專利名稱：一種用梔子果實(shí)制備總環(huán)烯醚萜苷的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，是一種從梔子果實(shí)中提取總環(huán)烯醚萜苷的方法。
背景技術(shù)：
梔子又名山梔子，是茜草科植物山梔Gardenia jasminoides Ellis.的果實(shí)。梔子屬植物全國大部分地區(qū)有栽培。南方各地有野生，主要分布于江西、湖南、浙江、福建、四川等地。早在《神農(nóng)本草經(jīng)》中就有記載，此后在歷代本草、醫(yī)方中均有論述和補(bǔ)充，如《名醫(yī)別錄》、陶弘景的《本草經(jīng)集注》等。梔子性寒，味苦，歸心、肝、肺、胃、三焦經(jīng)。常用于熱病心煩、黃疸尿赤、血淋澀痛、血熱吐衄、目赤腫痛、火毒瘡瘍、扭傷等。
梔子屬植物化學(xué)成分的研究始于20世紀(jì)20年代，到目前為止已從該植物中分離鑒定出的化合物約有幾十種之多，其中具有特征性的化合物約有40余種，包括黃酮類17種，環(huán)烯醚萜類11種，三萜類6種，有機(jī)酸酯類6種，此外還有d-甘露醇、甾醇類及色素等。其中梔子果實(shí)的有效成分為環(huán)烯醚萜苷類化合物，具有保肝利膽、促胰腺分泌、降壓、鎮(zhèn)靜、降溫、抗菌抗炎作用。其主要成分為梔子苷(geniposide)、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷(genipin-1-β-D-geniobioside)、羥異梔子苷(gardenoside)、梔子新苷(gardoside)、雞矢藤次苷甲酯(scandosidemethyl ester)、去乙酰基車前草酸甲酯(deacetyl-asperulosidic acid methyl ester)、梔子苷酸(geniposidicacid)、梔子素(gardenin)等[王鋼力，陳德昌等.梔子屬植物化學(xué)成分研究進(jìn)展.中國中藥雜志，1996，21(2)67；黃勝陽.中國梔子屬植物的研究概況.江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，1991，3(1)59；劉凈，梁敬鈺等.環(huán)烯醚萜類化合物近年研究進(jìn)展.海峽藥學(xué)，2004，16(1)14]。
對于梔子總環(huán)烯醚萜苷的制備多采用醇滲漉、醇回流等水醇法提取再進(jìn)一步純化[CN 1517326A梔子環(huán)烯醚萜總提物及其制備方法和用途]。常用的純化方法有正丁醇萃取、中性氧化鋁柱層析、硅膠柱層析等，這類方法或需使用有毒有機(jī)溶劑，如正丁醇，會造成環(huán)境污染；或成本高且操作繁瑣，如中性氧化鋁填料，價格昂貴。采用大孔吸附樹脂純化梔子果實(shí)提取物[CN 1193766C“治療肝炎的梔子總甙組合物及其制備方法”；CN1546507A“一種梔子提取物及其制備工藝和它的應(yīng)用”]可降低成本且對環(huán)境不產(chǎn)生污染，但目前常用的洗脫方式通常為先以大量水充分洗脫再以高濃度乙醇洗脫，由于水洗量過大使強(qiáng)極性的有效環(huán)烯醚萜苷類成分大量流失而降低得率；又由于用高濃度乙醇洗脫容易將許多弱極性雜質(zhì)洗脫下來而影響純度，因此提取物中環(huán)烯醚萜苷有效成分單一，主要成分為梔子苷，約占總環(huán)烯醚萜苷90％以上；并且還需要借助上述有機(jī)溶劑萃取或柱層析等進(jìn)一步純化去除雜質(zhì)，故仍存在污染環(huán)境或成本高等缺陷。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種操作簡便、成本低廉、得率和純度高且不污染環(huán)境的從梔子果實(shí)中制備總環(huán)烯醚萜苷的方法。
本發(fā)明采用大孔吸附樹脂純化梔子果實(shí)粗提物，改進(jìn)之處在于1.先用少量水洗脫，既去除了雜質(zhì)，又可減少強(qiáng)極性環(huán)烯醚萜苷類成分流失，從而提高得率；2.根據(jù)環(huán)烯醚萜苷類成分的極性特點(diǎn)用低濃度乙醇洗脫有效成分，可減少弱極性雜質(zhì)被洗脫，從而提高純度。
本發(fā)明方法包括如下步驟
