專利名稱：一種丹參素的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥用丹參素的制備方法，特別是工藝順序為提取→稀堿轉(zhuǎn)化→超濾→萃取→正相色譜的制備方法。
背景技術(shù)：
丹參具有擴張動脈、增加冠狀動脈流量、提高心肌抗缺氧能力，抑制血小板凝集、抗凝、改善血液循環(huán)，抗氧化、抑制內(nèi)原性膽固醇合成、抗動脈粥樣硬化和增強學習記憶等作用，臨床上廣泛用于預防和治療冠心病、中風、高血脂癥和消化性潰瘍等疾病。研究表明水溶性成分丹參素是其主要有效成分，臨床制劑是以丹參素為主成分的注射液。
目前丹參注射液為棕色澄明液體，臨床應用時，除了療效差異大外，不良反應(皮膚反應、藥物熱、過敏性休克、過敏性哮喘、局部紅腫疼痛、球結(jié)膜出血、血管性水腫、腹劇痛、腹瀉、心動過速、劇烈頭疼、肌肉震顫、肝腎功能損害、藥物性肝炎、心臟停跳等)時有發(fā)生。因而，人們一直重視丹參素的分離制備技術(shù)。研究表明，丹參及復方丹參注射液的不良反應主要由鞣質(zhì)引起，鞣質(zhì)為多羥基芳香酸類大分子化合物，進入機體后，可與血漿蛋白、血細胞膜蛋白、組織細胞膜蛋白結(jié)合，一方面形成全抗原，引發(fā)機體變態(tài)反應，一方面導致蛋白變性沉淀、細胞變形破裂。
經(jīng)檢測，市售丹參注射液中丹參素含量為0.7716～2.301mg/mL，原兒茶醛含量為0.1586～0.688mg/mL(張翠蓮，中國藥學雜志，2003，38(1)56～58；張建華，浙江中醫(yī)學院學報，2001，25(4)646～65)，有效成分批間差和廠間差很大，并且雜質(zhì)含量高達藥液干重的80％，鞣質(zhì)檢測均為陽性(袁璐，中草藥，1994，25(6)2996～301)。
由于丹參素水溶性高，與水溶性雜質(zhì)分離的難度大，目前丹參注射液的制備大多采用水提加二次醇沉工藝，產(chǎn)品質(zhì)量難以保證。文獻還報道了丹參水提液醇沉后進一步經(jīng)過聚酰胺層析(CN1242364A)、硅膠層析(CN1153778A，CN1380295A)、大孔吸附樹脂(CN1247855A，CN1384090A)或強堿離子交換樹脂+萃取(CN1342638A)純化的技術(shù)。吸附樹脂和離子交換樹脂法產(chǎn)品質(zhì)量較好(純度在80％以上)，但是收率僅為30％左右了。因水溶性雜質(zhì)的性質(zhì)與丹參素相近，而且量大，硅膠層析法純化丹參注射液時收率低、處理量低、成本高。總之，上述方法均沒有同時解決純度、收率和處理量相互矛盾的三個問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種萃取與色譜聯(lián)用制備丹參素的方法，該方法簡單、方便、回收率高、成本低。
本發(fā)明提供了一種丹參素的制備方法，工藝過程如下——提取，以丹參為原料獲得含有丹參素及丹參素前體的水或醇的提取液；——轉(zhuǎn)化，用稀堿將上述提取液中的丹參素前體轉(zhuǎn)化為丹參素；——超濾，用超濾膜將上述轉(zhuǎn)化后的提取液超濾除去大分子物質(zhì)；——萃取，自上述超濾后的提取液中將丹參素萃出；——分離，用正相色譜方法分離出上述萃取獲得的丹參素。
本發(fā)明丹參素的制備方法中，轉(zhuǎn)化過程在稀堿、抗氧保護劑和惰性氣體保護的室溫條件下進行，轉(zhuǎn)化時間為0.5～2小時；所述堿為堿金屬、堿金屬氧化物、堿金屬氫氧化物、或低碳醇鈉，用量為0.01～0.2mol/L，使溶液pH為9～10；所述抗氧保護劑為抗壞血酸、亞硫酸氫鈉、或沒食子酸，用量為1～10g/L；所述惰性氣體指氮氣、二氧化碳、氦氣、氬氣、或氖氣。
本發(fā)明丹參素的制備方法中，超濾過程的濾膜為親水膜，為板式或者中空纖維，截留分子量中心為1000～10000。
本發(fā)明丹參素的制備方法中，萃取過程的萃取劑為正丁醇、乙酸乙酯或乙醚，用量為提取液1g生藥/mL的1～2倍，pH 3.0、室溫萃取3～6次。
