專利名稱：：一種阿德福韋單酯的含量檢測方法
技術領域：
：本發(fā)明屬于醫(yī)藥
技術領域：
，涉及一種醫(yī)藥原料中間體的制備方法，以及它的質(zhì)量控質(zhì)方法，具體是指阿德福韋單酯的制備方法及其含量檢測方法。阿德福韋酯是一種新型口服廣譜抗病毒藥，通過抑制病毒DNA聚合酶和冷子管轉(zhuǎn)錄酶，抑制病毒的轉(zhuǎn)錄與復制，對乙型肝炎病毒和艾滋病病毒等有較強的抑制作用，對拉米夫定和泛昔洛韋耐藥的乙型肝炎病毒也有較強的抑制作用，為開環(huán)核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，是阿德福韋(PMEA)與特戊酰氧基甲醇的雙酯化物形式的前體藥物，生物利用度較阿德福韋大。阿德福韋酯由于其理化性穩(wěn)定性差，易于脫掉一個酯化基團而形成阿德福韋的單酯化合物(結(jié)構式如下式I)，在阿德福韋酯的藥物應用中，為了確保產(chǎn)品質(zhì)量，通常需要對阿德福韋酯的藥物制劑或其原料藥中的阿德福韋單酯進行含量監(jiān)控，因此，往往需純度較高的阿德福韋單酯化合物作為含量監(jiān)控檢測時的對照品物質(zhì),而且，阿德福韋單酯也有一定的藥理活性作用。通常的，阿德福韋單酯是通過阿德福韋與特戊酰氧基甲醇等摩爾酯化反應得到，但這種制備法得到的阿德福韋單酯的純度不夠理想，且反應收率較低，制
背景技術：
：、(式I)。備過程繁索且操作控制難度較大。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種制備簡單易于操作、收率高、純度高的阿德福韋單酯的制備方法，以及它的含量檢測方法。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，阿德福韋酯易于水解，將阿德福韋酯在含水介質(zhì)中進行水解反應，控制其水解反應的環(huán)境與條件，可使阿德福韋酯脫除一個酯基而得到阿德福韋單酯，其反應原理如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>應當理解的是，其水解反應的環(huán)境與條件的選擇是很重要的且要求重現(xiàn)性良好，因為當水解反應的環(huán)境與條件不適合時，很容易導致兩個酯基都脫除的情況發(fā)生，即會發(fā)生完全水解。本發(fā)明提供一種阿德福韋單酯的制備方法，它釆用阿德福韋酯在乙腈和水的混合介質(zhì)進行水解反應，視需要對反應物進行攪拌和加熱，優(yōu)選在3crc至加熱回流溫度下，進一步對水解后的固體產(chǎn)物進行洗滌和干燥。優(yōu)選采用二氯甲垸對反應產(chǎn)物進行洗滌。具體的，一種阿德福韋單酯的制備方法，它包括以下在乙腈和水的混合液中加入阿德福韋酯，攪拌并于3crc至加熱回流溫度下，使阿德福韋酯部分水解，減壓濃縮，加入二氯甲垸，抽濾，二氯甲烷洗滌，干燥即得，視需要可用乙腈與水的混合液對所得產(chǎn)物重結(jié)晶二次得阿德福韋單酯白色結(jié)晶。上述制備中，用于水解阿德福韋酯的乙腈和水的混合液，其中乙腈與水的體積比為1:0.55，即1體積的乙腈與0.55體積的水混合液作為水解阿德福韋酯的反應液，優(yōu)選乙腈與水的體積比為1:0.73;優(yōu)選乙腈與水的體積比為1:12;優(yōu)選乙腈與水的體積比為l:11.5;優(yōu)選乙腈與水的體積比為1:11.2;優(yōu)選乙腈與水的體積比為1:11.15。上述制備中，用于重結(jié)晶的乙腈和水的混合液，其中乙腈與水的體積比為l:0.53，即1體積的乙腈與0.53體積的水混合液作為水解阿德福韋酯的反應液，優(yōu)選乙腈與水的體積比為1:0.72;優(yōu)選乙腈與水的體積比為1:11.5;優(yōu)選乙腈與水的體積比為1:1。用本發(fā)明的制備方法得到的阿德福韋單酯呈白色固體粉末或結(jié)晶性粉末，含量大于99%，完全可作為標準品或?qū)φ掌酚糜跇硕ㄋ幤分邪⒌赂ｍf單酯含量。另一方面，本發(fā)明還提供了一種檢測阿德福韋單酯含量的方法，用于阿德福韋單酯的質(zhì)量控質(zhì)監(jiān)測。