專(zhuān)利名稱(chēng)：一種馬迪林堿的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物分離領(lǐng)域，具體是涉及一種應(yīng)用高速逆流色譜技術(shù)從生馬錢(qián)莖皮中分離純化馬迪林堿的方法。
背景技術(shù)：
馬迪林堿(Sickingine)是從馬錢(qián)科植物生馬錢(qián)SizycAffo1S decussata (Pappe)Gilg.的莖皮中分離得到的一種咔啉生物堿類(lèi)活性成分，呈淡黃色針晶，mp. 232-234°C。現(xiàn)代藥理研究表明，馬迪林堿具有肌肉松弛作用。在小鼠抓握篩選中，75mg/kg劑量腹腔注射時(shí)有肌松作用。對(duì)大鼠隔膜收縮振幅抑制50%的濃度為O. 15mg/ml。現(xiàn)有提取馬迪林堿的報(bào)道并不多見(jiàn)，市場(chǎng)上也尚未有馬迪林堿對(duì)照品的出售，因此提供一種馬迪林堿的制備方法則很有必要，可以為其后續(xù)研究提供支持。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種馬迪林堿的制備方法，該方法制得的馬迪林堿質(zhì)量好，
純度高。為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案
一種馬迪林堿的制備方法，其特征在于包含以下步驟
Cl)提取將生馬錢(qián)莖皮藥材粉碎，加入7-12倍量的75-90%乙醇水溶液，空化混懸20-40min,進(jìn)行負(fù)壓空化混懸固液萃取1_2次,得到萃取液；
(2)除雜將上述萃取液濃縮至小體積，加入2-5倍量1%的鹽酸水溶液溶解，過(guò)濾，再加入堿液將濾液調(diào)至PH9-10，加等體積量的二氯甲烷萃取，萃取液回收試劑得總生物堿浸膏；
(3)大孔樹(shù)脂富集總生物堿浸膏加入大孔樹(shù)脂，拌勻、干燥后裝柱，醇水溶液洗脫，收集馬迪林堿流分，濃縮得馬迪林堿粗品；
(4)純化將上述粗品采用高速逆流色譜法分離純化，設(shè)定色譜儀轉(zhuǎn)速為800-9001·/min,流速為2. 5-5. Oml/min,收集流分，回收試劑,真空干燥得產(chǎn)品。步驟(2)所述萃取液濃縮至密度I. 3-1. 5g/ml。步驟(2)所述堿性溶液為2-5mol/L的氨水溶液。步驟(3)所述大孔樹(shù)脂為DlOl型，醇水溶液為85%的乙醇溶液。步驟(4)所述高速逆流色譜法采用的溶劑系統(tǒng)是二氯甲烷-甲醇-pH3. I磷酸鹽緩沖液(5-9:15-17:6-8)。本發(fā)明的有益效果是采用高速逆流色譜法純化，樣品損失少，得率高。
具體實(shí)施例方式 下面將結(jié)合具體實(shí)施方式
進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施方式。實(shí)施例I :取生馬錢(qián)莖皮10kg，粉碎成粗粉，與70L 85%的乙醇溶液混合后，空化混懸30min，進(jìn)行負(fù)壓空化混懸固液萃取2次，得到萃取液，濃縮至密度I. 5g/ml，加入2倍量1%鹽酸溶液溶解，濾除沉淀后，加入2mol/L氨水調(diào)至pH9. 5，用等量二氯甲烷萃取，萃取液回收試劑，得總生物堿浸膏，向浸膏中加DlOl型大孔樹(shù)脂拌勻、干燥后裝柱，先用水洗至色淺，再用6倍柱體積的85%的乙醇溶液洗脫，薄層檢測(cè)，收集目標(biāo)流分，濃縮得粗品。取氯仿-甲醇-pH3. I磷酸鹽緩沖液按(5:15:6)體積比置于分液漏斗中，混勻后，靜置，放出上層作為固定相，下層作為流動(dòng)相，將總生物堿用下相溶解，開(kāi)啟制備型高速逆流色譜儀，先將固定相泵入色譜柱中，再以4ml/min流速泵入流動(dòng)相，并通過(guò)進(jìn)樣閥連續(xù)進(jìn)樣，控制轉(zhuǎn)速為800r/min，收集流出液，濃縮，干燥得馬迪林堿，檢測(cè)含量98. 4%。實(shí)施例2
取生馬錢(qián)莖皮20kg，粉碎成粗粉，與240L 75%的乙醇溶液混合后，空化混懸40min，進(jìn)行負(fù)壓空化混懸固液萃取I次，得到萃取液，濃縮至密度I. 3g/ml，加入5倍量1%鹽酸溶液 溶解，濾除沉淀后，加入5mol/L氨水調(diào)至pH9. 2，用等量二氯甲烷萃取，萃取液回收試劑，得總生物堿浸膏，向浸膏中加DlOl型大孔樹(shù)脂拌勻、干燥后裝柱，先用水洗至色淺，再用5倍柱體積的85%的乙醇溶液洗脫，薄層檢測(cè)，收集目標(biāo)流分，濃縮得粗品。取氯仿-甲醇-pH3. I磷酸鹽緩沖液按(9:17:8)體積比置于分液漏斗中，混勻后，靜置，放出上層作為固定相，下層作為流動(dòng)相，將總生物堿用下相溶解，開(kāi)啟制備型高速逆流色譜儀，先將固定相泵入色譜柱中，再以3. 5ml/min流速泵入流動(dòng)相，并通過(guò)進(jìn)樣閥連續(xù)進(jìn)樣，控制轉(zhuǎn)速為900r/min，收集流出液，濃縮，干燥得馬迪林堿，檢測(cè)含量97. 2%。實(shí)施例3:
