專(zhuān)利名稱：一種提取與富集雪蓮總黃酮的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種提取與富集雪蓮總黃酮的方法背景技術(shù)傳統(tǒng)對(duì)雪蓮有效成分的提取都是直接用溶劑提取，溶劑提取存在溶劑用量大，需要多次長(zhǎng)時(shí)間提取，由于提取條件有限，不能得到易揮發(fā)，易熱分解成分，深層有效成分浸出困難，對(duì)藥材利用率差。
本發(fā)明提供的對(duì)雪蓮黃酮的提取方法，先對(duì)雪蓮粉碎后進(jìn)行超臨界CO2萃取，得到其中的易揮發(fā)，以及熱不穩(wěn)成分，然后再用常規(guī)溶劑提取。經(jīng)過(guò)超臨界萃取后的雪蓮黃酮成分更容易從植物體內(nèi)釋放出來(lái)，其原理是超臨界萃取后的減壓放氣過(guò)程存在著氣爆破壁作用，大大降低了第二步提取時(shí)的傳質(zhì)阻力；低極性揮發(fā)性組分的脫除有利于第二步乙醇水溶液與植物組分的相互滲透過(guò)程。經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)證明，經(jīng)超臨界處理過(guò)的雪蓮?fù)瑯訔l件下一次對(duì)雪蓮黃酮的提取率比雪蓮直接溶劑萃取提取量高25％-120％(總黃酮的檢測(cè))。
以往超臨界CO2在植物有效成分萃取方面的應(yīng)用只限于直接萃取低極性成分，而事實(shí)上由于有效成分極性的差異，和植物材質(zhì)的不同，即使同樣的成分在不同的植物體內(nèi)萃取出的難易程度也有很大的差異，比如雪蓮黃酮直接超臨界萃取，或夾帶劑情況下的萃取效果都不理想，本發(fā)明2步提取能高效的提取出雪蓮黃酮成分，擴(kuò)寬了超臨界技術(shù)在藥用植物化學(xué)中的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及一種提取與富集雪蓮總黃酮的方法，該方法先對(duì)雪蓮進(jìn)行超臨界CO2萃取，得到其中的易揮發(fā)以及熱不穩(wěn)成分，然后再用常規(guī)溶劑提取。經(jīng)過(guò)超臨界萃取后的雪蓮黃酮成分更容易從植物體內(nèi)釋放出來(lái)。原理是超臨界萃取后的減壓放氣過(guò)程存在著氣爆破壁作用，大大降低了第二步提取時(shí)的傳質(zhì)阻力；低極性揮發(fā)性組分的脫除有利于第二步乙醇水溶液與植物組分的相互滲透過(guò)程。經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)證明，經(jīng)超臨界處理過(guò)的雪蓮?fù)瑯訔l件下一次對(duì)雪蓮黃酮的提取率比雪蓮直接溶劑萃取提取量高25％-120％(總黃酮的檢測(cè))。
本發(fā)明所述的一種提取與富集雪蓮總黃酮的方法，按下列步驟進(jìn)行a、將雪蓮干燥并粉碎至40-200目后置入超臨界萃取釜中，用超臨界CO2或CO2夾帶乙醇進(jìn)行預(yù)處理，動(dòng)態(tài)萃取，控制萃取釜壓力12-40MPa，萃取溫度30-65℃，分離壓力4-12MPa，分離溫度20-60℃，時(shí)間為30-180分鐘后停止；b、減壓卸料后萃取釜內(nèi)余渣用常規(guī)溶劑法提取，經(jīng)1-2次乙醇水溶液提取，提取溫度為25-100℃，提取時(shí)間為30-150min，即制得雪蓮黃酮提取溶液；c、將得到的雪蓮黃酮提取液減壓濃縮至乙醇濃度為0％-15％體積比，進(jìn)行大孔吸附樹(shù)脂柱吸附；d、將吸附黃酮后的樹(shù)脂依次用0％-95％乙醇洗脫，收集30％-50％洗脫液，濃縮后即得黃酮固含量為40-50％的雪蓮提取物。