(1)制備梔子果實(shí)粗提物按常規(guī)將干燥梔子果實(shí)粗粉以水或乙醇水溶液浸泡或回流提取1～3次，過濾，將濾液減壓濃縮至稀浸膏，再真空干燥得梔子果實(shí)粗提物，得率為25～30％。
(2)純化將上述制得的梔子果實(shí)粗提物加適量水混懸后，過大孔吸附樹脂柱。先以少量水洗脫至洗脫液不渾濁，通常水的洗脫體積不超過1倍樹脂量，棄去，再用10％～30％低濃度乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮干燥，即得總環(huán)烯醚萜苷粉末。將所得粉末按紫外分光光度法(《中國藥典》2000年版一部附錄VA)在238nm波長處進(jìn)行檢測，測得總環(huán)烯醚萜苷純度不低于85％，得率為8～10％，其中梔子苷含量為55～65％。
本發(fā)明采用大孔吸附樹脂純化僅以水和低濃度乙醇洗脫，成本低廉，對環(huán)境不造成污染，在洗脫過程中嚴(yán)格控制水洗脫體積及乙醇洗脫濃度，不僅可以減少強(qiáng)極性環(huán)烯醚萜苷類成分的流失，而且可減少弱極性雜質(zhì)的洗脫，故無需進(jìn)一步純化。本發(fā)明制備工藝簡單，總環(huán)烯醚萜苷得率高純度也高，適合工業(yè)化生產(chǎn)。


圖1為本發(fā)明總環(huán)烯醚萜苷及梔子苷標(biāo)準(zhǔn)品紫外吸收圖譜圖2為本發(fā)明總環(huán)烯醚萜苷高效液相色譜(HPLC)的色譜圖具體實(shí)施方式
下面結(jié)合實(shí)施例及附圖對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)描述。
實(shí)施例11.制備梔子果實(shí)粗提物取干燥梔子果實(shí)藥材粗粉500g，用10倍量50％乙醇回流提取2次，每次2小時，過濾，合并濾液，60℃減壓濃縮至稀浸膏，真空干燥得梔子果實(shí)粗提物，得率為26.6％。
2.純化取上述梔子果實(shí)粗提物，加水混懸后總體積為2000ml。加入到裝有1500g經(jīng)預(yù)處理過的1300大孔吸附樹脂層析柱上，上樣完畢后吸附2小時。用1500ml水洗脫(棄去)。再用6000ml 20％乙醇洗脫，乙醇洗脫流份減壓濃縮后，真空干燥(60℃)，得總環(huán)烯醚萜苷粉末46.59g，得率為9.3％。將所得粉末按紫外分光光度法(《中國藥典》2000年版一部附錄VA)在238nm波長處檢測，測得總環(huán)烯醚萜苷純度為85.7％，紫外吸收圖譜與梔子苷相似，見圖1，其中曲線1為總環(huán)烯醚萜苷提取物紫外吸收曲線，曲線2為梔子苷標(biāo)準(zhǔn)品紫外吸收曲線。對該提取物進(jìn)行高效液相分析表明，其主要成分為羥異梔子苷、梔子苷酸、京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷、梔子苷等環(huán)烯醚萜苷類化合物，其中梔子苷含量為60.1％。HPLC分析條件色譜柱Diamonsil C18(4.6×200mm i.d.5μm)；流動相為甲醇∶1％醋酸水溶液＝30∶70；流速0.8ml/min；柱溫25℃，檢測波長238nm。在此條件下總環(huán)烯醚萜苷色譜圖見圖2，其中峰1為京尼平-1-β-D-龍膽雙糖苷，峰2為梔子苷。
實(shí)施例21.制備梔子果實(shí)粗提物取干燥梔子果實(shí)藥材粗粉500g，用10倍量水回流提取2次，每次2小時，過濾，合并濾液，60℃減壓濃縮至稀浸膏，真空干燥得梔子果實(shí)粗提物，得率為28.7％。
2.純化取上述梔子果實(shí)粗提物，加水混懸后總體積為2000ml。加入到裝有1500g經(jīng)預(yù)處理過的1300大孔吸附樹脂層析柱上，上樣完畢后吸附2小時。用1500ml水洗脫(棄去)。再用4000ml 30％乙醇洗脫，乙醇洗脫流份減壓濃縮后，真空干燥(60℃)，得總環(huán)烯醚萜苷粉末49.30g，測得總環(huán)烯醚萜苷純度為80.8％，得率為9.9％，其中梔子苷含量為64.8％。檢測方法同實(shí)施例1。
實(shí)施例31.制備梔子果實(shí)粗提物取干燥梔子果實(shí)藥材粗粉500g，用10倍量50％乙醇浸泡提取2次，每次2小時，過濾，合并濾液，60℃減壓濃縮至稀浸膏，真空干燥得梔子果實(shí)粗提物，得率為20.3％。
