專利名稱：小八角蓮中提取純化鬼臼毒素的工藝的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種從天然植物小八角蓮中提取純化鬼白毒素的工藝。
背景技術：
鬼臼毒素屬于木脂素類，主要存在于小檗科足葉草屬、鮮黃蓮屬、山荷葉屬和八角 蓮屬植物中，1820年美國藥典收載，被用于治療尖銳濕疣。0.5%鬼白毒素酊劑是世界衛(wèi)生 組織(WHO)推薦的治療性病尖銳濕疣的首選藥物。鬼白毒素幾乎能治療所有的疣，而且比 其他的方法療程短、療效顯著、副作用少。鬼白毒素和其類似化合物還具有對抗麻疹、單純 皰疹和抗細胞巨化病毒等作用，還被用作生物農(nóng)藥。但抗腫瘤和抗病毒是其最重要的作用， 鬼臼毒素衍生物依托泊苷、替尼泊苷已被成功用于臨床治療各種腫瘤。通常，鬼白毒素是從 足葉草屬根莖中提取分離，然而，從此單一植物資源中提取鬼白毒素作為藥物和合成依托 泊苷和新衍生物的半合成物的原料藥是十分有限的。目前，鬼白毒素獲得主要有兩條途徑，一條途徑是化學全合成，另一條途徑是從天 然植物中提取分離?；瘜W全合成技術難度高，合成成本高，很不經(jīng)濟。從植物中直接提取鬼 臼毒素，在目前看來還是最有效、最經(jīng)濟、最迅速的辦法，但也有許多亟待解決的問題，如資 源持續(xù)供給、分離純化步驟繁多、復雜，也是最難解決的問題之一。由于鬼臼毒素主要存在于小檗科多年生草本類群鬼臼亞科八角蓮屬(Dysosma Woodson)、桃兒七屬(Sinopodophyllum Ying)、山荷葉屬(Diphylleia Michx)及足葉草屬 (Podophyllum)植物中。這些植物由于都具有盾狀著生的葉，莖中具有多數(shù)散生微管束，花 不具蜜腺，漿果含鬼白毒素等一些共同特征而被看作一個自然而相對獨立的類群，習慣上 稱為鬼白類植物。由于，鬼白類植物不僅具有藥用價值，而且具有良好的花卉觀賞價值。所 以，受到多年來人類采挖的影響，作為提取鬼臼毒素的八角蓮、六角蓮、中華山荷葉、東北山 荷葉、桃兒七等原植物已瀕臨滅絕。目前，八角蓮已被列為國家二級保護植物。發(fā)明人通過專利檢索和文獻查閱表明，目前鬼白毒素提純化工藝是甲醇、乙醇等 有機溶劑回流或超聲加熱提取八角蓮、六角蓮、桃兒七等植物中的鬼臼毒素，得鬼臼毒素浸 膏，然后采用溶劑萃取，重結(jié)晶工藝分離得鬼白毒素，如200710018473. 4發(fā)明專利關于鬼 臼毒素分離純化工藝采用苯為溶劑對鬼白毒素浸膏回流進一步提取，回收溶劑后，對析出 的晶體采用苯_乙醇重結(jié)晶，得鬼白毒素_苯加合物，再加熱分解加合物，得鬼白毒素白色 粉未；200410052833. 9發(fā)明專利關于鬼白毒素分離工藝改進采用石油醚萃取，再用硅膠柱 層析分離純化，以醇類或酮類與氯仿的混合液進行洗脫，得到鬼白毒素；200910047696. 2 發(fā)明專利關于鬼白毒素分離純化工藝采用二氯甲烷萃取，再以硅膠柱層析分離純化，以丙 酮+ 二氯甲烷混合洗脫劑洗脫，得到鬼白毒素。但以上工藝也存在著不夠環(huán)保，分離純化步 驟繁多、復雜的問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了提供一種可避開現(xiàn)有已瀕臨滅絕的可提取鬼臼毒素植物，開辟一個新原料供應渠道，并提供一種可有效的從該原料中提取并純化鬼白毒素的新工藝， 整個工藝具有綠色環(huán)保，且操作簡單，易于工業(yè)化，工藝所得鬼白毒素純度高的特點。本發(fā)明的目的可以通過如下措施來實現(xiàn)本發(fā)明包括如下步驟取小八角蓮根莖粉碎成粗粉，通過有機溶劑對小八角蓮粗粉進行預處理；加5 15倍量濃度為60% 90%的熱回流提取有機溶劑在溫度為70°C 95°C的熱水中回流提取 60 120分鐘并過濾，濾渣在70°C 95°C的溫度下加10 25倍量濃度為60% 90%相同 的熱回流提取有機溶劑繼續(xù)熱回流提取80 150分鐘后再次過濾，合并兩次濾液，回收有 機溶劑后用適量水定容，得到鬼白毒素提取液；用鬼白毒素提取液制備含生藥量為0. 