專利名稱：一種高純度蛋黃腦磷脂的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及磷脂類，尤其涉及一種高純度蛋黃腦磷脂的制備方法。
背景技術(shù)：
磷脂是一類含磷的脂類物質(zhì)，主要來源于大豆和蛋黃。磷脂酰乙醇胺(Phosphatidyl Ethanolamine，簡稱PE)和磷脂酰膽堿(Phosphatidyl Choline，簡稱PC)是其中兩種重要的磷脂，俗稱腦磷脂和卵磷脂，被廣泛應用于食品、醫(yī)藥、化妝品等行業(yè)。高純度腦磷脂是良好的天然表面活性劑，具有獨特的生物活性和生理功能，無毒、無污染、無刺激，易生物降解而受到國內(nèi)外科技界和工業(yè)界的高度重視，其需求在逐年增加，但目前純度大于90％的腦磷脂產(chǎn)品我國尚依賴進口，因此開發(fā)出適合我國國情的、低成本、高純度腦磷脂制備方法，具有重要的經(jīng)濟和社會價值。
腦磷脂的精制方法主要有萃取法、柱層析法、沉淀法、膜分離法等。柱層析法由于具有操作簡便、分離效果好、不需昂貴設(shè)備、處理量大等優(yōu)點，因而倍受關(guān)注。在柱層析法研究中，目前主要集中在價廉的硅膠和氧化鋁。對于氧化鋁通常是PC先出峰，而對于硅膠通常是PE先出峰。為了得到高純度的PE，本專利采用硅膠作為吸附劑，同時選用除PC和PE外其它磷脂較少的蛋黃作為原料。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種高純度蛋黃腦磷脂的制備方法。
方法的步驟如下1)新鮮蛋黃先用丙酮脫脂，真空抽濾，濾餅用酒精提取，合并濾液，真空濃縮得到粗磷脂；2)經(jīng)鈍化的硅膠用二氯甲烷-甲醇混合溶劑濕法裝柱，先用二氯甲烷-甲醇混合溶劑沖洗；3)粗磷脂用二氯甲烷-甲醇混合溶劑溶解后加入層析柱，并開始收集流出液；4)待卵磷脂開始穿透后用純甲醇沖洗，收集流出液；5)流出液經(jīng)薄層色譜TLC分析后合并腦磷脂餾份，經(jīng)真空濃縮、凍干后可得到純度大于90％的腦磷脂；
6)最后用含氨水的甲醇溶液再生柱子，再用二氯甲烷-甲醇混合溶劑沖洗后可重新進樣。
本發(fā)明的具有以下優(yōu)點1)工藝簡單，操作方便，較適合于大規(guī)模工業(yè)化制備；2)硅膠可循環(huán)使用，成本較低；3)硅膠柱層析過程可在室溫下進行；4)產(chǎn)品純度高，經(jīng)本工藝精制后可得純度大于90％的腦磷脂產(chǎn)品；5)為近年來雞蛋豐產(chǎn)、供過于求、難以存放等問題的解決提供新方法，為雞蛋的深加工開辟一條新路，促進禽蛋行業(yè)的發(fā)展。
具體實施例方式
溶劑提取法得到的粗磷脂，用二氯甲烷-甲醇混合溶劑溶解后在室溫下過硅膠柱，待PC開始流出后改用純甲醇沖洗，收集流出液，經(jīng)TLC分析后合并腦磷脂的餾份，再經(jīng)濃縮、冷凍干燥后可得腦磷脂產(chǎn)品。柱子經(jīng)含氨水的甲醇溶液再生、二氯甲烷-甲醇混合溶劑沖洗后可循環(huán)使用。
實施例1新鮮蛋黃先用丙酮脫脂三次，真空抽濾，濾餅用95％酒精提取二次，合并濾液，真空濃縮得到粗磷脂。經(jīng)HPLC分析，粗磷脂中含PC75.0％(wt％)、PE16.0％(wt％)。取含水量為10％的硅膠用含甲醇10％的二氯甲烷混合溶劑濕法裝Ф1/2英寸ID×20厘米柱子(柱體積為25ml)，先用含甲醇10％的二氯甲烷混合溶劑沖洗50ml。進60ml濃度為100mg/ml的粗磷脂溶液(溶劑為含甲醇10％的二氯甲烷溶液)，接著用200ml甲醇沖洗，流速控制在0.4ml/min，加樣后開始收集流出液(按每份約5ml收集)。流出液經(jīng)TLC分析后合并腦磷脂餾份，經(jīng)真空濃縮、凍干后得腦磷脂0.55g，經(jīng)HPLC分析產(chǎn)品中腦磷脂的含量為91％。柱子用含氨2％(重量百分比)的甲醇溶液(由含重量百分比為25％的氨水配制)沖洗150ml，再用含甲醇10％的二氯甲烷混合溶劑沖洗100ml后可重新進樣，同樣沖洗流速控制在0.4ml/min。
