專利名稱：作為pkc抑制劑的吲哚基馬來(lái)酰亞胺衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新穎的蛋白激酶C(PKC)抑制劑，它們有相對(duì)于其他蛋白激酶而言的選擇性；涉及新穎的PKC抑制劑，它們就PKC的同工型α和β以及任選地θ相對(duì)于一種或多種其他現(xiàn)有PKC同工型而言是選擇性的；還涉及這類PKC抑制劑抑制移植排斥或自身免疫病的用途。
蛋白激酶C(PKC)由密切相關(guān)的酶家族組成，它們充當(dāng)絲氨酸/蘇氨酸激酶。目前存在至少十種已知的PKC同工酶，它們?cè)诮M織分布、酶選擇性、對(duì)Ca2+的需求和調(diào)節(jié)作用上有所不同。PKC在細(xì)胞-細(xì)胞信號(hào)發(fā)送、基因表達(dá)和細(xì)胞分化與生長(zhǎng)的控制中扮演重要角色。已知有多種PKC抑制劑。有些也已知證明PKC相對(duì)于其他蛋白激酶而言是選擇性的。不過(guò)關(guān)于同工酶選擇性知之甚少。由于不同PKC同工酶在生理中的重要角色，需要開(kāi)發(fā)選擇性PKC抑制劑，特別是相對(duì)于其他蛋白激酶和/或某些特定PKC同工酶而言高度選擇性的PKC抑制劑。
令人驚奇地，現(xiàn)在已經(jīng)鑒定選擇性PKC抑制劑化合物，下文稱之為本發(fā)明化合物。此外，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)這些選擇性PKC抑制劑顯示令人感興趣的治療性質(zhì)，特別是在移植，和治療或預(yù)防自身免疫病中顯示令人感興趣的治療性質(zhì)。
一方面，本發(fā)明提供這樣一種化合物，它是蛋白激酶C的蛋白質(zhì)-選擇性抑制劑，例如就PKC相對(duì)于一種或多種其他蛋白激酶而言選擇性的抑制劑，例如相對(duì)于一種或多種酪氨酸激酶，例如相對(duì)于一種或多種非受體或受體酪氨酸激酶，例如相對(duì)于一種或多種PKA、PKB、Abl、Met、Src、Ins-R、Flt-3、JAK-2、KDR和/或Ret蛋白而言選擇性的抑制劑。本發(fā)明的選擇性PKC抑制劑可以任選地有相對(duì)于一種或多種絲氨酸/蘇氨酸激酶，例如相對(duì)于一種或多種不屬于CDK家族的絲氨酸/蘇氨酸激酶而言的選擇性。優(yōu)選地，本發(fā)明化合物顯示就PKC相對(duì)于一種或多種其他蛋白激酶，例如相對(duì)于一種或多種酪氨酸激酶，例如相對(duì)于Flt-3、JAK-2、KDR和/或Ret蛋白或者相對(duì)于一種或多種不屬于CDK家族的絲氨酸/蘇氨酸激酶而言至少10倍、更優(yōu)選20倍、最優(yōu)選100倍的選擇性。
在本發(fā)明的一種實(shí)施方案中，提供了這樣一種PKC抑制劑，它是就PKC相對(duì)于不屬于CDK家族的絲氨酸/蘇氨酸激酶，例如相對(duì)于不是CDK-1蛋白質(zhì)的絲氨酸/蘇氨酸激酶而言是選擇性的。
可以計(jì)算PKC的選擇性抑制劑相對(duì)于其他蛋白激酶的選擇性，其為在下述測(cè)定法中所測(cè)量的PKC的IC50相對(duì)于另一種激酶的IC50之比。
在本發(fā)明的另一種實(shí)施方案中，提供了這樣一種PKC抑制劑，在同種異體混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)測(cè)定法中所測(cè)定的IC50值與在BM測(cè)定法中所測(cè)定的IC50值之比高于5、10、20或30，優(yōu)選地高于20或30。
MLR和BM測(cè)定法可以按照已知方法進(jìn)行，例如小鼠或者人MLR和BM測(cè)定法，優(yōu)選如下文所公開(kāi)的。
另一方面，本發(fā)明提供蛋白激酶C(PKC)的選擇性抑制劑，也就是同工酶-選擇性PKC抑制劑，其中該化合物具備就PKC的同工型α和β相對(duì)于一種或多種其他PKC同工型而言的選擇性。
優(yōu)選地，本發(fā)明化合物是就α和βPKC相對(duì)于一種或多種其他PKC同工型而言選擇性的，例如相對(duì)于一種或多種選自δ、ε、η和θ的PKC同工型，優(yōu)選地相對(duì)于δ和εPKC同工型，更優(yōu)選地相對(duì)于δ、ε和ηPKC同工型，進(jìn)而更優(yōu)選地相對(duì)于δ、ε、η和θPKC同工型而言選擇性的。
在本發(fā)明的另一種實(shí)施方案中，本發(fā)明化合物就α、β和θPKC相對(duì)于一種或多種其他PKC同工型而言是選擇性的，例如相對(duì)于一種或多種選自δ、ε和η的PKC同工型，優(yōu)選地相對(duì)于δ和εPKC同工型，更優(yōu)選地相對(duì)于δ、ε和ηPKC同工型是選擇性的。
本發(fā)明化合物優(yōu)選地顯示就PKCα和β以及任選地θ相對(duì)于一種或多種其他PKC同工型，例如相對(duì)于一種或多種選自δ、ε、η和θ的PKC同工型，優(yōu)選地相對(duì)于PKC同工型δ，更優(yōu)選地相對(duì)于PKC同工型ε和η，進(jìn)而更優(yōu)選地相對(duì)于PKC同工型δ、ε和η而言至少10倍、更優(yōu)選20倍、最優(yōu)選100倍的選擇性。
就PKC的α、β或θ同工型相對(duì)于一種或多種其他PKC同工型而言的選擇性可以這樣測(cè)量比較化合物就α、β或θPKC而言的IC50與該化合物就其他PKC同工型、例如δ、ε、η而言的IC50。優(yōu)選地，選擇性可以這樣測(cè)定，計(jì)算化合物就δ、ε或ηPKC同工型而言的IC50與該化合物就α、β或θPKC而言的IC50之比。
IC50值例如可以按照下述PKC測(cè)定法獲得。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明化合物在下文提到的測(cè)定法中顯示出就α和β以及任選地θPKC而言1μM或以下、優(yōu)選10nM或以下的IC50值。
優(yōu)選地，本發(fā)明化合物顯示相對(duì)于PKC的α和β以及任選地θ同工型而言的選擇性，以及相對(duì)于一種或多種其他蛋白激酶而言的選擇性，例如相對(duì)于一種或多種酪氨酸激酶，或者相對(duì)于一種或多種不屬于CDK家族的絲氨酸/蘇氨酸激酶，例如相對(duì)于一種或多種PKA、PKB、Abl、Met、Src、Ins-R、Flt-3、JAK-2、KDR和Ret蛋白，例如相對(duì)于一種或多種Flt-3、JAK-2、KDR和Ret蛋白而言的選擇性。
本發(fā)明化合物的游離形式或藥學(xué)上可接受的鹽形式可用于治療和/或預(yù)防由T淋巴細(xì)胞和/或PKC介導(dǎo)的疾病或障礙，例如由α和β以及任選地θPKC介導(dǎo)的疾病或障礙，例如器官、組織或細(xì)胞同種異體移植或異種移植的急性或慢性排斥、移植物抗宿主病、自身免疫病、炎性疾病、感染性疾病、癌癥或心血管疾病，例如心力衰竭。術(shù)語(yǔ)“移植物”以及“細(xì)胞、組織或器官”包括例如皮膚、眼睛或眼睛的部分(例如角膜、視網(wǎng)膜、晶狀體)、骨髓、肌肉、心、肺、心肺、肝、腎、胰腺(例如胰島細(xì)胞、β-細(xì)胞)、甲狀旁腺、腸(例如結(jié)腸、小腸、十二指腸)、神經(jīng)元組織、骨和脈管系統(tǒng)(例如動(dòng)脈、靜脈)。
本發(fā)明的選擇性PKC抑制劑因此可用于治療和/或預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化、由血管損傷(例如血管成形術(shù))引起的血管閉塞、再狹窄、肥胖、X綜合征、葡萄糖耐量減低、多囊性卵巢綜合征、高血壓、心力衰竭、慢性阻塞性肺病、CNS疾病(例如阿爾茨海默氏病或肌萎縮性側(cè)索硬化)、癌癥、感染性疾病(例如AIDS、膿毒性休克或成人呼吸窘迫綜合征)、局部缺血/再灌注損傷(例如心肌梗塞、中風(fēng)、腸缺血、腎衰竭或出血性休克)或者創(chuàng)傷性休克(例如創(chuàng)傷性腦損傷)。本發(fā)明的同工酶選擇性PKC抑制劑也可用于治療和/或預(yù)防T-細(xì)胞介導(dǎo)的急性或慢性炎性疾病或障礙或者自身免疫病，例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、橋本氏甲狀腺炎、多發(fā)性硬化、重癥肌無(wú)力、I或II型糖尿病和與之有關(guān)的障礙、呼吸疾病(例如哮喘或炎性肺損傷)、炎性肝損傷、炎性小球損傷、免疫學(xué)-介導(dǎo)障礙或疾病的皮膚表現(xiàn)、炎性與過(guò)度增殖性皮膚疾病(例如牛皮癬、特應(yīng)性皮炎、變應(yīng)性接觸性皮炎、刺激物接觸性皮炎與進(jìn)一步的濕疹性皮炎、皮脂溢性皮炎)、炎性眼睛疾病(例如Sioegren綜合征、角膜結(jié)膜炎或眼色素層炎)、炎性腸疾病、克羅恩氏病或潰瘍性結(jié)腸炎。
本發(fā)明的選擇性PKC抑制劑的游離形式或藥學(xué)上可接受的鹽形式表現(xiàn)寶貴的藥理性質(zhì)，例如如下體外和體內(nèi)試驗(yàn)所示。
A.體外試驗(yàn)1.PKC抑制劑的特異性和選擇性的體外測(cè)定按照下列方法，測(cè)試本發(fā)明化合物對(duì)不同PKC同工型的活性。在具有非結(jié)合性表面的白色透明底384-孔微量滴定平板中進(jìn)行測(cè)定。反應(yīng)混合物(25μl)含有1.5μM十三肽接受底物(它模擬PKCα的偽底物序列，并有Ala→Ser置換)、10μM33P-ATP、10mM Mg(NO3)O2、0.2mM CaCl2、蛋白質(zhì)濃度從25至400ng/ml不等的PKC(依賴于所使用的同位型)、最終脂質(zhì)濃度為0.5mM的脂囊泡(含有30mol％磷脂酰絲氨酸、5mol％DAG和65mol％磷脂酰膽堿)和20mM Tris-HCl緩沖液pH 7.4+0.1％BSA。在室溫下溫育60min。加入50μl終止混合物(100mM EDTA，200μM ATP，0.1％Triton X-100，0.375mg/孔鏈霉抗生物素蛋白-包被的SPA珠粒的磷酸緩沖鹽水溶液w/o Ca，Mg)以終止反應(yīng)。在室溫下溫育10min后，使懸液在300g下自旋10min。在Trilux計(jì)數(shù)器中測(cè)量所摻入的放射性達(dá)1min。溫育濃度在1-1000μM之間的抑制劑系列稀釋液，在常-上進(jìn)行IC50測(cè)量。利用XL fit軟件，通過(guò)曲線擬合從曲線圖計(jì)算IC50值。
2.蛋白激酶Cα測(cè)定法從Oxford Biomedical Research獲得人重組PKCα，用在上述A.1節(jié)下所述測(cè)定條件下。在本測(cè)定法中，本發(fā)明化合物、例如式I化合物抑制PKCα的IC50≤1μM，優(yōu)選≤10nM。
3.蛋白激酶Cβ1測(cè)定法從Oxford Biomedical Research獲得人重組PKCβ1，用在上述A.1節(jié)下所述測(cè)定條件下。在本測(cè)定法中，本發(fā)明化合物、例如式I化合物抑制PKCβ1的IC50≤1μM，優(yōu)選≤10nM。
4.蛋白激酶Cδ測(cè)定法從Oxford Biomedical Research獲得人重組PKCδ，用在上述A.1節(jié)下所述測(cè)定條件下。在本測(cè)定法中，本發(fā)明化合物、例如式I化合物抑制PKCδ的IC50≤1μM。
5.蛋白激酶Cε測(cè)定法從Oxford Biomedical Research獲得人重組PKCε，用在上述A.1節(jié)下所述測(cè)定條件下。在本測(cè)定法中，本發(fā)明化合物、例如式I化合物抑制PKCε的IC50≤1μM。
6.蛋白激酶Cη測(cè)定法從PanVera獲得人重組PKCη，用在上述A.1節(jié)下所述測(cè)定條件下。在本測(cè)定法中，本發(fā)明化合物、例如式I化合物抑制PKCη的IC50≤1μM。
7.蛋白激酶Cθ測(cè)定法在上述測(cè)定條件下使用人重組PKCθ。在本測(cè)定法中，本發(fā)明化合物、例如式I化合物抑制PKCθ的IC50≤1μM。
8.CD28共同刺激測(cè)定法如Baumann G等在Transplant.Proc.1992；2443-8，theβ-galactosidase reporter gene being replaced by the luciferase gene(de WetJ.，et al.，Mol.Cell Biol.1987，7(2)，725-737)中所述，利用被人白介素-2啟動(dòng)/報(bào)道基因構(gòu)建體轉(zhuǎn)染的Jurkat細(xì)胞進(jìn)行測(cè)定。如下用固相-偶聯(lián)抗體或乙酸肉豆蔻佛波醇(PMA)和Ca++離子載體離子霉素刺激細(xì)胞。就抗體-介導(dǎo)的刺激而言，在室溫下向Microlite TM1微量滴定平板(Dynatech)每孔包被3μg/ml山羊抗-小鼠IgG Fc抗體(Jackson)的55μl磷酸緩沖鹽水(PBS)溶液達(dá)三小時(shí)。除去抗體后，用2％牛血清白蛋白(BSA)的PBS溶液(300μl每孔)在RT下溫育2小時(shí)，以封閉平板。用300μl PBS每孔洗滌三次后，加入10ng/ml抗-T細(xì)胞受體抗體(WT31，Becton & Dickinson)和300ng/ml抗-CD28抗體(15E8)的50μl 2％BSA/PBS溶液作為刺激性抗體，在4℃下溫育過(guò)夜。最后，將平板用300μl PBS每孔洗滌三次。在單獨(dú)的平板中制備供試化合物在測(cè)定培養(yǎng)基(RPMI 1640/10％胎牛血清(FCS)，含有50μM2-巰基乙醇，100單位/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素)中的七份三倍系列稀釋液，一式兩份，與所轉(zhuǎn)染的Jurkat細(xì)胞(克隆K22 290 H23)混合，在37℃下和5％CO2中溫育30分鐘。然后將含有1×105個(gè)細(xì)胞的100μl這種混合物轉(zhuǎn)移至抗體-包被的測(cè)定平板。以平行方式溫育100μl與40ng/mlPMA和2μM離子霉素。在37℃下和5％CO2中溫育5.5小時(shí)后，借助生物發(fā)光測(cè)量法測(cè)定螢光素酶的水平。將平板在500g下離心10min，輕輕彈去上清液。加入溶解緩沖液，其中含有25mM Tris-磷酸鹽pH 7.8、2mMDTT、2mM 1，2-二氨基環(huán)己烷-N，N，N′，N-四乙酸、10％(v/v)甘油和1％(v/v)Triton X-100(20μl每孔)。在恒定搖動(dòng)下，將平板在RT下溫育10分鐘。在自動(dòng)加入50μl每孔螢光素酶反應(yīng)緩沖液后，利用生物發(fā)光讀數(shù)器(Labsystem，Helsinki，F(xiàn)inland)評(píng)估螢光素酶活性，所述緩沖液含有20mMTricine、1.07mM(MgCO3)4Mg(OH)2x5H2O、2.67mM MgSO4、0.1mMEDTA、33.3mM DTT、270μM輔酶A、470μM螢光素(Chemie BrunschwigAG)、530μM ATP，pH 7.8。遲滯時(shí)間為0.5秒，總測(cè)量時(shí)間為1或2秒。低對(duì)照值是來(lái)自抗-T細(xì)胞受體-或PMA-刺激的細(xì)胞的光學(xué)單位，高對(duì)照來(lái)自抗-T細(xì)胞受體/抗-CD28-或PMA/離子霉素-刺激的細(xì)胞，沒(méi)有任何供試樣品。從所有數(shù)值中減去低對(duì)照。計(jì)算在供試化合物的存在下所獲得的抑制作用，其為高對(duì)照的抑制百分比。從劑量-反應(yīng)曲線測(cè)定供試化合物導(dǎo)致50％抑制的濃度(IC50)。在本測(cè)定法中，式I化合物抑制抗-T細(xì)胞受體/抗-CD28和PMA/離子霉素刺激的Jurkat細(xì)胞的IC50≤1μM。