本發(fā)明提供了用高效液相法來檢測阿德福韋單酯含量的方法，其特征在于用十八烷基硅垸鍵合硅膠為填充劑；0.lmol/L磷酸二氫鉀溶液-乙腈為流動相；檢測波長255265nm，其中流動相中0.lmol/L磷酸二氫鉀溶液與乙腈的體積配比為(30:70)(70:30)，優(yōu)選為體積配比為60:40或50:50;測試時的流速和進樣量依照高效液相色譜儀的型號來選定，例如通?？刹捎?.0ml/min的流速20iU的進樣量。阿德福韋單酯在上述檢測方法中，可以觀察到在260nm和210nm附近出現(xiàn)兩個較大的吸收峰，但變換系統(tǒng)適用性條件時，只有260nm附近的吸收峰可以穩(wěn)定存在，故優(yōu)選260nm附近的吸收峰作為本方法檢測時的特定的檢測波長。用本發(fā)明方法制備的阿德福韋單酯和其含量的檢測方法，制備簡單易于操作，產(chǎn)品成本低，制量控制能夠得到保證。附圖1:阿德福韋單酯的高效液相色譜圖(純度檢査圖)；附圖2:阿德福韋單酯的紅外吸收光譜附圖3:阿德福韋單酯的紫外吸收光譜圖(在乙醇中)；附圖4:阿德福韋單酯的核磁共振譜圖GHNMR);附圖5:阿德福韋單酯的核磁共振譜圖GHNMR+D20);附圖6:阿德福韋單酯的質(zhì)譜圖。具體實施方式通過下面的實施例來對本發(fā)明做進一步具體說明，但并不表示實施例對本發(fā)明的限制。實施例1.阿德福韋單酯的制備在一個250ml茄形瓶內(nèi)，加入阿德福韋酯10.Og，乙腈48.Oml，水55.Oml，攪拌，加熱回流8h，減壓濃縮，加入二氯甲烷100.0ml，45。C攪拌2h，抽濾，二氯甲垸洗滌，千燥得3.6g類白色固體，乙腈/水(l:l)重結(jié)晶二次得阿德福韋單酯白色結(jié)晶2.5g，收率32.0%，mp228230。C(分解)。上述的制備方法，所用阿德福韋酯、乙腈、水、二氯甲烷的用量可按比例放大或縮小。另外，對上述制備的阿德福韋單酯進行結(jié)構分析，以確認其為阿德福韋單酯的結(jié)構1.紅外吸收光譜檢測1.1儀器型號NicoletNexus670型FT-IR紅外吸收光譜儀。按中國藥典2005年版二部附錄IVC有關規(guī)定進行校正和檢定。1.2樣品的制備固體KBr壓片1.3紅外吸收光譜圖見附圖21.4紅外吸收光譜測定數(shù)據(jù)見表l表l樣品紅外吸收光譜數(shù)據(jù)及解析<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>1.5解析(1)35003200cm—1:為嘌呤環(huán)上的6位氨基的N-H伸縮振動；1697cm-1為6位-NH2的彎曲振動；1282cm—'為6氨基嘌呤環(huán)的C-N伸縮振動，證明分子結(jié)構中有與嘌呤環(huán)相連的伯胺結(jié)構。(2)3062cm—1:為嘌呤環(huán)的=0H伸縮振動；1590cm1,1514cm—1,1480cm—1為嘌呤環(huán)骨架碳碳雙鍵、碳氮雙鍵伸縮振動；878cm—1,801cm—1為嘌呤環(huán)的C_H面外彎曲振動，因此，證明分子中有嘌呤環(huán)存在。(3)2975cm—1:甲基、亞甲基C-H伸縮振動；1417cm—1，1393cm—1，1366cnf1，1355cm—工為甲基、亞甲基的C-H面外彎曲振動，證明分子中有甲基、亞甲基結(jié)構存在。(4)1743cm—1:為特戊酸酯的羰基伸縮振動；1147cm—1為特戊酸酯的C_0伸縮振動，與分子中存在特戊酸酯結(jié)構相符。oo(5)35003200cm—、為-ch&:的羥基伸縮振動；1230cm—1為-CH^C的oP二0伸縮振動；1028cnf1為-ch^:的P-0-C伸縮振動；721cii^為—OT2\。r的P-C伸縮振動，與分子結(jié)構存在—ch[。h結(jié)構相符。(6)1059cm-、為醚(C-0-C)的C-0伸縮振動，與分子中存在_0120120-012-結(jié)構相符。(7)972cm-1:為亞甲二氧基(0-CH2-0-)的C-0伸縮振動，與分子中存在n/OH々0結(jié)構相符。-P-0_CH20-C-OR-口IJIAIJ01.6.結(jié)論從紅外光譜得知，分子結(jié)構中含有伯胺基、嘌呤環(huán)、酯、醚、-ol:°H、OR亞甲二氧基、甲基、亞甲基等官能團，與分子結(jié)構相符。2.