步驟a中超臨界流體是單獨(dú)CO2或CO2挾帶70％-95％濃度的乙醇。
步驟b中提取所用的溶劑為50％-95％質(zhì)量百分比濃度的乙醇水溶液。
步驟b中乙醇水溶液的用量為雪蓮余渣重量的7-30倍質(zhì)量比，每次提取時(shí)間為1-6小時(shí)。
步驟b中雪蓮余渣用乙醇水溶液提取1-2次，合并提取液濃縮到乙醇濃度為0％-15％體積比，供大孔吸附樹(shù)脂柱吸附。
步驟c中所用的大孔吸附樹(shù)脂為HPD700或HPD400或HPD500。
步驟c中所述大孔樹(shù)脂依次以2-8BV/h的流速用0-95％的乙醇溶液洗脫。
步驟d中吸附后的大孔吸附樹(shù)脂先用濃度為0％-15％乙醇水液梯度洗脫，再用濃度為30％-50％乙醇洗脫，收集30％-50％濃度的乙醇洗脫液，濃縮后得40％-50％雪蓮總黃酮提取物。
本發(fā)明所述的一種提取與富集雪蓮總黃酮的方法，該方法與現(xiàn)有技術(shù)的比較藥材以及預(yù)處理新疆雪蓮(Saussures involucrate)又名雪荷花，為菊科，風(fēng)毛菊屬多年生草本植物。漿干燥的雪蓮全草粉碎至40-200目，然后裝入超臨界二氧化碳萃取裝置進(jìn)行萃取，萃取條件為20MP，45℃，2.5h。萃取后的余渣用作下一步溶劑法提取總黃酮。
本發(fā)明提取工藝并與常規(guī)提取法比較乙醇提取條件的優(yōu)化與超臨界二氧化碳萃取前后樣品提取比較以提取的總黃酮量為指標(biāo)，正交實(shí)驗(yàn)考察萃取液乙醇濃度(50％，70％，95％)、萃取溫度(45，65，95℃)、液料比(10，15，20ml/g)、萃取時(shí)間(1.5，2.5，4.0h)四個(gè)因素的影響。
表1兩種工藝的正交條件下測(cè)量結(jié)果

根據(jù)正交結(jié)果方法2中各個(gè)條件下都比方法1提取率要高出10.07％-128％，在提取溫度為65℃時(shí)相對(duì)提取率差別最大，方法1和2的最佳條件均為95℃，4小時(shí)，20倍液料比，70％乙醇。影響因素大小依次為提取溫度，乙醇濃度，液料比，提取時(shí)間。耦合提取法(方法2)在65℃，1.5小時(shí)的提取率(2.91％)與常規(guī)法(方法1)95℃，2.5小時(shí)提取率(2.98％)相當(dāng)。
優(yōu)化后條件與文獻(xiàn)其他方法對(duì)比用正交優(yōu)化后的條件分別按照方法1，方法2(本發(fā)明方法)，以及方法3(直接超聲輔助提取法，50倍量乙醇液超聲提取30min，然后加40倍乙醇液繼續(xù)超聲45min)萃取雪蓮，其后分別按照1.4測(cè)定提取液中的總黃酮，結(jié)果見(jiàn)表2表2優(yōu)化后條件與超聲提取比較結(jié)果 從表知以總黃酮提取率為指標(biāo)，超臨界耦合常規(guī)溶劑法提取雪蓮總黃酮比常規(guī)溶劑法提取率高25.90％，比超聲輔助溶劑法條件高35.21％，并減少有機(jī)溶劑用量。
不同方法的HPLC圖譜及結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)品的對(duì)照指認(rèn)對(duì)常規(guī)溶劑法和超臨界耦合法最佳條件下的提取液做HPLC分析，結(jié)果見(jiàn)圖，從指紋圖譜可知，兩種方法提取物在試驗(yàn)條件下組分成分的差異很小。結(jié)合正交分析結(jié)果，超臨界耦合法和傳統(tǒng)提取法提取液中其主要成分只存在含量的差異。
