專利名稱：篤斯越桔花青素及其分離純化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于功能活性成分提取純化和功能食品開發(fā)的技術(shù)領(lǐng)域，涉及到一種 從篤斯越桔果實(shí)中分離純化獲得花青素的方法。
技術(shù)背景篤斯越桔(Vaccinium uliginosum L.)又名藍(lán)莓、中國(guó)藍(lán)莓、篤斯、地果、 甸果、都柿等，隸屬杜鵑花科(Ericaceae)越桔屬(Vaccinium L.)，為亞灌木野 生植物。在全世界共有130多種，主要分布于中國(guó)、俄羅斯、歐洲、北美、日本、 朝鮮等北半球高緯度國(guó)家。我國(guó)主要集中在東北、內(nèi)蒙古、新疆等地區(qū)。吉林省 長(zhǎng)白山地區(qū)野生篤斯越桔分布極廣、產(chǎn)量大、資源豐富。篤斯越桔含有黃酮類化 合物、多酚類化合物、多糖類化合物等多種功能因子，保健功能在食品領(lǐng)域和醫(yī) 藥領(lǐng)域的作用倍受國(guó)內(nèi)外眾多學(xué)者關(guān)注，其研究熱點(diǎn)主要集中在治療眼科疾病、 血管障礙、糖尿病并發(fā)癥等方面，己經(jīng)被聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織列為人類五大健康食品 之一。目前，國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)中篤斯越桔飲料和保健酒比較暢銷，其他相關(guān)產(chǎn)品的研 究與開發(fā)還相對(duì)較緩慢?；ㄇ嗨?anthocyanidin)屬酚類化合物中的類黃酮類，是一種水溶性色素， 主要存在于水果蔬菜、花卉等植物細(xì)胞液中。自然條件下游離的花青素極少，在 果實(shí)中以糖苷的形式存在，如常與一個(gè)或多個(gè)葡萄糖、鼠李糖、半乳糖、阿拉伯 糖等通過糖苷形成花青苷，花青苷中的糖苷基和羥基還可以與一個(gè)或幾個(gè)分子的 香豆酸、阿魏酸、咖啡酸、對(duì)羥基苯甲酸等芳香酸和脂肪酸通過酯鍵形成?；?的花青苷?；ㄇ嗨鼐哂蓄慄S酮的典型結(jié)構(gòu)，屬于2—苯基苯并吡喃陽(yáng)離子的衍生 物，以C6—C3—C6為基本骨架，其結(jié)構(gòu)式如下<formula>formula see original document page 4</formula>在自然界中常見是氯化物，花青素的氯化物結(jié)構(gòu)式如下-cr花青素是一種強(qiáng)有力的抗氧化劑，它能夠保護(hù)人體免受一種叫做自由基的有 害物質(zhì)的損傷，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)己證明，花青素比維生素和茶酸等有更強(qiáng)的除去自由基 的功能，此外還具有抗自由基作用、抗視力退化、抗癌作用及抗動(dòng)脈硬化和血栓 形成等特殊保健功效。現(xiàn)已知的花青素中有20多種花色素，但在食品中主要的 有6種，即天竺葵色素、矢車菊色素、飛燕草色素、芍藥色素、牽牛花色素和錦 葵色素?；ㄇ嗨厝苡谒鸵掖?、不溶于乙醚、氯仿等有機(jī)溶劑，遇醋酸鉛試劑會(huì) 深沉，并能被活性炭吸附，其顏色隨pH不同而改變，在中性、接近中性條件下 呈無(wú)色，而在酸性條件下顯紅色，且在可見光區(qū)465~560nm處和紫外光區(qū) 270~280nm處有2個(gè)吸收波長(zhǎng)范圍，這也是研究花青素含量測(cè)定方法和研究分離 純化技術(shù)的基礎(chǔ)。