實施例2新鮮蛋黃先用丙酮脫脂三次，真空抽濾，濾餅用95％酒精提取二次，合并濾液，真空濃縮得到粗磷脂。經(jīng)HPLC分析，粗磷脂中含PC75.0％(wt％)、PE16.0％(wt％)。取含水量為12％的硅膠用含甲醇20％的二氯甲烷混合溶劑濕法裝Ф1/2英寸ID×20厘米柱子(柱體積為25ml)，先用含甲醇20％的二氯甲烷混合溶劑沖洗50ml。進55ml濃度為100mg/ml的粗磷脂溶液(溶劑為含甲醇20％的二氯甲烷溶液)，接著用200ml甲醇沖洗，流速控制在0.4ml/min，加樣后開始收集流出液(按每份約5ml收集)。流出液經(jīng)TLC分析后合并腦磷脂餾份，經(jīng)真空濃縮、凍干后得腦磷脂0.50g，經(jīng)HPLC分析產(chǎn)品中腦磷脂的含量為92％。柱子用含氨1％(重量百分比)的甲醇溶液(由含重量百分比為25％的氨水配制)沖洗200ml，再用含甲醇20％的二氯甲烷混合溶劑沖洗100ml后可重新進樣，同樣沖洗流速控制在0.4ml/min。
實施例3新鮮蛋黃先用丙酮脫脂二次，真空抽濾，濾餅用95％酒精提取二次，合并濾液，真空濃縮得到粗磷脂。經(jīng)HPLC分析，粗磷脂中含PC74.0％(wt％)、PE15.0％(wt％)。取含水量為14％的硅膠用含甲醇30％的二氯甲烷混合溶劑濕法裝Ф1/2英寸ID×20厘米柱子(柱體積為25ml)，先用含甲醇30％的二氯甲烷混合溶劑沖洗50ml。進50ml濃度為100mg/ml的粗磷脂溶液(溶劑為含甲醇30％的二氯甲烷溶液)，接著用200ml甲醇沖洗，流速控制在0.4ml/min，加樣后開始收集流出液(按每份約5ml收集)。流出液經(jīng)TLC分析后合并腦磷脂餾份，經(jīng)真空濃縮、凍干后得腦磷脂0.46g，經(jīng)HPLC分析產(chǎn)品中腦磷脂的含量為90％。柱子用含氨0.5％(重量百分比)的甲醇溶液(由含重量百分比為25％的氨水配制)沖洗300ml，再用含甲醇20％的二氯甲烷混合溶劑沖洗100ml后可重新進樣，同樣沖洗流速控制在0.4ml/min。
實施例4新鮮蛋黃先用丙酮脫脂二次，真空抽濾，濾餅用95％酒精提取二次，合并濾液，真空濃縮得到粗磷脂。經(jīng)HPLC分析，粗磷脂中含PC74.0％(wt％)、PE15.0％(wt％)。取含水量為8％的硅膠用含甲醇40％的二氯甲烷混合溶劑濕法裝Ф1/2英寸ID×20厘米柱子(柱體積為25ml)，先用含甲醇40％的二氯甲烷混合溶劑沖洗50ml。進50ml濃度為100mg/ml的粗磷脂溶液(溶劑為含甲醇40％的二氯甲烷溶液)，接著用200ml甲醇沖洗，流速控制在0.4ml/min，加樣后開始收集流出液(按每份約5ml收集)。流出液經(jīng)TLC分析后合并腦磷脂餾份，經(jīng)真空濃縮、凍干后得腦磷脂0.43g，經(jīng)HPLC分析產(chǎn)品中腦磷脂的含量為90％。柱子用含氨3％(重量百分比)的甲醇溶液(由含重量百分比為25％的氨水配制)沖洗150ml，再用含甲醇40％的二氯甲烷混合溶劑沖洗100ml后可重新進樣，同樣沖洗流速控制在0.4ml/min。
實施例5新鮮蛋黃先用丙酮脫脂三次，真空抽濾，濾餅用95％酒精提取三次，合并濾液，真空濃縮得到粗磷脂。經(jīng)HPLC分析，粗磷脂中含PC74.5％(wt％)、PE15.5％(wt％)。取含水量為10％的硅膠用含甲醇50％的二氯甲烷混合溶劑濕法裝Ф1/2英寸ID×20厘米柱子(柱體積為25ml)，先用含甲醇50％的二氯甲烷混合溶劑沖洗50ml。進50ml濃度為100mg/ml的粗磷脂溶液(溶劑為含甲醇50％的二氯甲烷溶液)，接著用200ml甲醇沖洗，流速控制在0.4ml/min，加樣后開始收集流出液(按每份約5ml收集)。流出液經(jīng)TLC分析后合并腦磷脂餾份，經(jīng)真空濃縮、凍干后得腦磷脂0.40g，經(jīng)HPLC分析產(chǎn)品中腦磷脂的含量為89％。柱子用含氨0.1％(重量百分比)的甲醇溶液(由含重量百分比為25％的氨水配制)沖洗500ml，再用含甲醇50％的二氯甲烷混合溶劑沖洗100ml后可重新進樣，同樣沖洗流速控制在0.4ml/min。
