專利名稱：：調(diào)節(jié)細(xì)胞因子活性的方法；相關(guān)藥劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明一般涉及哺乳動物細(xì)胞因子的用途。更具體地，本發(fā)明公開了IL-27受體的受體亞基。
背景技術(shù)：
：免疫系統(tǒng)保護個體免于傳染物，例如細(xì)菌、多細(xì)胞有機體以及癌癥。該系統(tǒng)包括幾種類型的淋巴樣細(xì)胞和髓樣細(xì)胞，例如單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹狀突細(xì)胞(DCs)、嗜酸性細(xì)胞、T細(xì)胞、B細(xì)胞和嗜中性粒細(xì)胞。這些淋巴樣細(xì)胞和髓樣細(xì)胞通常產(chǎn)生稱為細(xì)胞因子的信號蛋白。免疫應(yīng)答包括炎癥，即免疫細(xì)胞在身體的全身或尤其局部的積聚。作為對傳染物或異物的反應(yīng)，免疫細(xì)胞分泌細(xì)胞因子，其依次調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞增殖、發(fā)育、分化或遷移。免疫應(yīng)答有時會導(dǎo)致病理學(xué)后果，即炎癥病變。這些與免疫細(xì)胞和細(xì)胞因子有關(guān)的炎癥病變包括，例如銀屑病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、克隆(氏)病和動脈粥樣硬化(參見，例如Abbas等(eds.)(2000)CellularandMolecularImmunology，W.B.SaundersCo.，Philadelphia，PA；Oppenheim和Feldmann(eds.)(2001)CytokineReference，AcademicPress，SanDiego，CA；Kaufmann等(2001)Immunobiol.204603-613；Saurez和Schultz-Cheery(2000)Dev.Comp.Immunol.24269-283；vanReeth和Nauwynck(2000)Vet.Res.31187-213；Garcia-Sastre(2001)Virology279375-384；Katze等(2002)Nat.Rev.Immunol.2675-687；vanReeth(2000)Vet.Microbiol.74109-116；Tripp(2003)Curr.Pharm.Des.951-59)。IL-27為異二聚體細(xì)胞因子，包含兩種不同的亞基，結(jié)構(gòu)類似于IL-12、IL-23和CNTF/sCNTFR異源二聚體那些。IL-27的兩個亞基為p28和EB病毒-誘導(dǎo)的因子3(EBI3)。IL-27由例如抗原呈遞細(xì)胞(APCs)，例如單核細(xì)胞和樹狀突細(xì)胞(DCs)的表達。表達的IL-27依次刺激CD4+未致敏的T細(xì)胞的增殖。而且，IL-27與IL-12協(xié)同作用刺激CD4+未致敏的T細(xì)胞產(chǎn)生干擾素γ(IFNγ)、TH1型的細(xì)胞因子。IL-27也正向調(diào)節(jié)T-bet，一種特定地用于TH1型免疫應(yīng)答的轉(zhuǎn)錄因子，與此一致，IL-27向下調(diào)節(jié)GATA-3，一種特定地用于TH2-型免疫應(yīng)答的轉(zhuǎn)錄因子。脂多糖(LPS)誘導(dǎo)單核細(xì)胞和單核細(xì)胞衍生的DCs表達IL-27的兩個亞基，表明IL-27在天然免疫中起作用(Takeda等(2003)J.Immunol.1704886-4890；Lucas等(2003)Proc.Natl.Acad.SciUSA.10015047-15052；Pflanz等(2002)Immunity16779-790；Hashimoto等(2000)Blood962206-2214)。IL-27受體包含TCCR(也稱為WSX-1；WSX-1/TCCR)。由于受損的TH1型免疫應(yīng)答，TCCR/WSX-1基因剔除(knockout)的小鼠的(TCCR/WSX-1KO小鼠)，例如減少了IFNγ生成、增加對細(xì)胞內(nèi)病原體例如利什曼原蟲屬、李斯特菌屬和錐蟲屬的易感性、TH1型T細(xì)胞依賴性抗體(IgG2a亞型)生成的較低生成、對桿菌反應(yīng)的異常肉芽腫生成、TH1型T細(xì)胞依賴性抗體(IgG2a亞型)生成的較低生成。結(jié)核病、結(jié)節(jié)病和克隆(氏)病為涉及TH1型應(yīng)答和肉芽腫生成的病變。肉芽腫生成存在于這些疾病所涉及的位點。來自患有結(jié)核病、結(jié)節(jié)病和克隆(氏)病的患者的肉芽腫表達IL-27的兩個亞基(參見，例如Chen等(2000)Nature407916-920；Yoshida等(2001)Immunity15569-578；Trinchieri等(2003)Immunity19641-644；Larousserie等(2004)J.Pathol.202164-171；Brombacher等(2003)TRENDSImmunol.24207-212)。發(fā)現(xiàn)了包括IL-27的免疫途徑的微小變異，其顯然取決于對用于攻擊宿主的病原體的識別，和取決于選擇用于對感染的免疫應(yīng)答研究的時間點。例如，對WSX-1/TCCR基因剔除小鼠的某些研究證實，小鼠能抗細(xì)胞內(nèi)寄生物(Toxoplasma)的感染，小鼠產(chǎn)生了過量的IFNγ生成，而IFNγ的生成保持了正向調(diào)節(jié)，導(dǎo)致了致命性炎癥(Chen等(2000)Nature407916-920；Villarino等(2003)Immunity19645-655；Hamano等(2003)Immunity19657-667)。根據(jù)Trinchieri等，supra，IL-27單獨在起始的TH1型應(yīng)答中沒有表現(xiàn)出具有主要作用，但是，反而，其刺激了早期IFNγ生成，且不嚴(yán)重影響T細(xì)胞至TH1型分化。對于治療炎癥和免疫病變例如銀屑病、關(guān)節(jié)炎和癌癥，存在不能滿足的需要，這些病癥抵抗免疫系統(tǒng)的根除。本發(fā)明通過提供使用IL-27或IL-27受體的方法實現(xiàn)了這種需要。發(fā)明概述本發(fā)明部分基于發(fā)現(xiàn)了IL-27或IL-27受體的激動劑或拮抗劑調(diào)節(jié)了大量免疫和炎性病癥的應(yīng)答。本發(fā)明提供了調(diào)節(jié)免疫病變或病癥的方法，包括給藥有效量的p28、EBI3或WSX/TCCR的激動劑或拮抗劑，其中所述病變或病癥包含a)皮膚的炎性病癥；b)關(guān)節(jié)炎；c)克隆(氏)??；d)氣道高反應(yīng)性或炎癥；e)動脈粥樣硬化；或f)非由EB病毒引起的癌癥或腫瘤。本發(fā)明也提供上述的方法，其中拮抗劑抑制或阻止IL-27與受體的結(jié)合，所述受體包含WSX-1/TCCR和gpl30的異二聚體結(jié)合物。在另一個方面，本發(fā)明提供上述的方法，其中皮膚的炎性病癥包含銀屑病或特應(yīng)性皮炎；其中關(guān)節(jié)炎包含類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；骨關(guān)節(jié)炎；或銀屑病關(guān)節(jié)炎；其中氣道高反應(yīng)性或炎性病變包含哮喘；變態(tài)反應(yīng)；或慢性阻塞性肺疾患(COPD)。也提供其中癌癥或腫瘤包含乳腺癌；結(jié)腸癌；或黑素瘤的上述的方法；以及其中激動劑抑制或改善包含癌癥或腫瘤的病變的上述的方法；和其中癌癥或腫瘤表達與正常、對照組織相比可見增加量的a)p28；b)EBI3；或c)或WSX-1/TCCR的上述方法。在另一方面，本發(fā)明提供了其中拮抗劑改善a)皮膚的炎性病癥；b)關(guān)節(jié)炎；c)克隆(氏)??；d)氣道高反應(yīng)性或氣道炎癥；或e)動脈粥樣硬化的上述方法。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供了調(diào)節(jié)免疫病變或病癥的方法，其包含給藥有效量的p28、EBI3或WSX/TCCR的激動劑或拮抗劑，其中病變或病癥包含a)皮膚的炎性病癥；b)關(guān)節(jié)炎；c)克隆(氏)?。籨)氣道高反應(yīng)性或炎癥；e)動脈粥樣硬化；或f)非由EB病毒引起的癌癥或腫瘤；其中激動劑包含IL-27；IL-27hyperkine；p28；EBI3；或核苷酸；或其中核苷酸編碼IL-27hyperkine；p28；EBI3；p28和EBI3；WSX-1/TCCR；或WSX/1/TCCR和gpl30的上述方法；以及其中拮抗劑包含抗體特異性結(jié)合下述物質(zhì)的結(jié)合組合物IL-27；p28；EBI3；WSX-1/TCCR；或gpl30和WSX-1/TCCR的結(jié)合物的上述方法；和其中來自抗體的結(jié)合組合物包含下述物質(zhì)多克隆抗體；單克隆抗體；人源化抗體或其片段；Fab、Fv或F(ab′)2片段；抗體的肽模擬物；或可見標(biāo)記物(detectablelabel)的上述方法。也提供其中拮抗劑包含a)衍生自WSX-1/TCCR的可溶性受體；b)小分子；或c)核苷酸的上述方法；以及其中核苷酸特異性地與編碼如下物質(zhì)的多核苷酸p28；EBI3；或WSX-1/TCCR雜交的上述方法；或其中核苷酸包含反義核苷酸或小干擾RNA(siRNA)的上述方法。本發(fā)明的另一方面是其中給藥激動劑增加了或給藥拮抗劑降低了RANKL；TNFα；TEASRL；IL-1α或β；OX40；或APRIL的表達的上述方法。也提供診斷上述免疫病癥或病變的方法，包括使結(jié)合組合物與生物學(xué)樣品接觸，其中結(jié)合組合物特別地結(jié)合a)IL-27、p28、EBI3或WSX-1/TCCR；b)WSX-1/TCCR和gpl30的結(jié)合物；或c)編碼p28、EBI3或WSX-1/TCCR的核苷酸；和測定或確定結(jié)合組合物與生物學(xué)樣品的特異性結(jié)合。而且，本發(fā)明也提供診斷上述描述的免疫病癥或病變的藥盒，包括隔室和結(jié)合組合物，其特異性結(jié)合a)IL-27、p28、EBI3或WSX-1/TCCR；b)WSX-1/TCCR和gpl30的結(jié)合物；或c)編碼p28、EBI3或WSX-1/TCCR的核苷酸。優(yōu)選實施方案的詳細(xì)說明如本文(包括附加的權(quán)利要求)使用的詞語的單數(shù)形式例如″一個″和″該″包括它們相應(yīng)的復(fù)數(shù)參考，除非上下文有另外明確的指示。本文引用的所有引用文獻以其與每個出版物或?qū)＠暾埶囟ê酮毩⒌刂赋鲆胱鳛閰⒖嫉耐瑯拥姆秶氡疚淖鳛閰⒖?。I.定義當(dāng)將″激活″、″刺激″和″治療″應(yīng)用于細(xì)胞或受體時，其可具有相同的含義，例如激活、刺激或治療細(xì)胞或含有配體的受體，除非上下文或明確地另有指明?！迮潴w″包含天然和合成的配體，例如細(xì)胞因子、細(xì)胞因子變體、類似物、突變蛋白質(zhì)和衍生自抗體的結(jié)合組合物。″配體″也包含小分子，例如細(xì)胞因子的肽模擬物和抗體的肽模擬物?！寮せ睢逯缚僧?dāng)受到內(nèi)部機制和外部或環(huán)境因素調(diào)節(jié)時的細(xì)胞激活作用?！鍛?yīng)答″，例如細(xì)胞、組織、器官或有機體的應(yīng)答包括生物化學(xué)或生理學(xué)行為的改變，所述生物化學(xué)或生理學(xué)行為例如生物隔室的濃度、密度、粘著力或遷移、基因表達的速率或分化的狀況，其中所述改變與激活、刺激或治療相關(guān)，或者與內(nèi)部機制例如遺傳表演程序相關(guān)。分子的″活性″可以描述為或指分子與配體或與受體結(jié)合后的催化活性；或者指刺激基因表達或者細(xì)胞信號傳導(dǎo)、分化或成熟的能力；抗原的活性，調(diào)節(jié)其它分子的活性等等。分子的″活性″也可以指調(diào)節(jié)或保持細(xì)胞與細(xì)胞之間相互作用的能力，例如粘連，或指保持細(xì)胞結(jié)構(gòu)例如細(xì)胞膜或細(xì)胞骨架的活性?！寤钚浴逡部梢灾柑囟ǖ幕钚裕鏪催化活性]/[mg蛋白]或[免疫活性]/[mg蛋白]，生物隔室中的濃度等。″增殖活性″包括促進，必需時用于，或特別相關(guān)于，例如，正常細(xì)胞分裂，以及癌癥、腫瘤、發(fā)育異常、細(xì)胞轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)移和血管生成。當(dāng)將″給藥″和″處理″應(yīng)用于動物、人類、試驗受試者、細(xì)胞、組織、器官或體液時，指將外源性藥物、治療劑、診斷劑、化合物或組合物與動物、人類、受試者、細(xì)胞、組織、器官或體液接觸?！褰o藥″和″處理″也可以指，例如治療、安慰劑、藥動學(xué)、診斷學(xué)、研究和試驗方法?！寮?xì)胞的處理″包含使試劑與細(xì)胞接觸，以及試劑與液體接觸，其中液體與細(xì)胞接觸?！褰o藥″和″處理″也指通過試劑、診斷的、結(jié)合組合物或通過其它細(xì)胞的體外和體內(nèi)處理，例如對細(xì)胞的處理。當(dāng)將″處理″應(yīng)用于人類、牲畜或研究受試者時，指治療學(xué)處理、預(yù)防或預(yù)防性措施，指研究或診斷學(xué)應(yīng)用。當(dāng)將″處理″應(yīng)用于人類、牲畜或研究受試者或細(xì)胞、組織或器官時，其包括L-27激動劑或IL-27拮抗劑與人類或動物受試者、細(xì)胞、組織、生理學(xué)隔室或生理學(xué)體液接觸?！寮?xì)胞的處理″也包括其中IL-27激動劑或IL-27拮抗劑與IL-27受體(異源二聚體ofWSX-1/TCCR和gpl30)接觸的情形，例如在液相或膠質(zhì)相，以及其中激動劑或拮抗劑與液體接觸的情形，例如其中液體與細(xì)胞或受體接觸，但是其中還沒有證實激動劑或拮抗劑與細(xì)胞或受體接觸?！