與本發(fā)明相近的現(xiàn)有技術(shù)是一份申請(qǐng)日為2003年1月13日的名稱為"越桔 花青素的提取方法"的中國(guó)專利，公開號(hào)CN1517343，涉及越桔花青素提取方 法的改進(jìn)。用乙醇溶劑提取分離過濾，將濾液混合進(jìn)濃縮機(jī)蒸掉乙醇，上大孔樹 脂吸附柱吸附至飽和，用凈水沖洗吸附柱至無(wú)酸無(wú)色，再用5% 55%濃度的乙 醇洗脫樹脂得解吸液，將解吸液濃縮蒸掉乙醇，用水稀釋后再經(jīng)離子樹脂吸附。 除公開其工藝獲得的越桔花青素純度達(dá)到35%外，沒有公開越桔花青素中錦葵色 素含量和越桔花青素的抗氧化活性程度。以上所述的現(xiàn)有的花青素的分離純化方法中有很多因素制約著提取效果、產(chǎn) 品純度及其功效特性，主要表現(xiàn)在以下幾個(gè)方面(1) 花青素分離純化方法是受花青素本身的性質(zhì)及所達(dá)到目的影響，因?yàn)?花青素在中性或弱堿性溶液中不穩(wěn)定，多采用甲醇、乙醇、水等酸性的極性溶劑 提取分離，但該方法同時(shí)分離出材料中由原花青素及花白素轉(zhuǎn)化形成的花青素。(2) 篤斯越桔花青素對(duì)溫度很敏感，長(zhǎng)時(shí)間加熱可使其降解、退色。(3) 食用花青素應(yīng)更多注意安全性、著色力及穩(wěn)定性。常用甲醇溶液浸提 花青素可獲得比較理想的提取效果，但是考慮到甲醇毒性問題而采用酸化乙醇替 代，盡管其提取效果遠(yuǎn)不如甲醇的高。為獲得更接近于天然狀態(tài)的花色苷，常采用60%正丁醇、乙二醇、丙二醇、丙酮/甲醇/水混合物和水等中性溶劑做初步提 取。(4) 由于初步分離得到的天然花青素產(chǎn)品，通常品質(zhì)低，穩(wěn)定性和著色性 不好，需要進(jìn)一步的純化精制。(5) 高純度花青素產(chǎn)品市場(chǎng)價(jià)格極其昂貴，因?yàn)樵趯?duì)花青素進(jìn)行純化過程中，僅用一種手段很難達(dá)到對(duì)其純化的目的，往往需要借助兩種或兩種以上的手 段進(jìn)行配合，如可用柱層析初分離，再同時(shí)用薄層層析快速檢測(cè)，再用制備高效 液相分離出更純的花青素類，因而其生產(chǎn)工藝極其復(fù)雜，沒有大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)技 術(shù)與設(shè)備，制約著應(yīng)用領(lǐng)域和范圍。目前，發(fā)明人在《食品科學(xué)》雜志2007年第IO期發(fā)表的篤斯越桔中花青素 的含量分析方法研究論文，可以用于本發(fā)明篤斯越桔花青素粗品提取率和產(chǎn)品中 花青素含量的檢測(cè)方法；在《食品科學(xué)》雜志2007年第11期發(fā)表的纖維素酶法 提取篤斯越桔花青素的試驗(yàn)研究，獲得產(chǎn)品提取率4.533%;在《食品科學(xué)》雜 志2007年第11期發(fā)表的篤斯越桔花青素的分離純化試驗(yàn)研究中技術(shù)參數(shù)公開可 以用于實(shí)施本發(fā)明篤斯越桔花青素產(chǎn)品純化，獲得產(chǎn)品純度只能達(dá)20%。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所需要解決的技術(shù)問題是公開一種能從長(zhǎng)白山野生篤斯越桔中分離 純化獲得篤斯越桔花青素的方法，使研制的篤斯越桔花青素產(chǎn)品，用紫外分光光 度法檢測(cè)花青素含量在29.8~40%，高效液相色譜法檢測(cè)錦葵色素含量占花青素 的4.68~5.48%;抗氧化活性是Vc的7.8~15倍。本發(fā)明的技術(shù)方案是-一種篤斯越桔花青素，其特征在于，是采用超聲波、微波輔助冷浸提法分離 后，采用AB-8大孔樹脂靜態(tài)、動(dòng)態(tài)相結(jié)合的吸附純化法獲得的。