專利名稱：包括n－[2－(二乙氨基)乙基]－5－[(5－氟－2－氧代－3h－吲哚－3－亞基)甲基]－2 ...的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及晶體和其組合物，其中該晶體包括N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺的蘋果酸鹽。本發(fā)明還涉及制備這類晶體的方法。
背景PK是催化蛋白質(zhì)酪氨酸、絲氨酸和蘇氨酸殘基上羥基磷酸化作用的酶。這種看似簡單的活性的后果是巨大的細胞的生長、分化和增殖，即事實上在某種程度上是細胞生命的所有方面，都依賴于PK活性。此外，異常的PK活性已經(jīng)涉及宿主的疾患，從相對無生命威脅的疾病、例如牛皮癬到極為致命的疾病、例如成膠質(zhì)細胞瘤(腦癌)。PK可以被適宜地分為兩類，蛋白質(zhì)酪氨酸激酶(PTK)和絲氨酸-蘇氨酸激酶(STK)。
PTK活性的主要方面之一是它們與生長因子受體的牽連。生長因子受體是細胞表面蛋白。在被生長因子配體結(jié)合時，生長因子受體轉(zhuǎn)化為活性形式，后者與細胞膜內(nèi)表面上的蛋白質(zhì)發(fā)生相互作用。這引起受體和其它蛋白質(zhì)酪氨酸殘基上的磷酸化作用，并導(dǎo)致細胞內(nèi)部各種胞質(zhì)發(fā)信號分子配合物的生成，繼而引起大量細胞反應(yīng)，例如細胞分裂(增殖)、細胞分化、細胞生長、細胞外微環(huán)境的代謝效應(yīng)表達等。
人們已經(jīng)鑒別了充當(dāng)PK抑制劑的小分子，例如包括3-吡咯取代的2-二氫吲哚酮化合物，公開在PCT國際公報No.WO 01/60814(Tang etal.)中。3-吡咯取代的2-二氫吲哚酮化合物例如包括N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺，公開在PCT國際公報No.WO 01/60814(Tang et al.)中。不過，該文沒有涉及N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺的鹽的具體晶型的制備和性質(zhì)。存在對這類材料的結(jié)晶型式的需求，所述物質(zhì)具有優(yōu)越的化學(xué)和/或物理性質(zhì)，可用于藥物輸送應(yīng)用。
發(fā)明概述一方面，本發(fā)明提供包括具有下列結(jié)構(gòu)的化合物的蘋果酸鹽的晶體 上述結(jié)構(gòu)化合物已知也稱N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺。蘋果酸鹽可以是D-蘋果酸、D，L-蘋果酸、L-蘋果酸或其組合的鹽。優(yōu)選地，蘋果酸鹽是L-蘋果酸的鹽。優(yōu)選地，晶體是無水的。優(yōu)選地，晶體在粉末X-射線衍射圖中的特征衍射峰在約13.2和24.2度2θ，更優(yōu)選在約13.2、19.4、24.2和25.5度2θ，最優(yōu)選如表1關(guān)于晶型I所列舉的。優(yōu)選地，晶體包括至多約2重量％水，更優(yōu)選至多約0.5重量％水，最優(yōu)選至多約0.2重量％水。優(yōu)選地，晶體的熔點為至少約190℃，更優(yōu)選至少約195℃。還提供了包括本文所述晶體的組合物。優(yōu)選地，組合物包括治療有效量的晶體?？蛇x地，組合物包括賦形劑，優(yōu)選藥學(xué)上可接受的賦形劑。
另一方面，本發(fā)明提供包括N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺蘋果酸鹽的晶體，其中該晶體在粉末X-射線衍射圖中的特征衍射峰在約3.0和27.7度2θ，更優(yōu)選在約3.0、12.1、14.5和27.7度2θ，最優(yōu)選如表1關(guān)于晶型I I所列舉的。通常，晶體在暴露于80％相對濕度后吸收至少約5重量％水，熔點為至多約185℃。還提供了包括本文所述晶體的組合物。優(yōu)選地，組合物包括治療有效量的晶體?？蛇x地，組合物包括賦形劑，優(yōu)選藥學(xué)上可接受的賦形劑。