紫外吸收光譜檢測2.1儀器型號PERKIN-ELMERLAMBDA17UV/VIS型紫外可見光光譜儀2.2溶劑乙醇2.3紫外吸收光譜圖見附圖32.4紫外吸收光譜測定數(shù)據(jù)見表2表2樣品紫外吸收光譜數(shù)據(jù)溶劑濃度入max(nm)￡入隨(nm)乙醇25.9ug/ml2091038926173692.5解析樣品在乙醇中在A皿x(nm)209，Amax(nm)261處有最大吸收，為母環(huán)腺嘌呤環(huán)的E帶和B帶吸收，說明樣品分子中含有腺嘌呤母環(huán)，與化合物結(jié)構相符。3.核磁共振氫譜檢測3.1儀器型號BrukerACF-300型超導核磁共振儀3.2測定條件溶劑DMS0-d6，內(nèi)標TMS3.3核磁共振氫譜圖WNMR(附圖4)，1頓R+D20(附圖5<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>3.4iHNMR測定數(shù)據(jù)見表3表3樣品核磁共振氫譜數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>3.5解析(1)51.12卯m，(2)S3.68卯m，(3)53.88ppm，(4)S4.33ppm，(5)S5.44ppm，(6)57.62ppm，(7)58.16ppm，單峰，9H，歸為叔丁基的3個甲基氫H^H18，H19。雙重峰，J=6.0Hz，2H，歸為與磷原子相連亞甲基氫Hi2'多重峰，2H，歸為與氧原子相連亞甲基氫H^。多重峰，2H，歸為與氮原子相連亞甲基氫H^。多重峰，1H，歸為亞甲二氧基的亞甲基氫H^。寬單峰，2H，D20交換后消失，歸為20位伯氨基氫-NH2單峰，2H，歸為嘌呤環(huán)的烯氫H2，H8。3.6結(jié)論從WNMR譜得知，樣品相應質(zhì)子與分子結(jié)構完全相符<4.質(zhì)譜檢測4.1儀器型號Agilent1100型質(zhì)譜儀4.2條件電噴霧，ESI(-)70V4.3質(zhì)譜圖見附圖64.4解析m/z386(基峰)為(M-H)-峰，與阿德福韋單酯的分子式C14H22N506P相符。綜上所述，樣品的IR、UV、！HNMR、iHNMR+D20、MS譜能夠合理對分子結(jié)構作出歸屬，確證制得的產(chǎn)物為阿德福韋單酯。實施例2.阿德福韋單酯的制備在一個250ml茄形瓶內(nèi)，加入阿德福韋酯lO.Og，乙腈35ml，水70ml，加熱60。C攪拌12h，減壓濃縮，加入二氯甲垸IIOml,45。C攪拌2h，抽濾，二氯甲烷洗滌，干燥得3.lg類白色固體，乙腈/水(1:1.5)重結(jié)晶二次得阿德福韋單酯白色結(jié)晶。同樣的，用ir、uv、wnmr、wnmr+D20、ms譜能夠合理對上述方法制得的樣品的分子結(jié)構作出歸屬，確證制得的產(chǎn)物為阿德福韋單酯。實施例3.阿德福韋單酯含量的檢測方法取實施例1制備的阿德福韋單酯含量，采用高效液相檢測，方法如下色譜儀LC-10A型高效液相色譜儀，SPD-10AV紫外檢測器，N2000色譜工作站，色譜柱Lichrospher-C18，5u，250X4.6mm，流動相0.lmol/L磷酸二氫鉀溶液-乙腈(60:40)，流速1.0ml/min，檢測波長260nm，進樣量20lU。用高效液相色譜法測得樣品純度為99.8%，見附圖1。權利要求1.一種用高效液相法檢測阿德福韋單酯含量的方法，其特征在于用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；0.1mol/L磷酸二氫鉀溶液一乙腈為流動相；檢測波長255～265nm。2.權利要求1所述的檢測方法，其中流動相中0.lmol/L磷酸二氫鉀溶液與乙腈的體積配比為(30:70)(70:30),優(yōu)選為體積配比為60:40或50:50。3.權利要求1所述的檢測方法，其中檢測波長為260nm。全文摘要一種用高效液相法檢測阿德福韋單酯含量的方法，其特征在于用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；0.1mol/L磷酸二氫鉀溶液-乙腈為流動相；檢測波長255～265nm。用于阿德福韋單酯的質(zhì)量控制監(jiān)測。文檔編號C07F9/00GK101504394SQ20091000541公開日2009年8月12日申請日期2007年6月28日優(yōu)先權日2007年6月28日發(fā)明者康惠燕,陳國華申請人:福建廣生堂藥業(yè)有限公司