褰Y(jié)合組合物″指能與靶點結(jié)合的分子、小分子、大分子、抗體、其片段或其類似物，或可溶性受體?！褰Y(jié)合組合物″也可指能結(jié)合到靶點的分子的結(jié)合物，例如非共價結(jié)合物，電離的分子，和共價的或非共價改性的分子，例如通過磷酸化、?；?、交聯(lián)、環(huán)化或有限的卵裂改性?！褰Y(jié)合組合物″也可以指能結(jié)合到靶點的與穩(wěn)定劑、賦形劑、鹽、緩沖液、溶劑或添加劑結(jié)合的分子?！褰Y(jié)合″可以定義為結(jié)合組合物與靶點的關(guān)聯(lián)，其中關(guān)聯(lián)的結(jié)果是降低了結(jié)合組合物的正常布朗(氏)運動，在這種情況下，結(jié)合組合物可以溶解或懸浮在溶液中?！灞Ｊ匦揎椀淖凅w″應(yīng)用于氨基酸和核苷酸序列。至于特定的核苷酸序列，保守修飾的變體指其編碼相同的或基本上相同的氨基酸序列的那些核苷酸，或當(dāng)核苷酸沒有編碼氨基酸序列時，指基本上相同的核苷酸序列。由于遺傳密碼的簡并，大量功能性相同的核苷酸可以編碼任意給定的蛋白。至于氨基酸序列，技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)認(rèn)識到對核苷酸、肽、多肽或蛋白質(zhì)序列的單獨取代是″保守修飾的變體″，其中該取代基取代了保守的氨基酸的編碼序列中的氨基酸或小百分比的氨基酸。提供了功能類似的氨基酸的保守置換表是本領(lǐng)域已知的。保守置換的一個實例為在下述組的一個氨基酸與相同組中的另一個氨基酸的互換(授予Lee等的U.S.專利No.5,767,063；Kyte和Doolittle(19S2)J.Mol.Biol.157105-132)(1)疏水性正亮氨酸、Ile、Val、Leu、Phe、Cys或Met；(2)中性親水性Cys、Ser、Thr；(3)酸性Asp、Glu；(4)堿性Ash、Gln、His、Lys、Arg；(5)影響鏈定位的殘基Gly、Pro；(6)芳族Trp、Tyr、Phe；(7)小氨基酸類Gly、Ala、Ser.″衍生的″可用于描述，例如從母肽、寡肽或多肽例如抗體中衍生肽、寡肽或多肽的結(jié)構(gòu)。在本文中，衍生的包含，例如肽結(jié)構(gòu)，其中肽具有和其母體中發(fā)現(xiàn)的序列相同的序列的肽結(jié)構(gòu)，例如其中所述肽與母體相同，但是在母體的N-末端、C-末端或N-和C-末端具有截斷，或具有截斷和融合，或僅僅具有融合。衍生的也指所述肽具有和母體中發(fā)現(xiàn)的相同的序列，但是具有保守的氨基酸改變，或具有缺失或插入，其中缺失或插入保持著母體內(nèi)固有的肽的生物學(xué)性質(zhì)?！逖苌摹灏渲须幕蚨嚯臑槭褂媚阁w作為起始原料合成的情形，和其中肽或多肽使用母體的結(jié)構(gòu)作為引導(dǎo)重新合成的情形。″有效量″或″治療有效量″指足夠改善病變或生理學(xué)病癥的征兆或跡象的足夠量，或允許或促進病變或生理學(xué)病癥的診斷的足夠量。對于特定的患者或牲畜對象的有效量可根據(jù)因素例如受治療的病癥、患者的全面健康狀態(tài)、給藥途徑或劑量和副作用的嚴(yán)重性來改變(參見，例如授予Netti，etal.的U.S.專利No.5,888,530)。有效量可以是能避免顯著的副作用或毒性作用的最大劑量或服藥規(guī)定。該作用將導(dǎo)致診斷措施、參數(shù)或可測征兆改善了至少5％、通常至少10％、更通常至少20％、最通常至少30％、優(yōu)選至少40％、更優(yōu)選至少50％、最優(yōu)選至少60％、理想地至少70％、更理想地至少80％、最理想地至少90％、其中100％定義為正常受試者顯示的診斷參數(shù)(參見，例如Maynard等(1996)AHandbookofSOPsforGoodCliriicalPractice，InterpharmPress，BocaRaton，F(xiàn)L；Dent(2001)GoodLaboratoryandGoodClinicalPractice，UrchPubl.，London，UK)。根據(jù)上下文，″外源性″指在有機體、細(xì)胞或人體外生成的物質(zhì)。根據(jù)上下文，″內(nèi)源性″指在細(xì)胞、有機體或人體內(nèi)生成的物質(zhì)?！宀∽儭逯覆±韺W(xué)狀態(tài)，或者與病理學(xué)狀態(tài)相關(guān)或易患病理學(xué)狀態(tài)的病癥?！鍌魅拘圆∽儭逯?，例如由微生物、細(xì)菌、寄生蟲、病毒等引起的病變，以及對病變的不適當(dāng)?shù)?、無效的病理學(xué)免疫應(yīng)答。″致癌的病變″包含癌癥、轉(zhuǎn)化細(xì)胞、腫瘤、displasia、血管生成、轉(zhuǎn)移等，以及對病變的不適當(dāng)?shù)?、無效的病理學(xué)免疫應(yīng)答。″有效量″指，例如足夠改善病變、病癥或病理學(xué)狀態(tài)的征兆或跡象的IL-27激動劑、IL-27拮抗劑、結(jié)合化合物或結(jié)合組合物的量。″有效量″也包含足夠允許或促進病變、病癥或病理學(xué)狀態(tài)的征兆或跡象的診斷的IL-27激動劑、拮抗劑或結(jié)合化合物或組合物的量?！逡种苿搴汀遛卓箘寤颉寤罨瘎搴汀寮觿逯敢种苹蚧罨肿臃謩e地例如用于激活，例如配體、受體、輔助因子、基因、細(xì)胞、組織或器官。例如基因、受體、配體或細(xì)胞的調(diào)節(jié)劑為改變基因、受體、配體或細(xì)胞活性的分子，其中活性可以為其調(diào)節(jié)性質(zhì)中的活化、抑制或改變。所述調(diào)節(jié)劑可以單獨起作用，或者其可利用輔助因子，所述輔助因子例如蛋白、金屬離子或小分子。抑制劑為降低、阻斷、預(yù)防、延遲活化、失活、脫敏或下調(diào)例如基因、蛋白、配體、受體或細(xì)胞的化合物?；罨瘎樵黾印⒒罨?、促進、增加活化、致敏或上調(diào)例如基因、蛋白、配體、受體或細(xì)胞的化合物。抑制劑也可以定義為降低、阻斷或鈍化組成性活性(constitutiveactivity)失活的組合物。″激動劑″為與目標(biāo)作用引起或促進目標(biāo)活性增加的化合物。″拮抗劑″為與激動劑起對抗作用的化合物。拮抗劑預(yù)防、降低、抑制或中和了激動劑的活性。拮抗劑也可預(yù)防、抑制或降低靶點的組成的活性，甚至當(dāng)其中不存在確定的激動劑時。為了檢查抑制作用的程度，例如，用可能的激活劑或抑制劑處理包含給定的蛋白質(zhì)、基因、細(xì)胞或有機體的樣品或分析品，并與不含有抑制劑的對照樣品相比較。對照樣品，即不用拮抗劑處理，指定相對活性值為100％。當(dāng)與對照品比較，活性值為約90％或更少、典型地為85％或更少、更典型地為80％或更少、最典型地為75％或更少、通常為70％或更少、更通常為65％或更少、最通常為60％或更少、典型地為55％或更少、更一般為45％或更少、最一般為40％或更少、優(yōu)選為35％或更少、更優(yōu)選為30％或更少、更優(yōu)選為25％或更少、最優(yōu)選為小于25％時，獲得了抑制作用。當(dāng)與對照相比，活性值為約110％、通常至少120％、更通常至少140％、更通常至少160％、一般至少180％、更一般至少2倍、最一般至少2.5倍、通常至少5倍、更通常至少10倍、優(yōu)選至少20倍、更優(yōu)選至少40倍、最優(yōu)選超過40倍高時，獲得了激活作用。激活作用或抑制作用的終末點可按如下檢測。例如，細(xì)胞、生理學(xué)體液、組織、器官和動物或人類受試者的激活、抑制和對治療的應(yīng)答可通過終末點來檢測。該終末點可包含預(yù)定量或百分比的，例如炎癥、致腫瘤性或細(xì)胞脫顆?；蚣?xì)胞分泌物的標(biāo)記，例如細(xì)胞因子、毒性氧或蛋白酶的釋放。該終末點可包含，例如預(yù)定量的離子流或離子轉(zhuǎn)移；細(xì)胞遷移；細(xì)胞粘著；細(xì)胞增殖；轉(zhuǎn)移的潛力；細(xì)胞分化；表型的改變，例如與炎癥、細(xì)胞凋亡、轉(zhuǎn)化、細(xì)胞周期或轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因表達的改變(參見，例如，Knight(2000)Ann.Clin.Lab.Sci.30145-158；Hood和Cheresh(2002)NatureRev.Cnacer291-100；Timmme等(2003)Curr.DrugTargets4251-261；Robbins和Itzkowitz(2002)Med.Clin.NorthAm.861467-1495；Grady和Markowitz(2002)Annu.Rev.GenomicsHum.Genet.3101-128；Bauer等(2001)Glia36235-243；Stanimirovic和Satoh(2000)BrainPathol.10113-126)。抑制作用的終末點通常為對照的75％或更少，優(yōu)選為對照的50％或更少，更優(yōu)選為對照的25％或更少，最優(yōu)選為對照的10％或更少。通常，激活作用的終末點為對照的至少150％，優(yōu)選為對照的至少兩倍，更優(yōu)選為對照的至少四倍，最優(yōu)選為對照的至少10倍?！灞磉_″指由特定的基因編碼的mRNA或多肽的量度。表達的單位可以是，例如mRNA或多肽/mg蛋白分子的數(shù)量的量度，mRNA或多肽/細(xì)胞的分子數(shù)量的量度，按細(xì)胞、組織、細(xì)胞提取物或組織提取物的表達測定。表達的單位可以是相對的，例如與來自對照和試驗動物的信號的比較，或特異性地用于mRNA或多肽的試劑對非特異性用于mRNA或多肽的試劑的信號的比較?！咫s交″為當(dāng)在超過至少約30個核苷酸的伸展后存在至少約55％同源性，優(yōu)選在超過約25個核苷酸的伸展后存在至少約75％的同源性，最優(yōu)選在超過約20個核苷酸的伸展后存在至少約90％的同源性時，特異性地或選擇性的典型地發(fā)生(參見，例如Kanehisa(1984)NucleicAcidsRes.12203-213)。在嚴(yán)格條件下的雜交，例如，第一核苷酸與第二核苷酸的雜交的嚴(yán)格條件為(1)使用低離子強度和高溫度用于洗滌，例如，在50℃下使用0.015M氯化鈉/0.0015M檸檬酸鈉/0.1％十二烷基硫酸鈉；(2)在雜交期間于42℃使用變性劑，例如甲酰胺，例如，50％(vol/vol)甲酰胺和0.1％牛血清清蛋白/0.1％Ficoll(Sigma-Aldrich，St.Louis，MO)/0.1％聚乙烯吡咯烷酮/50mMpH6.5的磷酸鈉緩沖液和750mM氯化鈉、75mM檸檬酸鈉；(3)在42℃下，使用50％甲酰胺、5XSSC(0.75MNaCI，0.075M檸檬酸鈉)、50mM磷酸鈉(pH6.8)、0.1％焦磷酸鈉、5XDenhardt′s溶液、超聲處理的鮭魚精液DNA(50ng/ml)、0.1％SDS和10％葡聚糖磷酸酯，并在42℃下用0.2XSSC和0.1％SDS洗滌；或者(4)在55℃下，使用10％葡聚糖磷酸酯、2XSSC(氯化鈉/檸檬酸鈉)和50％甲酰胺的緩沖液體，然后在55℃下用包含0.1XSSC的EDTA進行高嚴(yán)格地洗滌(授予Botstein等的U.S.專利No.6,387,657)。用于核苷酸雜交的嚴(yán)格條件為鹽、溫度、有機溶劑和高液試劑(chaotropicagent)的函數(shù)。嚴(yán)格的溫度條件通常包括高于約30℃的溫度、更通常高于約37℃的溫度、典型地高于約45℃的溫度、更典型地高于約50℃的溫度、優(yōu)選高于約65℃的溫度、更優(yōu)選高于約70℃的溫度。嚴(yán)格的鹽條件將一般低于約1M、更一般低于約500mM、通常低于約400mM、更通常低于約300mM、典型地低于約200mM、優(yōu)選低于約100mM、更優(yōu)選低于約80mM、甚至低于約20mM。然而，參數(shù)的組合比任一單一參數(shù)的調(diào)節(jié)更為重要。(Wetmur和Davidson(1968)J.Mol.Biol.31349-370)?！迕庖卟“Y″或″免疫病變″包含，例如病理學(xué)炎癥、炎性病變和自體免疫病變或疾病?！懊庖卟“Y″也指感染、持久感染和增生病癥，例如癌癥、腫瘤和血管生成，包括抗免疫系統(tǒng)根除(irradication)的感染、腫瘤和癌癥?！灏┬缘牟“Y″包括，例如，癌癥、癌細(xì)胞、腫瘤、血管生成和癌前期的病癥，例如發(fā)育異常。″炎性病變″指其中病理學(xué)結(jié)果全部或部分來自免疫抗原數(shù)量改變、遷移速率的改變或免疫系統(tǒng)細(xì)胞的活化改變的病變或病理狀態(tài)。免疫系統(tǒng)的細(xì)胞包括例如，T細(xì)胞、B細(xì)胞、單核細(xì)胞或巨噬細(xì)胞、抗原呈遞細(xì)胞(APCs)、樹狀突細(xì)胞、小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、NK細(xì)胞、NKT細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、嗜酸性細(xì)胞、肥大細(xì)胞或任意其它與免疫學(xué)相關(guān)的特異性細(xì)胞，例如，生成細(xì)胞因子的內(nèi)皮或上皮細(xì)胞。″炎性病變″指其中病理學(xué)結(jié)果全部或部分來自免疫系統(tǒng)的細(xì)胞數(shù)量增加和/或活化增加的病變或病理狀態(tài)，所述細(xì)胞例如T細(xì)胞、B細(xì)胞、單核細(xì)胞或巨噬細(xì)胞、肺泡巨噬細(xì)胞、樹狀突細(xì)胞、NK細(xì)胞、NKT細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞嗜酸性細(xì)胞，或肥大細(xì)胞?！寤蛱蕹?KO)指至少部分由基因編碼的多肽表達的部分或全部降低，所述多肽例如IL-27的亞基p28或EBI3，其中基因為單一細(xì)胞、選擇的細(xì)胞和所有哺乳動物細(xì)胞內(nèi)。KO也包含其中生物學(xué)功能降低，但是其中表達沒有必然地降低的實施方案，例如p28KO多肽包含其包含有嵌入性激活的肽、寡肽或多肽的表達的p28多肽。編碼序列或調(diào)整序列的破壞包含在基因剔除技術(shù)中。