9.骨髓增殖(BM)測(cè)定法在100μl RPMI培養(yǎng)基中溫育來(lái)自CBA小鼠的骨髓細(xì)胞(2.5×104個(gè)細(xì)胞每孔，平底組織培養(yǎng)微量滴定平板)，所述培養(yǎng)基含有10％FCS、100U/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素(Gibco BRL，Basel，Switzerland)、50μM2-巰基乙醇(Fluka，Buchs，Switzerland)、WEHI-3條件培養(yǎng)基(7.5％v/v)與L929條件培養(yǎng)基(3％v/v)作為生長(zhǎng)因子源和經(jīng)過(guò)系列稀釋的化合物。每種供試化合物進(jìn)行七個(gè)三倍稀釋步驟，一式兩份。溫育四天后，加入1μCi3H-胸苷。另外五小時(shí)溫育期后收獲細(xì)胞，按照標(biāo)準(zhǔn)步驟測(cè)定所摻入的3H-胸苷。如下制備條件培養(yǎng)基。使WEHI-3細(xì)胞(ATCC TIB68)和L929細(xì)胞(ATCC CCL 1)在RPMI培養(yǎng)基中生長(zhǎng)直至匯合，分別達(dá)四天和一周。收獲細(xì)胞，在同一培養(yǎng)瓶中將WEHI-3細(xì)胞重新懸浮在含有1％FCS(Schreier and Tees 1981)的培養(yǎng)基C中，將L929細(xì)胞重新懸浮在RPMI培養(yǎng)基中，溫育兩天(WEHI-3)或一周(L929)。收集上清液，通過(guò)0.2μm過(guò)濾，以等分試樣貯存在-80℃下。使用沒(méi)有供試化合物并且沒(méi)有WEHI-3與L929上清液的培養(yǎng)物作為低對(duì)照值。從所有數(shù)值中減去低對(duì)照值。沒(méi)有任何樣品的高對(duì)照被視為100％增殖。計(jì)算樣品的抑制百分比，測(cè)定50％抑制所需濃度(IC50值)。
10.同種異體混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)測(cè)定法按照標(biāo)準(zhǔn)步驟進(jìn)行二路MLR(J.Immunol.Methods，1973，2，279和Meo T.et al.，Immunological Methods，New York，Academic Press，1979，227-39)。簡(jiǎn)而言之，在RPMI培養(yǎng)基中溫育來(lái)自CBA和BALB/c小鼠的脾細(xì)胞(平底組織培養(yǎng)微量滴定平板的每孔中每種品系1.6×105個(gè)細(xì)胞，總計(jì)3.2×105個(gè))，該培養(yǎng)基含有10％FCS、100U/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素(Gibco BRL，Basel，Switzerland)、50μM 2-巰基乙醇(Fluka，Buchs，Switzerland)和經(jīng)過(guò)系列稀釋的化合物。每種供試化合物進(jìn)行七個(gè)三倍稀釋步驟，一式兩份。溫育四天后，加入1μCi3H-胸苷。另外五小時(shí)溫育期后收獲細(xì)胞，按照標(biāo)準(zhǔn)步驟測(cè)定所摻入的3H-胸苷。MLR的背景值(低對(duì)照)是僅BALB/c細(xì)胞的增殖。從所有數(shù)值中減去低對(duì)照。沒(méi)有任何樣品的高對(duì)照被視為100％增殖。計(jì)算樣品的抑制百分比，測(cè)定50％抑制所需濃度(IC50值)。優(yōu)選地，根據(jù)MLR測(cè)定法的測(cè)定，本發(fā)明化合物顯示低于100μM、優(yōu)選低于10μM、更優(yōu)選低于1μM的IC50值。
B.體內(nèi)大鼠心臟移植術(shù)所使用的品系組合雄性Lewis(RT1單元型)和BN(RT1單元型)。將動(dòng)物用吸入性異氟醚(isofluorane)麻醉。用肝素處理供體大鼠的腹部下腔靜脈，同時(shí)經(jīng)由主動(dòng)脈驅(qū)血之后，打開(kāi)胸腔，迅速冷卻心臟。結(jié)扎主動(dòng)脈，在第一分支遠(yuǎn)端分開(kāi)，在第一分叉處分開(kāi)頭臂主干。結(jié)扎左肺動(dòng)脈，分開(kāi)，右側(cè)分開(kāi)但是維持開(kāi)放。切除所有其他血管，結(jié)扎，分開(kāi)，取出供體心臟置于冰鹽水中。
受體作如下準(zhǔn)備，切開(kāi)和交叉夾緊腎下腹部主動(dòng)脈和腔靜脈。植入移植物，使用10/0單絲縫合線，在供體頭臂主干與受體主動(dòng)脈之間和供體右肺動(dòng)脈與受體腔靜脈之間進(jìn)行末端-邊側(cè)吻合術(shù)。除去夾子，在腹部后系住移植物，將腹部?jī)?nèi)容物用溫鹽水洗滌，縫合動(dòng)物，在加熱燈下恢復(fù)。每日通過(guò)腹部壁觸診跳動(dòng)的供體心臟，監(jiān)測(cè)移植物的存活。當(dāng)心臟跳動(dòng)停止時(shí)，認(rèn)為排斥是完全的。在用口服施用的式I化合物處理的動(dòng)物中獲得移植物存活率的增加，每日劑量為1至150mg/kg bid，優(yōu)選1至30mg/kg bid或10至100mg/kg bid。
移植物抗宿主模型將來(lái)自Wistar/F大鼠的脾細(xì)胞(2×107)皮下注射到(Wistar/F x Fischer344)F1雜交大鼠的右后足墊內(nèi)。左足墊未作處理。將動(dòng)物用供試化合物連續(xù)處理4天(0-3)。在第7天除去腘淋巴結(jié)，測(cè)定兩個(gè)對(duì)應(yīng)淋巴結(jié)之間的重量差異。比較實(shí)驗(yàn)組淋巴結(jié)重量差異與未用供試化合物處理動(dòng)物組的對(duì)應(yīng)淋巴結(jié)重量差異，結(jié)果表示為對(duì)淋巴結(jié)增大的抑制率(以百分比給出)。
選擇性PKC抑制劑化合物的代表性實(shí)例例如包括式I的吲哚基馬來(lái)酰亞胺衍生物
其中Ra是H；C1-4烷基；或者被OH、NH2、NHC1-4烷基或N(二-C1-4烷基)2取代的C1-4烷基；Rb、Rc、Rd和Re之一是鹵素、C1-4烷氧基、C1-4烷基、CF3或CN，其他三個(gè)取代基各自是H；或者Rb、Rc、Rd和Re都是H；R是式(a)、(b)或(c)的原子團(tuán) 其中R1是-(CH2)n-NR3R4，其中每一R3和R4獨(dú)立地是H或C1-4烷基；或者R3和R4與它們所結(jié)合的氮原子一起形成雜環(huán)殘基；n是0、1或2；R2是H、鹵素、C1-4烷基、CF3、OH、SH、NH2、C1-4烷氧基、C1-4烷硫基、NHC1-4烷基、N(二-C1-4烷基)2、CN、炔或NO2；每一R10和R10a獨(dú)立地是雜環(huán)殘基；或者式α原子團(tuán)-X-Rf-Y(α)
其中X是直接鍵、O、S或NR11，其中R11是H或C1-4烷基，Rf是C1-4亞烷基或者其中一個(gè)CH2被CRxRy代替的C1-4亞烷基，其中Rx和Ry之一是H，另一個(gè)是CH3，每一Rx和Ry是CH3，或者Rx和Ry一起形成-CH2-CH2-，Y結(jié)合于末端碳原子，并且選自O(shè)H、-NR30R40，其中每一R30和R40獨(dú)立地是H、C3-6環(huán)烷基、C3-6環(huán)烷基-C1-4烷基、芳基-C1-4烷基、雜芳基-C1-4烷基、C2-6烯基或C1-4烷基，任選地在末端碳原子上被OH、鹵素、C1-4烷氧基或-NR50R60取代，其中每一R50和R60獨(dú)立地是H、C1-4烷基、C3-6環(huán)烷基、C3-6環(huán)烷基-C1-4烷基、芳基-C1-4烷基，或者R30和R40與它們所結(jié)合的氮原子一起形成雜環(huán)殘基；每一R20和R20a獨(dú)立地是H、鹵素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、CF3、腈、硝基或氨基，該化合物為游離形式或鹽形式。
式I化合物是新穎的，因此也構(gòu)成發(fā)明的一部分。
優(yōu)選地，Y包含氮作為雜原子和任選地第二雜原子，其優(yōu)選地選自N、O和S，并且任選地被取代。
將理解的是，本發(fā)明的同工酶選擇性PKC抑制劑，例如式I化合物可以存在旋光異構(gòu)體、外消旋物或非對(duì)映異構(gòu)體的形式。例如，在哌嗪基殘基3位攜帶取代基的環(huán)碳原子是不對(duì)稱的，可以具有R-或S-構(gòu)型。有待理解的是，本發(fā)明涵蓋所有對(duì)映體和它們的混合物。對(duì)映體相對(duì)于外消旋物是優(yōu)選的。相似的考慮適用于表現(xiàn)所述不對(duì)稱碳原子的原料。
烷基或烷氧基可以是直鏈或支鏈的。
鹵素可以是F、Cl、Br或I，優(yōu)選F、Cl或Br。
雜環(huán)殘基表示三至八元、優(yōu)選五至八元飽和、不飽和或芳族雜環(huán)，其包含1或2個(gè)雜原子，該雜原子優(yōu)選地選自N、O和S，并且任選地被取代。適合的實(shí)例例如包括吡啶基，例如3-或4-吡啶基；哌啶基，例如哌啶-1-基、3-或4-哌啶基、高哌啶基(homopiperidyl)、哌嗪基、高哌嗪基(homopiperazinyl)、嗎啉-4-基、咪唑基、咪唑烷基、吡咯基或吡咯烷基，任選地被取代，例如單或多取代。當(dāng)雜環(huán)殘基被取代時(shí)，這可以位于一個(gè)或多個(gè)環(huán)碳原子上和/或環(huán)氮原子上(當(dāng)存在時(shí))。環(huán)碳原子上取代基的實(shí)例包括例如C1-4烷基，例如CH3；C3-6環(huán)烷基，例如環(huán)丙基，任選地進(jìn)一步被C1-4烷基取代； 其中p是1、2或3，優(yōu)選1；CF3；鹵素；OH；NH2；-CH2-NR7R8，其中每一R7和R8獨(dú)立地是H、C1-4烷基，或者R7和R8與它們所結(jié)合的氮原子一起形成雜環(huán)殘基或雜芳基；-CH2-OH；哌啶-1-基；或者吡咯烷基。環(huán)氮原子上取代基的實(shí)例例如有C1-6烷基；酰基，例如R’x-CO，其中R’x是H、C1-6烷基或者任選被C1-4烷基、C1-4烷氧基或氨基取代的苯基，例如甲?；?；C3-6環(huán)烷基；C3-6環(huán)烷基-C1-4烷基；苯基；苯基-C1-4烷基，例如芐基；雜環(huán)殘基，例如如上所公開(kāi)的，例如包含1或2個(gè)氮原子的芳族雜環(huán)殘基；或者式β殘基-R5-Z (β)其中R5是C1-4亞烷基或者被O中斷的C2-4亞烷基，Z是OH、NH2、NH(C1-4烷基)或N(C1-4烷基)2。
當(dāng)環(huán)氮上取代基是雜環(huán)殘基時(shí)，它可以是五或六元飽和、不飽和或芳族雜環(huán)，其包含1或2個(gè)雜原子，優(yōu)選地選自N、O和S。實(shí)例例如包括3-或4-吡啶基；哌啶基，例如哌啶-1-基、3-或4-哌啶基、高哌啶基、哌嗪基、高哌嗪基、嘧啶基、嗎啉-4-基、咪唑基、咪唑烷基、吡咯基或吡咯烷基。
作為R10、R10a或Y的雜環(huán)殘基的進(jìn)一步實(shí)例例如包括式(γ)殘基 其中環(huán)D是5、6或7元飽和、不飽和或芳族環(huán)；
Xb是-N＝、-C＝或-CH-；Xc是-N＝、-NRf-、-CRf’＝或-CHRf’-，其中Rf是如上關(guān)于環(huán)氮原子所示取代基，Rf’是如上關(guān)于環(huán)碳原子所示取代基；C1與C2之間的鍵是飽和或不飽和的；每一C1和C2獨(dú)立地是碳原子，它任選地被一個(gè)或兩個(gè)選自如上關(guān)于環(huán)碳原子所示的那些取代基取代；C3與Xb之間和C1與Xb之間的線分別代表得到5、6或7元環(huán)D所需的碳原子數(shù)，由此當(dāng)Y是式(γ)殘基時(shí)，Xb和Xc至少一個(gè)是-N＝。
優(yōu)選的式(γ)殘基是這樣的殘基，其中環(huán)D構(gòu)成所示任選地C-和/或N-取代的1，4-哌嗪基環(huán)。
式(γ)殘基的代表性實(shí)例例如有3-或4-吡啶基、哌啶-1-基、1-N-(C1-4烷基)-或-(ω-羥基-C1-4烷基)-3-哌啶基、嗎啉-4-基、咪唑基、吡咯烷基、1-哌嗪基、2-C1-4烷基-或-C3-6環(huán)烷基-1-哌嗪基、3-C1-4烷基-或-C3-6環(huán)烷基-1-哌嗪基、2，2-或3，5-或2，5-或2，6-二(C1-4烷基)-1-哌嗪基、3，4，5-三-(C1-4烷基)-1-哌嗪基、4-N-(C1-4烷基)-或-(ω-羥基-C1-4烷基)-或-(ω-二甲氨基-C1-4烷基)-1-哌嗪基、4-N-吡啶-4-基-1-哌嗪基、4-N-苯基-或-C3-6環(huán)烷基-1-哌嗪基、4-N-(C1-4烷基)-或-(ω-羥基-C1-4烷基)-3-C1-4烷基-或-3，3-二(C1-4烷基)-1-哌嗪基、4-N-(1-C1-4烷基-C3-6環(huán)烷基)-1-哌嗪基、4-N-甲酰基-1-哌嗪基、4-N-嘧啶-2-基-1-哌嗪基、或者4-N-C1-4烷基-1-高哌嗪基。
式I化合物中，下列含義個(gè)別或者以任意亞組合是優(yōu)選的1.Ra是H或甲基；2.Rb、Rc、Rd和Re之一是甲基或乙基，其他三個(gè)取代基是H；或者Rb、Rc、Rd和Re都是H；3.每一R2、R20和R20a獨(dú)立地是H、Cl、NO2、F、CF3或甲基；4.n是0或1；5.每一R3和R4獨(dú)立地是H、甲基、乙基或異丙基；或者R3和R4與它們所結(jié)合的氮原子一起形成雜環(huán)殘基，例如任選取代的哌嗪基或吡咯烷基；6.每一R1、R10和R10a是雜環(huán)殘基，優(yōu)選哌嗪-1-基，其任選地在3和/或4位被CH3取代或者在3位被乙基取代；-CH2NR7R8、C1-4烷氧基-C1-4烷基或鹵代C1-4烷基；進(jìn)而更優(yōu)選在4位被CH3取代的哌嗪-1-基。
本發(fā)明也包括制備式I化合物的方法，該方法包括將式II化合物 其中Ra至Re是如上所定義，與式III化合物反應(yīng)，R-CH2-CO-NH2(III)其中R是如上所定義的，若需要的話，轉(zhuǎn)化所得式I化合物的游離形式為鹽形式或者反之亦然，視情況而定。
該方法可以適宜地在強(qiáng)堿例如t-BuOK的存在下進(jìn)行，例如WO02/38561或WO 03/08259所公開(kāi)的，其內(nèi)容引用在此作為參考，以及如實(shí)施例所闡述的。
式II和III化合物可以按照已知方法制備，例如WO 02/38561或WO03/08259所公開(kāi)的，其內(nèi)容引用在此作為參考，以及如實(shí)施例所闡述的。
根據(jù)本發(fā)明的選擇性PKC抑制劑的進(jìn)一步實(shí)例例如為式Ib化合物 其中每一Ri、Rj、Rk、Rl、Rm、Rn和Ro獨(dú)立地是H或C1-10烷基；Rh是(CH2)n’-CN，n’是0至5。
在式Ib化合物中，下列含義個(gè)別或者以任意亞組合是優(yōu)選的1- Ri、Rj、Rk、Rm、Rn和Ro都是H；2- Rl是CH3；3- Rh是(CH2)2-CN。
其中Ri、Rj、Rk、Rm、Rn和Ro都是H、Rl是CH3、Rh是(CH2)2-CN的式Ib化合物是本領(lǐng)域熟知的，例如公開(kāi)在Martin-Baron et al.，TheJournal of Biological Chemistry(1993)，268(13)，pp 9194-9197中，其內(nèi)容引用在此作為參考。
式Ib化合物、特別是其中Ri、Rj、Rk、Rm、Rn和Ro都是H、Rl是CH3、Rh是(CH2)2-CN的式Ib化合物可以是選擇性PKC抑制劑，例如就PKC的同工型α和β相對(duì)于其他現(xiàn)有PKC同工型而言的選擇性抑制劑。