本發(fā)明丹參素的制備方法中，分離過程的正相色譜填料為硅膠，硅膠粒度以10～63微米，用量為樣品量的20～60倍。最好采用將正相色譜樣品溶于少量甲醇后，與1～3倍的硅藻土混勻，經(jīng)減壓干燥制成粉未后，固體上樣?？梢詫⒁宜嵋阴ビ糜谙疵摰蜆O性雜質(zhì)，乙醚/乙酸乙酯/甲醇混合液6∶20∶4用于洗脫原茶醛和丹參素，甲醇用于洗脫水溶性雜質(zhì)以再生硅膠。
本發(fā)明所述萃取與色譜聯(lián)用制備丹參素的方法具有如下優(yōu)點1、用超濾解決了萃取工段的乳化問題、降低了其溶劑損耗，并大幅度提高了丹參素的萃取率；2、用萃取除去了絕大部分雜質(zhì)，確保了硅膠色譜的分離能，并提高了其處理能力和丹參素收率；3、采用稀堿將大量丹參素前體轉(zhuǎn)化為丹參素。
本發(fā)明所述萃取與色譜聯(lián)用制備丹參素的方法，基本解決了藥用丹參素制備中純度、收率和處理量三個相互矛盾的根本問題，為高純度藥用丹參素的制備提供了一種簡單、方便、回收率高、成本低的批量制備方法。使用本方法制備的丹參素含量≥95％，回收率≥70％。
具體實施例方式用去離子水或50％的乙醇80℃提取丹參粉三次，每次2小時，料液比分別為1∶8、1∶6和1∶4，第二三次提取液可與第一次提取液合并，也可用作第二批丹參的提取液。
將提取液超濾除去大分子物質(zhì)，以避免后續(xù)萃取工藝發(fā)生嚴重乳化。超濾膜為親水膜，可為板式，也可為中空纖維，截留分子量中心為1000～10000。
將丹參提取液濃縮至1g生藥/mL，加入適量堿使溶液pH為9～10，在室溫、抗氧保護劑和惰性氣體保護下轉(zhuǎn)化0.5～2h。堿為堿金屬、堿金屬氧化物、堿金屬氫氧化物、或低碳醇鈉，如金屬鈉、金屬鉀、氧化鈉、氧化鉀、氫氧化鈉、氫氧化鉀、甲醇鈉、乙醇鈉等，用量約為0.01～0.2mol/L；抗氧保護劑為還原性性化合物如抗壞血酸、亞硫酸氫鈉、沒食子酸等，用量為1～10g/L；惰性氣體指氮氣、二氧化碳、氦氣、氬氣、氖氣等。
加入適量2mol.L-1的HCl將上述20％的NaCl洗脫液調(diào)至pH3.0后，用萃取劑萃取該洗脫液。萃取劑為正丁醇、乙酸乙酯或乙醚，以乙酸乙酯最佳。萃取劑的用量為提取液(1g生藥/mL)的1～2倍，分3～6次室溫萃取。有機萃取相經(jīng)減壓回收溶劑后獲丹參素粗品。
丹參素粗品溶于少量甲醇后，與1～3倍的硅藻土混勻，經(jīng)減壓干燥制成粉未后，置于硅膠色譜柱頭，進行色譜分離。硅膠粒度以10～40微米或40～63微米為佳，硅膠用量為樣品量的20～60倍。乙酸乙酯用于洗脫低極性雜質(zhì)，乙醚/乙酸乙酯/甲醇混合液(6∶20∶4)用于洗脫原茶醛和丹參素，甲醇用于洗脫水溶性雜質(zhì)并再生硅膠。
經(jīng)TLC和HPLC檢測，合并含丹參素的洗脫液。丹參素的洗脫液經(jīng)減壓濃縮干燥后獲丹參素產(chǎn)品。
實施例11、粉碎、脫脂丹參根2公斤→粉碎(1～3mm)→石油醚脫脂(4L×3)→干燥→脫脂丹參粉。
2提取、超濾、濃縮脫脂丹參粉→16L去離子水提取(80℃、2小時)→12L去離子水提取(80℃、2小時)→8L去離子水提取(80℃、2小時)→合并→超濾→減壓濃縮至2L。
3轉(zhuǎn)化丹參濃縮液→加入亞硫酸氫鈉(10g)、飽和NaOH調(diào)至pH9～10→氮氣保護下攪拌2小時→加入2mol.L-1的HCl調(diào)pH至3.0。
4萃取經(jīng)酸化的丹參轉(zhuǎn)化液→乙酸乙酯萃取(600mL×5)→減壓回收乙酸乙酯→丹參素粗品(18g，淺黃色粉末、丹參素純度65％，原兒茶醛16％)，。
5硅膠色譜丹參素粗品(18g)→加入硅藻土(45g)混勻→真空干燥→固體粉未→上于不銹鋼柱(硅膠400g，φ50×500)→分步洗脫(乙酸乙酯3L，乙醚/乙酸乙酯/甲醇混合液(6∶20∶4)6L，甲醇3L；流速流速10～20mL/min)→分段收集(每段100～150mL)→分部合并(經(jīng)TLC和HPL檢測后按丹參素和原兒茶醛二個部分合并)→丹參素部分→真空濃縮回收溶劑→丹參素(11.5g)。