另一方面，本發(fā)明提供制備包括N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺蘋果酸鹽的無水晶體(例如晶型I)的方法。在一種實施方式中，該方法包括混合蘋果酸、N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺和溶劑，在包括一種或多種因素的結(jié)晶條件(例如晶型I結(jié)晶條件)下誘使鹽結(jié)晶，所述因素包括結(jié)晶溶液在最初與最終溫度之間至多約100℃的差異；至多約50℃每小時的冷卻速率；沒有有籽晶；至多約10的過飽和比；沒有沉淀劑；和/或它們的組合。優(yōu)選地，蘋果酸是L-蘋果酸。優(yōu)選地，溶劑包括一種或多種溶劑，例如包括乙腈、甲醇、乙醇、異丙醇、甲苯、正丁醇、四氫呋喃、N，N-二甲基甲酰胺、丙酮、水和它們的組合。
在另一種實施方式中，制備包括N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺蘋果酸鹽的無水晶體的方法包括使包括N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺蘋果酸鹽的晶體與溶劑接觸，在該溶劑中接觸中的晶體具有相當(dāng)?shù)娜芙舛?，在該溶劑中接觸中的晶體(例如晶型II)在粉末X-射線衍射圖中的特征衍射峰在約3.0和27.7度2θ。優(yōu)選地，溶劑包括一種或多種溶劑，例如包括乙腈、乙醇、甲醇和它們的組合。優(yōu)選地，使晶體與溶劑接觸后形成漿液，優(yōu)選地攪拌和/或加熱該漿液?？蛇x地，可以從漿液中回收無水晶體。
另一方面，本發(fā)明提供制備包括N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺蘋果酸鹽的晶體(例如晶型II)的方法。該方法包括混合蘋果酸、N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺和溶劑，在包括一種或多種因素的結(jié)晶條件(例如晶型II結(jié)晶條件)下誘使鹽結(jié)晶，所述因素包括結(jié)晶溶液在最初與最終溫度之間至少約25℃的差異；至少約25℃每小時的冷卻速率；有籽晶；至少約2的過飽和比；沉淀劑的存在；和/或它們的組合。優(yōu)選地，蘋果酸是L-蘋果酸。優(yōu)選地，溶劑包括一種或多種溶劑，例如包括甲醇、水、四氫呋喃/水混合物和它們的組合。優(yōu)選地，晶體在粉末X-射線衍射圖中的特征衍射峰在約3.0和27.7度2θ。
無水晶型I在很多應(yīng)用中優(yōu)于晶型II，因為由晶型I所呈現(xiàn)的性質(zhì)優(yōu)選地例如包括比晶型II相應(yīng)性質(zhì)更大的熱力學(xué)穩(wěn)定性、更高的結(jié)晶度和更低的吸濕性。
結(jié)晶條件受大量因素影響，它們是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。這類因素例如包括結(jié)晶溶液中鹽的濃度；結(jié)晶溶液在最初與最終溫度之間的差異，如果有的話；冷卻的速率，如果有的話；溶劑汽化速率，如果有的話；加籽晶；過飽和比；和沉淀劑的存在。按照本文所提供的指導(dǎo)，本領(lǐng)域技術(shù)人員無需額外的實驗即可以選擇和/或調(diào)整一種或多種適當(dāng)?shù)囊蛩?，以達到提供晶型I和/或晶型II的結(jié)晶條件。
定義本文所用的“過飽和比”表示在結(jié)晶溫度下溶液中材料濃度與飽和溶液中材料濃度之比。
本文所用的“加籽晶”表示向結(jié)晶溶液加入“晶種”的技術(shù)，以促進晶體的生成。優(yōu)選地，晶種的組成與所生成的晶體的組成相同。
本文所用的“沉淀劑”表示這樣一種物質(zhì)，它在加入到結(jié)晶溶液中后趨于誘使結(jié)晶。有用的沉淀劑例如包括鹽的非溶劑和包括過量抗衡離子的溶液。本文所用的非溶劑是這樣一種溶劑，鹽在其中的溶解度優(yōu)選為至多約1重量％，更優(yōu)選為至多約0.1重量％，最優(yōu)選為至多約0.01重量％。