取生馬錢(qián)莖皮20kg，粉碎成粗粉，與150L 85%的乙醇溶液混合后，空化混懸20min，進(jìn)行負(fù)壓空化混懸固液萃取2次，得到萃取液，濃縮至密度I. 4g/ml，加入4倍量1%鹽酸溶液溶解，濾除沉淀后，加入2mol/L氨水調(diào)至pHIO，用等量二氯甲烷萃取，萃取液回收試劑，得總生物堿浸膏，向浸膏中加DlOl型大孔樹(shù)脂拌勻、干燥后裝柱，先用水洗至色淺，再用6倍柱體積的85%的乙醇溶液洗脫，薄層檢測(cè)，收集目標(biāo)流分，濃縮得粗品。取氯仿-甲醇-pH3. I磷酸鹽緩沖液按(7:16:7)體積比置于分液漏斗中，混勻后，靜置，放出上層作為固定相，下層作為流動(dòng)相，將總生物堿用下相溶解，開(kāi)啟制備型高速逆流色譜儀，先將固定相泵入色譜柱中，再以5ml/min流速泵入流動(dòng)相，并通過(guò)進(jìn)樣閥連續(xù)進(jìn)樣，控制轉(zhuǎn)速為900r/min，收集流出液，濃縮，干燥得馬迪林堿，檢測(cè)含量97. 7%。實(shí)施例4:
取生馬錢(qián)莖皮20kg，粉碎成粗粉，與200L90%的乙醇溶液混合后，空化混懸35min，進(jìn)行負(fù)壓空化混懸固液萃取I次，得到萃取液，濃縮至密度I. 5g/ml，加入3倍量1%鹽酸溶液溶解，濾除沉淀后，加入2mol/L氨水調(diào)至pH9，用等量二氯甲烷萃取，萃取液回收試劑，得總生物堿浸膏，向浸膏中加DlOl型大孔樹(shù)脂拌勻、干燥后裝柱，先用水洗至色淺，再用5倍柱體積的85%的乙醇溶液洗脫，薄層檢測(cè)，收集目標(biāo)流分，濃縮得粗品。取氯仿-甲醇-pH3. I磷酸鹽緩沖液按(8:15:7)體積比置于分液漏斗中，混勻后，靜置，放出上層作為固定相，下層作為流動(dòng)相，將總生物堿用下相溶解，開(kāi)啟制備型高速逆流色譜儀，先將固定相泵入色譜柱中，再以2. 5ml/min流速泵入流動(dòng)相，并通過(guò)進(jìn)樣閥連續(xù)進(jìn)樣，控制轉(zhuǎn)速為850r/min，收集流出液，濃縮，干燥得馬迪林堿，檢測(cè)含量98. 3%。
權(quán)利要求
1.一種馬迪林堿的制備方法，其特征在于包含以下步驟 (1)提取將生馬錢(qián)莖皮藥材粉碎，加入7-12倍量的75-90%乙醇水溶液，空化混懸20-40min,進(jìn)行負(fù)壓空化混懸固液萃取1_2次,得到萃取液； (2)除雜將上述萃取液濃縮至小體積，加入2-5倍量1%的鹽酸水溶液溶解，過(guò)濾，再加入堿液將濾液調(diào)至PH9-10，加等體積量的二氯甲烷萃取，萃取液回收試劑得總生物堿浸膏； (3)大孔樹(shù)脂富集總生物堿浸膏加入大孔樹(shù)脂，拌勻、干燥后裝柱，醇水溶液洗脫，收集馬迪林堿流分，濃縮得馬迪林堿粗品； (4)純化將上述粗品采用高速逆流色譜法分離純化，設(shè)定色譜儀轉(zhuǎn)速為800-9001·/min,流速為2. 5-5. Oml/min,收集流分，回收試劑,真空干燥得產(chǎn)品。
2.如權(quán)利要求I所述的一種馬迪林堿的制備方法，其特征在于步驟(2)所述萃取液濃縮至密度I. 3-1. 5g/mL·
3.如權(quán)利要求I所述的一種馬迪林堿的制備方法，其特征在于步驟(2)所述堿性溶液為2-5mol/L的氨水溶液。
4.如權(quán)利要求I所述的一種馬迪林堿的制備方法，其特征在于步驟(3)所述大孔樹(shù)脂為DlOl型，醇水溶液為85%的乙醇溶液。
5.如權(quán)利要求I所述的一種馬迪林堿的制備方法，其特征在于步驟(4)所述高速逆流色譜法采用的溶劑系統(tǒng)是二氯甲烷-甲醇-PH3. I磷酸鹽緩沖液(5-9:15-17:6-8)。
全文摘要
本發(fā)明提供一種馬迪林堿的制備方法，其特征在于包含以下步驟(1)將生馬錢(qián)莖皮藥材粉碎，加入乙醇水溶液，進(jìn)行負(fù)壓空化混懸固液萃取，得到萃取液；(2)萃取液濃縮至小體積，加酸水溶解，濾除不溶物，濾液調(diào)至堿性，用二氯甲烷萃取，萃取液回收試劑得總生物堿浸膏；(3)總生物堿浸膏加入大孔樹(shù)脂，拌勻、干燥后裝柱，醇水溶液洗脫，收集馬迪林堿流分，濃縮得馬迪林堿粗品；(4)將上述粗品采用高速逆流色譜法分離純化得馬迪林堿。本方法具有所得產(chǎn)品含量高，操作簡(jiǎn)單，提率高等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)C07H1/08GK102816161SQ201210371190
公開(kāi)日2012年12月12日 申請(qǐng)日期2012年9月29日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月29日
發(fā)明者劉東鋒, 萬(wàn)冬梅 申請(qǐng)人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司