細(xì)胞或哺乳動物可以是″雜合的基因別除″，其中內(nèi)源性基因的一個等位基因被分裂。此外，細(xì)胞或哺乳動物可以是″純合的基因剔除″，其中內(nèi)源性基因的兩個等位基因被分裂?！寮兒系幕蛱蕹宀灰馕吨鴮⒒蚪M中的兩個等位基因的分裂限定于相同的技術(shù)(identicaltechniques)或限定于相同的結(jié)果(identicaloutcomes)。其中一個或兩個p28等位基因都被基因剔除的哺乳動物也都包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)?！迮潴w″指，例如小分子、肽、多肽和相關(guān)的膜或膜結(jié)合的分子，或其結(jié)合物，其可以作為受體的激動劑或拮抗劑起作用?！迮潴w″也包含非激動劑或拮抗劑的藥劑，但是其可以結(jié)合受體而不顯著地影響其生物學(xué)性質(zhì)，例如信號(signaling)或粘合。而且，″配體″包括，例如通過化學(xué)或重組方法，已經(jīng)改變?yōu)槟そY(jié)合的配體的可溶性變體的膜結(jié)合的配體。按照常規(guī)，當(dāng)配體膜結(jié)合在第一細(xì)胞上時，受體通常存在于第二細(xì)胞上。第二細(xì)胞可以與第一細(xì)胞具有相同或不同的特性。配體或受體也可以是完全細(xì)胞內(nèi)的，即，其可存在于細(xì)胞溶質(zhì)、細(xì)胞核或某些細(xì)胞內(nèi)隔室中。所述配體或受體可以改變其位置，例如從細(xì)胞內(nèi)隔室轉(zhuǎn)移到質(zhì)膜的外表面。配體和受體的結(jié)合物稱為″配體受體合成物″。當(dāng)配體和受體參與信號通路時，配體存在于信號通路的上游位置，而受體存在于信號通路的下游位置?！宓谝欢嚯逆湣搴汀宓诙嚯逆湣逯笡]有通過典型的肽鍵連接的兩個多肽鏈。典型地，第一多肽鏈包含N-末端和C-末端，第二多肽鏈包含另一個N-末端和另一個C-末端，即，總共有兩個N-末端和兩個C-末端。第一多肽鏈可以由第一載體編碼，同時第二多肽鏈可以由第二載體編碼。第一多肽鏈和第二多肽鏈可以由一個載體編碼，其中第一啟動子可以與第一多肽鏈連接進行，第二啟動子可以與第二多肽鏈連接進行，或者，在另一實施方案中，第一和第二多肽鏈的表達都可以與相同的啟動子操作連接?！屐`敏性″，例如，受體對配體的靈敏性指配體與受體結(jié)合，在受體中，或者在特別地與受體相關(guān)的事件或分子中產(chǎn)生了可見的改變，例如與受體相關(guān)的蛋白的構(gòu)象改變、磷酸化、與受體相關(guān)的蛋白質(zhì)的性質(zhì)和數(shù)量，或者由或與受體相關(guān)的基因表達的改變。提供″小分子″用于治療腫瘤和癌癥的生理學(xué)和病變。″小分子″定義為具有分子量小于10kD，典型地小于2kD，優(yōu)選小于1kD的分子。小分子包括，但不限于無機分子、有機分子、包含無機組分的有機分子，包含放射性原子的分子、合成的分子、肽模擬物和抗體模擬物。作治療用時，與大分子相比，小分子可以更容易地透過細(xì)胞，不易于降解、不易于誘導(dǎo)出免疫應(yīng)答。小分子例如抗體和細(xì)胞因子的肽模擬物，以及小分子毒素已被公開(參見，例如Cassetetal.(2003)Biochem.Biophys.Res.Commun.307198-205；Muyldermans(2001)J.Biotechnol.74277-302；Li(2000)Nat.Biotechnol.181251-1256；Apostolopoulos等(2002)Curr.Med.Chem.9411-420；Monfardini等(2002)Curr.Phare.Des.82185-2199；Domingues等(1999)Nat.Struct.Biol.6652-656；Sato和Sone(2003)Biochem.J.371603-608；授予Stewart，etal的U.S.專利No.6,326,482)?！蹇扇苄允荏w″為水溶性，且存在于例如細(xì)胞外液、細(xì)胞內(nèi)液中，或與細(xì)胞膜有點相關(guān)的受體?？扇苄允荏w還指改變?yōu)樗苄缘氖荏w?！褰Y(jié)合的特異性″″結(jié)合的選擇性″等，指預(yù)定的配體和預(yù)定的受體之間的結(jié)合作用，其有助于人們區(qū)別預(yù)定的配體和其他的配體，或者有助于區(qū)別預(yù)定的受體和其他的受體。當(dāng)“特異性”或“選擇性”結(jié)合指配體/受體、抗體/抗原、或其它結(jié)合對時，其指決定在蛋白質(zhì)和其它生物制劑的異質(zhì)群體中決定蛋白質(zhì)存在的結(jié)合反應(yīng)。因此，在指定的條件下，特定的配體結(jié)合到特定的受體上，而不結(jié)合樣品中存在的其它大量的蛋白質(zhì)。衍生自抗體的抗原結(jié)合位點的抗體或結(jié)合組合物結(jié)合到其抗原上，所述抗原具有與其他任一抗原的親和力相比，至少兩倍大、優(yōu)選至少十倍大，更優(yōu)選至少20倍大，最優(yōu)選至少100倍大的親和力。在一個優(yōu)選的實施方案中，抗體將具有大于約1091升/mol的親和力(參見，例如Munsen等(1980)Analyt.Biochem.107220-239。II.概述本發(fā)明提供用于調(diào)節(jié)或治療大量免疫病癥和病變，例如銀屑病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、克隆(氏)病(CD)和某些癌癥的方法。提供用于治療和診斷以p28、EBI3、IL-27和WSX-1/TCCR的異常表達為特征的病變的方法。先回顧一下IL-27、IL-27受體和其亞基的生理學(xué)和免疫學(xué)。簡而言之，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)IL-27或其一個亞基在干擾素γ(IFNγ)應(yīng)答、T細(xì)胞分化、EB病毒誘導(dǎo)的病變、妊娠和潰瘍性結(jié)膜炎(但不是克隆(氏)病)中起作用。詳細(xì)來說，IL-27影響涉及TNFα-刺激的DCs的T細(xì)胞分化通路，其中TNFα-刺激的DCs接觸未致敏的T細(xì)胞，促進未致敏的T細(xì)胞分化為產(chǎn)生的IFNγ-的T細(xì)胞。如果在TNFα-刺激的DC與未致敏的T細(xì)胞接觸期間存在IL-27，這將促進T細(xì)胞產(chǎn)生IFNγ。因此，IL-27有助于未致敏的THl-類T細(xì)胞的DC-依賴性分化。IL-27也起干擾素β(IFNβ)作用。未成熟的樹狀突細(xì)胞(DCs)和成熟的DCs表達EBI3受到大量細(xì)胞因子的刺激。這些細(xì)胞因子包括干擾素-β(IFNβ)，IFNβ治療是在CD40L和IFNγ組合之后(參見，例如Nagai等(2003)I.Immufzol.1715233-5243；vanSeventer等(2002)J.Neuroimmunol.13360-71)。EBI3看來在EB病毒-誘導(dǎo)的病變中起作用。在感染EB病毒的B細(xì)胞中表達EBI3，感染導(dǎo)致單核細(xì)胞增多。EBI3，由Hodgki淋巴瘤衍生的細(xì)胞系表達，存在于某些鼻咽癌中，已建議對腫瘤或病毒使用EBI3來抑制對抗與EB病毒相關(guān)的腫瘤，即，某些Hodgkin淋巴瘤和鼻咽癌的免疫應(yīng)答。簡而言之，已提出EBI3具有免疫抑制或TH2-促進功能(參見，例如Devergne等(1996)J.Virol.701143-1153；Niedobitek等(2002)J.Pathol.198310-316)。IL-27對妊娠起特定作用。IL-27在子宮中于懷孕開始后表達，其中該細(xì)胞因子的表達存在于子宮的NK細(xì)胞內(nèi)。EBI3，IL-27的一個亞基，顯示出胎盤即分化的trophoblasT細(xì)胞表達增加，且發(fā)現(xiàn)在妊娠期間于血清中其量增加(參見，例如，Croy等(2003)Reproduction126149-160；Zhang等(2003)Biol.Reproduction69404-411；Devergne等(2001)Am.J.Pathol.1591763-1776)。準(zhǔn)備一只EBI3基因剔除小鼠(EBI3KO小鼠；EBI3-/-小鼠)來確定例如，免疫系統(tǒng)的生理學(xué)結(jié)果。EBI3KO小鼠表明不變的NKT細(xì)胞(iNKTcells)和CD4+T細(xì)胞中顯示了改變。EBI3KO引起iNKT細(xì)胞的數(shù)量減少。施用EBI3KO后，隨著細(xì)胞活化增加，來自脾臟的CD4+T細(xì)胞表明更多的IFNγ生成，但是IL-4減少。這些效應(yīng)表明EBI3KO促進了THl-類應(yīng)答，EBI3有助于TH2-型反應(yīng)。EBI3KO減少了iNKT細(xì)胞的數(shù)量，按每個細(xì)胞計，也降低了iNKT細(xì)胞生成IL-4的能力。EBI3KO小鼠也開始抗結(jié)腸炎，其由對唑酮誘導(dǎo)的結(jié)腸炎的研究證實，唑酮誘導(dǎo)的結(jié)腸炎是TH2-型免疫應(yīng)答介導(dǎo)的結(jié)腸炎模型，然而，EBI3KO小鼠不抗TH1型結(jié)腸炎模型。類似地，在另一個表明EBI3在TH2型結(jié)腸炎中起作用的研究中，EBI3已經(jīng)提高了活性的潰瘍性結(jié)腸炎的表達，該結(jié)腸炎為其中TH2-型應(yīng)答支配的而不是THl型應(yīng)答支配的的活性克隆(氏)病(Christ等(1998)Gastroentrol.115307-313；Niedobitek等(2002)J.Patlaol.198310-316)。WSX-1/TCCR表達于CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和CD19+B細(xì)胞(參見，例如Sprecher等(1998)Biochenn.Biophys.Res.Cofnmun.24682-90)。本發(fā)明確認(rèn)了gpl30為IL-27受體的亞基。gpl30為受體亞基，其為IL-6細(xì)胞因子族共享的受體亞基。因此，gpl30為IL-6、白血病抑制因子(LIF)、IL-11、制瘤素M、睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子CNTF)、心營養(yǎng)素-1(CT-1)、心營養(yǎng)素類細(xì)胞因子(CLC)和病毒IL-6同系物的亞基。已經(jīng)證實了gpl30的可溶性變體(參見，例如Hammacher等(1998)J.Biol.Chem.27322701-22707；Hammacher等(2000)Biochem.J.34525-32；Sanchez-Cuenca等(1999)Immunol.Today2057-59；Gadient和Patterson(1999)StemCells17127-137；Peters等(1996)J.Exp.Med.1831399-1406；Muller-Newen(2003)ScienceSTKE2003，pe40)。本發(fā)明提供治療和診斷克隆(氏)病的方法。克隆(氏)病是一種慢性炎性病變，其可影響胃腸道例如小腸或結(jié)腸的任意區(qū)域。克隆(氏)病包括瘺管病變，而其它的腸道炎性病變，潰瘍性結(jié)腸炎包括淺的、潰瘍性病損?？寺?氏)病的病理學(xué)包括炎性細(xì)胞因子，例如IL-1IL-6和腫瘤壞死因子(TNF)?？寺?氏)病與潰瘍性結(jié)膜炎的區(qū)別在于克隆(氏)病通常涉及IFN、IL-2和IL-12在早期增加的TH1型反應(yīng)，而后者增加TNFα和IL-18。與克隆(氏)病相比，潰瘍性結(jié)膜炎中存在IL-5、IL-6、IL-10和IL-13表達增加，其中細(xì)胞因子模式類似于TH2-型應(yīng)答的變化?？寺?氏)病和潰瘍性結(jié)膜炎進一步的區(qū)別在于，在前者中粘膜區(qū)域的T細(xì)胞抗細(xì)胞凋亡，而在后者中，粘膜區(qū)域的T細(xì)胞更易于受Fas-介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。NOD2基因的突變與人類克隆(氏)病有關(guān)，然而″白細(xì)胞抗原區(qū)域基因″和MUC3基因與人類潰瘍性結(jié)腸炎有關(guān)。THl-類和TH2-型炎性腸病的機制區(qū)別由可得到的TH-1類和TH-2類小鼠模型兩者的事實突出顯示。例如，給定CD45RBhighCD4+T細(xì)胞的小鼠發(fā)展THl-細(xì)胞-介導(dǎo)的病變，與人類克隆(氏)病相似。炎性腸病的TH2-推動(driven)模型可使用TCRα基因剔除小鼠(參見，例如Ardizzone和Porro(2002)J.hat.Med.252475-496；Madsen(2002)Gastroentrol.1232140-2144；Bouma和STrober(2003)Nat.Rev.Immunol3521-533；Stallmach等(1998)Immunol.Todayl9438-441；Yamamoto等(2000)J.Immunol.1644878-4882；Targan等(1997)NewEngl.J.Med.3371029-1035；Simpson等(1998)J.Exp.Med.1871225-1234；Beutler(2001)Immunity155-14)。本發(fā)明提供治療和診斷銀屑病和其它皮膚炎癥病變，例如接觸過敏的方法。銀屑病，一種影響全球人數(shù)約2％的常規(guī)病變，包括皮膚和膿皰區(qū)域的脫皮。在美國的銀屑病患者中，約一百萬人需要紫外療法或免疫抑制療法。約10％的銀屑病患者也發(fā)展成為銀屑病關(guān)節(jié)炎，一種使人虛弱的病癥。銀屑病包括皮膚中角質(zhì)化細(xì)胞的過度增殖和白細(xì)胞的浸潤。銀屑病的炎癥由例如T細(xì)胞、單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞和抗原呈遞細(xì)胞(APCs)例如樹狀突細(xì)胞和朗氏細(xì)胞調(diào)節(jié)(參見，例如Yu等(2002)Dermatol.20494-99；Jiang等(2001)Int.J.Dermatol.40699-703).