本文所用的“無水晶體”表示這樣一種晶體，水在其中沒有被特定地結(jié)合。無水晶體優(yōu)選地不包括實質(zhì)量的水。水分可以借助本領(lǐng)域已知的方法測定，例如包括Karl Fischer滴定。優(yōu)選地，無水晶體包括至多約2重量％水，更優(yōu)選至多約0.5重量％水，最優(yōu)選至多約0.2重量％水。
本文所用的“結(jié)晶性”表示這樣一種材料，它具有有序的、遠程(long range)分子結(jié)構(gòu)。晶型的結(jié)晶度可以借助很多技術(shù)測定，例如包括粉末X-射線衍射、吸濕、示差掃描量熱法、溶液量熱法和溶解性質(zhì)。
本文所用的“更高的結(jié)晶性”意味著材料具有比它所比較的材料更高的結(jié)晶度。具有更高結(jié)晶度的材料一般具有高度有序的、遠程分子結(jié)構(gòu)，對晶體結(jié)構(gòu)的影響小于具有更低結(jié)晶度的材料?？梢韵鄬τ谄渌问絹碓u估更高的結(jié)晶度，評估技術(shù)例如包括粉末X-射線衍射圖中更敏銳的反射、相似大小粒子在指定相對濕度下更低的吸濕性、更低的溶解熱、更高的熔化熱、更慢的溶解速率和它們的組合。
本文所用的“更低的結(jié)晶性”意味著材料具有比它所比較的材料更低的結(jié)晶度。具有更低結(jié)晶度的材料一般具有比具有更高結(jié)晶度的材料更小的遠程順序和更多的晶體結(jié)構(gòu)缺陷。可以相對于其它形式來評估更低的結(jié)晶度，評估技術(shù)例如包括粉末X-射線衍射圖中更寬和/或更少的反射、相似大小粒子在指定相對濕度下更高的吸濕性、更高的溶解熱、更低的熔化熱、更快的溶解速率和它們的組合。
本申請在堆藥物穩(wěn)定性試驗中提到的“穩(wěn)定性”意味著在所示條件下貯存所示時間后，至少約97重量％、優(yōu)選至少約98重量％、更優(yōu)選至少約99重量％批次的藥物保持不變。
附圖的簡要說明

圖1是N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺L-蘋果酸鹽晶型I的粉末X-射線衍射(PXRD)數(shù)據(jù)的舉例說明?；硬煌邴}和游離堿的其它晶型，比晶型II(例如圖2)具有更高的結(jié)晶性。
圖2是N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺L-蘋果酸鹽晶型II的粉末X-射線衍射(PXRD)數(shù)據(jù)的舉例說明。花樣不同于鹽和游離堿的其它晶型，比晶型I(例如圖1)具有更低的結(jié)晶性，表現(xiàn)為在粉末X-射線衍射圖中的反射更寬。
圖3是N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺L-蘋果酸鹽晶型I與晶型I I的吸濕曲線的動態(tài)吸濕重量法(DMSG)吸收等溫線的舉例說明。更高結(jié)晶性多晶型的晶型I是低吸濕性的，在0-90％相對濕度范圍內(nèi)吸收少于0.5％水。更低結(jié)晶性多晶型的晶型II是非常吸濕性的，在0-90％相對濕度范圍內(nèi)吸收超過15％水。
圖4是示差掃描量熱法(DSC)數(shù)據(jù)的舉例說明，顯示N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺L-蘋果酸鹽晶型I與晶型II的DSC曲線。放熱躍遷以上箭頭表示。晶型I在更高的溫度(約196℃)下熔化，熔化焓更高(約141J/g)，而晶型II在約181℃下熔化，熔化焓約為105J/g。這提示了這兩種晶型是單變性的，盡管在晶體熔化之后發(fā)生降解。如本文所述在室溫漿液中晶型II向晶型I的轉(zhuǎn)化證實了單變現(xiàn)象。
優(yōu)選實施方式的詳細說明N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺是3-吡咯取代的2-二氫吲哚酮化合物，具有下列結(jié)構(gòu)