12g/ mL 0. 18g/mL的溶液作為上樣液，選擇凈化好的大孔吸附樹脂作為上柱樹脂，以lBV/h 3BV/h的流速進行上樣并充分吸附后，分別用水、8 12%乙醇依次洗去雜質(zhì)，再用濃度為 30% 70%的解吸劑以3BV/h 6BV/h的流速進行洗脫，收集洗脫部分，回收解吸劑后用適 量水定容，得到鬼白毒素純化液；對于小八角蓮粗粉進行預處理的有機溶劑是乙醇、丙酮、正丁醇、異丙醇、丙二醇、 丙三醇、乙酸乙酯、乙酸丁酯中的一種或幾種混合；用于熱回流提取的有機溶劑是乙醇、丙酮、正丁醇、異丙醇、丙二醇、丙三醇、乙酸 乙酯或乙酸丁酯；用于純化的解吸劑是乙醇、丙酮、正丁醇、異丙醇、丙二醇、丙三醇、乙酸乙酯、乙酸 丁酯中的一種或幾種混合。上述方案中用于純化的大孔吸附樹脂是LSA5B、HPD100, HPD400、HPD600、HPD800、 DlOl 或 AB-8。將得到鬼白毒素純化液回收有機溶劑，放置，干燥，得鬼白毒素。本發(fā)明所述新工藝具有如下優(yōu)點本發(fā)明采用的原料為小八角蓮，為小檗科八角 蓮屬植物，在我國湖南等地有廣泛分布，是八角蓮屬植物在湖南省分布最普遍的一種。其根 及根莖入藥，具有清熱解毒、散結(jié)祛瘀的功效。但目前對小八角蓮化學成分的研究在國內(nèi)外 均未見報道。因而，發(fā)明人對從小八角蓮中提取分離鬼白毒素進行研究，并獲取從小八角 蓮中提取并純化鬼白毒素的新工藝，可為醫(yī)藥工業(yè)生產(chǎn)依托泊干等抗腫瘤藥物創(chuàng)造新的條 件。另外，本發(fā)明采用的是乙醇、丙酮、正丁醇、異丙醇、丙二醇、丙三醇、乙酸乙酯、乙酸丁酯 等無毒有機溶劑及其混合有機溶劑對小八角蓮粗粉進行預處理，使小八角蓮粗粉處于強滲 促溶環(huán)境下。本發(fā)明工藝簡便可行，所需設備簡單，成本低。本發(fā)明利用木質(zhì)素類物質(zhì)的溶 解特性，將原料中的鬼白毒素能夠比較完全地提取并純化。本發(fā)明所采用的溶劑均是無毒 有機溶劑，且有機溶劑還可回收，再利用；所采用的大孔吸附樹脂無毒、安全、價廉、可重復 利用。無污染環(huán)境的“三廢”產(chǎn)物產(chǎn)生。整個工藝綠色環(huán)保，且操作簡單，易于工業(yè)化，工藝 所得鬼白毒素純度可達98%以上。


圖1為本發(fā)明的工藝流程圖。
具體實施例方式本發(fā)明還將結(jié)合實施例做進一步詳述，但本發(fā)明不僅限于所述實施例。實施例一取小八角蓮根莖粉碎成粗粉，以乙醇為有機溶劑，對小八角蓮粗粉進行預處理，使 小八角蓮粗粉處于強滲促溶環(huán)境，再加9倍量濃度為80%的乙醇在90°C的熱水中熱回流提 取60分鐘并過濾，濾渣加7倍量濃度為80%的乙醇繼續(xù)在100°C的熱水中熱回流提取45分 鐘后再次過濾，合并兩次濾液，回收乙醇后用適量水定容，得到鬼白毒素提取液。取鬼臼毒 素提取液制備成含小八角蓮生藥量為0. 121g/mL的溶液作為上樣液，選擇凈化好的LSA5B 大孔吸附樹脂作為上柱樹脂，以2BV/hr流速進行上樣并充分吸附后，分別用水、10%乙醇 各5BV依次洗去雜質(zhì)，再用5BV的濃度為70%乙醇作為解吸劑進行洗脫，流速控制在4BV/ h，接取70%乙醇的洗脫液，回收乙醇后用適量水定容，得到鬼白毒素純化液?；厥沼袡C溶 劑，放置，干燥，得鬼白毒素。鬼白毒素純度在98. 2%以上。實施例二 取小八角蓮根莖粉碎成粗粉，以乙醇和丙酮7 3比例混合有機溶劑，對小八角 蓮粗粉進行預處理，使小八角蓮粗粉處于強滲促溶環(huán)境，再加12倍量濃度為70%的乙醇在 950C的熱水中熱回流提取80分鐘并過濾，濾渣加15倍量濃度為70%的乙醇繼續(xù)在95°C的 熱水中熱回流提取120分鐘后再次過濾，合并兩次濾液，回收乙醇后用適量水定容，得到鬼 臼毒素提取液。取鬼白毒素提取液制備成含小八角蓮生藥量為0. 