本發(fā)明化合物、例如式I或Ib化合物可以以游離形式或鹽形式存在，例如與有機(jī)或無(wú)機(jī)酸的鹽，所述酸為例如鹽酸、乙酸、三氟乙酸。
如果沒(méi)有確切地描述原料的生產(chǎn)，那么這些化合物是已知的或者可以類似于本領(lǐng)域已知的方法或如下文所述加以制備。
下列實(shí)施例是本發(fā)明的舉例說(shuō)明而非任何限制。
AcOH＝乙酸DDQ ＝2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌DMF ＝二甲基甲酰胺EtOAc ＝乙酸乙酯MeOH＝甲醇Pd2(dba)3＝Pd(0)-雙(二亞芐基丙酮)TBAF ＝四丁基氟化銨THF ＝四氫呋喃FCC ＝急驟柱色譜TLC ＝薄層色譜RT ＝室溫實(shí)施例13-(2-氯-7-二甲氨基甲基-萘-1-基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮 在氬氣氛下，將活化3分子篩(2.0g)加入到2-(2-氯-7-二甲氨基甲基-萘-1-基)-乙酰胺(1.0g，3.61mmol)與(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-氧代-乙酸甲酯(1.02g，4.69mmol)的無(wú)水THF(50ml)溶液中。然后在RT下一次性加入1.0M KOtBu的THF溶液(10.9ml，10.9mmol)。在RT下1h后，TLC分析表明原料完全轉(zhuǎn)化。將反應(yīng)混合物用EtOAc稀釋，倒入飽和NH4Cl水溶液中。分離有機(jī)層，用鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，蒸發(fā)有機(jī)溶劑。殘余物經(jīng)過(guò)FCC純化(EtOAc/AcOH/H2O 600∶150∶150)，得到標(biāo)題化合物，將其溶于冰AcOH，凍干。得到標(biāo)題化合物的水溶性雙乙酸鹽。1H NMR(d6-DMSO，400MHz)δ1.80(s，6H)，3.20-3.42(m，2H)，6.10(d，J＝9.0Hz，1H)，6.44(t，J＝9.0Hz，1H)，6.94(t，J＝9.0Hz，1H)，7.31(d，J＝9.0Hz，1H)，7.34(d，J＝9.0Hz，1H)，7.42(s，1H)，7.63(d，J＝10.8Hz，1H)，7.89(d，J＝9.6Hz，1H)，8.03(d，J＝9.0Hz，1H)，8.10(s，1H)，11.0-11.3(br，1H)。ES+-MS444，446[M+H]+。
2-(2-氯-7-二甲氨基甲基-萘-1-基)-乙酰胺的制備在氬氣氛下，將(2-氯-7-二甲氨基甲基-萘-1-基)-乙酸乙酯(2.70g，8.82mmol)和甲酰胺(1.17ml，29.57mmol)溶于無(wú)水DMF(25ml)。將溶液加熱至105℃，在10分鐘內(nèi)滴加NaOMe(1.64ml 5.4M MeOH溶液，8.82mmol)。在105℃下1小時(shí)后，TLC分析表明原料完全消耗。將反應(yīng)混合物冷卻至RT，用水稀釋，加入1M NaHSO4溶液調(diào)節(jié)至pH 6-7。濃縮混合物，經(jīng)過(guò)FCC純化(CH2Cl2/EtOH/NH3conc.90∶9∶1)，得到標(biāo)題化合物。1H NMR(d6-DMSO，400MHz)δ2.01(s，6H)，3.48(s，3H)，4.02(s，3H)，6.9-7.0(br，1H)，7.41-7.47(m，2H)；7.47-7.85(br，1H)，7.75-7.88(m，2H)，7.80(d，J＝12.1Hz，1H)。ES+-MS277.3，279.2[M+H]+。
(2-氯-7-二甲氨基甲基-萘-1-基)-乙酸乙酯的制備在氬氣氛下，將二甲胺(5.6M EtOH溶液，4.2ml，23.20mmol)加入到(2-氯-7-甲?；?萘-1-基)-乙酸乙酯(4.28g，15.46mmol)的THF(80ml)溶液中。將混合物在RT下攪拌18h，然后加入氰基硼氫化鈉(1.16g，18.56mmol)的MeOH(20ml)溶液和冰乙酸(4.4ml，77.33mmol)。在RT下攪拌2h后，TLC分析表明原料完全消耗。將反應(yīng)混合物用水稀釋，加入濃NaHCO3水溶液調(diào)節(jié)至pH 8-9。用EtOAc萃取，用鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，除去溶劑，得到粗反應(yīng)產(chǎn)物。經(jīng)過(guò)FCC純化(EtOAc，然后EtOAc/MeOH 4∶1)，得到標(biāo)題化合物。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.26(t，J＝8.8Hz，3H)，2.28(s，6H)，3.62(s，3H)，4.18(q，J＝8.8Hz，2H)，4.32(s，3H)，7.48(d，J＝9.9Hz，1H)，7.52(d，J＝9.9Hz，1H)，7.73(d，J＝9.9Hz，1H)，7.80-7.84(m，2H)。ES+-MS306.3，308.2[M+H]+。
(2-氯-7-甲?；?萘-1-基)-乙酸乙酯的制備將(2-氯-7-氰基-萘-1-基)-乙酸乙酯(5.53g，20.20mmol)溶于水(70ml)、吡啶(130ml)與冰乙酸(70ml)的混合物。在RT下加入次磷酸鈉(17.13g，161.62mmol)和阮內(nèi)鎳(13g)。將反應(yīng)混合物加熱至100℃達(dá)1h。TLC分析表明原料完全消耗。將反應(yīng)混合物冷卻至RT，通過(guò)硅藻土(Celite)過(guò)濾，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮。將殘余物溶于2M HCl水溶液。用EtOAc萃取，除去溶劑，經(jīng)過(guò)FCC純化(己烷/EtOAc 5∶1)，得到標(biāo)題化合物。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.28(t，J＝8.8Hz，3H)，4.22(q，J＝8.8Hz，2H)，4.39(s，2H)，7.68(d，J＝9.9Hz，1H)，7.83(d，J＝9.9Hz，1H)，7.95-8.03(m，2H)，8.48(s，1H)，10.2(s，1H)。ES--MS275.3，277.3[M+H]+。
(2-氯-7-氰基-萘-1-基)-乙酸乙酯的制備在氬氣氛下，將(2-氯-7-三氟甲磺酰氧基-萘-1-基)-乙酸乙酯(9.30g，23.43mmol)溶于DMF(80ml)。加入四(三苯膦)鈀(0)(1.08g，0.9375mmol)和氰化鋅(II)(5.50g，46.87mmol)。將反應(yīng)混合物加熱至125℃。1h后，TLC分析表明原料完全消耗。將懸液冷卻至RT，倒在水上。攪拌15分鐘后，過(guò)濾，濃縮，得到粗反應(yīng)產(chǎn)物。經(jīng)過(guò)FCC純化(己烷/EtOAc 4∶1)，得到標(biāo)題化合物。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.26(t，J＝8.8Hz，3H)，4.19(q，J＝8.8Hz，2H)，4.28(s，2H)，7.62-7.66(m，2H)，7.79(d，J＝9.9Hz，1H)，7.92(d，J＝9.9Hz，1H)，8.32(s，1H)。ES+-MS274.2[M+H]+。
(2-氯-7-三氟甲磺酰氧基-萘-1-基)-乙酸乙酯的制備在氬氣氛下，將(2-氯-7-羥基-萘-1-基)-乙酸乙酯(8.03g，30.33mmol)溶于吡啶(60ml)。冷卻至0℃后，在15分鐘內(nèi)滴加三氟甲磺酸酐(5.50ml，33.36mmol)。在0℃下攪拌15分鐘，在RT下攪拌1h，TLC分析表明原料完全消耗。將反應(yīng)混合物倒入1M NaHCO3水溶液中。用EtOAc萃取，用鹽水洗滌，有機(jī)層經(jīng)Na2SO4干燥，濃縮，得到粗反應(yīng)產(chǎn)物。經(jīng)過(guò)FCC純化(己烷/EtOAc 4∶1)，得到標(biāo)題化合物。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.13(t，J＝9.4Hz，3H)，4.08(q，J＝9.4Hz，2H)，4.15(s，2H)，7.28-7.30(m，1H)，7.48(d，J＝11Hz，1H)，7.69(d，J＝11Hz，1H)，7.72(m，1H)，7.82(d，J＝11Hz，1H)。ES+-MS414.2，416.0，397.1[M+H]+。
(2-氯-7-羥基-萘-1-基)-乙酸乙酯的制備在氬氣氛下，將(2-氯-7-甲氧基-萘-1-基)-乙酸乙酯(12.0g，43.10mmol)和四丁基碘化銨(20.7g，56.04mmol)溶于CH2Cl2(240ml)。將反應(yīng)混合物冷卻至-78℃，在30分鐘內(nèi)加入1M BBr3的CH2Cl2溶液(108ml，107.77mmol)。在-78℃下攪拌15分鐘，在RT下攪拌1h，TLC分析表明原料完全消耗。小心地加入飽和NaHCO3水溶液(8ml)。分離有機(jī)層，用鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，濃縮。經(jīng)過(guò)FCC純化(己烷/EtOAc 4∶1至3∶2)，得到標(biāo)題化合物。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.51(t，J＝9.9Hz，3H)，4.43(q，J＝9.9Hz，2H)，4.48(s，2H)，6.28-6.36(br，1H)，7.29-7.32(m，1H)，7.48-7.49(m，1H)，7.58(d，J＝10Hz，1H)，7.89(d，J＝10Hz，1H)，7.96(d，J＝10Hz，1H)。ES+-MS265.2，267.2[M+H]+。
(2-氯-7-甲氧基-萘-1-基)-乙酸乙酯的制備在氬氣氛下，將[2-氯-7-甲氧基-3，4-二氫-2H-亞萘-(1E/Z)-基]-乙酸乙酯與(2-氯-7-甲氧基-3，4-二氫-萘-1-基)-乙酸乙酯的混合物(26.82g，95.52mmol)溶于二烷(280ml)。加入2，3-二氯-5，6-二氰基-對(duì)-苯醌(DDQ，47.70g，210.16mmol)，將反應(yīng)混合物回流2h。TLC分析表明原料完全轉(zhuǎn)化。冷卻至RT后，加入MeOH使得反應(yīng)混合物均勻。加入硅膠(250g)，借助旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑。經(jīng)過(guò)FCC純化(己烷/EtOAc 9∶1)，得到標(biāo)題化合物。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.24(t，J＝8.8Hz，3H)，3.95(s，3H)，4.19(q，J＝8.8Hz，2H)，4.28(s，2H)，7.16-7.19(m，1H)，7.22(s，1H)，7.38(d，J＝10Hz，1H)，7.68(d，J＝10Hz，1H)，7.75(d，J＝10Hz，1H)。ES+-MS279.2，281.2[M+H]+。
(2-氯-7-甲氧基-3，4-二氫-萘-1-基)-乙酸乙酯的制備在氬氣氛下，將(2-氯-1-羥基-7-甲氧基-1，2，3，4-四氫-萘-1-基)-乙酸乙酯(42.7g，142.9mmol)溶于吡啶(250ml)。在30分鐘內(nèi)加入三氟甲磺酸酐(30.7ml，185.8mmol)，同時(shí)偶爾用冰浴冷卻，保持溫度在25℃。加入完全后，將反應(yīng)混合物升溫至50℃達(dá)2h。TLC分析表明原料完全轉(zhuǎn)化。小心地加入2M HCl水溶液(100ml)，然后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮反應(yīng)混合物至干。將殘余物溶于2M HCl水溶液(100ml)，用EtOAc萃取。有機(jī)層經(jīng)Na2SO4干燥，濃縮。經(jīng)過(guò)FCC純化(EtOAc)，得到標(biāo)題化合物。ES+-MS281.2，283.2[M+H]+。
(2-氯-1-羥基-7-甲氧基-1，2，3，4-四氫-萘-1-基)-乙酸乙酯的制備在-78℃氬氣氛下，將EtOAc(16.1ml，164.48mmol)的THF(250ml)溶液緩慢加入到二異丙氨基鋰(從23.3ml二異丙胺(164.48mmol)和102.8ml1.6M n-BuLi的己烷溶液(164.48mmol)制備)的THF(250ml)溶液中。在-78℃下攪拌30分鐘后，在30分鐘內(nèi)緩慢加入2-氯-7-甲氧基-3，4-二氫-2H-萘-1-酮(31.5g，149.53mmol)的THF(250ml)溶液。將反應(yīng)混合物在-78℃下攪拌1h。TLC分析表明原料完全轉(zhuǎn)化。在-78℃下向反應(yīng)混合物小心加入飽和NH4Cl水溶液(250ml)。將混合物升溫至RT。分離有機(jī)層，用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌。經(jīng)Na2SO4干燥后，除去溶劑。經(jīng)過(guò)FCC純化(己烷/EtOAc 4∶1)，得到標(biāo)題化合物。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.27(t，J＝9.4Hz，3H)，2.32-2.48(m，2H)，2.78-2.88(m，1H)，2.86-3.02(m，2H)，3.05-3.14(m，1H)，3.82(s，3H)，4.18(q，J＝9.4Hz，2H)，5.02-5.08(m，1H)，6.81-6.84(m，1H)，7.03(d，J＝10.5Hz，1H)，7.18-7.19(m，1H)。ES+-MS281.3，283.3[M+H-H2O]+。
2-氯-7-甲氧基-3，4-二氫-2H-萘-1-酮的制備在-78℃氬氣氛下，將7-甲氧基-3，4-二氫-2H-萘-1-酮(25.6g，145.28mmol)的THF(300ml)溶液緩慢加入到二異丙氨基鋰的THF溶液(300ml；從22.6ml二異丙胺(160mmol)和100ml 1.6M n-BuLi的己烷溶液(160mmol)制備)中。在-78℃下30分鐘后，在20分鐘內(nèi)加入對(duì)-甲苯磺酰氯(30.5g，159.8mmol)的THF(300ml)溶液。除去干冰冷卻浴，使反應(yīng)混合物達(dá)到RT。1h后，TLC分析表明原料完全消耗。加入飽和NH4Cl水溶液(100ml)，將混合物在RT下攪拌15分鐘。分離有機(jī)層，用鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，濃縮。經(jīng)過(guò)FCC純化(己烷/EtOAc 3∶1)，得到標(biāo)題化合物。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ2.32-2.52(m，2H)，2.82-2.90(m，2H)，3.10-3.18(m，2H)，3.78(s，1H)，4.52-4.58(m，1H)，7.01-7.05(m，1H)，7.11(d，J＝8.8Hz，1H)，7.47-7.48(m，1H)。ES+-MS211.3，213.3[M+H]+。
遵照實(shí)施例1的步驟，但是使用適當(dāng)?shù)脑?，可以得到式A化合物，其中Ra、Rb、Rc、Rd、R3和R4是如下表1所示的，Re是H。
表1
遵照實(shí)施例1的步驟，但是使用適當(dāng)?shù)脑?，可以得到式B化合物，其中Rc、Rd和Re是H，Ra、Rb、R3和R4是如下表2所示的。
表2