本發(fā)明的篤斯越桔花青素凍干粉，組分用紫外分光光度法檢測(cè)花青素含量在 29.8~40%，高效液相色譜法檢測(cè)錦葵色素含量占花青素的4.68~5.48%;抗氧化 活性是Vc的7.8-15倍。本發(fā)明的篤斯越桔花青素的分離純化方法，包括原料預(yù)處理、浸提濃縮、純 化濃縮的過程；其特征在于，(1)所述的原料預(yù)處理過程，是將新鮮的篤斯越桔果實(shí)進(jìn)行速凍處理得冷 凍的篤斯越桔果實(shí)；或者在-18'C -35'C環(huán)境下保藏備用；或者凍干至水分含量為5%以下，再粉碎至顆粒度為60~120目，制得篤斯越桔果實(shí)凍干粉，為下步 浸提提供原料；(2) 所述的浸提濃縮過程，是將篤斯越桔冷凍果實(shí)或凍干粉在酸化乙醇溶 液中采用超聲波、微波輔助冷浸提法分離獲得篤斯越桔花青素浸提液，再經(jīng)減壓 濃縮處理至花青素含量為1.5 4.0mg/mL;其中① 酸化乙醇溶液乙醇與鹽酸體積比95 : 5~70 : 30，乙醇濃度50%~100%;② 浸提料液按重量比篤斯越桔果實(shí)凍干粉酸化乙醇=1 : 25 1 : 150;或 者冷凍的篤斯越桔果實(shí)研磨至均勻漿液后投料，按重量比篤斯越桔果實(shí)漿料酸化乙醇=9 : 25 9 : 150;③ 超聲功率200~600W，超聲時(shí)間5 30min;④ 微波功率在400~900W，微波時(shí)間4-10min;⑤ 浸提溫度10。C 40。C，浸提次數(shù)1 4次，浸提總時(shí)間為l 8h;⑥ 減壓濃縮真空度為0.075 0.095Mpa，溫度為45°C~60°C，濃縮至花青素 含量為1.5~4.0mg/mL;(3) 所述的純化濃縮過程， 是將篤斯越桔花青素浸提液濃縮液，采用柱層析AB-8大孔樹脂靜態(tài)、動(dòng)態(tài)相結(jié)合吸附純化以獲得篤斯越桔花青素洗脫液，再經(jīng)減壓濃縮處理至原體積的 1/5~1/20。上述的純化濃縮過程，可以用通常的純化濃縮方法進(jìn)行；最好用下列純化濃 縮方法進(jìn)行柱層析AB — 8大孔樹脂的徑高比為1 : 10~30，單柱或雙柱串聯(lián)； 靜態(tài)吸附條件柱層析上樣量為l~15mL/min，操作溫度在30°C~50°C ，吸附pH 值2 6;動(dòng)態(tài)吸附條件洗脫液乙醇濃度為20~80%;洗脫流速為L(zhǎng)5 15mL/min; 減壓濃縮真空度為0.075 0.095Mpa，溫度為50~55°C ，濃縮至原體積的1/5~1/20。為制得篤斯越桔花青素凍干粉，對(duì)純化濃縮過程得到的篤斯越桔花青素純化 濃縮液，進(jìn)行凍干處理，制得篤斯越桔花青素凍干粉；所述的凍干處理，是經(jīng)-40 -6(TC凍干至水分含量為5。/。以下，包裝保藏。此外，所述的濃縮技術(shù)，也可采用超濾或減壓蒸餾的方法。本發(fā)明有益效果主要表現(xiàn)在①本發(fā)明設(shè)計(jì)的篤斯越桔花青素分離純化技術(shù)真正體現(xiàn)了"綠色、高效、低 成本"生產(chǎn)技術(shù)研究與開發(fā)，采用酸化乙醇和乙醇在篤斯越桔花青素浸提和純化洗脫，不但安全可靠，而且還可回收重復(fù)利用而大大降低生產(chǎn)成本；微波、超聲 波輔助低溫浸提工藝及冷凍干燥技術(shù)相結(jié)合，保證了篤斯越桔花青素的抗氧化等 生物活性和理想分離效果，獲得抗氧化活性高于Vc7.8倍的篤斯越桔花青素產(chǎn)叩o② 本發(fā)明制備篤斯越桔花青素凍千粉，用紫外分光光度法檢測(cè)花青素含量在 29.8~40%，高效液相色譜法檢測(cè)錦葵色素含量占花青素的4.68~5.48%;抗氧化 活性是Vc的7.8~15倍。