雪蓮總黃酮的大孔樹(shù)脂法富集，純化樹(shù)脂靜態(tài)吸附，解析量的考察以及樹(shù)脂的優(yōu)選，根據(jù)文獻(xiàn)以及樹(shù)脂物性參數(shù)，選擇河北滄州寶思公司的HPD系列5種樹(shù)脂(HPD100A，HPD400，HPD500，HPD600，HPD700)考察靜態(tài)吸附量。分別量取各種樹(shù)脂10ml，用已知黃酮濃度為5.58mg/ml的雪蓮黃酮水溶液50ml，裝入錐形瓶后放置在30℃度恒溫振蕩箱內(nèi)充分吸附24h，過(guò)濾，濾液定容250ml容量瓶，測(cè)吸光度，換算為黃酮濃度。
充分吸附后的樹(shù)脂用100ml濃度為95％的乙醇洗脫30℃恒溫振蕩箱里充分解吸附24h。過(guò)濾，稱重，濾液定容250ml容量瓶測(cè)吸光度，換算為黃酮濃度。濃縮后測(cè)固重，數(shù)據(jù)見(jiàn)表表3幾種樹(shù)脂對(duì)雪蓮總黃酮的靜態(tài)吸附，靜態(tài)解析參數(shù)

綜合樹(shù)脂克吸附量，洗脫物黃酮百分含量，黃酮回收率結(jié)果，選擇HPD700為最優(yōu)，較好的還有HPD400，HPD500。
HPD700大孔樹(shù)脂的動(dòng)態(tài)吸附，動(dòng)態(tài)解析行為考察取處理后的HPD700樹(shù)脂10.0g(30.67ml)裝柱(徑高比1.25)，取黃酮含量為5.58mg/ml的水溶液上樣，固定柱子流速為2BV/h(約1ml/min)，透過(guò)液每15ml一份，測(cè)試其固重；黃酮固含量。數(shù)據(jù)見(jiàn)表4表4 HPD700大孔樹(shù)脂對(duì)雪蓮總黃酮的動(dòng)態(tài)飽和吸附

根據(jù)表4可知HPD700樹(shù)脂動(dòng)態(tài)飽和吸附量約為7.3BV(15×7/30.67)，黃酮吸附量為19.1mg/ml，與動(dòng)態(tài)飽和吸附量相當(dāng)。
吸附后的樹(shù)脂乙醇梯度洗脫濃度考察用不同濃度的乙醇溶液各100ml，流速不變(2BV/h)梯度洗脫表5 HPD700大孔樹(shù)脂動(dòng)態(tài)梯度解析參數(shù)

單一洗脫樹(shù)脂5份2.5ml(0.8149g)，分別飽和上樣后，先用50ml水洗脫，然后分別用不同濃度的乙醇50ml洗脫，檢測(cè)洗脫物重量和黃酮含量，結(jié)果見(jiàn)表6表6 HPD700大孔樹(shù)脂醇解析濃度參數(shù)考察

本發(fā)明所述的一種提取與富集雪蓮總黃酮的方法，該方法具有(1)、超臨界CO2處理?xiàng)l件較溫和，可以使雪蓮中易揮發(fā)易分解成分無(wú)損失，實(shí)現(xiàn)對(duì)植物有效成分的初級(jí)分離，提高雪蓮黃酮的提取率，能得到揮發(fā)油成分，原料利用率高；(2)、擴(kuò)寬了超臨界技術(shù)在植物有效成分提取中的應(yīng)用，操作簡(jiǎn)單，安全不需要?dú)獗扪b置，全過(guò)程只用到乙醇溶劑，且用量比常規(guī)方法降低；(3)、此耦合法提取雪蓮總黃酮比單獨(dú)超臨界，或單獨(dú)溶劑提取法都要高，總黃酮提取率比常規(guī)方法高25％以上，此法得到的浸膏便于富集濃縮黃酮，經(jīng)過(guò)大孔樹(shù)脂富集后，可以得到黃酮固含量為45％的雪蓮提取物等特點(diǎn)。