N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺可以借助標(biāo)準的合成工藝而被制成游離堿，例如包括公開在PCT國際公報No.WO 01/60814(Tang et al.)中的那些。盡管游離堿可以結(jié)晶成小的粒子，不過例如在大規(guī)模操作中需要更大粒徑的晶體，因其易于過濾。為此，針對N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺的鹽的制備方法評價了與鹽的加工和口服藥物組合物的制備有關(guān)的所得性質(zhì)。
針對與鹽的加工和口服藥物組合物的制備有關(guān)的性質(zhì)，篩選了N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺——包括游離堿及其鹽(例如環(huán)己氨磺酸、馬來酸、氫溴酸、扁桃酸、酒石酸、富馬酸、抗壞血酸、磷酸、鹽酸、對-甲苯磺酸、檸檬酸和蘋果酸的鹽)——的結(jié)晶型式，例如包括結(jié)晶性(例如結(jié)晶性的或無定形的，結(jié)晶度，無水的或水合的晶體)、毒性、吸濕性、穩(wěn)定性和形態(tài)?；谏鲜龊Y選，確定了N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺蘋果酸鹽可提供所需性質(zhì)的最佳平衡。進一步的研究發(fā)現(xiàn)，N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺蘋果酸鹽以多種晶型結(jié)晶。
本發(fā)明提供制備包括N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺蘋果酸鹽的晶型的方法，和這些晶型的鑒別。包括蘋果酸鹽的無水晶體的制備如本文所述。無水晶型I在很多應(yīng)用上具有優(yōu)越的性質(zhì)。
晶型I在一個實施方式中，已經(jīng)制備了N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺的蘋果酸鹽，為無水晶體(例如晶型I)。無水晶型I在熱力學(xué)上比其它晶型(例如晶型II)更加穩(wěn)定。在一種方法中，晶型I例如可以這樣制備，在晶型I結(jié)晶條件下誘使蘋果酸鹽從過飽和溶液中結(jié)晶出來。
本文所用的“晶型I結(jié)晶條件”表示提供熱力學(xué)晶型(例如晶型I)的結(jié)晶條件。這類條件一般稱為“慢”結(jié)晶條件。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以選擇一種或多種因素，例如包括結(jié)晶溶液的最初與最終溫度之間的差異優(yōu)選為至多約100℃，更優(yōu)選為至多約50℃，進而更優(yōu)選為至多約25℃，最優(yōu)選為約0℃；冷卻速率優(yōu)選為至多約每小時50℃，更優(yōu)選為至多約每小時20℃，進而更優(yōu)選為至多約每小時2℃，最優(yōu)選為約每小時0℃；沒有加籽晶；過飽和比優(yōu)選為至多約10，更優(yōu)選為至多約5，最優(yōu)選為至多約1.5；沒有沉淀劑；和/或它們的組合，以提供晶型I結(jié)晶條件。
可用于制備結(jié)晶溶液的溶劑例如包括乙腈、甲醇、乙醇、異丙醇、甲苯、正丁醇、四氫呋喃、N，N-二甲基甲酰胺、丙酮、水和它們的組合。
在另一種方法中，晶型I例如可以這樣制備，提供晶型II在溶劑中的漿液，在該溶劑中晶型II具有實質(zhì)性的溶解度。本文所用的“實質(zhì)性的溶解度”意味著在約室溫(例如約15℃至約30℃)下，晶體優(yōu)選地可溶于該溶劑，濃度為至少約0.1重量％，更優(yōu)選為至少約1重量％，最優(yōu)選為至少約10重量％?？蛇x地，在室溫下晶體可以以所示濃度溶于該溶劑。
這類溶劑例如包括乙腈、乙醇、甲醇和它們的組合。
晶型II在另一個實施方式中，已經(jīng)制備了N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺的蘋果酸鹽，為另一種晶型(例如晶型II)。晶型II例如可用作無水晶型I制備中的中間體。