而報(bào)道，含量高25%的花色素提取物已經(jīng)被收入法國(guó)藥 典；意大利、法國(guó)、西班牙、韓國(guó)、美國(guó)和新西蘭已將其用于夜盲癥、毛細(xì)血管 硬化、腦血管障礙、胃潰瘍的治療；因此本發(fā)明成果將有利于增強(qiáng)視力，治療眼 病，以及開發(fā)降低心血管疾病患病幾率和為開發(fā)應(yīng)用于心血管疾病的藥物奠定基 礎(chǔ)。③ 本發(fā)明社會(huì)意義和經(jīng)濟(jì)意義大。本發(fā)明可以為廣泛利用長(zhǎng)白山篤斯越桔的 豐富資源，大力開發(fā)和研制系列篤斯越桔保健食品，填補(bǔ)本領(lǐng)域研究的空白，為 早日實(shí)現(xiàn)篤斯越桔保健食品產(chǎn)業(yè)化發(fā)展奠定基礎(chǔ)，推動(dòng)長(zhǎng)白山篤斯越桔的綜合開 發(fā)進(jìn)程，以實(shí)現(xiàn)篤斯越桔層層增值，真正體現(xiàn)出篤斯越桔深加工蘊(yùn)涵的巨大經(jīng)濟(jì) 效益和社會(huì)效益。(D在本發(fā)明的分離純化方法中，經(jīng)浸提過程或濃縮過程得到的浸提液或粗提 濃縮液添加或不添加其他組分可以制成口服液、沖劑、膠囊、片劑(咀嚼片或含 片)食用。(D本發(fā)明設(shè)計(jì)的工藝路線簡(jiǎn)捷，設(shè)備投入少，工業(yè)化推廣可行。 ⑥篤斯越桔花青素產(chǎn)品添加或不添加其他組分制作成抗氧化作用顯著的食 品色素廣泛應(yīng)用于飲料/冷飲制品、焙烤制品、酒類制品等各領(lǐng)域中。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1:將新鮮的篤斯越桔果實(shí)剔除葉片、枝干等雜質(zhì)，進(jìn)行速凍處理得冷凍的篤斯 越桔果實(shí)。取出在-18'C環(huán)境下保藏備用的篤斯越桔果實(shí)，進(jìn)行研磨至均勻槳液 后，采用超聲波、微波輔助冷浸提法、冷凍干燥技術(shù)相結(jié)合方法制備篤斯越桔花 青素。浸提工藝條件①酸化乙醇溶液乙醇濃度100%，乙醇與鹽酸體積比95 :5;②浸提料液按重量比篤斯越桔果實(shí)酸化乙醇=9 : 150;③浸提溫度10。C， 浸提次數(shù)4次，浸提總時(shí)間為8h;④浸提前先超聲處理，超聲功率200W，超聲時(shí)間30min;⑤浸提前先微波處理，微波功率在400 W，微波時(shí)間10min。⑥浸 提后減壓濃縮真空度可以為0.075 0.095Mpa，溫度可以為60°C，濃縮至無(wú)乙 醇味，花青素含量為4.0mg/mL。純化工藝條件①單柱柱層析，AB — 8大孔樹脂的徑高比為1: 30;②靜態(tài)吸附條件柱層析上樣量為15mL/min;操作溫度在5(TC，吸附pH值2;③動(dòng) 態(tài)吸附條件洗脫液乙醇濃度為80%;洗脫流速為1.5mL/min;④減壓濃縮真 空度可以為0.075 0.095Mpa，溫度可以為55。C以下，濃縮至無(wú)乙醇味，且為原 體積的1/20。凍干工藝條件將篤斯越桔花青素純化濃縮液進(jìn)行真空冷凍干燥，經(jīng)-4(TC 凍干至水分含量為5%以下，包裝保藏。 實(shí)施例2:將新鮮的篤斯越桔果實(shí)剔除葉片、枝干等雜質(zhì)，進(jìn)行速凍處理得冷凍的篤斯 越桔果實(shí)。取出在-35'C環(huán)境下保藏備用的篤斯越桔果實(shí)放入真空冷凍干燥機(jī)中 凍干至水分含量為5%以下，再粉碎至顆粒度為100目，制得篤斯越桔果實(shí)凍干 粉，采用超聲波、微波輔助冷浸提法、冷凍干燥技術(shù)相結(jié)合方法制備篤斯越桔花 青素。浸提工藝條件①酸化乙醇溶液乙醇濃度50%，乙醇與鹽酸體積比70: 30;②浸提料液按重量比篤斯越桔果實(shí)凍干粉酸化乙醇=1 : 25;③浸提溫度40°C，浸提次數(shù)1次，浸提時(shí)間為lh;④浸提前先超聲處理，超聲功率600W， 超聲時(shí)間5min;⑤浸提前先微波處理，微波功率在600W,微波時(shí)間5min。