遵照實(shí)施例1的步驟，但是使用適當(dāng)?shù)脑?，可以得到式B化合物，其中Rb、Rc、Rd和Re是H，Ra、R3和R4是如下表3所示的。
表3
遵照實(shí)施例1的步驟，但是使用適當(dāng)?shù)脑希梢缘玫绞紺化合物，其中Rb、Rc、Rd和Re是H，Ra、R3和R4是如下表4所示的。
表4
遵照實(shí)施例1的步驟，但是使用適當(dāng)?shù)脑?，可以得到式D化合物，其中Rb是如下表5所示的。
表5
實(shí)施例283-(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-吡咯-2，5-二酮
在氬氣氛下，將2-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-乙酰胺(150mg，0.64mmol)和(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-氧代-乙酸甲酯(209mg，0.96mmol)溶于無(wú)水DMF(2ml)與無(wú)水THF(2ml)的混合物。然后在RT下加入1.0MKOtBu的THF溶液(1.9ml，1.9mmol)。在50℃下1h后，TLC分析表明原料完全轉(zhuǎn)化。將反應(yīng)混合物用EtOAc稀釋，倒入飽和NH4Cl水溶液中。分離有機(jī)層，用鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，蒸發(fā)有機(jī)溶劑。殘余物經(jīng)過(guò)FCC純化(EtOAc/AcOH/H2O 600∶115∶150)，得到標(biāo)題化合物。1H NMR(d6-DMSO 400MHz)δ2.15(s，3H)，2.28-2.32(m，2H)，2.92-3.00(m，2H)，3.15(s，3H)，6.21(d，J＝9Hz，1H)，6.64(t，J＝9Hz，1H)，6.88(d，J＝9Hz，1H)，7.22(s，1H)，7.98(br s，1H)，8.20-8.22(m，1H)。ES+-MS402.6[M+H]+。
2-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-乙酰胺的制備在氬氣氛下，將[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-乙酸(1.57g，5.78mmol)和羰基二咪唑(1.03g，6.36mmol)溶于DMF(16ml)。在RT下攪拌1h后，加入NH4OH水溶液(25％，16ml)，繼續(xù)在RT下攪拌15分鐘。TLC分析表明原料完全消耗。將水性層用NaCl飽和，用CH2Cl2反復(fù)萃取。有機(jī)層經(jīng)Na2SO4干燥，濃縮。經(jīng)過(guò)FCC純化(CH2Cl2∶MeOH 95∶5至90∶10至80∶20至70∶30至50∶50至25∶75至0∶100)，得到標(biāo)題化合物。1H NMR(d6-DMSO 400MHz)δ2.76(s，3H)，3.12-3.42(m，8H)，3.34(s，2H)，6.86-6.96(br s，1H)，7.26(s，1H)，7.93(s，1H)，8.21(s，1H)。ES+-MS235.4[M+H]+。-乙酸的制備將[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-乙酸叔丁基酯(1.68g，5.77mmol)溶于4M HCl的二烷溶液(28ml)。在60℃下1h后，TLC分析表明原料完全消耗。將反應(yīng)混合物冷卻至RT，用Et2O稀釋。將沉淀過(guò)濾，用Et2O洗滌，得到標(biāo)題化合物，無(wú)需進(jìn)一步純化即可用于下一反應(yīng)。1H NMR(d6-DMSO 400MHz)δ2.79(s，3H)，3.05-4.10(br m，8H)，3.81(s，2H)，8.04(s，1H)，8.22(s，1H)，8.45(s，1H)。ES+-MS236.4[M+H]+。
2-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-乙酰胺[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-乙酸叔丁基酯的制備將磷酸鉀(4.08g，19.21mmol)在100℃高真空下干燥90分鐘。冷卻至RT，放入氬后，加入Pd2(dba)3(70mg，0.077mmol)、二環(huán)己基-(2′，4′，6′-三異丙基-聯(lián)苯-2-基)-膦(183mg，0.38mmol)、甲苯/叔丁醇的脫氣混合物(9∶1，20ml)和N-甲基哌嗪(1.15g，11.53mmol)。將反應(yīng)混合物浸在預(yù)加熱的油浴(100℃)中。在100℃下2h后，加入另外的Pd2(dba)3(70mg，0.077mmol)和二環(huán)己基-(2′，4′，6′-三異丙基-聯(lián)苯-2-基)-膦(183mg，0.38mmol)。在100℃下另外2h后，TLC分析表明原料完全轉(zhuǎn)化。將反應(yīng)混合物冷卻至RT，用水稀釋，用CH2Cl2萃取。合并有機(jī)層，經(jīng)Na2SO4干燥，濃縮。經(jīng)過(guò)FCC純化(CH2Cl2∶MeOH 95∶5至92∶8至88∶12至80∶20)，得到標(biāo)題化合物。1HNMR(CDCl3，400MHz)δ1.57(s，9H)，2.48(s，3H)，2.68-2.72(m，4H)，3.35-3.40(m，4H)，3.60(s，2H)，7.24-7.27(m，1H)，8.10(br s，1H)，8.32-8.33(m，1H)。ES+-MS292.4[M+H]+。
(5-氯-吡啶-3-基)-乙酸叔丁基酯的制備在RT氬氣氛下，將Pd2(dba)3(928mg，1.01mmol)和(2′-二環(huán)己基膦烷基-聯(lián)苯-2-基)-二甲基-胺(838mg，2.13mmol)加入到六甲基二甲硅烷基氨基鋰的甲苯溶液(在-78℃下，向六甲基二甲硅烷基胺(6.27g，38.85mmol)的甲苯(100ml)溶液加入n-BuLi(1.6M己烷溶液，24.3ml，38.85mmol)進(jìn)行制備)。將混合物在RT下攪拌10分鐘，然后冷卻至-10℃。在10分鐘內(nèi)加入乙酸叔丁酯(4.12g，35.48mmol)。將該混合物經(jīng)由套管加入到冷(-10℃)的1，3-二氯吡啶(5.00g，33.79mmol)的甲苯(40ml)溶液中。將混合物升溫至RT，攪拌2h。TLC分析表明原料基本轉(zhuǎn)化。加入水，過(guò)濾所得漿液，濾液用EtOAc萃取。合并有機(jī)層，經(jīng)Na2SO4干燥，濃縮。經(jīng)過(guò)FCC純化(己烷/EtOAc 100∶0至92∶8至85∶15)，得到標(biāo)題化合物。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.39(s，9H)，3.47(s，2H)，7.58-7.60(m，1H)，8.31(s，1H)，8.41-8.42(m，1H)。ES+-MS228.3[M+H]+。
實(shí)施例293-(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-[2-甲基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-吡咯-2，5-二酮 在0℃氬氣氛下，向2-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-硝基-吡啶-3-基]-乙酰胺(96mg，0.34mmol)與(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-氧代-乙酸甲酯(127mg，0.58mmol)的無(wú)水THF(8.0ml)溶液加入1.0M KOtBu的THF溶液(1.7ml，1.7mmol)。在0℃下攪拌2h后，TLC分析表明原料完全消耗。將反應(yīng)混合物用EtOAc稀釋，用鹽水洗滌。水相用EtOAc萃取，合并有機(jī)層，用鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，在減壓下濃縮。殘余物經(jīng)過(guò)FCC純化(EtOAc/AcOH/H2O 6∶1∶1)，得到標(biāo)題化合物，為橙色粉末。1H NMR(d6-DMSO 400MHz)δ2.05(s，3H)，2.04-2.11(m，4H)，2.46(s，3H)，3.06-3.14(m，4H)，6.35(d，J＝8.1Hz，1H)，6.65(dd，J＝8.1，7.2Hz，1H)，6.84(d，J＝7.2Hz，1H)，6.87(d，J＝2.0Hz，1H)，7.95(s，1H)，8.16(d，J＝2.0Hz，1H)。ES+-MS447[M+H]+。
2-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-硝基-吡啶-3-基]-乙酰胺的制備將[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-硝基-吡啶-3-基]-乙酸甲酯(222mg，0.75mmol)的33％NH4OH(100ml)水溶液在50℃密封高壓釜中攪拌16h。TLC分析表明原料完全消耗。在減壓下蒸發(fā)溶劑，得到標(biāo)題化合物，為黃色固體，為與對(duì)應(yīng)羧酸的3∶2混合物。1H NMR(d6-DMSO 400MHz)δ2.18(s，3H)，2.36-2.44(m，4H)，3.36-3.44(m，4H)，3.77(s，2H)，6.92(bs，1H)，7.34(d，J＝2Hz，1H)，7.44(bs，1H)，8.07(d，J＝2Hz，1H)。ES+-MS280.4[M+H]+。-乙酸甲酯的制備將(5-溴-2-硝基-吡啶-3-基)-乙酸甲酯(472mg，1.72mmol)與N-甲基哌嗪(344mg，3.44mmol)的混合物在氬氣氛下加熱18h。TLC分析表明原料完全消耗。將反應(yīng)混合物冷卻至RT，用水稀釋，用飽和NaHCO3水溶液調(diào)節(jié)至pH 8-9。水相用二氯甲烷萃取三次，合并有機(jī)層，用鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，在減壓下濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)過(guò)FCC純化(二氯甲烷/MeOH 95∶5至90∶10)，得到標(biāo)題化合物，為黃色固體。1H NMR(d6-DMSO 400MHz)δ2.01(s，3H)，2.22-2.26(m，4H)，3.24-3.28(m，4H)，3.40(s，3H)，3.81(s，2H)，7.26(d，J＝2Hz，1H)，7.97(d，J＝2Hz，1H)。ES+-MS295.3[M+H]+。
(5-溴-2-硝基-吡啶-3-基)-乙酸甲酯的制備在-78℃下，向5-溴-2-硝基-吡啶(2.33g，11.5mmol)與三甲基甲硅烷基-乙酸甲酯(1.8g，12.0mmol)的THF(12ml)懸液加入在70℃高真空下干燥TBAFx3H2O(7.5g)達(dá)18h所得干燥的TBAF(3.0g，11.5mmol)在乙腈(6ml)與THF(6ml)混合物中的溶液。將所得深紅色溶液在-40℃下攪拌1h。TLC分析表明原料完全消耗。將反應(yīng)混合物冷卻至-78℃，小心地加入DDQ(2.6g，11.5mmol)。將黑色溶液緩慢升溫至RT。由于TLC分析表明沒(méi)有發(fā)生進(jìn)一步的變化，使反應(yīng)混合物在EtOAc與飽和NH4Cl水溶液之間分配。分離各層，將有機(jī)層用飽和NH4Cl水溶液、鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，在減壓下濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)過(guò)FCC純化(環(huán)己烷/EtOAc 9∶1至8∶1)，得到標(biāo)題化合物，為黃色針晶。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ3.94(s，3H)，4.17(s，2H)，8.20(s，1H)，8.78(s，1H)。
遵照實(shí)施例28和29的步驟，但是使用適當(dāng)?shù)脑?，可以得到式E化合物，其中Ra、Rb和R2是如下表6所示的。
表6
實(shí)施例383-(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-4-基]-吡咯-2，5-二酮
將2-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-4-基]-乙酰胺(34mg，0.15mmol)與(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-氧代-乙酸甲酯(47mg，0.22mmol)的混合物溶于無(wú)水THF(3ml)，蒸發(fā)，進(jìn)行共沸干燥。在氬氣氛下，將混合物溶于無(wú)水THF(1ml)，在RT下滴加1.0M KOtBu的THF溶液(0.44ml，0.44mmol)。在RT下5分鐘后，TLC分析表明原料完全轉(zhuǎn)化。將反應(yīng)混合物用EtOAc稀釋，倒入飽和NH4Cl水溶液中。分離有機(jī)層，用鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，蒸發(fā)有機(jī)層。殘余物經(jīng)過(guò)FCC(CH2Cl2/MeOH 95∶5至90∶10至85∶15)和制備型HPLC純化(H2O/MeCN/TFA 95∶5∶0.1)，得到標(biāo)題化合物，為紅色TFA鹽。1H NMR(d6-DMSO，400MHz)δ2.48(s，3H)，2.78(s，3H)，2.78-3.02(m，4H)，3.39(d，J＝12Hz，2H)，4.14(d，J＝13Hz，2H)，6.24(d，J＝9Hz，1H)，6.71(d，J＝6Hz，1H)，8.03(d，J＝3Hz，1H)，8.10(d，J＝6Hz，1H)，9.71(s，寬峰，1H)，11.19(s，1H)，12.09(d，J＝3Hz，1H)。ES+-MS402.5[M+H]+，ES--MS400.3[M-H]-。