角質(zhì)化細(xì)胞過度增殖部分起因于IL-2、IFNγ、TNFβ、IL-5和其它細(xì)胞因子的不適當(dāng)?shù)谋磉_。先天反應(yīng)，例如包括細(xì)菌的脂多糖(LPS；糖脂類)已經(jīng)涉及銀屑病的病理學(xué)部分(參見，例如Bos和DeRie(1999)ImmunologyToday2040-46；Ellis等(2001)NewEngl.J.Med.345248-255；Bhalerao和Bowcock(1998)HumanMol.Genetics71537-1545；vandeKerkhof(2000)Clin.Exp.Dermatol.25165；Tanaka等(2000)Brit.J.Dermatol.143728-732；Nickoloff(1999)J.Clin.Invest.1041161-1164；Curry等(2003)Arch.Pathol.Lab.Med.127178-186；Travers等(1999)J.Clin.Invest.1041181-1189；Greaves和Weinstein(1995)NewEngl.J.Med.332581-588；Robert和Kupper(1999)NewEngl.J.Med.3411817-1828；Bos和DeRie(1999)Immunol.Today2040-46)；Shimizu等(2002)Histochem.CellBiol.118251-257，Gottleib等(1995)NatureMed.1442-447，Abrams等(2000)J.Exp.Med.192681-693；Yu等(2002)Dermatology20494-99)。銀屑病關(guān)節(jié)炎、特應(yīng)性皮炎和哮喘都與銀屑病有關(guān)(McInnes等(2001)J.Immunol.1764075-4082；Welp等(1989)Hautarzt40496-500)。本發(fā)明提供治療和診斷動脈粥樣硬化和其它方面的心血管疾病的方法。免疫細(xì)胞，例如肥大細(xì)胞、樹狀突細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞對動脈粥樣硬化的病理學(xué)有貢獻。腫瘤壞死因子、白細(xì)胞介素-1和其它細(xì)胞因子與例如動脈粥樣硬化、心血管疾病和發(fā)作的病因?qū)W有關(guān)(參見，例如，Huang等(2002)Cardiovasc.Res.55150-160；Kelley等(2000)Mol.Med.Today6304-308；Aicher等(2003)Circulation107604-611；Ozmen等(2002)Histol.Histopathol.17223-237；Wanders等(1994)Trahspl.Int.7Suppl.1S371-S375；Hallenbeck(2002)NatureMed.81363-1368；Young等(2002)Thromb.Haemost.88554-567；Loppnow等(2001)Shock13-9)。另外，本發(fā)明提供治療和診斷關(guān)節(jié)炎，例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病關(guān)節(jié)炎、幼年型類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎和強直性脊柱炎的方法。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)為關(guān)節(jié)的慢性、破壞性疾病，特征在于炎癥和滑液增生。該疾病不能治愈，可導(dǎo)致傷殘。CD4+T細(xì)胞浸潤關(guān)節(jié)，且刺激IL-1、IL-6和TNFα的生成。生成的細(xì)胞因子刺激成纖維細(xì)胞、破骨細(xì)胞和軟骨細(xì)胞釋放蛋白水解酶，其依次使關(guān)節(jié)軟骨降解。肥大細(xì)胞是參與RA病理學(xué)的主要免疫細(xì)胞。肥大細(xì)胞生產(chǎn)了腫瘤壞死因子-α(TNFα)，其引起炎癥級聯(lián)反應(yīng)，促進了IL-1和IL-6的表達。肥大細(xì)胞也活化了蛋白水解酶，使軟骨基質(zhì)降解。關(guān)節(jié)炎的小鼠模型可用，例如膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎(CIA)、TNF過表達小鼠和IL-lα過表達小鼠(Choy和Panayi(2001)NewEngl.J.Med.344907-916；Woolley(2003)NewEngl.J.Med.3481709-1711；Niki等(2001)J.Clin.Invest.1071127-1135；Feldmann和Maini(2001)Annu.Rev.Immunol.19163-196)。本發(fā)明提供了治療和診斷哮喘和變態(tài)反應(yīng)的方法。寄生蟲引起的感染，例如，曲霉或一鉤蟲屬與患有哮喘和變態(tài)反應(yīng)的人類相關(guān)。而且，曲霉或一鉤蟲屬引起的感染，或用寄生蟲抗原的治療，已被用于哮喘和變態(tài)反應(yīng)的模型研究。對寄生蟲變應(yīng)原的免疫應(yīng)答存在于階段，例如早期階段和晚期階段(參見，例如Hurst等(2001)J.Immunol.1664922-4930；Hurst等(2002)J.Im77tunol.169443-453；Mehrad等(1999)J.Immunol.1621633-1640；Soubani和Chandrasekar(2002)Chest1211988-1999；Schuh等(2002)FASEBJ.161313-1315；Greenberger(2003)FrontBiosci.8sll9-s127；Gibson等(2003)Eur.Respir.J.21582-588；Black等(2001)J.AppLPhysiol.90571-578；Palmer等(2002)Am.J.Respir.Crit.CareMed.1651489-1493；Zou等(2002)GenomeBioL320.1-20.13；Abraham等(1999)Am.J.Respir.Crit.CareMed.1591205-1214；Jones等(1998)Can.J.Physiol.Pharmacol76210-217；Wright等(1999)J.Pharmacol.Exp.Therapeutics2891007-1014；D′Brot等(1989)Am.Rev.Respir.Dis.139915-920)。本發(fā)明也涉及治療和診斷肺病，包括那些包含氣道高反應(yīng)性的方法，例如，用IL-27拮抗劑來治療。氣道高反應(yīng)性(airwayhyperreactivity)，也稱為氣道高反應(yīng)性(airwayhyperresponsiveness)，其涉及刺激應(yīng)答產(chǎn)生的不適當(dāng)?shù)臍獾揽s小，特征在于氣道的多種病變，例如哮喘、變應(yīng)性鼻炎、支氣管炎、細(xì)支氣管炎和可能的慢性阻塞性肺疾患(COPD)。高反應(yīng)性可以由例如呼吸道感染、吸煙和呼吸道變應(yīng)原引起。哮喘，一種可致命的慢性病變，影響了約七分之一的美國兒童，是超過15％的兒科急癥的原因。該病的癥狀包括呼吸急促和粘液分泌過多(參見，例如，Crain等(1995)Arch.Pediatr.Adolesc.Med.149893-901；Grunig等(1998)Science2822261-2263；Crystal等(eds.)(1997)TheLung，Vols.1-2，2nded.，Lippincott-Raven，Phila，PA；Holgate等(2001)Allergy，2nded.，Mosby，NewYork；Marone(1998)Immunol.Today195-9；Barnes和Lemanske(2001)NewEngl.J.Med.344350-362)。氣道高反應(yīng)性以氣道中T細(xì)胞、嗜酸性細(xì)胞、肥大細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞和抗原呈遞細(xì)胞(APC)的浸潤為特征。肺的APC包括DC、B細(xì)胞和肺泡的巨噬細(xì)胞，其中每個都可表達細(xì)胞因子和導(dǎo)致氣道高反應(yīng)性(參見，例如Lawrence等(1998)J.Pharm.Exp.Thera.284222-227；Alexis等(2001)Am.J.Physiol.LungCellMol.Physio.280L369-L375；Akabari等(2002)NatureMedicine81024-1032；MacLean等(1999)Am.J.Respir.CellMol.Biol.20379-387；Hamelmann等(1999)Am.J.Respir.CellMol.Biol.21480-489；Gonzales等(2000)AnnalsInternalMedicine133981-991；Li等(2002)PulmoraaryPharmacol.Therapeutics15409-416；Zimmermann，tal.(2003)J.AllergyClin.Immunol.111227-242；Riffo-Vasquez和Spina(2002)Pharmacol.Therapeutics94185-211)。COPD為涉及巨噬細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞和T細(xì)胞例如CD8+T細(xì)胞浸潤細(xì)支氣管的病變。COPD，北美洲引起死亡的第四大病因，特征在于氣道平滑肌的增厚和氣道的炎癥。這種反應(yīng)的出現(xiàn)是由于單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和嗜中性粒細(xì)胞對肺的浸潤。肺泡的巨噬細(xì)胞，在COPD中提高表達細(xì)胞因子，依次促進了炎癥和增加了免疫細(xì)胞的活化。COPD包括慢性支氣管炎和氣腫。氣腫的特征在于薄壁組織、氣隙末梢的末端細(xì)支氣管的永久性破壞(參見，例如Hautamaki等(1997)Science2772002-2004；Barnes(2000)Chest11710S-14S；Barnes(2003)Annu.Rev.Med.54113-129；Jeffery(1998)Thorax53129-136；Barnes(2000)NewEngl.J.Med.343269-280)。本發(fā)明也包括癌癥治療和診斷方法。注意到IL-27已顯示可治療小鼠腫瘤(Hisada等(2004)CaneerRes.641152-1156)。本發(fā)明提供使用IL-27增加TNFα、IL-lα和OX40生成的方法，這些細(xì)胞因子與抗腫瘤的適當(dāng)?shù)拿庖邞?yīng)答相關(guān)和與腫瘤衰退相關(guān)。本發(fā)明提供使用IL-27刺激包含免疫因子例如TNFα、IL-lα、IL-lβ和OX4的抗腫瘤免疫應(yīng)答生成來治療癌癥的方法。腫瘤通常由CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞浸潤。具有T細(xì)胞的腫瘤的較高浸潤有時與患者的良好預(yù)后有關(guān)，例如在黑素瘤和結(jié)腸直腸癌的情況下。對腫瘤的免疫應(yīng)答的問題是T細(xì)胞可以是不完全活化的、免疫缺乏的或滅活的(Dalerba等(2003)Crit.Revs.OncologyHematology4633-57；Ladanyi等(2004)Clin.CancerRes.10521-530；Toomey等(1999)Immunol.Invest.2829-41)。IL-lα、IL-lβ和TNFα具有抗腫瘤功效，其導(dǎo)致抗腫瘤的增強的免疫應(yīng)答。發(fā)現(xiàn)大量腫瘤類型表達IL-lα。TNFα的抗腫瘤，例如，由對腫瘤的直接細(xì)胞毒性引起，但是也可以經(jīng)由活化巨噬細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞和嗜中性粒細(xì)胞引起。相反地，在一定的條件下，IL-1和TNFα可具有致腫瘤(pro-tumor)功效。IL-1可誘導(dǎo)能促進腫瘤生長和侵襲力的因子的分泌。IL-1的生成可導(dǎo)致自泌激活、增加傾襲力。TNFα、IL-lα和IL-lβ可刺激某些腫瘤例如卵巢癌的生長(參見，例如Chen等(1998)CancerRes.583668-3676；Woods等(1998)CancerRes.583132-3141；Apte和Voronov(2002)Sem.CancerBiol.12277-290；Woodward等(2002)Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.433144-3152；Smith等(1990)CancerRes.503146-3153；Wu等(1993)CancerRes.531939-1944；Noorda等(2003)Cancer981483-1490；Bazzoni等(2001)CancerRes.611050-1057；Kamada等(2000)CancerRes.606416-6420；Kaneda等(1998)CancerRes.58290-295；Gnant等(1999)CancerRes.594668-4674；Suganuma等(1999)CancerRes.594516-4518)。OX40為一種配體，然而OX40R為其相應(yīng)的受體。OX40/OX40R介導(dǎo)的信號在抗腫瘤應(yīng)答中起作用。OX40和OX40R在浸潤腫瘤的T細(xì)胞中正向調(diào)節(jié)，但是在外周血T細(xì)胞中沒有正向調(diào)節(jié)。通過施予OX40配體觸發(fā)OX40/OX40R信號可導(dǎo)致多種腫瘤的排斥反應(yīng)。