浸提后減壓濃縮真空度可以為0.075 0.095Mpa，溫度可以為45°C，濃縮至無(wú) 乙醇味，花青素含量為1.5mg/mL。純化工藝條件①雙柱串聯(lián)柱層析AB — 8大孔樹脂的徑高比為1 : 10;② 靜態(tài)吸附條件柱層析上樣量為lmL/min;操作溫度在3(TC，吸附pH值6; ◎ 動(dòng)態(tài)吸附條件洗脫液乙醇濃度為20%;洗脫流速為15mL/min;④減壓濃縮 真空度可以為0.075 0.095Mpa，溫度可以為50。C以下，濃縮至無(wú)乙醇味，且為 原體積的1/5。凍干工藝條件將篤斯越桔花青素純化濃縮液進(jìn)行真空冷凍干燥，經(jīng)-6(TC 凍干至水分含量為5%以下，包裝保藏。 本實(shí)施例可獲得較高的純度。 實(shí)施例3:將新鮮的篤斯越桔果實(shí)剔除葉片、枝干等雜質(zhì)，進(jìn)行速凍處理得冷凍的篤斯 越桔果實(shí)。取出在-18'C環(huán)境下保藏備用的篤斯越桔果實(shí)放入真空冷凍干燥機(jī)中 凍干至水分含量為5%以下，再粉碎至顆粒度為80目，制得篤斯越桔果實(shí)凍干粉，采用超聲波、微波輔助冷浸提法、冷凍干燥技術(shù)相結(jié)合方法制備篤斯越桔花青素。浸提工藝條件①酸化乙醇溶液乙醇濃度80%，乙醇與鹽酸體積比85: 15;②浸提料液按重量比篤斯越桔果實(shí)凍干粉酸化乙醇=1 : 100;③浸提溫 度3(TC，浸提次數(shù)2次，浸提總時(shí)間為4h;④浸提前超聲處理，超聲功率500W， 超聲時(shí)間20min; (D浸提前微波處理，微波功率在400W，微波時(shí)間20min。 ◎ 浸提后減壓濃縮真空度可以為0.075 0.095Mpa，溫度可以為50°C，濃縮至無(wú) 乙醇味，花青素含量為3.0mg/mL。純化工藝條件①單柱柱層析AB — 8大孔樹脂的徑高比為1 : 20;②靜態(tài) 吸附條件柱層析上樣量為5mL/min;操作溫度在30。C，吸附pH值4;③動(dòng)態(tài) 吸附條件洗脫液乙醇濃度為60%;洗脫流速為10mL/min;④減壓濃縮真空 度可以為0.075 0.095Mpa，溫度可以為55'C以下，濃縮至無(wú)乙醇味，且為原體 積的1/10。凍干工藝條件將篤斯越桔花青素純化濃縮液進(jìn)行真空冷凍干燥，經(jīng)-50°C 凍干至水分含量為5%以下，包裝保藏。 實(shí)施例4:將新鮮的篤斯越桔果實(shí)剔除葉片、枝干等雜質(zhì)，進(jìn)行速凍處理得冷凍的篤斯 越桔果實(shí)。取出在-35'C環(huán)境下保藏備用的篤斯越桔果實(shí)放入真空冷凍干燥機(jī)中 凍干至水分含量為5%以下，再粉碎至顆粒度為70目，制得篤斯越桔果實(shí)凍干粉， 采用超聲波、微波輔助冷浸提法、冷凍干燥技術(shù)相結(jié)合方法制備篤斯越桔花青素。浸提工藝條件①酸化乙醇溶液乙醇濃度90%，乙醇與鹽酸體積比80: 20;②浸提料液按重量比篤斯越桔果實(shí)凍干粉酸化乙醇=1 : 150;③浸提溫 度30。C，浸提次數(shù)3次，浸提總時(shí)間為5h;④浸提前先微波處理，微波功率在400 W，微波時(shí)間10min;⑤浸提前先超聲處理，超聲功率300W，超聲時(shí)間20min; ⑥減壓濃縮真空度可以為0.075 0.095Mpa，溫度可以為50°C，濃縮至無(wú)乙醇 味，花青素含量為2.0mg/mL。