2-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-4-基]-乙酰胺的制備將[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-4-基]-乙酸叔丁基酯(95mg，0.33mmol)溶于TFA與CH2Cl2的混合物(5ml/5ml)，在RT下攪拌。在RT下1h后，TLC分析表明原料完全轉(zhuǎn)化。借助旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，用無(wú)水DMF(1.5ml)代替。在氬氣氛下，加入羰基二咪唑(58mg，0.36mmol)。在RT下20分鐘后，TLC分析表明羧酸完全轉(zhuǎn)化。在RT下加入氨水溶液(25％，6ml)。在RT下15分鐘后，在高真空下除去溶劑。將殘余物溶于CH2Cl2/MeOH(9∶1)，經(jīng)過(guò)FCC純化(CH2Cl2/MeOH，從95∶5至40∶60的緩慢梯度)，得到標(biāo)題化合物。1H NMR(d4-MeOD，400MHz)δ2.35(s，3H)，2.56(m，4H)，3.46(s，2H)，3.54(m，4H)，6.66(d，J＝6Hz，1H)，6.78(s，1H)，8.02(d，J＝6Hz，1H)。ES+-MS235.3[M+H]+。-乙酸叔丁基酯的制備將磷酸鉀(2.65g，12.47mmol)在120℃高真空下干燥45分鐘。冷卻至RT，放入干燥氬氣后，加入二亞芐基丙酮鈀(Pd2(dba)3，25mg，0.03mmol)和二-叔丁膦基五苯基二茂鐵(39mg，0.06mmol)。加入(2-氯-吡啶-4-基)-乙酸叔丁基酯(631mg，2.77mmol)的1，2-二甲氧基乙烷(14ml，穿過(guò)堿性氧化鋁柱干燥)溶液和1-甲基哌嗪(830mg，8.31mmol)。將反應(yīng)混合物升溫至40℃達(dá)1h。加入另外的Pd2(dba)3(25mg，0.03mmol)和膦配體(39mg，0.06mmol)，繼續(xù)在60℃下攪拌2h。加入另外的Pd2(dba)3(25mg，0.03mmol)和膦配體(39mg，0.06mmol)，繼續(xù)在90℃下攪拌18h，在RT下攪拌72h。TLC和MS分析表明有所需產(chǎn)物存在。將反應(yīng)混合物用EtOAc稀釋，倒入飽和NaCl水溶液中。分離有機(jī)層，經(jīng)Na2SO4干燥，蒸發(fā)溶劑。殘余物經(jīng)過(guò)FCC純化(己烷/EtOAc，從95∶5至90∶10的梯度)，得到標(biāo)題化合物。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.44(s，9H)，2.34(s，3H)，2.52(m，4H)，3.42(s，2H)，3.55(m，4H)，6.55(d，J＝4Hz，1H)，6.56(s，1H)，8.11(d，J＝4Hz，1H)。ES+-MS292.4[M+H]+。
(2-氯-吡啶-4-基)-乙酸叔丁基酯的制備在氬氣氛下，將六甲基二甲硅烷基胺(5.45g，33.8mmol)溶于無(wú)水甲苯(80ml)。用氬充分凈化溶劑后，將溶液冷卻至-78℃，加入n-BuLi(21.1ml1.6M己烷溶液，33.8mmol)。將混合物在-78℃下攪拌15分鐘，在RT下攪拌15分鐘，由此得到澄清的溶液。加入二亞芐基丙酮鈀(Pd2(dba)3，743mg，0.81mmol)和(2′-二環(huán)己基膦烷基-聯(lián)苯-2-基)-二甲基-胺(670mg，1.70mmol)。將混合物在RT下攪拌10分鐘，然后冷卻至-10℃。緩慢加入純乙酸叔丁酯(3.61g，31.08mmol)。在-10℃下10分鐘后，一次性加入2，4-二氯吡啶(4.00g，27.03mmol)。將反應(yīng)混合物升溫至RT。1h后，TLC分析表明原料完全消耗。將反應(yīng)混合物用EtOAc稀釋，倒入飽和NH4Cl水溶液中。分離有機(jī)層，用鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，蒸發(fā)溶劑。殘余物經(jīng)過(guò)FCC純化(己烷/EtOAc，從97∶3至90∶10的梯度)，得到標(biāo)題化合物。1HNMR(CDCl3，400MHz)δ1.44(s，9H)，3.51(s，2H)，7.15(dd，J＝1Hz，4Hz，1H)，7.27(d，J＝1Hz，1H)，8.32(d，J＝4Hz)。ES+-MS228.2，230.1(Cl)[M+H]+。
實(shí)施例393-(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-[5-甲基-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-4-基]-吡咯-2，5-二酮 將2-[5-甲基-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-4-基]-乙酰胺(30mg，0.12mmol)與(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-氧代-乙酸甲酯(39mg，0.18mmol)的混合物溶于無(wú)水THF(3ml)，蒸發(fā)，進(jìn)行共沸干燥。在氬氣氛下，將混合物溶于無(wú)水THF(1ml)，在RT下滴加1.0M KOtBu的THF溶液(0.36ml，0.36mmol)。在RT下10分鐘后，TLC分析表明原料完全轉(zhuǎn)化。將反應(yīng)混合物用EtOAc稀釋，倒入飽和NH4Cl水溶液中。分離有機(jī)層，用鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，蒸發(fā)有機(jī)層。殘余物經(jīng)過(guò)制備型HPLC純化(H2O/MeCN/TFA 95∶5∶0.1)，得到標(biāo)題化合物，為紅色TFA鹽。1H NMR(d6-DMSO，400MHz)δ1.79(s，3H)，2.44(s，3H)，2.79(d，J＝3Hz，3H)，2.75-3.07(m，2H)，3.44(s，寬峰，2H)，4.25(s，寬峰，2H)，6.30(d，J＝8Hz，1H)，6.64(dd，J＝8Hz，8Hz，1H)，6.86(s，1H)，6.88(d，J＝8Hz，1H)，8.00(d，J＝2Hz，1H)，8.04(s，1H)，9.70(s，寬峰，1H)，11.16(s，1H)，12.04(d，J＝2Hz，1H)。19F NMR(d6-DMSO，400MHz)δ-74.542。ES+-MS416.4[M+H]+，ES--MS414.4[M-H]-。
2-[5-甲基-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-4-基]-乙酰胺的制備將[5-甲基-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-4-基]-乙酸叔丁基酯(320mg，1.05mmol)溶于TFA與CH2Cl2的混合物(10ml/10ml)，在RT下攪拌。在RT下1h后，TLC分析表明原料完全轉(zhuǎn)化。借助旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，用無(wú)水DMF(1.5ml)代替。在氬氣氛下，加入羰基二咪唑(187mg，1.16mmol)。在RT下30分鐘后，TLC分析表明羧酸完全轉(zhuǎn)化。在RT下加入氨水溶液(25％，16ml)。在RT下15分鐘后，在高真空下除去溶劑。將殘余物溶于CH2Cl2/MeOH(9∶1)，經(jīng)過(guò)FCC純化(CH2Cl2/MeOH，從95∶5至40∶60的緩慢梯度)，得到標(biāo)題化合物。1H NMR(d6-DMSO，400MHz)δ2.07(s，3H)，2.38(s，3H)，2.64(s，寬峰，4H)，3.34(s，2H)，3.46(s，寬峰，4H)，6.72(s，1H)，6.95(s，寬峰，1H)，7.44(s，寬峰，1H)，7.87(s，1H)。ES+-MS249.3[M+H]+，ES--MS247.3[M-H]-。-乙酸叔丁基酯的制備在大約80℃高真空下干燥叔丁醇鈉(227mg，2.37mmol)。用氬凈化，冷卻至RT，加入乙酸鈀(39mg，0.17mmol)、外-2，2′-雙-二苯基膦烷基-[1，1′]聯(lián)萘(rac-BINAP，54mg，0.09mmol)和(2-氯-5-甲基-吡啶-4-基)-乙酸叔丁基酯(520mg，2.15mmol)。將混合物溶于二烷(7ml，在HV/氬下用三個(gè)冷凍-融化循環(huán)脫氣)，加入1-甲基-哌嗪(237mg，2.37mmol)。將含有反應(yīng)混合物的圓底燒瓶浸在預(yù)加熱的油浴(T＝85℃)中。30分鐘后，TLC分析表明原料幾乎完全轉(zhuǎn)化。將反應(yīng)混合物用EtOAc稀釋，倒入飽和NH4Cl水溶液中。分離有機(jī)層，用鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，蒸發(fā)溶劑。殘余物經(jīng)過(guò)FCC純化(CH2Cl2/MeOH，從98∶2至90∶10的緩慢梯度)，得到標(biāo)題化合物。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.43(s，9H)，2.14(s，3H)，2.34(s，3H)，2.51(m，4H)，3.44(s，2H)，3.49(m，4H)，6.51(s，1H)，7.96(s，1H)。ES+-MS306.4[M+H]+。
(2-氯-5-甲基-吡啶-4-基)-乙酸叔丁基酯的制備在氬氣氛下，將六甲基二甲硅烷基胺(1.33g，8.23mmol)溶于無(wú)水甲苯(15ml)。用氬充分凈化溶劑后，將溶液冷卻至-78℃，加入n-BuLi(5.1ml1.6M己烷溶液，8.23mmol)。將混合物在-78℃下攪拌15分鐘，在RT下攪拌15分鐘，由此得到澄清的溶液。加入二亞芐基丙酮鈀(Pd2(dba)3，151mg，0.16mmol)和(2′-二環(huán)己基膦烷基-聯(lián)苯-2-基)-二甲基-胺(136mg，0.35mmol)。將混合物在RT下攪拌10分鐘，然后冷卻至-10℃。緩慢加入凈的乙酸叔丁酯(924mg，7.96mmol)。在-10℃下10分鐘后，一次性加入2，4-二氯-5-甲基-吡啶(889mg，5.49mmol)。將反應(yīng)混合物升溫至RT。1h后，TLC分析表明原料完全消耗。將反應(yīng)混合物用EtOAc稀釋，倒入飽和NH4Cl水溶液中。分離有機(jī)層，用鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，蒸發(fā)溶劑。殘余物經(jīng)過(guò)FCC純化(己烷/EtOAc，從100∶0至90∶10的梯度)，得到標(biāo)題化合物。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.45(s，9H)，2.26(s，3H)，3.52(s，2H)，7.18(s，1H)，8.18(s，1H)。ES+-MS242.2，244.2(Cl)[M+H]+。
2，4-二氯-5-甲基-吡啶的制備將2，4-二氯-5-氯甲基-吡啶(1.43g，7.28mmol)溶于乙醇(14ml)。加入三乙胺(737mg，7.28mmol)后，加入阮內(nèi)鎳(143mg)。向反應(yīng)容器連接充有H2的氣囊。在RT下非常劇烈地機(jī)械攪拌3小時(shí)后，反應(yīng)試樣的NMR分析表明原料完全轉(zhuǎn)化。將反應(yīng)混合物用EtOAc稀釋，倒入水中，水層用EtOAc萃取三次。合并有機(jī)層，經(jīng)Na2SO4干燥。小心除去溶劑，得到標(biāo)題化合物，其純度足夠適合于進(jìn)一步使用。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ2.33(s，3H)，7.35(s，1H)，8.23(s，1H)。ES+-MS160，162，164(2Cl)[M+H]+。
2，4-二氯-5-氯甲基-吡啶的制備在氬氣氛下，將(4，6-二氯-吡啶-3-基)-甲醇(2.21g，12.41mmol)冷卻至0℃。小心地加入亞硫酰氯(8ml)。在0℃下5分鐘后，將溶液加熱至回流。10分鐘后，TLC分析表明原料完全轉(zhuǎn)化。冷卻至RT后，經(jīng)由膜泵除去過(guò)量亞硫酰氯。將剩余的油溶于EtOAc。將溶液倒入濃NaHCO3水溶液中。分離有機(jī)層，用濃NaCl水溶液洗滌兩次。經(jīng)Na2SO4干燥后，除去有機(jī)溶劑，得到標(biāo)題化合物，其濃度適合于立即進(jìn)一步使用。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ4.65(s，2H)，7.42(s，1H)，8.44(s，1H)。ES+-MS195，197，199(3Cl)[M+H]+。
(4，6-二氯-吡啶-3-基)-甲醇的制備將4，6-二氯-煙酸乙酯(5.0g，22.72mmol)溶于二烷(30ml)。加入氫氧化鋰(599mg，24.99mmol)的水(20ml)溶液，將混合物在RT下攪拌。30分鐘后，TLC分析表明原料完全轉(zhuǎn)化。除去溶劑，在高真空下充分干燥后，殘余4，6-二氯-煙酸的鋰鹽直接用于下一步。1H NMR(d6-DMSO，400MHz)δ7.54(s，1H)，8.34(s，1H)。ES--MS190.1，192.1，194.1(2Cl)[M-H]-。
在氬氣氛下，將4，6-二氯-煙酸的鋰鹽(4.5g，22.72mmol)懸浮在亞硫酰氯(28ml)中。在超聲浴中勻漿混合物后，將反應(yīng)混合物加熱至回流達(dá)2.5h，然后TLC分析表明原料完全消耗。將溶液冷卻至RT，利用膜泵除去過(guò)量亞硫酰氯。將固體殘余物冷卻至0℃，非常小心地加入硼氫化鈉(3.10g，81.85mmol)的水(35ml)溶液。在RT下1h后，TLC分析表明完全轉(zhuǎn)化。將反應(yīng)混合物用EtOAc稀釋，水性層用NaCl飽和。分離有機(jī)層，用鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，除去溶劑。經(jīng)過(guò)FCC純化(己烷∶EtOAc，從9∶1至7∶3的梯度)，得到標(biāo)題化合物。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ2.00(t，J＝6Hz，1H)，4.81(d，J＝6Hz，2H)，7.38(s，1H)，8.47(s，1H)。ES+-MS178.1，180.1，181.9(2Cl)[M+H]+。
遵照實(shí)施例39的步驟，但是使用適當(dāng)?shù)脑?，可以得到式F化合物，其中Rc、Rd、Re是H，Ra和Rb是如下表7所示的。
表7
實(shí)施例413-(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5-硝基-吡啶-4-基]-吡咯-2，5-二酮
將2-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5-硝基-吡啶-4-基]-乙酰胺(50mg，0.18mmol)與(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-氧代-乙酸甲酯(60mg，0.27mmol)的混合物溶于無(wú)水THF(10ml)，蒸發(fā)，進(jìn)行共沸干燥。在氬氣氛下，將混合物溶于無(wú)水THF(3ml)，在RT下滴加1.0M KOtBu的THF溶液(0.54ml，0.54mmol)。在RT下10分鐘后，TLC分析表明原料完全轉(zhuǎn)化。將反應(yīng)混合物用EtOAc稀釋，倒入飽和NH4Cl水溶液中。分離有機(jī)層，用鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，蒸發(fā)有機(jī)層。殘余物經(jīng)過(guò)制備型HPLC純化(H2O/MeCN/TFA 95∶5∶0.1)，得到標(biāo)題化合物，為紅色TFA鹽。1H NMR(d6-DMSO，400MHz)δ2.48(s，3H)，2.70(s，3H)，3.00-3.22(s，寬峰，1H)，4.05-4.43(s，寬峰，4H)，6.44(d，J＝8Hz，1H)，6.64(s，1H)，6.76(dd，J＝8Hz，8Hz，1H)，6.92(d，J＝8Hz，1H)，8.05(d，J＝2Hz，1H)，9.07(s，1H)，9.80(s，寬峰，1H)，11.30(s，1H)，12.10(d，J＝2Hz，1H)。19F NMR(d6-DMSO，400MHz)δ-73.959。ES+-MS447.3[M+H]+，ES--MS445.3[M-H]-。