圖1為本發(fā)明優(yōu)化后常規(guī)法提取液(方法1)的HPLC圖譜圖2為本發(fā)明優(yōu)化后耦合法(方法2)的HPLC圖譜
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1取干燥后的雪蓮全草100g粉碎至40目后裝入超臨界萃取釜，啟動(dòng)超臨界二氧化碳泵，用超臨界CO2進(jìn)行預(yù)處理，設(shè)定萃取溫度30℃，先用少量的CO2排盡系統(tǒng)內(nèi)殘留空氣，然后加壓萃取釜為12MP，分離釜溫度30℃，調(diào)節(jié)分離釜壓力為4MP，動(dòng)態(tài)萃取30分鐘；減壓卸料后萃取釜內(nèi)余渣用常規(guī)溶劑法提取，將余渣用7倍量的50％的乙醇溶液在30℃提取1次，每次1小時(shí)，過(guò)濾后合并濾液，濾液濃縮后得到浸膏含黃酮3.15g；大孔吸附樹(shù)脂的預(yù)處理HPD型大孔吸附樹(shù)脂在使用以前，用10％的氯化鈉溶液浸泡24小時(shí)，然后用2倍量的氯化鈉溶液沖洗，并用5倍量去離子水沖洗，以便除去痕量的防腐劑和殘留的單體化合物；樹(shù)脂裝柱后，用乙醇沖洗，洗去殘留的少量有機(jī)物和致孔劑，再用去離子水沖洗；然后用2％氫氧化鈉溶液沖洗，除去樹(shù)脂中堿溶性雜質(zhì)，用去離子水沖洗；再用1M的鹽酸溶液沖洗，除去酸溶性雜質(zhì)，用去離子水沖洗至近中性；將得到雪蓮乙醇提取物5g，分散在100ml熱水中，以1BV/h的流速通過(guò)100ml處理好的HPD400大孔樹(shù)脂，然后依次用200ml水，0％，10％，40％乙醇水溶液沖洗柱子，監(jiān)測(cè)透過(guò)液黃酮含量，黃酮濃度大于0.01mg/ml停止上樣，收集40％濃度的乙醇洗脫液，合并濃縮即得黃酮固含量為44.7％的雪蓮提取物。
實(shí)施例2取干燥后的雪蓮全草100g粉碎至80目后裝入超臨界萃取釜，啟動(dòng)超臨界二氧化碳泵，用超臨界CO2夾代乙醇進(jìn)行預(yù)處理，設(shè)定萃取溫度40℃，先用少量的CO2排盡系統(tǒng)內(nèi)殘留空氣，然后加壓萃取釜為20MP，分離釜溫度40℃，調(diào)節(jié)分離釜壓力為6MP，動(dòng)態(tài)萃取60分鐘，
減壓卸料后萃取釜內(nèi)得到超臨界二氧化碳雪蓮萃取物2.35g，超臨界萃取后的余渣用10倍量的70％的乙醇溶液在60℃提取2次，每次2小時(shí)，過(guò)濾后合并濾液，濾液濃縮后得到浸膏含黃酮2.35g；而同樣批次的100g雪蓮粉碎后直接用用7倍量95％的乙醇在65℃提取6小時(shí)，得到浸膏含黃酮只有1.35g；大孔吸附樹(shù)脂的預(yù)處理HPD型大孔吸附樹(shù)脂在使用以前，用10％的氯化鈉溶液浸泡24小時(shí)，然后用2倍量的氯化鈉溶液沖洗，并用5倍量去離子水沖洗，以便除去痕量的防腐劑和殘留的單體化合物；樹(shù)脂裝柱后，用乙醇沖洗，洗去殘留的少量有機(jī)物和致孔劑，再用去離子水沖洗；然后用2％氫氧化鈉溶液沖洗，除去樹(shù)脂中堿溶性雜質(zhì)，用去離子水沖洗；再用1M的鹽酸溶液沖洗，除去酸溶性雜質(zhì)，用去離子水沖洗至近中性；將得到雪蓮乙醇提取物5g，分散在100ml熱水中，以3BV/h的流速通過(guò)100ml處理好的HPD700大孔樹(shù)脂，然后依次用200ml水，0％，10％，40％乙醇水溶液沖洗柱子，監(jiān)測(cè)透過(guò)液黃酮含量，黃酮濃度大于0.01mg/ml停止上樣，收集40％濃度的乙醇洗脫液，合并濃縮即得黃酮固含量為44.7％的雪蓮提取物。
