中常用的流 動相乙腈-緩沖鹽混合溶液體系，外標(biāo)法定量分析氨基己酸含量，該方法填補了己內(nèi)酰胺 領(lǐng)域氨基己酸測定方法的技術(shù)空白，具有樣品處理及分析過程簡單，分析結(jié)果準(zhǔn)確性高，重 現(xiàn)性好等優(yōu)點。
【附圖說明】
[0025] 圖1為標(biāo)液的色譜譜圖，圖中10. 449min出峰為氨基己酸峰。
[0026] 圖2為樣品配制所得B液的色譜譜圖，圖中10. 334min出峰為氨基己酸峰。
【具體實施方式】
[0027] 下面結(jié)合實施例及附圖1和2,進(jìn)一步闡明本發(fā)明。
[0028] 實施例1 :
[0029] -種采用高效液相色譜法測定己內(nèi)酰胺中氨基己酸含量的方法，具體步驟為：
[0030] 液相色譜法測定氨基己酸含量的分析方法
[0031] 1、流動相選擇和檢測波長選擇：
[0032] 1)流動相的選擇實驗結(jié)果表明：緩沖鹽含量增加，混合標(biāo)樣出峰時間很快，但是 無法分離；乙腈含量增加，混合標(biāo)樣出峰時間慢，但峰形差，兼顧分離效果與分析時間，采用 以下洗脫條件：混合溶液：10mm〇l/L緩沖鹽=98 :2(V/V);其中混合溶液采用體積濃度為 95%的乙腈溶液與lOmmol/L的緩沖鹽按體積比85 :15配制而成；lOmmol/L緩沖鹽采用磷 酸二氫鉀溶液和磷酸氫二鈉溶液按體積比1:1混合配制而成。
[0033] 2)檢測波長的選擇
[0034] 用紫外可見分光光度計在190-800nm進(jìn)行連續(xù)掃描，氨基己酸在200nm處有特征 吸收，故確定檢測波長為200nm。
[0035] 2、標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制
[0036] 準(zhǔn)確稱取2. 0032g氨基己酸標(biāo)準(zhǔn)品，置于1000 mL容量瓶中，用純水溶解，并定容， 搖勻，得濃度為2003. 2mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲備液；
[0037] 取標(biāo)準(zhǔn)儲備液10mL，用80 %乙腈定容至100mL，得濃度為200. 32mg/L標(biāo)樣1# ;
[0038] 取標(biāo)準(zhǔn)儲備液5mL，用80 %乙腈定容至100mL，得濃度為100. 16mg/L標(biāo)樣2# ;
[0039] 取標(biāo)準(zhǔn)儲備液2mL，用80 %乙腈定容至100mL，得濃度為40. 064mg/L標(biāo)樣3# ;
[0040] 取標(biāo)準(zhǔn)儲備液lmL，用80 %乙腈定容至100mL，得濃度為20. 032mg/L標(biāo)樣4# ;
[0041] 取標(biāo)1#標(biāo)液5mL，用80%乙腈定容至100mL，得濃度為KX 016mg/L標(biāo)樣5#。
[0042] 3、建立校正曲線
[0043] 用樣品空白液校準(zhǔn)液相色譜儀零點，以測定樣品相同的液相色譜條件測定標(biāo)樣 1 #、2#、3#、4#、5#溶液，儀器自動繪制校正曲線。
[0044] 4、樣品溶液制備
[0045] 取酰胺油2. 5g，用純水溶解，并定容至25mL，搖勻，得A溶液；從A溶液中移取5mL， 用80%的乙腈定容至25mL，搖勻，得樣品溶液B液。
[0046] 5、液相色譜儀條件設(shè)定：
[0047] 儀器為安捷倫液相色譜1260，
[0048] 流動相為混合溶液：IOmmol緩沖鹽=98 :2,等度洗脫；
[0049] 流速：0· 4mL/min ；
[0050] 檢測波長：200nm ;
[0051] 檢測器：紫外-可見光檢測器；
[0052] 柱溫：40 Γ ;
[0053] 進(jìn)樣量：20yL;
[0054] CAPCELL CORE PC S2. 7, 2. lmml. dX 150mm。
[0055] 6、樣品測定：待儀器的基線穩(wěn)定后，測定標(biāo)液和B液，先注入標(biāo)液，兩次注入標(biāo)液 的面積變化小于1 %后，進(jìn)行B液測定，在兩次標(biāo)液注入的中間注入B液。
[0056] 其中標(biāo)樣的色譜圖見圖1，B液的色譜圖見圖2,根據(jù)外標(biāo)法計算B液中氨基己酸 的含量為42. 63mg/L，并根據(jù)稀釋倍數(shù)計算出樣品中氨基己酸含量為0. 1060wt%。
[0057] 7、標(biāo)準(zhǔn)回收試驗見表1
[0059] 表 1
[0060] 結(jié)論：加標(biāo)回收的結(jié)論：回收率為92%-106%，滿足分析需求。
[0061] 8、精密度試驗