2-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5-硝基-吡啶-4-基]-乙酰胺的制備將[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5-硝基-吡啶-4-基]-乙酸乙酯(250mg，0.81mmol)溶于甲醇(2.5ml)。加入氨水溶液(25％，2.5ml)，將混合物升溫至40℃達(dá)18h。TLC分析表明原料完全轉(zhuǎn)化。除去溶劑，殘余物經(jīng)過(guò)FCC純化(CH2Cl2/MeOH，從97∶3至90∶10的梯度)，得到標(biāo)題化合物。1H NMR(d6-DMSO，400MHz)δ2.21(s，3H)，2.38(m，4H)，3.72(m，4H)，3.80(s，2H)，6.84(s，1H)，6.93(s，寬峰，1H)，7.46(s，寬峰，1H)，8.85(s，1H)。ES+-MS280.3[M+H]+，ES--MS278.3[M-H]-。-乙酸乙酯的制備將磷酸鉀(2.48g，11.67mmol)在120℃高真空下干燥45分鐘。冷卻至RT，放入干燥氬后，加入二亞芐基丙酮鈀(Pd2(dba)3，24mg，0.026mmol)和二-叔丁膦基五苯基二茂鐵(37mg，0.052mmol)。加入(2-溴-5-硝基-吡啶-4-基)-乙酸乙酯(750mg，2.59mmol)的1，2-二甲氧基乙烷(10ml，穿過(guò)堿性氧化鋁柱干燥)溶液和1-甲基哌嗪(780mg，7.78mmol)。將反應(yīng)混合物在RT下攪拌10分鐘，此后TLC和MS分析表明原料完全轉(zhuǎn)化。將反應(yīng)混合物用EtOAc稀釋，倒入飽和NaCl水溶液中。分離有機(jī)層，經(jīng)Na2SO4干燥，蒸發(fā)溶劑。殘余物經(jīng)過(guò)FCC純化(己烷/EtOAc，從95∶5至90∶10的梯度)，得到標(biāo)題化合物。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.26(t，J＝7Hz，3H)，2.35(s，3H)，2.50(m，4H)，3.76(m，4H)，3.94(s，2H)，4.18(q，J＝7Hz，2H)，6.36(s，1H)，9.05(s，1H)。ES+-MS309.3[M+H]+，ES--MS307.3[M-H]-。
(2-溴-5-硝基-吡啶-4-基)-乙酸乙酯的制備在氬氣氛下，將2-溴-5-硝基吡啶(1.84g，9.06mmol)和三甲基硅烷基-乙酸乙酯(1.53g，9.52mmol)溶于無(wú)水THF(10ml)。冷卻至-78℃后，緩慢加入四丁基氟化銨(TBAF，2.37g，真空干燥過(guò)夜)在THF與乙腈混合物(10ml/10ml)中的溶液，以便反應(yīng)溫度不升至-65℃以上。完全加入后，將混合物在-40℃下攪拌30分鐘，在-20℃下攪拌10分鐘。將反應(yīng)混合物重新冷卻至-78℃，加入2，3-二氯-5，6-二氰基-對(duì)-苯醌(benzochinone)(DDQ，2.06g，9.06mmol)。將懸液升溫至RT。TLC分析表明完全轉(zhuǎn)化。將反應(yīng)混合物用EtOAc稀釋，倒入飽和NH4Cl溶液中。分離有機(jī)層，用鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，蒸發(fā)溶劑。殘余物經(jīng)過(guò)FCC純化(甲苯/EtOAc 100∶0至97∶3)，得到標(biāo)題化合物。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.26(t，J＝7Hz，3H)，4.01(s，2H)，4.19(q，J＝7Hz，2H)，7.53(s，1H)，9.06(s，1H)。ES--MS287，289[M-H]-。
遵照實(shí)施例41的步驟，但是使用適當(dāng)?shù)脑?，可以得到式G化合物，其中Ra和Rb是如下表8所示的。
表8
實(shí)施例433-[5-氯-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-4-基]-4-(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮
將2-[5-氯-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-4-基]-乙酰胺(90mg，0.18mmol)與(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-氧代-乙酸甲酯(109mg，0.50mmol)的混合物溶于無(wú)水THF(10ml)，蒸發(fā)，進(jìn)行共沸干燥。在氬氣氛下，將混合物溶于無(wú)水THF(3ml)，在RT下滴加1.0M KOtBu的THF溶液(1.0ml，1.0mmol)。在RT下10分鐘后，TLC分析表明原料完全轉(zhuǎn)化。將反應(yīng)混合物用EtOAc稀釋，倒入飽和NH4Cl水溶液中。分離有機(jī)層，用鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，蒸發(fā)有機(jī)層。殘余物經(jīng)過(guò)制備型HPLC純化(H2O/MeCN/TFA95∶5∶0.1)，得到標(biāo)題化合物，為紅色TFA鹽。1H NMR(d6-DMSO，400MHz)δ2.45(s，3H)，2.78(s，3H)，2.82-3.13(m，4H)，4.27(m，2H)，6.40(d，J＝8Hz，1H)，6.70(dd，J＝7Hz，8Hz，1H)，6.90(d，J＝7Hz，1H)，7.00(s，1H)，8.03(d，J＝2Hz，1H)，8.26(s，1H)，9.74(s，寬峰，1H)，11.27(s，1H)，12.1(d，J＝2Hz，1H)。ES+-MS436.3[M+H]+，ES--MS434.3[M-H]-。
2-[5-氯-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-4-基]-乙酰胺的制備在氬氣氛下，將[5-氯-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-4-基]-乙酸乙酯(385mg，1.29mmol)溶于無(wú)水DMF(4ml)。加入甲酰胺(195mg，4.33mmol)，將混合物加熱至105℃。在該溫度下，滴加甲醇鈉(5.4M MeOH溶液，0.24ml，1.29mmol)。20分鐘后，TLC分析表明不完全轉(zhuǎn)化，因而加入另外的甲醇鈉(0.08ml 5.4M MeOH溶液)。另外10分鐘后，根據(jù)TLC判斷反應(yīng)完全。將反應(yīng)混合物冷卻至RT，用CH2Cl2(150ml)稀釋。加入水(3ml)直至得到澄清的溶液。加入充足的Na2SO4以吸收水，蒸發(fā)有機(jī)溶劑。殘余物經(jīng)過(guò)FCC純化(CH2Cl2/MeOH 95∶5至80∶20)，得到標(biāo)題化合物。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ2.35(s，3H)，2.51(m，4H)，3.56(m，4H)，3.62(s，2H)，5.37(s，寬峰，1H)，5.54(s，寬峰，1H)，6.64(s，1H)，8.15(s，1H)。ES+-MS269.2，271.1(Cl)[M+H]+，ES--MS267.2，269.3(Cl)[M-H]-。-乙酸乙酯的制備在氬氣氛下，將[5-氨基-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-4-基]-乙酸乙酯(680mg，2.44mmol)溶于18％鹽酸水溶液(12ml)。冷卻該溶液至0℃后，歷經(jīng)15分鐘加入亞硝酸鈉(244mg，3.54mmol)的水(6ml)溶液，注意內(nèi)部溫度不升至5℃以上。在0℃下20分鐘后，將反應(yīng)混合物加入到-10℃的氯化銅(I)(新鮮制備，725mg，7.33mmol)的水(1.8ml)溶液中。在-10℃下15分鐘后，TLC分析表明完全轉(zhuǎn)化。將反應(yīng)混合物用EtOAc稀釋，倒入飽和NaCl水溶液中。分離有機(jī)層，經(jīng)Na2SO4干燥，濃縮。殘余物經(jīng)過(guò)FCC純化(CH2Cl2/MeOH，從98∶2至90∶10的梯度)，得到標(biāo)題化合物。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.27(t，J＝7Hz，3H)，2.34(s，3H)，2.50(m，4H)，3.52(m，4H)，3.66(s，2H)，4.19(q，J＝7Hz，2H)，6.59(s，1H)，8.11(s，1H)。ES+-MS298.2，300.1(Cl)[M+H]+，ES--MS296.2，298.2(Cl)[M-H]-。-乙酸乙酯的制備將[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5-硝基-吡啶-4-基]-乙酸乙酯(2.78g，9.02mmol)溶于MeOH(28ml)。加入披鈀碳(10％，96mg，0.90mmol)，向反應(yīng)燒瓶連接充有氫的氣囊。劇烈攪拌2.5h后，TLC分析表明完全轉(zhuǎn)化。將反應(yīng)混合物過(guò)濾，除去有機(jī)溶劑，殘余物經(jīng)過(guò)FCC純化(CH2Cl2/MeOH，從97∶3至70∶30的梯度)，得到[5-氨基-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-4-基]-乙酸乙酯。1HNMR(CDCl3，400MHz)δ1.27(t，J＝7Hz，3H)，2.35(s，3H)，2.54(m，4H)，3.40(m，4H)，3.55(s，2H)，3.62(s，寬峰，2H)，4.16(q，J＝7Hz，2H)，6.50(s，1H)，7.79(s，1H)。ES+-MS279.3[M+H]+。
遵照實(shí)施例43的步驟，但是使用適當(dāng)?shù)脑?，可以得到式H化合物，其中Ra和Rb是如下表9所示的。
表9
實(shí)施例453-(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5-三氟甲基-吡啶-4-基]-吡咯-2，5-二酮 將2-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5-三氟甲基-吡啶-4-基]-乙酰胺(80mg，0.26mmol)與(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-氧代-乙酸甲酯(86mg，0.40mmol)的混合物溶于無(wú)水THF(10ml)，蒸發(fā)，進(jìn)行共沸干燥。在氬氣氛下，將混合物溶于無(wú)水THF(3ml)，在RT下滴加1.0M KOtBu的THF(1.05ml，1.05mmol)溶液。在RT下45分鐘后，TLC分析表明原料完全轉(zhuǎn)化。將反應(yīng)混合物用EtOAc稀釋，倒入飽和NH4Cl水溶液中。分離有機(jī)層，用鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，蒸發(fā)有機(jī)層。殘余物經(jīng)過(guò)制備型HPLC純化(H2O/MeCN/TFA 95∶5∶0.1)，得到標(biāo)題化合物，為紅色TFA鹽。1H NMR(d6-DMSO，400MHz)δ2.44(s，3H)，2.78(s，3H)，2.74-3.54(m，寬峰，6H)，4.34-4.58(m，寬峰，2H)，6.62(d，J＝8Hz，1H)，6.74(dd，J＝7Hz，8Hz，1H)，6.90(d，J＝7Hz，1H)，7.03(s，1H)，7.96(d，J＝3Hz，1H)，8.58(s，1H)，9.84(s，寬峰，1H)，11.27(s，1H)，12.01(d，J＝3Hz，1H)。19F NMR(d6-DMSO，400MHz)δ-74.00，-57.33。ES+-MS470.3[M+H]+。
2-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5-三氟甲基-吡啶-4-基]-乙酰胺的制備將[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5-三氟甲基-吡啶-4-基]-乙酸叔丁基酯(475mg，1.32mmol)溶于TFA與CH2Cl2的混合物(10ml/10ml)，在RT下攪拌。在RT下1.5h后，TLC分析表明原料完全轉(zhuǎn)化。借助旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，用無(wú)水DMF(5ml)代替。在氬氣氛下，加入羰基二咪唑(236mg，1.46mmol)。在RT下3h后，TLC分析表明羧酸完全轉(zhuǎn)化。在RT下加入氨水溶液(25％，20ml)。在RT下15分鐘后，在高真空下除去溶劑。將殘余物溶于CH2Cl2/MeOH(9∶1)，經(jīng)過(guò)FCC純化(CH2Cl2/MeOH，從90∶10至40∶60的緩慢梯度)，得到標(biāo)題化合物。1H NMR(d6-DMSO，400MHz)δ2.69(s，3H)，2.93-3.18(m，寬峰，4H)，3.54(s，2H)，3.59-3.98(m，寬峰，4H)，6.95(s，1H)，7.02(s，寬峰，1H)，7.47(s，寬峰，1H)，8.45(s，1H)。ES+-MS303.2[M+H]+。-乙酸叔丁基酯的制備在大約80℃高真空下干燥叔丁醇鈉(354mg，3.68mmol)。用氬凈化，冷卻至RT，加入乙酸鈀(60mg，0.27mmol)、外-2，2′-雙-二苯基膦烷基-[1，1′]聯(lián)萘(rac-BINAP，83mg，0.13mmol)和(2-氯-5-三氟甲基-吡啶-4-基)-乙酸叔丁基酯(990mg，3.35mmol)。將混合物溶于二烷(11ml，在HV/氬下用三個(gè)冷凍-融化循環(huán)脫氣)，加入1-甲基-哌嗪(369mg，3.68mmol)。將含有反應(yīng)混合物的圓底燒瓶浸在預(yù)加熱的油浴(T＝85℃)中。1h后，TLC分析表明原料幾乎完全轉(zhuǎn)化。將反應(yīng)混合物冷卻至RT，用EtOAc稀釋，倒入飽和NH4Cl水溶液中。分離有機(jī)層，用鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，蒸發(fā)溶劑。殘余物經(jīng)過(guò)FCC純化(CH2Cl2/MeOH，從99∶1至94∶6的緩慢梯度)，得到標(biāo)題化合物。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.44(s，9H)，2.34(s，3H)，2.50(m，4H)，3.59(s，2H)，3.66(m，4H)，6.54(s，1H)，8.35(s，1H)。ES+-MS360.3[M+H]+。
(2-氯-5-三氟甲基-吡啶-4-基)-乙酸叔丁基酯的制備在干燥氬氣氛下，將二亞芐基丙酮鈀(Pd2(dba)3，22mg，0.02mmol)、二-叔丁膦基五苯基二茂鐵(17mg，0.02mmol)、2-氯-4-碘-5-三氟甲基-吡啶(1.50g，4.88mmol)與從溴乙酸叔丁酯和活化鋅金屬制備的雷佛馬茨基試劑(1.40g，5.37mmol)的混合物懸浮在無(wú)水和經(jīng)過(guò)脫氣的THF(20ml)中。將混合物加熱至60℃。在45分鐘和90分鐘后，加入另外的二亞芐基丙酮鈀(Pd2(dba)3，22mg，0.02mmol)、二-叔丁膦基五苯基二茂鐵(17mg，0.02mmol)和雷佛馬茨基試劑(1.40g，5.37mmol)。在60℃下總計(jì)2.5h后，TLC分析表明原料完全轉(zhuǎn)化。冷卻至RT后，將反應(yīng)混合物用等量EtOAc與H2O稀釋，通過(guò)緊密的棉塞過(guò)濾。分離有機(jī)層，用鹽水洗滌兩次，經(jīng)Na2SO4干燥，蒸發(fā)溶劑。殘余物經(jīng)過(guò)FCC純化(己烷/EtOAc，從100∶0至97∶3梯度)，得到標(biāo)題化合物。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ1.44(s，9H)，3.71(s，2H)，7.39(s，1H)，8.63(s，1H)。ES+-MS294.1，296.2(Cl)[M+H]+。