晶型II例如可以這樣制備，在晶型II結(jié)晶條件下誘使蘋果酸鹽從過飽和溶液中結(jié)晶出來。
本文所用的“晶型II結(jié)晶條件”表示提供除熱力學(xué)形式以外的晶型的結(jié)晶條件。這類條件一般稱為“快”結(jié)晶條件。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以選擇一種或多種因素，例如包括結(jié)晶溶液的最初與最終溫度之間的差異優(yōu)選為至少約25℃，更優(yōu)選為至少約50℃，最優(yōu)選為至少約100℃；冷卻速率優(yōu)選為至少約每小時25℃，更優(yōu)選為至少約每小時100℃，最優(yōu)選為至少約每小時300℃；有籽晶；過飽和比優(yōu)選為至少約2，更優(yōu)選為至多約5，最優(yōu)選為至多約10；有沉淀劑的存在；和/或它們的組合，以提供晶型II結(jié)晶條件。
可用于結(jié)晶溶液的溶劑例如包括甲醇、水、四氫呋喃/水混合物和它們的組合。
粉末X-射線衍射(PXRD)結(jié)晶性有機化合物由大量在三維空間中按周期性陣列排列的原子組成。結(jié)構(gòu)周期性通常表現(xiàn)出明顯的物理性質(zhì)，例如大多數(shù)光譜學(xué)(例如X-射線衍射、紅外和固態(tài)NMR)探測到敏銳、清晰的光譜特征。X-射線衍射(XRD)被公認是最靈敏的測定固體結(jié)晶性的方法之一。晶體產(chǎn)生清晰的衍射最大量，出現(xiàn)在特定的角度，與晶面間距一致，正如布拉格定律所預(yù)測的。相反，無定形物不具有長程序。它們經(jīng)常保留分子之間額外的容積，如同液態(tài)一樣。無定形固體通常顯示無特征的XRD花樣，具有寬的、擴散性暈輪，因為不存在重復(fù)晶格的長程序。
粉末X-射線衍射據(jù)報道已經(jīng)用于區(qū)別有機化合物的不同晶型(例如可用在藥物組合物中的化合物)。例如參見美國專利Nos.5,504,216(Holohan et al)，5,721,359(Dunn et al.)，5,910,588(Wangnicket al.)，6,066,647(Douglas et al.)，6,225,474(Matsumoto etal.)，6,239,141(Allen et al.)，6,251,355(Murata et al.)，6,288,057(Harkness)，6,316,672(Stowell et al.)，6,329,364(Groleau)和美國專利申請公報Nos.2001/0003752(Talley et al.)，2002/0038021(Barton et al.)，2002/0045746(Barton et al.)。
結(jié)晶性材料在很多藥學(xué)應(yīng)用中都是優(yōu)選的。結(jié)晶型式一般在熱力學(xué)上比同一物質(zhì)的無定形形式更加穩(wěn)定。這種熱力學(xué)穩(wěn)定性優(yōu)選地反映在結(jié)晶型式的溶解度較低和物理穩(wěn)定性較高。結(jié)晶性固體中分子的規(guī)則性堆積拒絕化學(xué)雜質(zhì)的摻入。因此，結(jié)晶性材料一般具有比它們的無定形相應(yīng)物更高的化學(xué)純度。結(jié)晶性固體中的堆積一般將分子限制在被充分限定的晶格位置，減少分子的移動性，后者是化學(xué)反應(yīng)的先決條件。因此，結(jié)晶性固體——鮮有顯著的例外——在化學(xué)上比同一分子組成的無定形固體更加穩(wěn)定。優(yōu)選地，公開在本申請中的N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺蘋果酸鹽的結(jié)晶型式具有如本文所公開的一種或多種有利的化學(xué)和/或物理性質(zhì)。
公開在本申請中的N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺蘋果酸鹽的結(jié)晶型式優(yōu)選地具有清楚的粉末X-射線衍射曲線。例如，包括N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺蘋果酸鹽的無水晶體可以優(yōu)選地區(qū)別于如本文所公開的包括蘋果酸鹽的其它晶型，因為存在特征衍射峰。本文所用的特征衍射峰選自所觀測的衍射圖的最強峰。優(yōu)選地，特征性峰選自衍射圖中的20個最強峰，更優(yōu)選約10個最強峰，最優(yōu)選約5個最強峰。