實(shí)施例3取干燥后的雪蓮全草100g粉碎至100目后裝入超臨界萃取釜，啟動(dòng)超臨界二氧化碳泵，用超臨界CO2進(jìn)行預(yù)處理，設(shè)定萃取溫度45℃，先用少量的CO2排盡系統(tǒng)內(nèi)殘留空氣，然后加壓萃取釜為25MP，分離釜溫度30℃，調(diào)節(jié)分離釜壓力為4MP，動(dòng)態(tài)萃取150分鐘；減壓卸料后，從分離釜得到超臨界二氧化碳雪蓮萃取物2.41g，超臨界萃取后的余渣用7倍量70％的乙醇在55℃提取2次，每次3小時(shí)，過(guò)濾后合并濾液，濾液濃縮后得到浸膏含黃酮2.49g；而同樣批次的100g雪蓮粉碎后直接用7倍量70％的乙醇在55℃提取3小時(shí)，得到浸膏含黃酮只有1.95g；大孔吸附樹(shù)脂的預(yù)處理HPD型大孔吸附樹(shù)脂在使用以前，用10％的氯化鈉溶液浸泡24小時(shí)，然后用2倍量的氯化鈉溶液沖洗，并用5倍量去離子水沖洗，以便除去痕量的防腐劑和殘留的單體化合物；樹(shù)脂裝柱后，用乙醇沖洗，洗去殘留的少量有機(jī)物和致孔劑，再用去離子水沖洗；然后用2％氫氧化鈉溶液沖洗，除去樹(shù)脂中堿溶性雜質(zhì)，用去離子水沖洗；再用1M的鹽酸溶液沖洗，除去酸溶性雜質(zhì)，用去離子水沖洗至近中性；將得到雪蓮乙醇提取物5g，分散在100ml熱水中，以4BV/h的流速通過(guò)100ml處理好的HPD500大孔樹(shù)脂，然后依次用200ml水，0％，10％，40％乙醇水溶液沖洗柱子，監(jiān)測(cè)透過(guò)液黃酮含量，黃酮濃度大于0.01mg/ml停止上樣，收集40％濃度的乙醇洗脫液，合并濃縮可得黃酮固含量為42.9％的雪蓮提取物。
實(shí)施例4取干燥后的雪蓮全草100g粉碎至120目后裝入超臨界萃取釜，啟動(dòng)超臨界二氧化碳泵，用超臨界CO2夾帶乙醇進(jìn)行預(yù)處理，設(shè)定萃取溫度50℃，先用少量的CO2排盡系統(tǒng)內(nèi)殘留空氣，然后加壓萃取釜為35MP，分離釜溫度50℃，調(diào)節(jié)分離釜壓力為8MP，動(dòng)態(tài)萃取120分鐘；減壓卸料后，從分離釜得到超臨界二氧化碳雪蓮萃取物2.51g，超臨界萃取后的余渣用15倍量80％的乙醇在75℃提取1次，時(shí)間2.5小時(shí)，過(guò)濾后合并濾液，濾液濃縮后得到浸膏含黃酮2.91g；而同樣批次的100g雪蓮粉碎后直接用15倍量70％的乙醇在65℃提取2.5小時(shí)，得到浸膏含黃酮只有1.48g大孔吸附樹(shù)脂的預(yù)處理HPD型大孔吸附樹(shù)脂在使用以前，用10％的氯化鈉溶液浸泡24小時(shí)，然后用2倍量的氯化鈉溶液沖洗，并用5倍量去離子水沖洗，以便除去痕量的防腐劑和殘留的單體化合物；樹(shù)脂裝柱后，用乙醇沖洗，洗去殘留的少量有機(jī)物和致孔劑，再用去離子水沖洗；然后用2％氫氧化鈉溶液沖洗，除去樹(shù)脂中堿溶性雜質(zhì)，用去離子水沖洗；再用1M的鹽酸溶液沖洗，除去酸溶性雜質(zhì)，用去離子水沖洗至近中性；將得到雪蓮乙醇提取物5g，分散在100ml熱水中，以1～5BV/h的流速通過(guò)100ml處理好的HPD400大孔樹(shù)脂，然后依次用200ml水，0％，10％，40％乙醇水溶液沖洗柱子，監(jiān)測(cè)透過(guò)液黃酮含量，黃酮濃度大于0.01mg/ml停止上樣，收集40％濃度的乙醇洗脫液，合并濃縮即得黃酮固含量為44.7％的雪蓮提取物。