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)人類乳腺癌和黑素瘤包含OX40-表達的T細(xì)胞，并在抗腫瘤應(yīng)答中涉及OX40/OX40R(參見，例如，Morris等(2001)BreastCancerRes.Treat.6771-80；Hurwitz等(2000)Curr.Opin.Immunol.12589-596；Ladany等(2004)Clin.CancerRes.10521-530)。至于癌癥，用于治療癌癥、腫瘤、轉(zhuǎn)移和血管生成的多種調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答方法都是有效的。這些方法包括用細(xì)胞因子或抗-細(xì)胞因子抗體治療，所述細(xì)胞因子或抗-細(xì)胞因子抗體例如IL-2、IL-12、腫瘤壞死因子-α(TNFα)、IFNγ、粒巨噬系集落刺激因子(GM-CSF)和轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)。當(dāng)癌細(xì)胞可產(chǎn)生能促進其自身生長和自身存活的細(xì)胞因子時，抗細(xì)胞因子抗體可以是適宜的治療劑(參見，例如Ramirez-Montagut等(2003)Oncogene223180-3187；Braun等(2000)J.Immunol.1644025-4031；Shaw等(1998)J.Immunol.1612817-2824；Coussens和Werb(2002)Nature420860-867；Baxevanis等(2000)J.Immunol.1643902-3912；Shimizu等(1999)J.Immunol.1635211-5218；Belardelli和Ferrantini(2002)TRENDSImmunol.23201-208；Seki等(2002)J.Immunol.1683484-3492；Casares等(2003)J.Immunol.1715931-5939；Oft等(2002)NatureCellBiol.4487-494)。III.激動劑、拮抗劑和結(jié)合組合物本發(fā)明提供使用IL-27的激動劑和拮抗劑的方法。IL-27的激動劑包含例如IL-27、IL-27變體、突變蛋白質(zhì)、hyperkine或其肽模擬物、WSX-1/TCCR或gp130的激動劑抗體和編碼這些激動劑的核苷酸。IL-27的拮抗劑包括，例如，IL-27的抗體、p28或EBI3的抗體、WSX-1/TCCR或gpl30的阻斷抗體、基于WSX-1/TCCR或gpl30的亞基胞外區(qū)的可溶性受體、其肽模擬物和編碼這些拮抗劑的核苷酸。也可以使用抗-個體遺傳型(anti-idiotpic)抗體。本發(fā)明提供使用p28的激動劑和拮抗荊、p28和EBI3結(jié)合物的激動劑和拮抗劑、WSX-1/TCCR的激動劑和拮抗劑、gp130的激動劑和拮抗劑、WSX-1/TCCR和gpl30的激動劑和拮抗劑的方法。I27hyperkine包含，例如，包含p28和EBI3的多肽序列的融合蛋白，其中p28和EBI3存在于一個連續(xù)的多肽鏈中。p28和EBI3的序列可以在連續(xù)多肽鏈中是任意順序。所述融合蛋白可在一個連續(xù)的多肽鏈中包含聯(lián)結(jié)子序列，其存在于p28和EBI3和序列之間。使用VectorNTISuite用Parker曲線很容易地于發(fā)現(xiàn)增加的抗原性區(qū)域，該區(qū)域可用于抗體增殖(Informax，Inc，Bethesda，MD)。p28、EBI3、WSX-1/TCCR和gpl30的抗體為已知的(參見，例如，Pflanz等(2004)J.Immunol.1722225-2231；Larousserie等(2004)J.Pathol.202164-171；Devergne等(2001)Am.J.Pathol.1591763-1776；Autissier等(1998)Int.Immunol.101881-1889)。也涉及特異性結(jié)合p28和EBI3結(jié)合物的抗體，和特異性結(jié)合WSX-1/TCCR和gpl30結(jié)合物的抗體。也提供了對應(yīng)于WSX-1/TCCR和gpl30的胞外區(qū)的可溶性受體。成熟的人類WSX-1/rCCR的胞外域包含GenBankBC028003或NM004843的氨基酸序列的氨基酸33至514。該胞外域包括經(jīng)典的細(xì)胞因子結(jié)合域，也包含三個纖連蛋白(FN)域。本發(fā)明提供包含細(xì)胞因子結(jié)合域和無、一個或三個FN域的可溶性受體(參見，例如Hui等(2000)Cytokine12151-155)?；谶@些胞外區(qū)的受體不限于這些明確的N-末端和C-末端氨基酸，但可以稍長或稍短，例如不限于一個、兩個、三個或更多的氨基酸，只要基本上保留配體的結(jié)合性質(zhì)。也包含基于可溶性受體的融合蛋白，例如，用促進純化和穩(wěn)定性，或用于提供功能域，例如有毒的多肽?？芍苽鋯慰寺〉?、多克隆的和人源化抗體(參見，例如Sheperd和Dean(eds.)(2000)MonoclonalAntibodies，OxfordUniv.Press，NewYork，NY；Kontermann和Dubel(eds.)(2001)AntibodyEngineering，Springer-Verlag，NewYork；Harlow和Lane(1988)AntibodyAlaboratoryManual，ColdSpringHarborLaboratoryPress，ColdSpringHarbor，NY，pp.139-243；Carpenter等(2000)J.Immunol.1656205；He等(1998)J.Immunol.1601029；Tang等(1999)J.Biol.Chem.27427371-27378；Baca等(1997)J.Biol.Chem.27210678-10684；Chothia等(1989)Nature342877-883；Foote和Winter(1992)J.Mol.Biol.224487-499；授予Vasquez等的U.S.專利No.6,329,511)。也包含抗體的突變蛋白質(zhì)和變體和可溶性受體，例如聚乙二醇化或引起突變形成以除去或替換脫酰氨基天冬酰胺殘基。對抗體的增殖而言，抗原的純化不是必須的。通過DNA運載體免疫接種進行免疫接種，參見，例如Wang，etal.(1997)virology228278-284。另外，動物也可以用承受相關(guān)抗原的細(xì)胞來免疫。然后，脾細(xì)胞可以從免疫的動物中分離，脾細(xì)胞可以與骨髓瘤細(xì)胞系融合產(chǎn)生雜交瘤(Meyaard等(1997)Immunity7283-290；Wright等(2000)Immunity13233-242；Preston等(1997)Eur.J.Immunol.271911-1918)。通過功能性化試驗或生物試驗，可篩選生成的雜交瘤產(chǎn)生想要的抗體，所述試驗即，不依賴擁有純化的抗原的試驗。用細(xì)胞免疫可證實Dekker，NY；Weiner和Kotkoskie(2000)ExcipientToxicityandSafety，MarcelDekker，Inc.，NewYork，NY).選擇用于治療的給藥方式取決于某些因素，包括實體的血清或組織更新率，癥侯的水平、實體的免疫原性和在生物基質(zhì)中對靶細(xì)胞的易趨性。優(yōu)選地，給藥方式使遞送給患者的治療量最大化，其與可接受的副作用水平一致。因此，遞送的生物量部分取決于具體的實體和受治療的病癥的嚴(yán)重性。選擇適宜劑量的抗體、細(xì)胞因子和小分子的指南是已知的(參見，例如Wawrzynczak(1996)AntibodyTherapy，BiosScientificPub.Ltd，Oxfordshire，UK；Kresina(ed.)(1991)MonoclonalCytokinesandArthritis，MarcelDekker，NewYork，NY；Bach(ed.)(1993)MonoclonalAntibodiesandPeptideTherapyinAutoimnauneDiseases，MarcelDekker，NewYork，NY；Baert等(2003)NewEngl.J.Med.348601-608；Milgrom等(1999)NewEngl.J.Med.3411966-1973；Slamon等(2001)NewEngl.J.Med.344783-792；Beniaminovitz等(2000)NewEngl.J.Med.342613-619；Ghosh等(2003)NewEngl.JMed.34824-32；Lipsky等(2000)NewEngl.J.Med.3431594-1602)?？贵w、抗體片段和細(xì)胞因子可通過連續(xù)輸注或通過，例如每天、每周間隔服藥或每周1-7次提供。藥量可以通過靜脈、皮下、局部、口服、鼻腔、直腸、肌內(nèi)、腦內(nèi)或吸入提供。優(yōu)選的劑量方案為包含最大劑量或避免顯著的不想要的副作用的劑量。總共每周劑量通常為至少0.05μg/kg體重、更通常至少0.2μg/kg、最優(yōu)選通常至少0.5μg/kg、典型地至少1μg/kg、更典型地至少10μg/kg、最典型地至少100μg/kg、優(yōu)選至少0.2mg/kg、更優(yōu)選至少1.0mg/kg、最優(yōu)選至少2.0mg/kg、理想地至少10mg/kg、更理想地至少25mg/kg、最理想地至少50mg/kg(參見，例如，Yang等(2003)NewEngl.J.Med.349427-434；Herold等(2002)NewEngl.J.Med.3461692-1698；Liu，etal.(1999)J.Neurol.Neurosurg.Psych.67451-456；Portielji，etal.(20003)CancerImmunol.Immunother.52133-144)。小分子治療劑例如肽模擬物、天然產(chǎn)物或有機化學(xué)品的想要的劑量與用于抗體或多肽的量相同，以moles/kg體重計。小分子治療荊想要的血漿濃度與用于抗體的約相同，以moles/kg體重計。用于具體患者的有效量可根據(jù)多種因素而改變，所述因素例如治療的病癥、患者的整體健康狀態(tài)、給藥的方法、途徑和劑量、和副作用的嚴(yán)重性(參見，例如Maynard等(1996)AHandbookofSOPsforGoodClinicalPractice，InterpharmPress，BocaRaton，F(xiàn)L；Dent(2001)GoodLaboratoryandGoodClinicalPractice，UrchPubl.，London，UK)。典型的牲畜、試驗和研究受試者包括猴、狗、貓、大鼠、小鼠、兔、荷蘭豬、馬和人。適宜劑量由臨床醫(yī)師例如，利用參數(shù)或已知因素或影響治療的本領(lǐng)域可能因素或影響治療的預(yù)測因素來確定適宜劑量。通常，劑量開始略微少于最佳劑量，隨后按小劑量不斷增加，直到獲得相對于任意消極地副作用而言想要的最佳劑量。重要的診斷措施包括那些癥狀，例如產(chǎn)生的炎癥或炎癥細(xì)胞因子的水平。優(yōu)選地，將要使用的生物學(xué)劑量得自類似于用于治療的目標(biāo)動物的相同種類，因而，使對試劑的體液應(yīng)答降低至最低。與第二治療劑共治療或治療的方法是本領(lǐng)域已知的，所述第二治療劑例如細(xì)胞因子、類固醇、化學(xué)治療劑、抗生素或放射物(參見，例如Hardman等(eds.)(2001)GoodmanandGilman′sThePharmacologicalBasisofTherapeutics，10thed.，McGraw-Hill，NewYork，NY；Poole和Peterson(eds.)(2001)PharmacotherapeuticsforAdvancedPracticeApracticalApproach，Lippincott，Williams&Wilkins，Phila.，PA；Chabner和Longo(eds.)(2001)CancerChemotherapyandBiotherapy，Lippincott，Williams&Wilkins，Phila.，PA)。典型地，治療有效量將減少癥狀至少10％；通常至少20％；優(yōu)選至少約30％；更優(yōu)選至少40％，最優(yōu)選至少50％。給藥途徑為，例如，經(jīng)由局部或皮下施用，通過靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、腦內(nèi)、肌內(nèi)、眼內(nèi)、動脈內(nèi)、腦脊髓內(nèi)、患處內(nèi)或肺部途徑注射或輸注、通過緩釋系統(tǒng)或者移植物(參見，例如Sidmanetal.(1983)Biopolymers22547-556；Langer等(1981)J.Biomed.Mater.Res.15167-277；Langer(1982)Chem.Tech.1298-105；Epstein等(1985)Proc.Natl.Acad.Sci.USA823688-3692；Hwang等(1980)Proc.Natl.Acad.Sci.USA774030-4034；U.S.專利Nos.6,350466和6,316,024)。本發(fā)明提供治療或診斷增殖的方法。上述病癥或病變，例如，子宮、宮頸、乳腺、前列腺、睪丸、陰莖、胃腸道例如食道、口咽、胃、小腸或大腸、結(jié)腸或直腸、腎、腎細(xì)胞、膀胱、骨、骨髓、皮膚、頭或頸、皮膚、肝、膽囊、心臟、肺、胰腺、唾液腺、腎上腺、甲狀腺癌、腦、神經(jīng)節(jié)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)和周圍神經(jīng)系統(tǒng)(PNS)和免疫系統(tǒng)例如，脾臟或胸腺的癌癥。本發(fā)明提供治療例如免疫原性腫瘤、非免疫原性腫瘤、潛伏性(dormant)腫瘤、病毒誘導(dǎo)的癌癥例如上皮細(xì)胞癌、內(nèi)皮細(xì)胞癌、鱗狀上皮細(xì)胞癌、乳頭瘤病毒、腺癌、淋巴瘤、癌、黑素瘤、白血病、肉瘤、畸胎癌、化學(xué)誘導(dǎo)的癌癥、轉(zhuǎn)移和血管生成的方法。