遵照實(shí)施例45的步驟，但是使用適當(dāng)?shù)脑?，可以得到式I化合物，其中Ra和Rb是如下表10所示的。
表10
實(shí)施例47G6976
按照上述，本發(fā)明進(jìn)一步提供1.1PKC抑制劑，它具備就PKC的α和β以及任選地θ同工型相對(duì)于一種或多種其他PKC同工型而言的選擇性，例如相對(duì)于一種或多種同工型δ、ε和/或η而言的選擇性，并且具備就PKC相對(duì)于一種或多種不屬于CDK家族的蛋白激酶而言的選擇性，例如相對(duì)于一種或多種酪氨酸激酶，例如相對(duì)于一種或多種PKA、PKB、Abl、Met、Src、Ins-R、Flt-3、JAK-2、KDR和Ret蛋白，例如相對(duì)于一種或多種Flt-3、JAK-2、KDR或Ret蛋白而言的選擇性，所述抑制劑為游離形式或藥學(xué)上可接受的鹽形式。該化合物優(yōu)選地顯示就α和βPKC相對(duì)于一種或多種其他PKC同工型而言至少10倍、更優(yōu)選20倍、最優(yōu)選100倍的選擇性。該化合物優(yōu)選地顯示就PKC相對(duì)于其他蛋白激酶而言至少10倍、更優(yōu)選20倍、最優(yōu)選100倍的選擇性。
1.2PKC抑制劑，它具備就PKC的α和β以及任選地θ同工型相對(duì)于一種或多種其他PKC同工型而言的選擇性，例如相對(duì)于一種或多種同工型δ、ε和/或η而言的選擇性，根據(jù)MLR測(cè)定法所測(cè)定的IC50值與根據(jù)BM測(cè)定法所測(cè)定的IC50值之比高于5、10、20、30或50，所述抑制劑為游離形式或藥學(xué)上可接受的鹽形式。優(yōu)選地，該比例高于20或30。優(yōu)選地，MLR和BM測(cè)定法是如上所定義進(jìn)行的。
1.3PKC抑制劑，它具備就α、β和θPKC同工型相對(duì)于一種或多種其他PKC同工型而言的選擇性，例如相對(duì)于一種或多種PKC同工型δ、ε和/或η而言的選擇性，所述抑制劑為游離形式或藥學(xué)上可接受的鹽形式。該化合物也可以具備就PKC相對(duì)于其他蛋白激酶而言的選擇性，例如相對(duì)于不屬于CDK家族的蛋白激酶，例如相對(duì)于一種或多種酪氨酸激酶而言的選擇性。該化合物優(yōu)選地顯示就PKC相對(duì)于不屬于CDK家族的蛋白激酶而言的選擇性。
2.1PKC抑制劑的用途，該抑制劑是就PKC的α和β以及任選地θ同工型相對(duì)于一種或多種其他PKC同工型而言選擇性的，例如相對(duì)于一種或多種同工型δ、ε和/或η而言選擇性的，所述抑制劑為游離形式或藥學(xué)上可接受的鹽形式，用于預(yù)防或治療由T淋巴細(xì)胞和/或PKC介導(dǎo)的障礙或疾病，或者預(yù)防、抑制或控制急性或慢性移植排斥或移植物抗宿主疾病，預(yù)防或治療自身免疫病或障礙、炎性疾病、感染性疾病、心血管疾病或癌癥。
2.2PKC抑制劑的用途，該抑制劑根據(jù)MLR測(cè)定法所測(cè)定的IC50值與根據(jù)BM測(cè)定法所測(cè)定的IC50值之比高于5、10、20、30或50，例如高于20或30，所述抑制劑為游離形式或藥學(xué)上可接受的鹽形式，用于預(yù)防或治療由T淋巴細(xì)胞和/或PKC介導(dǎo)的障礙或疾病，或者預(yù)防、抑制或控制急性或慢性移植排斥或移植物抗宿主疾病，預(yù)防或治療自身免疫病或障礙、炎性疾病、感染性疾病、心血管疾病或癌癥。
2.3PKC抑制劑的用途，該抑制劑是就PKC、任選PKCα和PKCβ相對(duì)于一種或多種其他蛋白激酶而言選擇性的，例如相對(duì)于一種或多種其他不屬于CDK家族的蛋白激酶，例如相對(duì)于一種或多種酪氨酸激酶是選擇性的，所述抑制劑為游離形式或藥學(xué)上可接受的鹽形式，用于預(yù)防或治療由T淋巴細(xì)胞和/或PKC介導(dǎo)的障礙或疾病，或者預(yù)防、抑制或控制急性或慢性移植排斥或移植物抗宿主疾病，預(yù)防或治療自身免疫病或障礙、炎性疾病、感染性疾病、心血管疾病或癌癥。
2.4如上1.1、1.2或1.3下所示PKC抑制劑的用途，例如式I或Ib化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，用于預(yù)防或治療由T淋巴細(xì)胞和/或PKC介導(dǎo)的障礙或疾病，或者預(yù)防、抑制或控制急性或慢性移植排斥或移植物抗宿主疾病，預(yù)防或治療自身免疫病或障礙、炎性疾病、感染性疾病、心血管疾病或癌癥。
2.5本發(fā)明PKC抑制劑的用途，例如上文1.1、1.2或1.3下所示，例如式I或Ib化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，用于抑制移植排斥或移植物抗宿主疾病。
2.6本發(fā)明PKC抑制劑的用途，例如上文1.1、1.2或1.3下所示，例如式I或Ib化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，用于預(yù)防或治療自身免疫病。
3.式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽作為藥物的用途。
4.1式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽作為選擇性PKC抑制劑的用途，例如作為如上文1.1、1.2或1.3下所示PKC抑制劑。
4.2式Ib化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽作為如上文1.1、1.2或1.3下所示選擇性PKC抑制劑的用途。
5.1預(yù)防或治療需要這種治療的受試者由T淋巴細(xì)胞和/或PKC介導(dǎo)的障礙或疾病的方法，該方法包括對(duì)所述受試者施用有效量的本發(fā)明PKC抑制劑，例如這樣一種PKC抑制劑，它是就PKC的α和β以及任選地θ同工型相對(duì)于一種或多種其他PKC同工型而言是選擇性的，例如相對(duì)于一種或多種同工型δ、ε和η，或者如上文1.1、1.2或1.3下所示PKC抑制劑，或者式I或Ib化合物，或者其藥學(xué)上可接受的鹽。
5.2預(yù)防或治療需要這種治療的受試者中急性或慢性移植排斥、移植物抗宿主疾病、炎性或自身免疫病、癌癥、心血管疾病或感染性疾病的方法，該方法包括對(duì)所述受試者施用有效量的本發(fā)明PKC抑制劑，例如這樣一種PKC抑制劑，它是就PKC的α和β以及任選地θ同工型相對(duì)于一種或多種其他PKC同工型，例如相對(duì)于一種或多種同工型δ、ε和η而言是選擇性的，或者如上文1.1、1.2或1.3下所示PKC抑制劑，或者式I或Ib化合物，或者其藥學(xué)上可接受的鹽。
6.1藥物組合物，例如用在任意如上4.1和4.2中的方法中，該藥物組合物包含本發(fā)明的PKC抑制劑，例如這樣一種PKC抑制劑，它是就PKC的α和β以及任選地θ同工型相對(duì)于一種或多種其他PKC同工型，例如相對(duì)于一種或多種同工型δ、ε和η而言是選擇性的，或者如上文1.1、1.2或1.3下所示PKC抑制劑，或者式I或Ib化合物，其游離形式或藥學(xué)上可接受的鹽形式，與之結(jié)合有藥學(xué)上可接受的稀釋劑或載體。
6.2本發(fā)明的PKC抑制劑，例如這樣一種PKC抑制劑，它是就PKC的α和β以及任選地θ同工型相對(duì)于一種或多種其他PKC同工型，例如相對(duì)于一種或多種同工型δ、ε和η而言是選擇性的，或者如上文1.1、1.2或1.3下所示PKC抑制劑，或者式I或Ib化合物，其游離形式或藥學(xué)上可接受的鹽形式，用于制備藥物組合物。
6.3本發(fā)明的PKC抑制劑，例如這樣一種PKC抑制劑，它是就PKC的α和β以及任選地θ同工型相對(duì)于一種或多種其他PKC同工型，例如相對(duì)于一種或多種同工型δ、ε和η而言是選擇性的，或者如上文1.1、1.2或1.3下所示PKC抑制劑，或者式I或Ib化合物，其游離形式或藥學(xué)上可接受的鹽形式，用于制備用在任意如上5.1和5.2中的方法中的藥物組合物，例如用于抑制急性或慢性移植排斥或移植物抗宿主疾病，或者預(yù)防或治療自身免疫病或障礙。
就本發(fā)明化合物，例如式I或Ib化合物的用途而言，所需劑量當(dāng)然將因給藥方式、所治療的特定病癥和所需效果而異。一般而言，按照約0.1至約100mg/kg體重的每日劑量全身給藥，可以獲得令人滿意的結(jié)果。適用于大型哺乳動(dòng)物、例如人類的每日劑量在約0.5mg至約2000mg的范圍內(nèi)，例如適宜以分份劑量施用，多達(dá)一天四次，或者以延遲方式施用。
本發(fā)明的選擇性PKC抑制劑、例如式I或Ib化合物可以借助任意常規(guī)途徑給藥，特別是腸內(nèi)方式，例如口服，例如片劑或膠囊形式，或者腸胃外方式，例如可注射溶液劑或混懸劑形式，或者局部方式，例如洗劑、凝膠劑、軟膏或霜?jiǎng)┬问剑蛘弑怯没蛩▌┬问?。包含本發(fā)明選擇性PKC抑制劑、例如式I化合物的游離形式或藥學(xué)上可接受的鹽形式結(jié)合至少一種藥學(xué)可接受載體或稀釋劑的藥物組合物可以按照常規(guī)方式制造，與藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑混合即可。用于口服施用的單位劑型例如含有約0.1mg至約500mg的活性物質(zhì)。
局部給藥例如用于皮膚。進(jìn)一步的局部給藥是施用于眼睛。
本發(fā)明的選擇性PKC抑制劑、例如式I或Ib化合物可以以游離形式或藥學(xué)上可接受的鹽形式給藥，例如如上所示。這類鹽可以按照常規(guī)方式制備，并且表現(xiàn)與游離化合物相同級(jí)別的活性。
測(cè)定法所用測(cè)定法是如上文所描述的。
一些本發(fā)明化合物所得PKCβ的IC50值與PKCα的IC50值之比、PKCδ的IC50值與PKCα的IC50值之比、PKCε的IC50值與PKCα的IC50值之比、PKCη的IC50值與PKCα的IC50值之比、PKCθ的IC50值與PKCα的IC50值之比、根據(jù)MLR測(cè)定法所測(cè)定的IC50值與根據(jù)BM測(cè)定法所測(cè)定的IC50值之比如表11所示。
PKCα、β、δ、ε、η與θ測(cè)定法、MLR和BM測(cè)定法是如上所述的。
表11
本發(fā)明的選擇性抑制劑、例如α、β和任選地θPKC的選擇性抑制劑、特別是式I或Ib化合物可以作為單獨(dú)的活性成分或者與其他免疫調(diào)控方案用藥或其他抗炎劑一起給藥，例如用于治療或預(yù)防同種異體或異種移植物的急性或慢性排斥或者炎性或自身免疫障礙。例如，它們可以與下列藥物聯(lián)合使用環(huán)孢菌素或子囊菌素或者它們的免疫抑制性類似物或衍生物，例如環(huán)孢菌素A、ISA Tx247、FK-506、ABT-281、ASM 981；mTOR抑制劑，例如雷帕霉素、40-O-(2-羥基乙基)-雷帕霉素、CCI779、ABT578或者雷帕類似物(rapalog)，例如AP23573、AP23464、AP23675、AP23841、TAFA-93、biolimus 7或biolimus 9等；皮質(zhì)甾類；環(huán)磷酰胺；硫唑嘌呤；甲氨蝶呤；S1P受體調(diào)控劑，例如FTY 720或其類似物；來(lái)氟米特或其類似物；咪唑立賓；霉酚酸或其鹽，例如鈉鹽；霉酚酸酯；15-脫氧精胍菌素或其類似物；免疫抑制性單克隆抗體，例如抗白細(xì)胞受體的單克隆抗體，例如MHC、CD2、CD3、CD4、CD11a/CD18、CD7、CD25、CD27、B7、CD40、CD45、CD58、CD137、ICOS、CD150(SLAM)、OX40、4-1BB或它們的配體，例如CD154；或者其他免疫調(diào)節(jié)化合物，例如具有至少一部分CTLA4或其突變體的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的重組結(jié)合分子，例如與非CTLA4蛋白序列連接的CTLA4或其突變體的至少細(xì)胞外部分，例如CTLA4Ig(例如ATCC 68629)或其突變體，例如LEA29Y，或者其他粘連分子抑制劑，例如mAbs或者低分子量抑制劑，包括LFA-1拮抗劑、選擇蛋白拮抗劑和VLA-4拮抗劑。本發(fā)明的選擇性PKC抑制劑、例如式I化合物也可以與抗增殖藥一起給藥，所述抗增殖藥為例如化療藥，例如用在癌癥治療中的化療藥，包括但不限于芳化酶抑制劑、抗雌激素、拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑、拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制劑、微管活性劑、烷基化劑、組蛋白去乙酰酶抑制劑、法呢基轉(zhuǎn)移酶抑制劑、COX-2抑制劑、MMP抑制劑、mTOR抑制劑、抗瘤形成性抗代謝產(chǎn)物、鉑化合物、降低蛋白激酶活性的化合物與其他抗血管生成化合物、高那瑞林激動(dòng)劑、抗雄激素、bengamide、雙膦酸酯、抗增殖性抗體和替莫唑胺，或者與下列藥物一起用在糖尿病療法中抗糖尿病藥、胰島素促分泌劑或胰島素分泌增強(qiáng)劑，例如磺酰脲，例如甲苯磺丁脲、氯磺丙脲、妥拉磺脲、醋酸己脲、4-氯-N-[(1-吡咯烷基氨基)羰基]苯磺酰胺(格列吡脲)、格列本脲(優(yōu)降糖)、格列齊特、1-丁基-3-間氨基苯磺酰脲、氨磺丁脲、格列波脲、格列吡嗪、格列喹酮、格列派特、格列噻唑、格列丁唑、格列己脲、格列嘧啶、格列平脲、苯磺丁脲或甲苯磺環(huán)己脲；口服促胰島素劑衍生物，例如短效胰島素增強(qiáng)劑，例如氯茴苯酸、瑞格列奈；苯基乙酸衍生物，例如納格列奈；DPP IV抑制劑，例如1-{2-[(5-氰基吡啶-2-基)氨基]乙基氨基}乙?；?(2S)-氰基-吡咯烷二鹽酸鹽、LAF237、GLP-1或GLP-1激動(dòng)劑類似物；或者胰島素致敏劑，例如過(guò)氧化物酶體增殖物活化受體γ激動(dòng)劑(PPARγ)，例如格列他腙，非格列他腙型，例如N-(2-苯甲酰基苯基)-L-酪氨酸類似物，例如GI-262570，或者唑烷二酮，例如JTT501；雙重PPARγ/PPARα激動(dòng)劑，例如DRF-554158、NC-2100或NN-622；類視黃酸X受體激動(dòng)劑或類視黃酸(rexinoid)，例如2-[1-(3，5，5，8，8-五甲基-5，6，7，8-四氫-2-萘基)-環(huán)丙基]-吡啶-5-羧酸、4-[(3，5，5，8，8-五甲基-5，6，7，8-四氫-2-萘基)-2-羰基]-苯甲酸、9-順式視黃酸或其類似物、衍生物或藥學(xué)上可接受的鹽。
按照上述，本發(fā)明在更進(jìn)一步的方面提供7.如上所定義的方法，其包括治療有效量的游離形式或藥學(xué)上可接受的鹽形式的本發(fā)明化合物、例如就α、β和任選的θPKC相對(duì)于一種或多種其他PKC同工型而言選擇性的抑制劑、例如就PKC相對(duì)于一種或多種其他蛋白激酶、例如相對(duì)于一種或多種不屬于CDK-1家族的蛋白激酶而言選擇性的抑制劑、例如如上文1.1、1.2和1.3下所示的化合物、例如式I或Ib化合物，與第二藥物物質(zhì)共同給藥，例如相伴或順序給藥，所述第二藥物物質(zhì)是如上所示的免疫抑制、免疫調(diào)節(jié)、抗炎、抗增殖或抗糖尿病藥。
8.治療組合，例如藥盒，其包含a)游離形式或藥學(xué)上可接受的鹽形式的本發(fā)明化合物，例如就α、β和任選地θPKC相對(duì)于一種或多種其他PKC同工型而言選擇性的抑制劑，例如就PKC相對(duì)于一種或多種其他蛋白激酶，例如相對(duì)于一種或多種不屬于CDK-1家族的蛋白激酶而言選擇性的抑制劑，例如如上文1.1、1.2和1.3下所示的化合物，例如式I或Ib化合物，和b)至少一種第二種活性劑，其選自如上所示的免疫抑制、免疫調(diào)節(jié)、抗炎、抗增殖和抗糖尿病藥。組分a)和組分b)可以相伴或順序使用。該藥盒可以包含其給藥指導(dǎo)。