純化工藝條件①柱層析AB — 8大孔樹脂的徑高比為1 : 30;雙柱串聯(lián)；②靜態(tài)吸附條件柱層析上樣量為5mL/min;操作溫度在5(TC,吸附pH值6; (D動(dòng)態(tài)吸附條件洗脫液乙醇濃度為60%;洗脫流速為4.5mL/min;④浸提后減 壓濃縮真空度可以為0.075 0.095Mpa，溫度可以為55。C以下，濃縮至無(wú)乙醇 味，且為原體積的1/15。凍干工藝條件將篤斯越桔花青素純化濃縮液進(jìn)行真空冷凍干燥，經(jīng)-6(TC 凍干至水分含量為5%以下，包裝保藏。本實(shí)施例獲得較高的純度。實(shí)施例5:將新鮮的篤斯越桔果實(shí)剔除葉片、枝干等雜質(zhì)，進(jìn)行速凍處理得冷凍的篤斯 越桔果實(shí)，取出在-18t:環(huán)境下保藏備用的篤斯越桔果實(shí)，進(jìn)行研磨至均勻漿液 后，釆用超聲波、微波輔助冷浸提法、冷凍干燥技術(shù)相結(jié)合方法制備篤斯越桔花 青素。浸提工藝條件①酸化乙醇溶液乙醇濃度100%,乙醇與鹽酸體積比95 : 5;②浸提料液按重量比篤斯越桔果實(shí)酸化乙醇=9 : 150;③浸提溫度10。C， 浸提次數(shù)4次，浸提總時(shí)間為8h;④浸提前先超聲處理，超聲功率200W，超聲 時(shí)間30min;⑤浸提前先微波處理，微波功率在400 W，微波時(shí)間10min。⑥浸 提后減壓濃縮真空度可以為0.075 0.095Mpa，溫度可以為60°C，濃縮至無(wú)乙 醇味，花青素含量為4.0mg/mL。純化工藝條件和凍干工藝條件同實(shí)施例2。本實(shí)施例獲得較高的純度。實(shí)施例6:將新鮮的篤斯越桔果實(shí)剔除葉片、枝干等雜質(zhì)，進(jìn)行速凍處理得冷凍的篤斯 越桔果實(shí)，取出在-18t:環(huán)境下保藏備用的篤斯越桔果實(shí)，進(jìn)行研磨至均勻漿液 后，采用超聲波、微波輔助冷浸提法、冷凍干燥技術(shù)相結(jié)合方法制備篤斯越桔花 青素。浸提工藝條件①酸化乙醇溶液乙醇濃度100%，乙醇與鹽酸體積比95 : 5;②浸提料液按重量比篤斯越桔果實(shí)酸化乙醇=9 : 80;③浸提溫度10。C， 浸提次數(shù)4次，浸提總時(shí)間為8h;④浸提前先超聲處理，超聲功率200W，超聲時(shí)間30min;⑤浸提前先微波處理，微波功率在400 W，微波時(shí)間10min。⑥浸 提后減壓濃縮真空度可以為0.075 0.095Mpa，溫度可以為60°C，濃縮至無(wú)乙 醇味，花青素含量為4.0mg/mL。純化工藝條件和凍干工藝條件同實(shí)施例4。實(shí)施例7:將新鮮的篤斯越桔果實(shí)剔除葉片、枝干等雜質(zhì)，進(jìn)行速凍處理得冷凍的篤斯 越桔果實(shí)，取出在-18'C環(huán)境下保藏備用的篤斯越桔果實(shí)，進(jìn)行研磨至均勻漿液 后，采用超聲波、微波輔助冷浸提法、冷凍干燥技術(shù)相結(jié)合方法制備篤斯越桔花 青素。浸提工藝條件①酸化乙醇溶液乙醇濃度100%，乙醇與鹽酸體積比95 : 5;②浸提料液按重量比篤斯越桔果實(shí)酸化乙醇=9 : 100;③浸提溫度10。C， 浸提次數(shù)4次，浸提總時(shí)間為8h;④超聲功率200W，超聲時(shí)間30min;⑤微波 功率在400W，微波時(shí)間10min。⑥減壓濃縮真空度可以為0.075 0.095Mpa， 溫度可以為60'C，濃縮至無(wú)乙醇味，花青素含量為4.0mg/mL。純化工藝條件和凍干工藝條件同實(shí)施例3。