實(shí)施例5取干燥后的雪蓮全草100g粉碎至150目后裝入超臨界萃取釜，啟動(dòng)超臨界二氧化碳泵，用95％乙醇為夾帶劑進(jìn)行預(yù)處理，設(shè)定萃取溫度60℃，先用少量的CO2排盡系統(tǒng)內(nèi)殘留空氣，然后加壓萃取釜為35MP，分離釜溫度50℃，調(diào)節(jié)分離釜壓力為10MP，動(dòng)態(tài)萃取150分鐘；減壓卸料后，從分離釜得到超臨界二氧化碳雪蓮萃取物3.52g，超臨界萃取后的余渣用20倍量95％的乙醇在85℃提取2次，每次5小時(shí)，過(guò)濾后合并濾液，濾液濃縮后得到浸膏含黃酮2.33g；而同樣批次的100g雪蓮粉碎后直接用7倍量95％的乙醇在85℃提取5小時(shí)，得到浸膏含黃酮只有1.02g；大孔吸附樹(shù)脂的預(yù)處理HPD型大孔吸附樹(shù)脂在使用以前，用10％的氯化鈉溶液浸泡24小時(shí)，然后用2倍量的氯化鈉溶液沖洗，并用5倍量去離子水沖洗，以便除去痕量的防腐劑和殘留的單體化合物；樹(shù)脂裝柱后，用乙醇沖洗，洗去殘留的少量有機(jī)物和致孔劑，再用去離子水沖洗；然后用2％氫氧化鈉溶液沖洗，除去樹(shù)脂中堿溶性雜質(zhì)，用去離子水沖洗；再用1M的鹽酸溶液沖洗，除去酸溶性雜質(zhì)，用去離子水沖洗至近中性；
將得到雪蓮乙醇提取物5g，分散在100ml熱水中，以1～5BV/h的流速通過(guò)100ml處理好的HPD700大孔樹(shù)脂，然后依次用200ml水，0％，10％，40％乙醇水溶液沖洗柱子，監(jiān)測(cè)透過(guò)液黃酮含量，黃酮濃度大于0.01mg/ml停止上樣，收集40％濃度的乙醇洗脫液，濃縮可得黃酮固含量為45.3％的雪蓮提取物。
實(shí)施例6取干燥后的雪蓮全草100g粉碎至200目后裝入超臨界萃取釜，啟動(dòng)超臨界二氧化碳泵，用超臨界CO2進(jìn)行預(yù)處理，設(shè)定萃取溫度65℃，先用少量的CO2排盡系統(tǒng)內(nèi)殘留空氣，然后加壓萃取釜為40MP，分離釜溫度60℃，調(diào)節(jié)分離釜壓力為12MP，動(dòng)態(tài)萃取180分鐘；減壓卸料后，從分離釜得到超臨界二氧化碳雪蓮萃取物2.35g，超臨界萃取后的余渣用30倍量95％的乙醇在100℃提取1次，時(shí)間4小時(shí)，過(guò)濾后合并濾液，濾液濃縮后得到浸膏含黃酮3.18g；而同樣批次的100g雪蓮粉碎后直接用30倍量95％的乙醇在100℃提取4小時(shí)，得到浸膏含黃酮只有2.32g；大孔吸附樹(shù)脂的預(yù)處理HPD型大孔吸附樹(shù)脂在使用以前，用10％的氯化鈉溶液浸泡24小時(shí)，然后用2倍量的氯化鈉溶液沖洗，并用5倍量去離子水沖洗，以便除去痕量的防腐劑和殘留的單體化合物；樹(shù)脂裝柱后，用乙醇沖洗，洗去殘留的少量有機(jī)物和致孔劑，再用去離子水沖洗；然后用2％氫氧化鈉溶液沖洗，除去樹(shù)脂中堿溶性雜質(zhì)，用去離子水沖洗；再用1M的鹽酸溶液沖洗，除去酸溶性雜質(zhì)，用去離子水沖洗至近中性；將得到雪蓮乙醇提取物5g，分散在100ml熱水中，以1～5BV/h的流速通過(guò)100ml處理好的HPD400大孔樹(shù)脂，然后依次用200ml水，0％，10％，40％乙醇水溶液沖洗柱子，監(jiān)測(cè)透過(guò)液黃酮含量，黃酮濃度大于0.01mg/ml停止上樣，收集40％濃度的乙醇洗脫液，合并濃縮即得黃酮固含量為44.7％的雪蓮提取物。
權(quán)利要求