實施例21提取、超濾、濃縮丹參根100公斤→粉碎(1～3mm)→800L去離子水提取(80℃、2小時)→600L去離子水提取(80℃、2小時)→400L去離子水提取(80℃、2小時)→合并→超濾→減壓濃縮至100L。
2轉(zhuǎn)化丹參濃縮液→加入亞硫酸氫鈉(500g)、飽和NaOH調(diào)至pH9～10→氮氣保護下攪拌2h→加入2mol.L-1的HCl調(diào)pH至3.0。
3萃取經(jīng)酸化的丹參轉(zhuǎn)化液→乙酸乙酯萃取(30L×5)→減壓回收乙酸乙酯→丹參素粗品(920g，淺黃色粉末、丹參素純度67％，原兒茶醛14％)，。
4硅膠色譜丹參素粗品(920g)→加入硅藻土(2.5kg)混勻→真空干燥→固體粉未→上于不銹鋼柱(硅膠20kg，φ200×1500)→分步洗脫(乙酸乙酯150L，乙醚/乙酸乙酯/甲醇混合液(6∶20∶4)300L，甲醇150L；流速流速400～450mL/min)→分段收集(每段4～5L)→分部合并(經(jīng)TLC和HPL檢測后按丹參素和原兒茶醛二個部分合并)→丹參素部分→真空濃縮回收溶劑→丹參素(487g)。
權(quán)利要求
1.一種丹參素的制備方法，工藝過程如下——提取，以丹參為原料獲得含有丹參素及丹參素前體的水或醇的提取液；——轉(zhuǎn)化，用稀堿將上述提取液中的丹參素前體轉(zhuǎn)化為丹參素；——超濾，用超濾膜將上述轉(zhuǎn)化后的提取液超濾除去大分子物質(zhì)；——萃取，自上述超濾后的提取液中將丹參素萃出；——分離，用正相色譜方法分離出上述萃取獲得的丹參素。
2.按照權(quán)利要求1所述丹參素的制備方法，其特征在于所述轉(zhuǎn)化過程在稀堿、抗氧保護劑和惰性氣體保護的室溫條件下進行，轉(zhuǎn)化時間為0.5～2小時；所述堿為堿金屬、堿金屬氧化物、堿金屬氫氧化物、或低碳醇鈉，用量為0.01～0.2mol/L，使溶液pH為9～10；所述抗氧保護劑為抗壞血酸、亞硫酸氫鈉、或沒食子酸，用量為1～10g/L；所述惰性氣體指氮氣、二氧化碳、氦氣、氬氣、或氖氣。
3.按照權(quán)利要求1所述丹參素的制備方法，其特征在于所述超濾過程中，濾膜為親水膜，為板式或者中空纖維，截留分子量中心為1000～10000。
4.按照權(quán)利要求1所述丹參素的制備方法，其特征在于所述萃取過程中，萃取劑為正丁醇、乙酸乙酯或乙醚，用量為提取液1g生藥/mL的1～2倍，pH3.0、室溫萃取3～6次。
5.按照權(quán)利要求1所述丹參素的制備方法，其特征在于所述分離過中，正相色譜填料為硅膠，硅膠粒度以10～63微米，用量為樣品量的20～60倍。
6.按照權(quán)利要求5所述丹參素的制備方法，其特征在于所述分離過程中，正相色譜樣品溶于少量甲醇后，與1～3倍的硅藻土混勻，經(jīng)減壓干燥制成粉未后，固體上樣。
7.按照權(quán)利要求6所述萃取與色譜聯(lián)用制備丹參素的方法，其特征在于所述分離過程中，乙酸乙酯用于洗脫低極性雜質(zhì)，乙醚/乙酸乙酯/甲醇混合液6∶20∶4用于洗脫原茶醛和丹參素，甲醇用于洗脫水溶性雜質(zhì)以再生硅膠。
全文摘要
一種丹參素的制備方法，工藝過程如下以丹參為原料獲得含有丹參素及丹參素前體的水或醇的提取液；用稀堿將上述提取液中的丹參素前體轉(zhuǎn)化為丹參素；用超濾膜將上述轉(zhuǎn)化后的提取液超濾除去大分子物質(zhì)；自上述超濾后的提取液中將丹參素萃出；用正相色譜方法分離出上述萃取獲得的丹參素。本發(fā)明所述萃取與色譜聯(lián)用制備丹參素的方法，基本解決了藥用丹參素制備中純度、收率和處理量三個相互矛盾的根本問題，為高純度藥用丹參素的制備提供了一種簡單、方便、回收率高、成本低的批量制備方法。使用本方法制備的丹參素含量≥95％，回收率≥70％。
文檔編號C07C51/42GK1670008SQ20041002141
公開日2005年9月21日 申請日期2004年3月18日 優(yōu)先權(quán)日2004年3月18日
發(fā)明者楊凌, 何克江, 楊義 申請人:中國科學院大連化學物理研究所