本發(fā)明也涉及對腫瘤細(xì)胞或癌細(xì)胞抗原減少的耐受性，例如通過調(diào)節(jié)調(diào)整T細(xì)胞(Treg)的活性(參見，例如Ramirez-Montagut等(2003)Oncogle223180-3187；Sawaya等(2003)NewEngl.J.Med.3491501-1509；Farrar等(1999)J.Imrnunol.1622842-2849；Le等(2001)J.Immunol.1676765-6772；Cannistra和Niloff(1996)NewEngl.J.Med.3341030-1038；Osborne(1998)NewEngl.J.Med.3391609-1618；Lynch和Chapelle(2003)NewEngl.J.Med.348919-932；Enzinger和Mayer(2003)NewEngl.J.Med.3492241-2252；Forastiere等(2001)NewEngl.J.Med.3451890-1900；Izbicki等(1997)NewEngl.J.Med.3371188-1194；Holland等(eds.)(1996)CancerMedicineEncyclopediaofCancer，4thed.，AcademicPress，SanDiego，CA)。本發(fā)明提供用IL-27的激動劑或拮抗劑和用至少一種另外的治療劑或診斷劑治療增殖疾病、癌癥、腫瘤或癌前期的病癥例如發(fā)育異常的方法。一種或多種另外的治療劑或診斷劑選自例如，細(xì)胞因子或細(xì)胞因子拮抗劑，例如干擾素-α或抗表皮生長因子受體、多柔比星、表柔比星、抗葉酸劑例如甲氨蝶呤或氟尿嘧啶、依立替康、環(huán)磷酰胺放射療法、激素或抗激素治療(例如雄激素、雌激素、抗雌激素、氟他胺或己烯雌酚)、外科手術(shù)、他莫昔芬、異環(huán)磷酰胺、二溴衛(wèi)矛醇、烷化劑(例如，美法侖或順鉑)、依托泊苷、長春瑞濱、長春堿、長春酰胺、糖皮質(zhì)激素、組胺受體拮抗劑、血管生成抑制劑、放射線、放射敏化劑、蒽環(huán)類抗生素、長春花生物堿、紫杉烷例如紫杉醇和多西紫杉醇、細(xì)胞周期抑制劑例如周期素依賴性蛋白激酶抑制劑、單克隆抗體、單克隆抗體和毒素結(jié)合物、T細(xì)胞佐劑、骨髓移植或抗原呈遞細(xì)胞例如樹突細(xì)胞治療。也可提供疫苗，例如作為可溶蛋白或作為編碼蛋白質(zhì)的核苷酸(參見，例如，Le等(2001)J.Immunol.1676765-6772；Greco和Zellefsky(eds.)(2000)RadiotherapyofProstateCancer，HarwoodAcademic，Amsterdam；Shapiro和Recht(2001)NewEngt.J.Med.3441997-2008；Hortobagyi(1998)NewEngl.J.Med.339974-984；Catalona(1994)NewEngl.JMed.331996-1004；Naylor和Hadden(2003)Int.Immunopharmacol.31205-1215；TheInt.AdjuvantLungCancerTrialCollaborativeGroup(2004)NewEngl.J.Med.350351-360；Slamon等(2001)NewEngl.J.Med.344783-792；Kudelka等(1998)NewEngl.J.Med.338991-992；vanNetten等(1996)NewEngl.J.Med.334920-921)。V.藥盒和診斷劑提供基于抗體、核苷酸雜化和PCR方法而用于炎癥病變的診斷方法，所述炎癥病變例如銀屑病、克隆(氏)病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、哮喘或變態(tài)反應(yīng)、動脈粥樣硬化和癌癥。本發(fā)明提供IL-27的多肽、其片段、IL-27的核苷酸和其片段的多肽在例如用于包含流行性感冒A的病毒病變和的診斷和呼吸道和粘膜組織的病變的診斷中的診斷藥盒。也提供用于檢測IL-27和其代謝產(chǎn)物和分解產(chǎn)物的結(jié)合組合物，包含抗體或抗體片段。典型地，所述藥盒含有包含IL-27多肽或其抗原片段、其結(jié)合組合物的隔室或核苷酸，例如核苷酸探針、引物或分子或分子導(dǎo)引(molecularbeacon)(參見，例如，Rajendran等(2003)NueleicAcidsRes.315700-5713；Cockerill(2003)Arch.Pathol.Lab.Med.1271112-1120；Zammatteo等(2002)Biotech.Aranu.Rev.885-101；Klein(2002)TrendsMol.Med.8257-260)。一種診斷方法可包含來自患者例如測試受試者的樣品與結(jié)合組合物接觸，結(jié)合組合物特別地結(jié)合IL-27的多肽或核苷酸或IL-27受體。該方法還包含使來自對照受試者、正常狀態(tài)受試者或來自測試受試者的正常組織或體液的樣品與結(jié)合組合物接觸。而且，該方法另外可包含比較特定結(jié)合到測試受試者的組合物與特定結(jié)合到正常狀態(tài)受試者、對照受試者或來自測試受試者的正常組織或體液的結(jié)合物?？杀容^測試樣品或測試受試者的表達或活性與來自對照樣品或?qū)φ帐茉囌叩谋磉_或活性。對照樣品可包含，例如患有免疫病變的患者中非感染樣品或非發(fā)炎組織?？商峁﹣碜詫φ帐茉囌呋?qū)φ諛悠返谋磉_或活性作為預(yù)定值，例如從對照受試者的統(tǒng)計學(xué)適宜組獲得。該藥盒包含，例如試劑和隔室、試劑和使用說明或含有試劑的隔室和使用說明。所述試劑可以包含IL-27的激動劑或拮抗劑，或其抗原片段、結(jié)合組合物、有義方向核苷酸或反義方向的核苷酸。測定測試化合物的藥盒可包含對照化合物、標(biāo)記化合物，和從聯(lián)合的標(biāo)記化合物中分離游離標(biāo)記化合物的方法，所述化合物例如從生物學(xué)樣品獲得或從化學(xué)庫中獲得。對照化合物可包含IL-27或IL-27受體多肽的片段，或編碼IL-27或IL-27受體的核苷酸。所述片段包含零個、一個、兩個或更多的抗原片段?！皹?biāo)記”的組合物直接或間接通過分光鏡法、光化學(xué)法、生化法、免疫化學(xué)法、同位素法或化學(xué)方法檢測。例如，有用的標(biāo)記物包括32P、33P、35S、14C、3H、125I、穩(wěn)定的同位素、熒光染料、高電子密度試劑、酶作用物、附加表位或酶，例如用于酶連免疫測定或fluorettes(Rozinov和Nolan(1998)Chem.BioL5713-728)?？墒褂蒙镂镔|(zhì)進行診斷測定，所述生物物質(zhì)例如活細(xì)胞、細(xì)胞提取物、溶胞產(chǎn)物、固定細(xì)胞、細(xì)胞培養(yǎng)物、體液或法醫(yī)樣品。用于診斷或藥盒目的的共軛抗體包含偶合到染料、同位素、酶類和金屬偶合的抗體，參見，例如LeDoussal等(1991)NewEngl.J.Med.146169-175；Gibellini，etaL(1998)J.ImmunoL1603891-3898；Hsing和Bishop(1999)NewEngt.J.Med.1622804-2811；Everts等(2002)NewEngl.J.Med.168883-889。存在各種測試方式，例如放射免疫測定法(RIA)ELISA和切片試驗(labonachip)(U.S.專利Nos.6,176,962和6,517,234)。基因表達數(shù)據(jù)可用于診斷和治療疾病和病理狀態(tài)的的工具(參見，例如LiandWong(2001)GenoineInformatics123-13；Lockhart等(1996)NatureBiotechizol.141675-1680；Homey等(2000)J.Immunol.1643465-3470；Debets等(2000)J.Immunol.1654950-4956)。VI.用途本發(fā)明提供使用IL-27和IL-27受體的激動劑和拮抗劑用于診斷、預(yù)防和治療免疫和炎癥病變的方法，所述免疫和炎癥病變包含皮膚病、胃腸道病、關(guān)節(jié)病、血管系統(tǒng)病例如銀屑病、克隆(氏)病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、哮喘、變態(tài)反應(yīng)、COPD、氣道高反應(yīng)性、和動脈粥樣硬化。本發(fā)明也包含治療或增強癌癥例如乳腺癌和黑素瘤期間不適當(dāng)?shù)幕虿蛔愕拿庖邞?yīng)答的方法。提供給藥IL-27激動劑或拮抗劑來調(diào)節(jié)例如銀屑病、克隆(氏)病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、哮喘、變態(tài)反應(yīng)、動脈粥樣硬化和癌癥中的免疫應(yīng)答或?qū)?xì)胞應(yīng)答的方法，其中給藥為給予例如細(xì)胞、體液、組織、器官、動物患者或人類患者。許多用于紀(jì)錄炎癥病變例如銀屑病、克隆(氏)病和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的生物標(biāo)記物的方法是已知的(參見，例如Bresnihan(2003)ArthritisRes.Ther.5271-278；Barnero和Delmas(2003)Curr.Opin.Rheumatol.15641-646；Gionchetti等(2003)Dig.Dis.21157-167；Wiik(2002)AutoilninuneRev.167-72；Sostegni等(2003)AlimentPharmacol.Ther.17(Suppl.2)11-17)。生物標(biāo)記物和用于紀(jì)錄癌癥的方法也已已知(參見，例如，Alison(ed.)(2001)TheCancerHandbook，Grove′sDictionaries，Inc.，St.Louis，MO；Oldham(ed.)(1998)PrinciplesofCancerBiotherapy，3rd.ed.，KluwerAcademicPubl.，Hingham，MA；Thompson等(eds.)(2001)TextbookofMelanoma，MartinDunitz，Ltd.，London，UK；Devita等(eds.)(2001)CancerPrinciplesandPfacticeofOncology，6thed.，Lippincott，Phila，PA；Holland等(eds.)(2000)Holland-FreiCancerMedicine，BCDecker，Phila.，PA；Garrett和Sell(eds.)(1995)CellularCancerMarkers，HumanaPress，Totowa，NJ；MacKie(1996)SkinCancer，2nded.，Mosby，St.Louis；Moertel(1994)NewEngl.JMed.3301136-1142；Engleman(2003)Semin.Oncol.30(3Suppl.8)23-29；Mohr等(2003)Onkologie26227-233)。參照下述的實施例可最好地理解本發(fā)明的廣闊的范圍，其并不意味著將本發(fā)明限制于具體的實施方案.實施例I.通用方法在生物化學(xué)和分子生物學(xué)中的標(biāo)準(zhǔn)方法已經(jīng)公開(參見，例如Maniatis等(1982)MolecularCloning，ALaboratoryManual，ColdSpringHarborLaboratoryPress，ColdSpringHarbor，NY；Sambrook和Russell(2001)MolecularCloning，3rded.，ColdSpringHarborLaboratoryPress，ColdSpringHarbor，NY；Wu(1993)RecombinantDNA，Vol.217，AcademicPress，SanDiego，CA)。標(biāo)準(zhǔn)方法也描述于Ausbel等(2001)CurrentProtocolsinMolecularBiology，Vols.1-4，JohnWileyandSons，Inc.NewYork，NY，其中描述了在細(xì)菌細(xì)胞和DNA誘變中的克隆(Vol.1)，在哺乳動物細(xì)胞和酵母中的克隆(Vol.2)，配糖體和蛋白表達(Vol.3)，和生物信息學(xué)(Vol.4)。用于蛋白純化的包含免疫沉淀作用、層析、電泳、離心分離和結(jié)晶作用的方法已經(jīng)公開(Coligan等(2000)CurrentProtocolsinProteinScience，Vol.1，JohnWileyandSons，Inc.，NewYork).化學(xué)分析、化學(xué)修飾、翻譯后修飾、融合蛋白的生成、蛋白質(zhì)的糖基化已經(jīng)公開(參見，例如Coligan等(2000)CurrentProtocolsinProteinScience，Vol.2，JohnWileyandSons，Inc.，NewYork；Ausubel等(2001)CurrentProtocolsinMolecularBiology，Vol.3，JohnWileyandSons，Inc.，NY，NY，pp.16.0.5-16.22.17；Sigma-Aldrich，Co.(2001)ProductsforLifeScienceResearch，St.Louis，MO；pp.45-89；AmershamPharmaciaBiotech(2001)BioDirectory，Piscataway，N.J.，pp.384-391)。生成、純化和分裂多克隆的和單克隆的抗體的方法已經(jīng)公開(Coligan等(2001)CurrentProtcolsinImmunology，Vol.1，JohnWileyandSons，Inc.，NewYork；Harlow和Lane(1999)UsingAntibody，ColdSpringHarborLaboratoryPress，ColdSpringHarbor，NY；HarlowandLane，supra).