[0062] 對同一份樣品在優(yōu)化條件下連續(xù)測定10次，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為3. 45%。
[0063] 該實施例應(yīng)理解為僅用于說明本發(fā)明而不是用于限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。在閱讀 了本發(fā)明記載的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等效變 化和修飾同樣落入本發(fā)明權(quán)利要求書所限定的范圍。
【主權(quán)項】
1. 一種采用高效液相色譜法測定己內(nèi)酰胺中氨基己酸含量的方法，其特征在于，包括 以下步驟： 1) 標(biāo)液制備：準(zhǔn)確稱取氨基己酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用純水溶解，定容后，再以體積濃度為80% 的乙腈為稀釋劑配制成不同濃度的標(biāo)液； 2) 建立標(biāo)準(zhǔn)曲線：用樣品空白液校準(zhǔn)液相色譜儀零點，以測定樣品相同的液相色譜條 件測定步驟1)中的標(biāo)液，儀器自動繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線； 3) 樣品溶液制備：稱取被測樣品2. 5g±0.OOOlg，用純水定容至25mL，得A液，再從A 液中取5mL，用體積濃度為80%的乙腈定容至25mL，得B液； 4) 樣品測定：待液相色譜儀器的基線穩(wěn)定后，測定標(biāo)液和B液，先注入標(biāo)液，兩次注入 標(biāo)液的面積變化小于1%后，進(jìn)行B液測定，在兩次標(biāo)液注入的中間注入B液； 5) 分別記下步驟4)中每針標(biāo)液、B液的面積，用外標(biāo)法計算B液中氨基己酸的含量，并 根據(jù)稀釋倍數(shù)計算出樣品中氨基己酸含量。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述的液相色譜條件為： 色譜柱：CAPCELLCOREPCS2. 7 ; 流動相：混合溶液與lOmmol/L的緩沖鹽按體積比98 :2配制，等度洗脫； 流速：〇? 4mL/min; 檢測波長：200nm; 柱溫：40°C; 進(jìn)樣量：20yL。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：所述的流動相中的混合溶液采用體積濃 度為95%的乙腈溶液與lOmmol/L的緩沖鹽按體積比85 :15配制而成；所述lOmmol/L緩沖 鹽采用磷酸二氫鉀溶液和磷酸氫二鈉溶液按體積比1:1混合配制而成。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：所述CAPCELLCOREPCS2. 7柱的規(guī)格 為：2.lmml.dX1.SOmnin5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟1)中所述不同濃度分別為 200. 32mg/L、100. 16mg/L、40. 064mg/L、20. 032mg/L、10. 016mg/L。6. 根據(jù)權(quán)利要求1-5任意一項所述的方法，其特征在于：所述被測樣品為己內(nèi)酰胺生 產(chǎn)中粗酰胺油中間產(chǎn)品。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種采用高效液相色譜法測定己內(nèi)酰胺中氨基己酸含量的方法，采用反相色譜中常用的流動相乙腈-緩沖鹽混合溶液體系，外標(biāo)法定量分析氨基己酸含量的分析方法。其色譜條件為：色譜柱：CAPCELL？CORE？PC？S2.7（2.1mml.d×150mm）；流動相：混合溶液：10mmol/L緩沖鹽的體積比為98：2配制而成，等度洗脫；流速：0.4mL/min；檢測波長：200nm；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：20μL。該方法填補了己內(nèi)酰胺領(lǐng)域氨基己酸測定方法的技術(shù)空白，具有樣品處理及分析過程簡單，分析結(jié)果準(zhǔn)確性高，重現(xiàn)性好等優(yōu)點。
【IPC分類】G01N30/02
【公開號】CN105181849
【申請?zhí)枴緾N201510645276
【發(fā)明人】李萬清, 周學(xué)軍, 陳志霞, 劉冬梅, 李芹芹, 張小蘭, 張艷麗, 裴小英, 李煥, 張美麗
【申請人】湖北三寧化工股份有限公司
【公開日】2015年12月23日
【申請日】2015年10月8日