若本發(fā)明的PKC選擇性抑制劑、例如α、β和任選地θPKC的選擇性抑制劑、例如式I或Ib化合物與其他免疫抑/免疫調(diào)節(jié)、抗炎、抗增殖或抗糖尿病療法聯(lián)合施用的，例如用于預(yù)防或治療如上所指定的急性或慢性移植排斥或者炎性或自身免疫障礙，共同施用的免疫抑制、免疫調(diào)節(jié)、抗炎、抗增殖或抗糖尿病化合物的劑量當(dāng)然將因所采用的共同藥物類型(例如它是甾類還是環(huán)孢菌素)、所采用的特定藥物、所治療的病癥等而異。
本發(fā)明的選擇性PKC抑制劑、特別是就α、β和任選地θPKC相對(duì)于一種或多種其他PKC同工型而言選擇性的抑制劑、特別是式I和Ib化合物，具有令人感興趣的藥物動(dòng)力學(xué)分布圖和令人感興趣的體外與體內(nèi)活性。
權(quán)利要求
1.游離形式或藥學(xué)上可接受的鹽形式的PKC抑制劑化合物的用途，用于生產(chǎn)治療或預(yù)防由T淋巴細(xì)胞和/或PKC介導(dǎo)的疾病或障礙，特別是同種異體移植排斥、移植物抗宿主疾病、自身免疫病、感染性疾病、炎性疾病、心血管疾病或癌癥的藥物，其中所述化合物具有就PKCα、PKCβ和任選地PKCθ相對(duì)于一種或多種其他PKC同工型而言至少10倍的選擇性，該選擇性是如通過(guò)該化合物對(duì)于不是PKCα和PKCβ、并且任選地不是PKCθ的PKC的IC50與該化合物對(duì)于PKCα、PKCβ或PKCθ的IC50之比所測(cè)量的。
2.游離形式或藥學(xué)上可接受的鹽形式的PKC抑制劑化合物，其中所述化合物具有就PKC相對(duì)于一種或多種不屬于CDK-家族的蛋白激酶而言的選擇性，和如根據(jù)權(quán)利要求1所測(cè)量的就PKCα、PKCβ和任選地PKCθ相對(duì)于一種或多種其他PKC同工型而言至少10倍的選擇性。
3.游離形式或藥學(xué)上可接受的鹽形式的PKC抑制劑化合物，其中所述化合物具有就PKCα、PKCβ和任選地PKCθ相對(duì)于一種或多種其他PKC同工型而言至少10倍的選擇性，并且如根據(jù)同種異體混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)測(cè)定法所測(cè)定的所述化合物的IC50值與根據(jù)骨髓增殖(BM)測(cè)定法所測(cè)定的所述化合物的IC50值之比高于5。
4.游離形式或藥學(xué)上可接受的鹽形式的PKC抑制劑化合物，其中所述化合物具有如根據(jù)權(quán)利要求1所測(cè)量的就PKCα、PKCβ和PKCθ相對(duì)于一種或多種其他PKC同工型而言至少10倍的選擇性。
5.式I化合物或其鹽， 其中Ra是H；C1-4烷基；或者被OH、NH2、NHC1-4烷基或N(二-C1-4烷基)2取代的C1-4烷基；Rb、Rc、Rd和Re之一是鹵素、C1-4烷氧基、C1-4烷基、CF3或CN，其他三個(gè)取代基各自是H；或者Rb、Rc、Rd和Re都是H；R是式(a)、(b)或(c)的原子團(tuán) 其中R1是-(CH2)n-NR3R4，其中每一R3和R4獨(dú)立地是H或C1-4烷基；或者R3和R4與它們所結(jié)合的氮原子一起形成雜環(huán)殘基；n是0、1或2；R2是H、鹵素、C1-4烷基、CF3、OH、SH、NH2、C1-4烷氧基、C1-4烷硫基、NHC1-4烷基、N(二-C1-4烷基)2、CN、炔或NO2；其中每一R10和R10a獨(dú)立地是雜環(huán)殘基；或者式α的原子團(tuán)-X-Rf-Y (α)其中X是直接鍵、O、S或NR11，其中R11是H或C1-4烷基，Rf是C1-4亞烷基或者其中一個(gè)CH2被CRxRy代替的C1-4亞烷基，其中Rx和Ry之一是H，另一個(gè)是CH3，每一Rx和Ry是CH3，或者Rx和Ry一起形成-CH2-CH2-，Y結(jié)合于末端碳原子并且選自O(shè)H；-NR30R40，其中每一R30和R40獨(dú)立地是H、C3-6環(huán)烷基、C3-6環(huán)烷基-C1-4烷基、芳基-C1-4烷基、雜芳基-C1-4烷基、C2-6烯基或C1-4烷基，任選地在末端碳原子上被OH、鹵素、C1-4烷氧基或-NR50R60取代，其中每一R50和R60獨(dú)立地是H、C1-4烷基、C3-6環(huán)烷基、C3-6環(huán)烷基-C1-4烷基、芳基-C1-4烷基，或者R30和R40與它們所結(jié)合的氮原子一起形成雜環(huán)殘基；每一R20和R20a獨(dú)立地是H、鹵素、C1-4烷基、C1-4烷氧基、CF3、腈、硝基或氨基。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的化合物，其中Ra是H或甲基；每一R2、R20和R20a獨(dú)立地是H、Cl、NO2、F、CF3或甲基；n是0或1；Rb、Rc、Rd和Re之一是甲基或乙基，其他三個(gè)取代基是H；或者Rb、Rc、Rd和Re都是H；每一R3和R4獨(dú)立地是H、甲基、乙基或異丙基；或者R3和R4與它們所結(jié)合的氮原子一起形成任選被取代的雜環(huán)殘基；每一R1、R10和R10a獨(dú)立地是雜環(huán)殘基。
7.游離形式或藥學(xué)上可接受的鹽形式的根據(jù)權(quán)利要求5或6的化合物，其選自3-[5-氯-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-4-基]-4-(1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、3-(2-氯-7-二甲氨基甲基-奈1-基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、3-(7-氨基甲基-2-氯-萘-1-基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、3-(2-氯-7-甲氨基甲基-萘-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、3-(2-氯-7-甲氨基甲基-萘-1-基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、3-(2-氯-7-甲氨基甲基-萘-1-基)-4-(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、3-(2-氯-7-甲氨基甲基-萘-1-基)-4-(6-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、3-(2-氯-7-甲氨基甲基-萘-1-基)-4-(5-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、3-(2-氯-7-二甲氨基甲基-萘-1-基)-4-(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、3-(2-氯-7-二甲氨基甲基-萘-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、3-(2-氯-7-二甲氨基甲基-萘-1-基)-4-(6-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、3-(2-氯-7-二甲氨基甲基-萘-1-基)-4-(5-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、3-{2-氯-7-[(乙基-甲基-氨基)-甲基]-萘-1-基}-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、3-(2-氯-7-二乙氨基甲基-萘-1-基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、3-(2-氯-7-乙氨基甲基-萘-1-基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、3-[2-氯-7-(異丙基氨基-甲基)-萘-1-基]-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、3-[2-氯-7-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)萘-1-基]-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、3-(2-氯-7-吡咯烷-1-基甲基-萘-1-基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、3-(7-氨基甲基-2-甲基-萘-1-基)-4-(1，7-二甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、3-(7-氨基甲基-2-甲基-萘-1-基)-4-(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、3-(7-氨基甲基-2-甲基-萘-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、3-(7-氨基甲基-2-甲基-萘-1-基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、3-(7-氨基甲基-萘-1-基)-4-(1-H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、3-(7-氨基甲基-萘-1-基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、3-(7-氨基-萘-1-基)-4-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、3-(7-氨基-萘-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、3-(7-二甲氨基甲基-2-氟-萘-1-基)-4-(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、3-(7-二甲氨基甲基-2-氟-萘-1-基)-4-(1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-吡咯-2，5-二酮、3-(1H-吲哚-3-基)-4-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-吡咯-2，5-二酮、3-(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲基-吡啶-3-基]-吡咯-2，5-二酮、3-(1H-吲哚-3-基)-4-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲基-吡啶-3-基]-吡咯-2，5-二酮、3-(1-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲基-吡啶-3-基]-吡咯-2，5-二酮、3-(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-4-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-吡咯-2，5-二酮、3-(1H-吲哚-3-基)-4-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-硝基-吡啶-3-基]-吡咯-2，5-二酮、3-[2-氯-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-3-基]-4-(7-甲基-1H-吲哚-3-基)-吡咯-2，5-二酮、3-(1H-吲哚-3-基)-4-[5-甲基-2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-吡啶-4-基]-吡咯-2，5-二酮、3-(1H-吲哚-3-基)-4-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5-硝基-吡啶-4-基]-吡咯-2，5-二酮、3-(1H-吲哚-3-基)-4-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-5-三氟甲基-吡啶-4-基]-吡咯-2，5-二酮。
8.游離形式或藥學(xué)上可接受的鹽形式的根據(jù)權(quán)利要求5至7任意一項(xiàng)的化合物，其用作藥物。
9.根據(jù)權(quán)利要求2至7任意一項(xiàng)的化合物，其用于治療或預(yù)防由T淋巴細(xì)胞和/或PKC介導(dǎo)的疾病或障礙，特別是同種異體移植排斥、移植物抗宿主疾病、自身免疫病、感染性疾病、炎性疾病、心血管疾病或癌癥。
10.藥物組合物，其包含游離形式或藥學(xué)上可接受的鹽形式的根據(jù)權(quán)利要求2至7任意一項(xiàng)的化合物和與之結(jié)合的藥學(xué)上可接受的稀釋劑或載體。
11.游離形式或藥學(xué)上可接受的鹽形式的根據(jù)權(quán)利要求2至7任意一項(xiàng)的化合物或者根據(jù)權(quán)利要求10的藥物組合物的用途，用于生產(chǎn)治療或預(yù)防由T淋巴細(xì)胞和/或PKC介導(dǎo)的疾病或障礙，特別是同種異體移植排斥、移植物抗宿主疾病、自身免疫病、感染性疾病、炎性疾病、心血管疾病或癌癥的藥物。
12.藥物組合，其包含游離形式或藥學(xué)上可接受的鹽形式的根據(jù)權(quán)利要求2至7任意一項(xiàng)的化合物，和選自免疫抑制劑、免疫調(diào)節(jié)劑、抗炎劑、化學(xué)治療劑、抗增殖劑和抗糖尿病劑的另一種治療劑。
13.生產(chǎn)根據(jù)權(quán)利要求5或6的化合物的方法，該方法包括將式II化合物 其中Ra至Re如權(quán)利要求5中定義，與式III化合物反應(yīng)，R-CH2-CO-NH2(III)其中R如權(quán)利要求5中定義，需要時(shí)，如果合適，將游離形式的所得式I化合物轉(zhuǎn)化為鹽形式或者反之亦然。
14.治療或預(yù)防需要這種治療的受試者中由T淋巴細(xì)胞和/或PKC介導(dǎo)的障礙或疾病、特別是同種異體移植排斥、移植物抗宿主疾病、自身免疫病、感染性疾病、炎性疾病、心血管疾病或癌癥的方法，該方法包括對(duì)所述受試者施用有效量的PKC抑制劑或其藥學(xué)上可接受的鹽，所述PKC抑制劑具有如根據(jù)權(quán)利要求1所測(cè)量的就PKCα、PKCβ和任選地PKCθ相對(duì)于一種或多種其他PKC同工型而言至少10倍的選擇性。
17.治療或預(yù)防需要這種治療的受試者中由T淋巴細(xì)胞和/或PKC介導(dǎo)的障礙或疾病、特別是同種異體移植排斥、移植物抗宿主疾病、自身免疫病、感染性疾病、炎性疾病、心血管疾病或癌癥的方法，該方法包括對(duì)所述受試者施用有效量的根據(jù)權(quán)利要求2至7任意一項(xiàng)的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
全文摘要
本發(fā)明涉及PKC抑制劑，它們能夠選擇性地抑制PKC的例如α、β和任選地θ同工型，和它們特別是在移植術(shù)中的用途。
文檔編號(hào)C07D213/00GK1910173SQ200580002684
公開(kāi)日2007年2月7日 申請(qǐng)日期2005年1月19日 優(yōu)先權(quán)日2004年1月19日
發(fā)明者M·范艾斯, P·馮馬特, J·瓦格納, J-P·埃弗努, W·舒勒 申請(qǐng)人:諾瓦提斯公司