用于描繪配體/受體相互作用的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)是已知的(參見，例如Coligan等(2001)CurrentProtcolsinImmunology，Vol.4，JohnWiley，Inc.，NewYork).用于包含熒光激活細(xì)胞分選術(shù)(FACS)的流式細(xì)胞儀的方法是已知的(參見，例如Owebs等(1994)FlowCytometryPrinciplesForClinicalLaboratoryPractice，JohnWileyandSons，Hoboken，NJ；Givan(2001)FlowCytometry，2nded.；Wiley-Liss，Hoboken，NJ；Shapiro(2003)PracticalFlowCytometry，JohnWileyandSons，Hoboken，NJ).適宜用于修飾核苷酸的熒光試劑是已知的，所述核苷酸包含核苷酸引物和探針、多肽和抗體，其用于作為例如診斷試劑(參見，例如MolecularProbes(2003)Catalogue，MolecularProbes，Inc.，Eugene，OR；Sigma-Aldrich(2003)Catalogue，St.Louis，MO)。免疫系統(tǒng)的組織學(xué)標(biāo)準(zhǔn)方法是已知的(參見，例如，Muller-Harmelink(ed.)(1986)HumanThymusHistopathologyandPathology，SpringerVerlag，NewYork，NY；Hiatt等(2000)ColorAtlasofHistology，Lippincott，Williams，andWilkins，Phila，PA；Louis等(2002)BasicHistologyTextandAtlas，McGraw-Hill，NewYork，NY)。使用動物模型，例如基因剔除小鼠的方法，和用于測試、評價和篩選診斷劑、治療劑和藥物試劑的方法是已知的(參見，例如，Car和Eng(2001)Vet.Pathol.3820-30；Kenyon等(2003)Toxicol.Appl.Pharmacol.18690-100；Deurloo等(2001)Am.J.Respir.CellMol.Biol.25751-760；Zuberi等(2000)J.Immunol.1642667-2673；Temelkovski等(1998)Thorax53849-856；Horrocks等(2003)Curr.Opin.DrugDiscov.Devel.6570-575；Johnston等(2002)DrugDiscov.Today7353-363)。用于確定例如抗原片段、前導(dǎo)序列、蛋白質(zhì)折疊、功能性領(lǐng)域、糖基化位點和序列對比的軟件包和數(shù)據(jù)庫是已知的(參見，例如GenBank，VectorNTISuite(Informax，Inc，Bethesda，MD)；GCGWisconsinPackage(Accelrys，Inc.，SanDiego，CA)；DeCypher(TimeLogicCorp.，CrystalBay，Nevada)；Menne等(2000)Bioinformatics16741-742；Menne等(2000)BioinformaticsApplicatiorsNote16741-742；Wren等(2002)Comput.MethodsPrograms.Biomed.68177-181；vonHeijne(1983)Eur.J.Biochem.13317-21；vonHeijne(1986)NucleicAcidsRes.144683-4690)。II.IL-27和IL-27受體的亞基的表達IL-27的亞基，即p28亞基和EBI3亞基，和IL-27受體的亞基，即WSX-1/TCCR亞基和gpl30亞基的表達可通過Taqman實時PCR分析來確定(表1)。結(jié)果證實增強的p28、EBI3和WSX-1/TCCR的表達與銀屑病的關(guān)系；增強的EBI3、WSX-1/TCCR和gpl30的表達與克隆(氏)病的關(guān)系；和增強的EBI3和WSX/TCCR的表達與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的關(guān)系。也表明了增強的表達與乳腺癌、黑素瘤、結(jié)腸癌和動脈粥樣硬化的關(guān)系(表1)。表1.IL-27亞基的表達和IL-27亞基，用Taqman實時PCR分析來分析，相對于泛激素(1.0)的表達做比較。續(xù)表1用能刺激大量基因表達的IL-27來處理來自臍帶血的原發(fā)的人肥大細(xì)胞(表2)。IL-27引起大量與免疫病變例如銀屑病、關(guān)節(jié)炎、克隆(氏)病、哮喘、變態(tài)反應(yīng)和氣道高反應(yīng)性有關(guān)基因的表達(表2)。表2實時PCR確定在人類肥大細(xì)胞基因表達中IL-27-介導(dǎo)的改變″1.0″的表達改變指沒有可檢測到改變本發(fā)明提供治療銀屑病和其它皮膚病變例如接觸過敏反應(yīng)和特應(yīng)性皮炎的方法。銀屑病與TNFα、IL-lβ和TEASRL(配體)、TEASR(受體)的表達增加有關(guān)(表3)?？?TNFα抗體治療用于銀屑病的治療(參見，例如Girolomoni等(2002)Curr.Opin.InvestitDrugs.31590-1595；Zabraniecki和Fournie(2001)JointBoneSpine68106-108；Victor和Gottlieb(2002)J.DrugsDermatol.1264-275；Reich等(2002)JlnvestDermatol.118155-163)。TEASRL(a.k.a.GITRL)是包含TEASRL和TEASR的信號通路的配體，而TEASR(a.k.a.GITR)是其受體。TEASR也稱為例如糖皮質(zhì)激素-誘導(dǎo)的腫瘤壞死因子受體(GITR)和TNFRSF18。TEASR是腫瘤壞死因子受體超家族的一員。TEASR的激動劑通過直接刺激CD4+T細(xì)胞或CD8+T細(xì)胞，或通過阻斷由T調(diào)節(jié)細(xì)胞(Treg)介導(dǎo)的基因恢復(fù)導(dǎo)致CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞的增殖。所述Treg可以是CD4+CD25+調(diào)節(jié)T細(xì)胞(參見，例如，Shimizu等(2002)NatureImmunol3135-142；McHugh等(2002)Immunity16311-323)。鑒于fIL-27刺激TEASRL的表達的能力(表2)，和與銀屑病中增加的TEASRL和TEASR表達相關(guān)，本發(fā)明提供用于治療銀屑病的IL-27的拮抗劑。表3.Taqman分析TEASRL(配體)和TEASR(受體)的實時PCR表達本發(fā)明提供治療關(guān)節(jié)炎和銀屑病關(guān)節(jié)炎的方法。TNFα、RANKL和IL-lα，其在IL-27處理中表達增加的水平(表2)，刺激破骨細(xì)胞的生成，其為可消化和降解骨細(xì)胞。RANKL為核因子κB配體的受體激動劑。RANKL表達在患有銀屑病關(guān)節(jié)炎的人類關(guān)節(jié)中增加。IL-lα和IL-lβ都在關(guān)節(jié)炎的病理學(xué)中起作用。本發(fā)明提供通過給藥IL-27的拮抗劑來治療關(guān)節(jié)炎例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎和銀屑病關(guān)節(jié)炎的方法，其中所述拮抗劑期望減少TNFα和RANKL的表達(參見，例如Reimold(2002)Curr.DrugTargetsInflamm.Allergy1377-392；Girolomoni等(2002)Curr.Opina.Investig.Drugs31590-1595；Ritchlin等(2003)J.Clin.Invest.111821-831；Nakashima等(2003)Curr.Opin.Rheumatol.15280-287；Williams等(2000)J.Immunol.1657240-7245；Arend(2001)Serein.ArthrittsRheum.30(5Suppl.2)1-6；Arend(2002)CytokineGrowthFactorRevs.13323-340)。本發(fā)明提供例如通過使用IL-27的拮抗劑來抑制OX40和/或TNFα的生成來治療克隆(氏)病的方法(表2)。OX40的抗體改善了克隆(氏)病的動物模型，同時在患有克隆(氏)病的患者的腸中發(fā)現(xiàn)增加了OX40和OX40配體(OX40L)的表達(參見，例如，Totsuka等(2003)Am.J.Physiol.Gastrointest.LiverPhysiol.284G595-G603；Souza等(1999)Gut45856-863；Stuber等(2000)EuropeanJ.Clin.Invest.30594-599)。T′α有助于克隆(氏)病，其作為一種抗-TNFα抗體用于治療這種病變(參見，例如，Reimold(2002)Curr.DrugTargetsInflamm.Allergy1377-392)。本發(fā)明提供治療哮喘、變態(tài)反應(yīng)和其它肺病的方法。TNFα、IL-lα、IL-lβ和OX40已顯示對哮喘、變態(tài)反應(yīng)、氣道高反應(yīng)性和COPD的病理學(xué)起作用。例如，OX40L缺乏的小鼠或用抗OX40L抗體處理的小鼠抵抗對模型變態(tài)原的病理反應(yīng)。IL-1缺乏的小鼠也抵抗誘導(dǎo)氣道高反應(yīng)性應(yīng)答的作用。TNFα在患有支氣管高反應(yīng)性和COPD的患者中增加(參見，例如，Nakae等(2003)Int.Immunol.15483-490；Halasz等(2002)Respir.Med.96262-267；Chung(2001)Eur.Respir.J.Suppl.3450s-59s；Hoshino等(2003)Eur.J.Immunol.333861-869)。本發(fā)明提供給藥IL-27的激動劑或拮抗劑來治療癌癥的方法。已發(fā)現(xiàn)用IL-27治療可刺激細(xì)胞因子或其它與抗腫瘤應(yīng)答相關(guān)的信號分子的表達，所述其它信號分子例如TNFα、IL-lα、IL-lβ和OX40。表達增加的p28、EBI3或WSX-1/TCCR的腫瘤實例表明對腫瘤適宜的免疫應(yīng)答涉及IL-27-介導(dǎo)的信號，并表明自然存在的抗腫瘤應(yīng)答可通過給藥IL-27激動劑來增強。表達增加的p28、EBI3或WSX-1/TCCR的腫瘤實例包括乳腺癌\黑素瘤和結(jié)腸癌(表1)。在表2中的其它基因是已知的。APRIL(一種增殖性誘導(dǎo)配體)和BLAS是腫瘤壞死因子(TNF)配體家族的一員。淋巴細(xì)胞毒素-α和β(LTα；LTβ)為在淋巴結(jié)發(fā)育中使用的細(xì)胞因子(參見，例如，Varfolomeev等(2004)Mol.CellularBiol.24997-1006；Novak等(2002)Blood1002973-2979；Nardelli等(2002)Leuk.Lymphoma431367-1373；Shakhov等(2004)Eur.J.Immunol.34494-503；Kather等(2003)Immunology108338-345)。III.經(jīng)由WSX-1/TCCR和gpl30調(diào)節(jié)IL-27信號。多種細(xì)胞因子受體蛋白與WSX-1/TCCR配對。只有WSX-1/TCCR和gpl30的組合支持的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)對IL-27有響應(yīng)。受體亞基單獨不足以支持信號轉(zhuǎn)導(dǎo)?？?人類gpl30抗體(抗hgpl30抗體)阻斷人類NK細(xì)胞系中IL-27-介導(dǎo)的信號，并阻斷自身CD4+T細(xì)胞的IL-27-介導(dǎo)的增殖。用于WSX-1/TCCR亞基的候選配偶體在大鼠pre-BBa/F3細(xì)胞中表達，并用于評價STAT1和STAT3的磷酸化。母體Ba/F3細(xì)胞系表達WSX-1/TCCR(相對于泛激素的表達為約100，000)，但是表達相對少的gpl30(相對于泛激素的表達為約3)。用gpl30轉(zhuǎn)染的母體Ba/F3細(xì)胞和Ba/F3細(xì)胞可用IL-3、IL-6/sIL-6Rα或IL-27來刺激，并且其用于評價STAT1磷酸化。作為對IL-27的相應(yīng)，STAT1僅用gpl30轉(zhuǎn)導(dǎo)來磷酸化(表4)。STAT3對各種刺激的反應(yīng)類似于STAT1對各種刺激的反應(yīng)(沒有標(biāo)出)。因此，在天然表達WSX-1/TCCR的細(xì)胞中，IL-27介導(dǎo)的細(xì)胞信號由gpl30支持(表4)。表4.在用gpl30轉(zhuǎn)染或未轉(zhuǎn)染的Ba/F3細(xì)胞中STAT1的磷酸化。STATI-P用特定的抗體測定。小鼠成纖維細(xì)胞系NIH3T3表達gpl30，通過定量PCR分析確定，gpl30的表達遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于WSX-1/TCCR的表達，即高于約1000倍(表5)。NIH3T3細(xì)胞用編碼flag-標(biāo)記的小鼠WSX-1/TCCR(mWSX-1/TCCR)的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體(一種對照載體)轉(zhuǎn)染，或根本不用轉(zhuǎn)染。僅用WSX-1/TCCR轉(zhuǎn)染的細(xì)胞響應(yīng)通過STAT1磷酸化的IL-27的應(yīng)答(表5)。