實(shí)施例8:將新鮮的篤斯越桔果實(shí)剔除葉片、枝干等雜質(zhì)，進(jìn)行速凍處理得冷凍的篤斯 越桔果實(shí)，取出在-35'C環(huán)境下保藏備用的篤斯越桔果實(shí)放入真空冷凍干燥機(jī)中 凍干至水分含量為5%以下，再粉碎至顆粒度為100目，制得篤斯越桔果實(shí)凍干 粉，采用超聲波、微波輔助冷浸提法、冷凍干燥技術(shù)相結(jié)合方法制備篤斯越桔花 青素。浸提工藝條件①酸化乙醇溶液乙醇濃度50%，乙醇與鹽酸體積比70: 30;②浸提料液按重量比篤斯越桔果實(shí)凍干粉酸化乙醇=1 : 25;③浸提溫度40°C，浸提次數(shù)1次，浸提時(shí)間為lh;④超聲功率600W，超聲時(shí)間5min; 微波功率在600 W，微波時(shí)間5min。⑥減壓濃縮真空度可以為0.075 0.095Mpa， 溫度可以為45""C，濃縮至無(wú)乙醇味，花青素含量為1.5mg/mL。純化工藝條件和凍干工藝條件同實(shí)施例1。 實(shí)施例9:將新鮮的篤斯越桔果實(shí)剔除葉片、枝干等雜質(zhì)，進(jìn)行速凍處理得冷凍的篤斯 越桔果實(shí)，取出在-35'C環(huán)境下保藏備用的篤斯越桔果實(shí)放入真空冷凍干燥機(jī)中 凍干至水分含量為5%以下，再粉碎至顆粒度為100目，制得篤斯越桔果實(shí)凍干粉，釆用超聲波、微波輔助冷浸提法、冷凍干燥技術(shù)相結(jié)合方法制備篤斯越桔花 青素。浸提工藝條件①酸化乙醇溶液乙醇濃度50%,乙醇與鹽酸體積比70: 30;②浸提料液按重量比篤斯越桔果實(shí)凍干粉酸化乙醇=1 : 25;③浸提溫度40°C，浸提次數(shù)1次，浸提時(shí)間為lh;④超聲功率600W，超聲時(shí)間5min;⑤ 微波功率在600 W，微波時(shí)間5min。⑥減壓濃縮真空度可以為0.075 0.095Mpa， 溫度可以為45'C，濃縮至無(wú)乙醇味，花青素含量為1.5mg/mL。純化工藝條件和凍干工藝條件同實(shí)施例4。實(shí)施例10:將新鮮的篤斯越桔果實(shí)剔除葉片、枝干等雜質(zhì)，進(jìn)行速凍處理得冷凍的篤斯 越桔果實(shí)，取出在-35'C環(huán)境下保藏備用的篤斯越桔果實(shí)放入真空冷凍干燥機(jī)中 凍干至水分含量為5%以下，再粉碎至顆粒度為70目，制得篤斯越桔果實(shí)凍干粉， 采用超聲波、微波輔助冷浸提法、冷凍干燥技術(shù)相結(jié)合方法制備篤斯越桔花青素。浸提工藝條件①酸化乙醇溶液乙醇濃度90%，乙醇與鹽酸體積比80: 20;②浸提料液按重量比篤斯越桔果實(shí)凍干粉酸化乙醇=1 : 150;③浸提溫度30°C，浸提次數(shù)3次，浸提總時(shí)間為5h;④超聲功率300W，超聲時(shí)間20min; ⑤微波功率在400 W，微波時(shí)間10min。⑥減壓濃縮真空度可以為 0.075 0.095Mpa，溫度可以為50。C，濃縮至無(wú)乙醇味，花青素含量為2.0mg/mL。 純化工藝條件和凍干工藝條件同實(shí)施例1。
權(quán)利要求
1. 一種篤斯越桔花青素，其特征在于，是采用超聲波、微波輔助冷浸提法分離后，采用AB-8大孔樹脂靜態(tài)、動(dòng)態(tài)相結(jié)合的吸附純化法獲得的。
2、 按照權(quán)利要求1所述的篤斯越桔花青素，其特征在于，凍干粉狀的篤斯 越桔花青素組分用紫外分光光度法檢測(cè)花青素含量在29.8~40%，高效液相色譜 法檢測(cè)錦葵色素含量占花青素的4.68~5.48%;抗氧化活性是Vc的7.8~15倍。