實施例6新鮮蛋黃先用丙酮脫脂三次，真空抽濾，濾餅用95％酒精提取三次，合并濾液，真空濃縮得到粗磷脂。經(jīng)HPLC分析，粗磷脂中含PC74.5％(wt％)、PE15.5％(wt％)。取含水量為12％的硅膠用含純二氯甲烷溶劑濕法裝Ф1/2英寸ID×20厘米柱子(柱體積為25ml)，先用純二氯甲烷溶劑沖洗50ml。進70ml濃度為100mg/ml的粗磷脂溶液(溶劑為純二氯甲烷)，接著用200ml甲醇沖洗，流速控制在0.4ml/min，加樣后開始收集流出液(按每份約5ml收集)。流出液經(jīng)TLC分析后合并腦磷脂餾份，經(jīng)真空濃縮、凍干后得腦磷脂0.65g，經(jīng)HPLC分析產(chǎn)品中腦磷脂的含量為91％。柱子用含氨0.5％(重量百分比)的甲醇溶液(由含重量百分比為25％的氨水配制)沖洗200ml，再用純二氯甲烷溶劑沖洗100ml后可重新進樣，同樣沖洗流速控制在0.4ml/min。
實施例7新鮮蛋黃先用丙酮脫脂三次，真空抽濾，濾餅用無水酒精提取二次，合并濾液，真空濃縮得到粗磷脂。經(jīng)HPLC分析，粗磷脂中含PC76.0％(wt％)、PE16.5％(wt％)。取含水量為12％的硅膠用含甲醇5％的二氯甲烷混合溶劑濕法裝Ф1/2英寸ID×20厘米柱子(柱體積為25ml)，先用含甲醇5％的二氯甲烷混合溶劑沖洗50ml。進65ml濃度為100mg/ml的粗磷脂溶液(溶劑為含甲醇30％的二氯甲烷溶液)，接著用200ml甲醇沖洗，流速控制在0.4ml/min，加樣后開始收集流出液(按每份約5ml收集)。流出液經(jīng)TLC分析后合并腦磷脂餾份，經(jīng)真空濃縮、凍干后得腦磷脂0.62g，經(jīng)HPLC分析產(chǎn)品中腦磷脂的含量為92％。柱子用含氨1％(重量百分比)的甲醇溶液(由含重量百分比為25％的氨水配制)沖洗200ml，再用含甲醇5％的二氯甲烷混合溶劑沖洗100ml后可重新進樣，同樣沖洗流速控制在0.4ml/min。
權(quán)利要求
1.一種高純度蛋黃腦磷脂的制備方法，其特征在于，方法的步驟如下1)新鮮蛋黃先用丙酮脫脂，真空抽濾，濾餅用酒精提取，合并濾液，真空濃縮得到粗磷脂；2)經(jīng)鈍化的硅膠用二氯甲烷—甲醇混合溶劑濕法裝柱，先用二氯甲烷—甲醇混合溶劑沖洗；3)粗磷脂用二氯甲烷—甲醇混合溶劑溶解后加入層析柱，并開始收集流出液；4)待卵磷脂開始穿透后用純甲醇沖洗，收集流出液；5)流出液經(jīng)薄層色譜TLC分析后合并腦磷脂餾份，經(jīng)真空濃縮、凍干后可得到純度大于90％的腦磷脂；6)最后用含氨水的甲醇溶液再生柱子，再用二氯甲烷—甲醇混合溶劑沖洗后可重新進樣。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高純度蛋黃腦磷脂的制備方法，其特征在于所說的二氯甲烷—甲醇混合溶劑中甲醇的含量為體積百分比0％～50％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高純度蛋黃腦磷脂的制備方法，其特征在于所說的經(jīng)鈍化的硅膠是指通過加入少量水以減少硅膠的活性，經(jīng)鈍化后的硅膠含水量為重量百分比8％～14％。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高純度蛋黃腦磷脂的制備方法，其特征在于所說的含氨水的甲醇溶液中氨的含量為重量百分比0.1～3％。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種高純度蛋黃腦磷脂的制備方法。方法的步驟如下1)新鮮蛋黃先用丙酮脫脂，真空抽濾，濾餅用酒精提取，合并濾液，真空濃縮得到粗磷脂；2)經(jīng)鈍化的硅膠用二氯甲烷－甲醇混合溶劑濕法裝柱，先用二氯甲烷－甲醇混合溶劑沖洗；3)粗磷脂用二氯甲烷－甲醇混合溶劑溶解后加入層析柱，并開始收集流出液；4)待卵磷脂開始穿透后用純甲醇沖洗，收集流出液；5)流出液經(jīng)薄層色譜TLC分析后合并腦磷脂餾份，經(jīng)真空濃縮、凍干后可得到純度大于90％的腦磷脂；6)最后用含氨水的甲醇溶液再生柱子，再用二氯甲烷－甲醇混合溶劑沖洗后可重新進樣。本發(fā)明具有工藝簡單、操作方便、產(chǎn)品純度高、成本較低、較適合于大規(guī)模工業(yè)化制備等優(yōu)點。
文檔編號C07F9/00GK1733776SQ20051005067
公開日2006年2月15日 申請日期2005年7月12日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月12日
發(fā)明者呂秀陽 申請人:浙江大學