2.純化取上述梔子果實(shí)粗提物，加水混懸后總體積為2000ml。加入到裝有1500g經(jīng)預(yù)處理過的AB-8大孔吸附樹脂層析柱上，上樣完畢后吸附2小時。用1500ml水洗脫(棄去)。再用8000ml 10％乙醇洗脫，乙醇洗脫流份減壓濃縮后，真空干燥(60℃)，得總環(huán)烯醚萜苷粉末40.62g，測得總環(huán)烯醚萜苷純度為89.2％，得率為8.1％，其中梔子苷含量為55.2％。檢測方法同實(shí)施例1。
實(shí)施例41.制備梔子果實(shí)粗提物取干燥梔子果實(shí)藥材粗粉500g，用10倍量50％乙醇回流提取2次，每次2小時，過濾，合并濾液，60℃減壓濃縮至稀浸膏，真空干燥得梔子果實(shí)粗提物，得率為29.8％。
2.純化取上述梔子果實(shí)粗提物，加水混懸后總體積為2000ml。加入到裝有1500g經(jīng)預(yù)處理過的D101大孔吸附樹脂層析柱上，上樣完畢后吸附2小時。用1500ml水洗脫(棄去)。再用5000ml 20％乙醇洗脫，乙醇洗脫流份減壓濃縮后，真空干燥(60℃)，得總環(huán)烯醚萜苷粉末45.18g，測得總環(huán)烯醚萜苷純度為85.1％，得率為9.0％，其中梔子苷含量為60.7％。檢測方法同實(shí)施例1。
權(quán)利要求
1.一種用梔子果實(shí)制備總環(huán)烯醚萜苷的方法，包括如下步驟(1)制備梔子果實(shí)粗提物按常規(guī)將干燥梔子果實(shí)粗粉以水或乙醇水溶液浸泡或回流提取1～3次，過濾，將濾液減壓濃縮至稀浸膏，再真空干燥得梔子果實(shí)粗提物；(2)純化將上述制得的梔子果實(shí)粗提物加適量水混懸后，過大孔吸附樹脂，先用少量水洗脫至洗脫液不渾濁，棄去，再用10％～30％低濃度乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮干燥，得總環(huán)烯醚萜苷。
2.按權(quán)利要求1所述的用梔子果實(shí)制備總環(huán)烯醚萜苷的方法，其特征在于制備梔子果實(shí)粗提物時，用50％乙醇回流提取。
3.按權(quán)利要求1或2所述的用梔子果實(shí)制備總環(huán)烯醚萜苷的方法，其特征在于純化時，所說的少量水體積為不超過1倍樹脂量。
4.按權(quán)利要求1或2所述的用梔子果實(shí)制備總環(huán)烯醚萜苷的方法，其特征在于純化時，所說的低濃度乙醇為20％乙醇。
5.按權(quán)利要求3所述的用梔子果實(shí)制備總環(huán)烯醚萜苷的方法，其特征在于純化時，所說的低濃度乙醇為20％乙醇。
6.按權(quán)利要求1或2或5所述的用梔子果實(shí)制備總環(huán)烯醚萜苷的方法，其特征在于所說的大孔吸附樹脂為1300或D101或AB-8型大孔吸附樹脂。
7.按權(quán)利要求3所述的用梔子果實(shí)制備總環(huán)烯醚萜苷的方法，其特征在于所說的大孔吸附樹脂為1300或D101或AB-8型大孔吸附樹脂。
8.按權(quán)利要求4所述的用梔子果實(shí)制備總環(huán)烯醚萜苷的方法，其特征在于所說的大孔吸附樹脂為1300或D101或AB-8型大孔吸附樹脂。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，是一種用梔子果實(shí)制備總環(huán)烯醚萜苷的方法，包括用水或乙醇水溶液浸泡或回流制備梔子果實(shí)粗提物，再采用大孔吸附樹脂分別以少量水和低濃度乙醇水溶液洗脫純化，減壓濃縮后得高純度總環(huán)烯醚萜苷。本發(fā)明制備方法操作簡單，成本低廉，產(chǎn)品純度高、得率高，不污染環(huán)境，適于工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號C07H17/00GK1706860SQ20051002614
公開日2005年12月14日 申請日期2005年5月24日 優(yōu)先權(quán)日2005年5月24日
發(fā)明者范國榮, 周婷婷, 柴逸峰, 吳玉田, 洪戰(zhàn)英 申請人:中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)