3、 一種權(quán)利要求1的篤斯越桔花青素的分離純化方法，包括原料預(yù)處理、 浸提濃縮、純化濃縮的過程；其特征在于(1) 所述的原料預(yù)處理過程，是將新鮮的篤斯越桔果實(shí)進(jìn)行速凍處理得冷 凍的篤斯越桔果實(shí)；或者在-18'C -35'C環(huán)境下保藏備用；或者凍干至水分含量 為5%以下，再粉碎至顆粒度為60-120目，制得篤斯越桔果實(shí)凍干粉，為下步 浸提提供原料；(2) 所述的浸提濃縮過程，是將篤斯越桔冷凍果實(shí)或凍干粉在酸化乙醇溶 液中采用超聲波、微波輔助冷浸提法分離獲得篤斯越桔花青素浸提液，再經(jīng)減壓 濃縮處理至花青素含量為1.5 4.0mg/mL;其中① 酸化乙醇溶液乙醇與鹽酸體積比95 : 5~70 : 30，乙醇濃度50%~100%;② 浸提料液按重量比篤斯越桔果實(shí)凍干粉酸化乙醇=1 : 25 1 : 150;或 者冷凍的篤斯越桔果實(shí)研磨至均勻槳液后投料，按重量比篤斯越桔果實(shí)漿料酸化乙醇=9 : 25 9 : 150;③ 超聲功率200~600W，超聲時(shí)間5 30min;④ 微波功率在400~900W，微波時(shí)間4-10min;⑤ 浸提溫度1(TC 4(TC，浸提次數(shù)1 4次，浸提總時(shí)間為l 8h; (D減壓濃縮真空度為0.075 0.095Mpa，溫度為45°C~60°C，濃縮至花青素含量為1.5~4.0mg/mL;(3) 所述的純化濃縮過程， 是將篤斯越桔花青素浸提液濃縮液，采用柱層析AB-8大孔樹脂靜態(tài)、動(dòng)態(tài)相結(jié)合吸附純化以獲得篤斯越桔花青素洗脫液，再經(jīng)減壓濃縮處理至原體積的 1/5-1/20。
4、 按照權(quán)利要求3所述的篤斯越桔花青素的分離純化方法，其特征在于， 所述的純化濃縮過程，柱層析AB—8大孔樹脂的徑高比為1 : 10~30，單柱或雙柱串聯(lián)；靜態(tài)吸附條件柱層析上樣量為l~15mL/min，操作溫度在30'C 5(TC，吸附pH值2 6;動(dòng)態(tài)吸附條件洗脫液乙醇濃度為20~80%;洗脫流速為1.5~15mL/min;減壓濃縮真空度為0.075 0.095Mpa，溫度為50 55。C，濃縮至 原體積的1/5~1/20。
5、按照權(quán)利要求3所述的篤斯越桔花青素的分離純化方法，其特征在于，對(duì)純化濃縮過程得到的篤斯越桔花青素純化濃縮液，進(jìn)行凍干處理，制得篤斯越 桔花青素凍干粉；所述的凍干處理，是經(jīng)-40 -6(TC凍干至水分含量為5%以下。
全文摘要
本發(fā)明的篤斯越桔花青素及其分離純化方法屬于活性成分提取純化和功能食品開發(fā)的技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的篤斯越桔花青素含量在29.8～40％，其中錦葵色素含量占花青素的4.68～5.48％；抗氧化活性是Vc的7.8～15倍。制備方法包括原料預(yù)處理、浸提濃縮、純化濃縮、凍干4個(gè)過程。采用超聲波、微波輔助冷浸提法分離，AB-8大孔樹脂靜態(tài)-動(dòng)態(tài)相結(jié)合的吸附純化法。本發(fā)明提供了一種“綠色、高效、低成本”的篤斯越桔花青素分離純化技術(shù)，保證了產(chǎn)品抗氧化等生物活性和理想分離效果，為廣泛利用篤斯越桔的豐富資源，推動(dòng)系列篤斯越桔保健食品的產(chǎn)業(yè)化開發(fā)奠定了基礎(chǔ)，體現(xiàn)出篤斯越桔深加工蘊(yùn)涵的巨大經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。
文檔編號(hào)C07D311/00GK101265252SQ200810050659
公開日2008年9月17日 申請(qǐng)日期2008年4月28日 優(yōu)先權(quán)日2008年4月28日
發(fā)明者劉靜波, 林松毅 申請(qǐng)人:吉林大學(xué)