也檢測STAT3的磷酸化，反應(yīng)導(dǎo)致其與STATl的磷酸化類似，區(qū)別在于用IL-6/sIL-6Rα處理的STAT3磷酸化比用IL-27處理的STAT3磷酸化多一些。因此，在天然表達WSX-1/TCCR的細(xì)胞中，IL-27介導(dǎo)的細(xì)胞信號由gpl30支持(表5)。表5.在轉(zhuǎn)染的NIH3T3細(xì)胞或沒有用flag-標(biāo)記mWSX-1轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中STAT1的磷酸化。ND表示沒有監(jiān)測到。STATl-P用特定的抗體測定。發(fā)現(xiàn)抗人類gpl30抗體(抗-hgpl30抗體)可阻斷IL-27的短期或長期應(yīng)答，其再一次證實，IL-27信號穿過gpl30(表6)。短期應(yīng)答由人類白血病的自然殺傷細(xì)胞(NKL細(xì)胞)確定，自然殺傷細(xì)胞為通過STAT1和STAT3的酪氨酸磷酸化對IL-27應(yīng)答的細(xì)胞系(Hibbert等(2003)J.InterferonCytokineRes.23513-522)。細(xì)胞用或不用抗-hgpl30抗體(抗體B-T2)培養(yǎng)后，再用IL-27處理(Wijdenes等(1995)Eur.J.Immunol.253474-3481).用抗-hgpl30抗體或同型對照單克隆抗體預(yù)培養(yǎng)NKL細(xì)胞，使用的抗體為25,500，和10,000ng/ml(表6)。用飽和量的IL-27刺激細(xì)胞，或者無刺激。對IL-27的應(yīng)答，和對抗-gpl30的抑制，證實IL-27信號調(diào)節(jié)gpl30，而gpl30-調(diào)節(jié)的信號引起STAT1和STAT2的磷酸化(表6)。分離短期研究證實IL-27刺激原發(fā)人類單核細(xì)胞磷酸化STAT1和STAT3(數(shù)據(jù)沒有標(biāo)示)，然而，包括在t＝2h、6h和24h的時間點的時程研究表明僅僅在t＝24hIL-lβ、TNFα何IL-18的表達有可測量的增加(數(shù)據(jù)沒有標(biāo)示)。作為對IL-27的應(yīng)答，單核細(xì)胞生成IL-27，且表達IL-27的兩個亞基受體表明單核細(xì)胞可用于自刺激的自分泌通路。表6.抗gpl30抗體防止由NKL細(xì)胞的1L-27介導(dǎo)的細(xì)胞信號。ND表示STAT的磷酸化不能被檢測到。用IL-27刺激10-20分鐘。IL-27的長期作用和用這些長期作用的gpl30的依賴由自然人類T細(xì)胞的增殖試驗來確定(表7)。在試驗中使用之前，用FACS純化T細(xì)胞。加入胸苷來測定增殖。T細(xì)胞接受IL-27(飽和水平)、激動(agonistic)抗-CD3受體、激動抗-CD28抗體和中和的抗IL-2抗體，如上所述。用抗-GPl30抗體或用對照抗體滴定細(xì)胞。加入[3H]胸苷來測定細(xì)胞增殖。氚化了的胸苷的最大加入量為約21,000cpm。發(fā)現(xiàn)最大半數(shù)抑制量為約1.0ng/ml濃度的抗gpl30抗體，然而發(fā)現(xiàn)最大抑制量為(7,000cpm)約30ng/ml抗-gpl30抗體(表7)。當(dāng)僅僅用培養(yǎng)基補充細(xì)胞時，加入的氘為零，即沒有監(jiān)測到。表7.IL-27-依賴性T細(xì)胞增殖。(--)表示沒有加入添加劑IV.材料和方法重組體hIL-6/shIL-6Rα、hIL-2和mIL-3來自R&DSystems，Inc.(Minneapolis，MN)。重組體人類和小鼠IL-27融合蛋白是市售的(Pflanz等，supra)?？?hgpl30單克隆抗體B-T2來自InstituteofBiochemistry，RWTHAachen，Germany。抗-hWSX-1多克隆抗體來自U.S.Biological，Swampscott，MA.STAT1和STAT3的酪氨酸磷酸化形式的抗體來自CellSignaling，Beverly，MA，而可檢測的全部STAT1或STAT3的抗體來自TransductionLabs，Lexington，KY，andSantaCruzBiologicals，SantaCruz，CA.在分別存在mIL-3(5ng/ml)或hIL-2(5ng/ml)的RPMI/10％胎牛血清(FCS)中培養(yǎng)小鼠骨髓前體BaF3細(xì)胞和人類白血病NK細(xì)胞系(NKL)。在DMEM/10％FCS中培養(yǎng)小鼠成纖維細(xì)胞系NIH3T3.制備并培養(yǎng)天然的人類原發(fā)的CD4+T細(xì)胞，如所述的(Pflanz等，supra)。由Ficoll/Hypaque離心分離從單核粒細(xì)胞中新鮮分離的人類臍帶血。在添加了2％人類血清、100ng/ml干細(xì)胞因子和50ng/mlIL-6的Yseel′s培養(yǎng)基中培養(yǎng)臍帶血單核細(xì)胞(GeminiBioproducts，Woodland，CA)。保養(yǎng)培養(yǎng)基約7-8周，期間每周更換培養(yǎng)基。在第八周，給培養(yǎng)基中補充1ng/ml的IL-4和10微克/ml的人類IgE。在9-10周，收集培養(yǎng)基，通過磁珠排除CD15、CD14、和CD11lb陽性細(xì)胞而除去殘余的髓樣細(xì)胞(MiltenyiBiotec，Inc.，Auburn，CA)。用FACS分析檢驗肥大細(xì)胞純度(CD117+，F(xiàn)cepsilonRI+)為大于97％。通過Percoll密度梯度離心分離人類白血球?qū)?buttycoat)得到原發(fā)的人單核細(xì)胞。STAT酪氨酸磷酸化測定如下。通常，在DMEM/2％FCS中使細(xì)胞受餓12小時，然后旋轉(zhuǎn)和再懸浮于2.5×106細(xì)胞/ml。在37℃，用各個細(xì)胞因子以飽和濃度(100ng/ml)刺激細(xì)胞15分鐘，然后在冰上冷凍5分鐘，旋轉(zhuǎn)和再懸浮于溶胞的緩沖液中(2xPBS，添加2mMEDTA、0.875％Brij97(Sigma，St.Louis，MO)、0.125％NP40(Sigma)、1mM釩酸鈉、1mM氟化鈉、完全的蛋白酶抑制劑合劑(RocheAppliedScience，Indianapolis，IN)和3mMPefabloc(RocheAppliedScience)。離心溶胞產(chǎn)物，用SDS-PAGE分析上清液，然后對上述描述的抗體進行蛋白質(zhì)斑跡法分析。再用IL-27刺激之前，用各個抗體培養(yǎng)NKL細(xì)胞20分鐘。逆轉(zhuǎn)錄病毒感染如下。如所公開的方式用編碼各個誘導(dǎo)的受體的逆轉(zhuǎn)錄病毒重構(gòu)物對Ba/F3和NIH3T3細(xì)胞進行感染(Kitamura(1998)Int.J.Hemato.67351-359)。簡言之，通過標(biāo)準(zhǔn)的PCR技術(shù)，使編碼WSX-1的成熟部分和gpl30的全部編碼框的DNA從cDNA庫中擴增(Clontech，MountainView，CA)。gpl30擴增子克隆進入逆轉(zhuǎn)錄病毒載體pMX，WSX-1擴增子克隆CD8引導(dǎo)肽序列的3-引子和flag-tag序列克隆入載體pMX。用這些重構(gòu)的轉(zhuǎn)染效率為大于80％。對原發(fā)CD4+T細(xì)胞的增殖測定如下。得到FACS分選的CD3+CD45RA細(xì)胞，用飽和量的IL-27進行增殖試驗，如所述的(Pflanz等，supra)。將抗體滴入測定中。使用Sybrgreenprotocol分析cDNA庫的mRNA表達(Halfon等(1998)J.Biol.Chem.27316400-16408；Bolin等(1997)J.Neurosci.175493-5502)。使用RNAeasy試劑盒由Ba/F3或NIH3T3細(xì)胞制備mRNA(Qiagen，Valencia，CA)。使用下述的正向和反向PCR引發(fā)劑。用于人gpl30的引發(fā)劑得自GenBankE06613的基質(zhì)2174-2194(正向)和基質(zhì)2276-2295(反向)。小鼠gpl30的引發(fā)劑來自GenBankX62646的基質(zhì)1943-1965(正向)和2065-2085(反向)。用于小鼠WSX-1/TCCR的引發(fā)劑來自GenBankNM-016671的基質(zhì)1054-1074(正向)和1101-1121(反向)。用于人類WSX/-/TCCR的引發(fā)劑來自GenBankBC028003的基質(zhì)1665-1684(正向引發(fā)劑)和基質(zhì)1726-1746(反向引發(fā)劑)。本文引用的所有引用文獻以其與每個出版物、專利申請或?qū)＠囟ê酮毩⒌刂赋霭ㄋ懈綀D和圖形引入作為參考的同樣的范圍引入本文作為參考。對本領(lǐng)域技術(shù)人員來顯而易見的是可做出本發(fā)明的多種修改和改變以適應(yīng)具體條件、材料、物質(zhì)的組合物、方法、方法步驟或步驟以保護本發(fā)明的目的、精神和范圍。在不背離本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)，所有這修改都意味著包括在其附加的權(quán)利要求的范圍內(nèi)。本文描述的具體的實施方案僅僅依靠具體實施例提供，而本發(fā)明由附加的權(quán)利要求的范圍限定，連同這些權(quán)利要求授權(quán)的等同物的全部范圍；本發(fā)明也并不受限于已經(jīng)由本文中的實施例列出的具體的實施方案。權(quán)利要求1.調(diào)節(jié)免疫病變或病癥的方法，包括給藥有效量的p28、EBI3或WSX/TCCR的激動劑或拮抗劑，其中所述病變或病癥包含a)皮膚的炎性病癥；b)關(guān)節(jié)炎；c)克隆(氏)病；d)氣道高反應(yīng)性或炎癥；e)動脈粥樣硬化；或f)非EB病毒引起的癌癥或腫瘤。2.權(quán)利要求1的方法，其中拮抗劑抑制或阻止IL-27結(jié)合到異二聚體受體上，所述受體包括WSX-1/TCCR和gpl30的結(jié)合物。3.權(quán)利要求1的方法，其中皮膚的炎性病癥包含a)銀屑?。换騜)特應(yīng)性皮炎。4.權(quán)利要求1的方法，其中關(guān)節(jié)炎包含a)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；b)骨關(guān)節(jié)炎；或c)銀屑病關(guān)節(jié)炎。5.權(quán)利要求1的方法，其中氣道高反應(yīng)性或炎性病變包含a)哮喘；b)變態(tài)反應(yīng)；或c)慢性阻塞性肺疾患(COPD)。6.權(quán)利要求1的方法，其中癌癥或腫瘤包含a)乳腺癌；b)結(jié)腸癌；或c)黑素瘤。7.權(quán)利要求1的方法，其中激動劑抑制或改善包括癌癥或腫瘤的病變。8.權(quán)利要求6的方法，其中癌癥或腫瘤表達了與正常對照下述組織相比可見的增加量的a)p28；b)EBI3；或c)或WSX-1/TCCR。9.權(quán)利要求1的方法，其中拮抗劑改善了a)皮膚的炎性病癥；b)關(guān)節(jié)炎；c)克隆(氏)??；d)氣道高反應(yīng)性或氣道炎癥；或e)動脈粥樣硬化。10.權(quán)利要求1的方法，其中激動劑包含a)IL-27；b)IL-27hyperkine；c)p28；d)EBI3；或e)核苷酸。11.權(quán)利要求11的方法，其中核苷酸編碼a)IL-27hyperkine；b)p28；c)EBI3；d)第一p28多肽鏈和第二EBI3多肽鏈；e)WSX-1/TCCR；或f)WSX/l/TCCR和gpl30。12.權(quán)利要求1的方法，其中拮抗劑包含來自抗體的結(jié)合組合物，其特別定地結(jié)合a)IL-27；b)p28；c)EBI3；d)WSX-1/TCCR；或e)gpl30和WSX-1/TCCR的結(jié)合物。13.權(quán)利要求12的方法，其中來自抗體的結(jié)合組合物包含a)多克隆抗體；b)單克隆抗體；c)人源化抗體，或其片段；d)Fab、Fv或F(ab′)2片段；e)抗體肽模擬物；或f)可見指示物。14.權(quán)利要求1的方法，其中拮抗劑包含a)衍生自WSX-1/TCCR的可溶性受體；b)小分子；或c)核苷酸。15.權(quán)利要求14的方法，其中核苷酸特定地與編碼如下物質(zhì)的多核苷酸雜交a)p28；b)EBI3；或c)WSX-1/TCCR。16.權(quán)利要求15的方法，其中核苷酸包含a)反義核苷酸；或b)小干擾RNA(siRNA)。17.權(quán)利要求1的方法，其中給藥激動劑增加了下述物質(zhì)的表達a)RANKL；b)TNFα；c)TEASRL；d)IL-1α或β；e)OX40；或f)APRIL。18.權(quán)利要求1的方法，其中給藥拮抗劑降低了下述物質(zhì)的表達a)RANKL；b)TNFα；c)TEASRL；d)IL-1α或β；e)OX40；或f)APRIL。19.診斷權(quán)利要求1的免疫病變或病癥的方法，包含使結(jié)合組合物與生物學(xué)樣品接觸，其中結(jié)合組合物特定地結(jié)合a)IL-27、p28、EBI3或WSX-1/TCCR；b)WSX-1/TCCR和gpl30的結(jié)合物；或c)編碼p28、EBI3或WSX-1/TCCR的核苷酸；和檢測或確定結(jié)合組合物與生物學(xué)樣品的特定結(jié)合。20.診斷權(quán)利要求1的免疫病癥或病變的藥盒，包含隔室和特定結(jié)合到下述物質(zhì)的結(jié)合組合物a)IL-27、p28、EBI3或WSX-1/TCCR；b)WSX-1/TCCR和gpl30的結(jié)合物；或c)編碼p28，EBI3或WSX-1/TCCR的核苷酸。全文摘要提供調(diào)節(jié)細(xì)胞因子活性的方法，例如用于治療免疫病變和炎癥疾病的目的。也提供給藥IL－27和IL－27受體激動劑或拮抗劑的方法。文檔編號C07K16/24GK1921886SQ200580005143公開日2007年2月28日申請日期2005年2月15日優(yōu)先權(quán)日2004年2月17日發(fā)明者R·A·凱斯特林,T·K·麥克拉那漢,S·普夫蘭茨申請人:先靈公司