152g/mL的溶液作為上樣 液，選擇凈化好的HPD100大孔吸附樹脂作為上柱樹脂，以2BV/h流速進行上樣并充分吸附 后，分別用水、10%乙醇各5BV依次洗去雜質(zhì)，再用5BV的濃度為50%乙醇作為解吸劑進行 洗脫，流速控制在4BV/h，接取50%乙醇的洗脫液，回收乙醇后用適量水定容，得到鬼臼毒 素純化液?；厥沼袡C溶劑，放置，干燥，得鬼白毒素。鬼白毒素純度在98. 9%以上。實施例三取小八角蓮根莖粉碎成粗粉，以乙醇和乙酸乙酯9 1比例混合有機溶劑，對小八 角蓮粗粉進行預處理，使小八角蓮粗粉處于強滲促溶環(huán)境，再加15倍量濃度為90%的乙醇 在90°C的熱水中熱回流提取60分鐘并過濾，濾渣加20倍量濃度為90%的乙醇繼續(xù)在90°C 的熱水中熱回流提取100分鐘后再次過濾，合并兩次濾液，回收乙醇后用適量水定容，得到 鬼臼毒素提取液。取鬼白毒素提取液制備成含小八角蓮生藥量為0. 152g/mL的溶液作為上 樣液，選擇凈化好的HPD400大孔吸附樹脂作為上柱樹脂，以3BV/h流速進行上樣并充分吸 附后，分別用水、10%乙醇各5BV依次洗去雜質(zhì)，再用6BV的濃度為30%乙醇作為解吸劑進 行洗脫，流速控制在3BV/h，接取30%乙醇的洗脫液，回收乙醇后用適量水定容，得到鬼臼 毒素純化液?；厥沼袡C溶劑，放置，干燥，得鬼白毒素。鬼白毒素純度在99. 3%以上。
權利要求
小八角蓮中提取純化鬼臼毒素的工藝，取小八角蓮根莖粉碎成粗粉，通過有機溶劑對小八角蓮粗粉進行預處理；加5～15倍量濃度為60％～90％的熱回流提取有機溶劑在溫度為70℃～95℃的熱水中回流提取60～120分鐘并過濾，濾渣在70℃～95℃的溫度下加10～25倍量濃度為60％～90％的相同的熱回流提取有機溶劑繼續(xù)熱回流提取80～150分鐘后再次過濾，合并兩次濾液，回收有機溶劑后用適量水定容，得到鬼臼毒素提取液；用鬼臼毒素提取液制備含生藥量為0.12g/mL～0.18g/mL的溶液作為上樣液，選擇凈化好的大孔吸附樹脂作為上柱樹脂，以1BV/h～3BV/h的流速進行上樣并充分吸附后，分別用水、8～12％乙醇依次洗去雜質(zhì)，再用濃度為30％～70％的解吸劑以3BV/h～6BV/h的流速進行洗脫，收集洗脫部分，回收解吸劑后用適量水定容，得到鬼臼毒素純化液；對于小八角蓮粗粉進行預處理的有機溶劑是乙醇、丙酮、正丁醇、異丙醇、丙二醇、丙三醇、乙酸乙酯、乙酸丁酯中的一種或幾種混合；用于熱回流提取的有機溶劑是乙醇、丙酮、正丁醇、異丙醇、丙二醇、丙三醇、乙酸乙酯或乙酸丁酯；用于純化的解吸劑是乙醇、丙酮、正丁醇、異丙醇、丙二醇、丙三醇、乙酸乙酯、乙酸丁酯中的一種或幾種混合。
2.根據(jù)權利要求1所述的工藝，用于純化的大孔吸附樹脂是LSA5B、HPD100、HPD400、 HPD600、HPD800、D101 或 AB-8。
3.根據(jù)權利要求1或2所述的工藝，將得到鬼白毒素純化液回收有機溶劑，放置，干燥， 得鬼白毒素。
全文摘要
小八角蓮中提取純化鬼臼毒素的工藝。該工藝是取小八角蓮根莖粉碎成粗粉，通過有機溶劑對小八角蓮粗粉進行預處理，經(jīng)熱水中回流提取，濾渣繼續(xù)熱回流提取再次過濾，合并兩次濾液，回收有機溶劑后用適量水定容，得到鬼臼毒素提取液。用鬼臼毒素提取液制備含生藥量為0.12g/mL～0.18g/mL的溶液作為上樣液，選擇凈化好的大孔吸附樹脂作為上柱樹脂，充分吸附后，分別用水、10％乙醇依次洗去雜質(zhì)，再用解吸劑進行洗脫，收集洗脫部分，回收解吸劑后用適量水定容，得到鬼臼毒素純化液。本發(fā)明工藝使用的均是無毒有機溶劑，且有機溶劑還可回收，再利用，無污染環(huán)境的“三廢”產(chǎn)物產(chǎn)生。整個工藝綠色環(huán)保，且操作簡單，易于工業(yè)化，工藝所得鬼臼毒素純度在98％以上。
文檔編號C07D493/04GK101974008SQ201010522960
公開日2011年2月16日 申請日期2010年10月28日 優(yōu)先權日2010年10月28日
發(fā)明者周春山, 張 杰 申請人:中南大學