1.一種提取與富集雪蓮總黃酮的方法，其特征在于按下列步驟進(jìn)行a、將雪蓮干燥并粉碎至40-200目后置入超臨界萃取釜中，用超臨界CO2或CO2夾帶乙醇進(jìn)行預(yù)處理，動(dòng)態(tài)萃取，控制萃取釜壓力12-40MPa，萃取溫度30-65℃，分離壓力4-12MPa，分離溫度20-60℃，時(shí)間為30-180分鐘后停止；b、減壓卸料后萃取釜內(nèi)余渣用常規(guī)溶劑法提取，將余渣經(jīng)1-2次乙醇水溶液提取，提取溫度為25-100℃，提取時(shí)間為30-150min，即制得雪蓮黃酮提取溶液；c、將得到的雪蓮黃酮提取液減壓濃縮至乙醇濃度為0％-15％體積比，進(jìn)行大孔吸附樹(shù)脂柱吸附；d、將吸附黃酮后的樹(shù)脂依次用0％-95％乙醇洗脫，收集30％-50％洗脫液，濃縮后即得黃酮固含量為40-50％的雪蓮提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提取與富集雪蓮總黃酮的方法，其特征在于步驟a中超臨界流體是單獨(dú)CO2或CO2挾帶70％-95％濃度的乙醇。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提取與富集雪蓮總黃酮的方法，其特征在于步驟b中提取所用的溶劑為50％-95％質(zhì)量百分比濃度的乙醇水溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的一種提取與富集雪蓮總黃酮的方法，其特征在于步驟b中乙醇水溶液的用量為雪蓮余渣重量的7-30倍質(zhì)量比，每次提取時(shí)間為1-6小時(shí)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提取與富集雪蓮總黃酮的方法，其特征在于步驟b中雪蓮余渣用乙醇水溶液提取1-2次，合并提取液濃縮到乙醇濃度為0％-15％體積比，供大孔吸附樹(shù)脂柱吸附。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提取與富集雪蓮總黃酮的方法，其特征在于步驟c中所用的大孔吸附樹(shù)脂為HPD700或HPD400或HPD500。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提取與富集雪蓮總黃酮的方法，其特征在于步驟c中所述大孔樹(shù)脂依次以2-8BV/h的流速用0-95％的乙醇溶液洗脫。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提取與富集雪蓮總黃酮的方法，其特征在于步驟d中吸附后的大孔吸附樹(shù)脂先用濃度為0％-15％乙醇水液梯度洗脫，再用濃度為30％-50％乙醇洗脫，收集30％-50％濃度的乙醇洗脫液，濃縮后得40％-50％雪蓮總黃酮提取物。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種提取與富集雪蓮總黃酮的方法，該方法先對(duì)雪蓮進(jìn)行超臨界CO
文檔編號(hào)C07H17/07GK101041653SQ200710102748
公開(kāi)日2007年9月26日 申請(qǐng)日期2007年4月21日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月21日
發(fā)明者趙文軍, 張富昌, 劉明燈, 高林 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院新疆理化技術(shù)研究所