圖1和2分別顯示N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺L-蘋果酸鹽晶型I和II的粉末X-射線衍射圖。表1含有每種PXRD花樣最強峰的列表，2θ在2與35度之間。游離堿、晶型I和晶型II都容易借助它們獨特的PXRD花樣加以區(qū)分。
優(yōu)選地，包括N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺蘋果酸鹽的無水晶體(例如晶型I)的特征衍射峰在約13.2和24.2度2θ，更優(yōu)選在約13.2、19.4、24.2和25.5度2θ，最優(yōu)選地具有如表1關(guān)于晶型I所列舉的特征衍射峰。
優(yōu)選地，N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺蘋果酸鹽晶型II的特征衍射峰在約3.0和27.7度2θ，更優(yōu)選在約3.0、12.1、14.5和27.7度2θ，最優(yōu)選地具有如表1關(guān)于晶型II所列舉的特征衍射峰。
表1晶型I和II的粉末X-射線衍射峰表
純度和固態(tài)穩(wěn)定性N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺蘋果酸鹽晶型I的純度是借助高效液相色譜(HPLC)評價的。結(jié)果顯示檢測到大于約98面積％的純度和小于約2面積％的雜質(zhì)(表2)。
還進行了N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺L-蘋果酸鹽晶型I的固態(tài)穩(wěn)定性研究(表2)。在60℃/環(huán)境相對濕度、60℃/75％相對濕度和80℃/環(huán)境相對濕度下老化四周后的數(shù)據(jù)顯示沒有顯著的降解作用。針對兩周樣品所進行的粉末X-射線衍射也表明晶型沒有改變。
表2基于HPLC分析的晶型I的穩(wěn)定性
*相對濕度(RH)水分吸收數(shù)據(jù)N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺L-蘋果酸鹽晶型I和II在25℃下的水分吸收數(shù)據(jù)如圖3所示。更具結(jié)晶性的多晶型的晶型I是低吸濕性的，在0-90％相對濕度范圍內(nèi)吸收少于0.5％的水。更少具結(jié)晶性的多晶型的晶型II是高吸濕性的，在0-90％相對濕度范圍內(nèi)吸收15％以上的水。
熱數(shù)據(jù)示差掃描量熱數(shù)據(jù)如圖4所示。N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺L-蘋果酸鹽的無水晶型I在約196℃下熔化，而晶型II在約181℃下熔化。在最初熔化之后所觀察到的事件提示了很可能存在一定程度的分解，其與熔化有關(guān)。因此，不容易測量準確的熔化熱。
晶型I的TGA數(shù)據(jù)(未顯示)顯示直至熔點也沒有顯著的重量丟失，表明缺乏殘留在晶體中的殘留溶劑和/或水。
給藥和藥物組合物本發(fā)明的晶體可以原樣對人類患者給藥，或者可以以藥物組合物形式給藥，在組合物中使上述晶體與適合的載體或賦形劑混合。藥物的制劑和給藥技術(shù)可以參見″Remington’s PharmacologicalSciences″，Mack Publishing Co.，Easton，PA.最新版。
本文所用的動詞“給藥”或名詞“給藥”表示本發(fā)明晶體或其藥物組合物向生物體的輸送，目的是預(yù)防或治療PK相關(guān)性障礙。
適合的給藥途徑可以非限制性地包括口服、直腸、透粘膜或腸內(nèi)給藥，或者肌內(nèi)、皮下、髓內(nèi)、鞘內(nèi)、直接的室內(nèi)、靜脈內(nèi)、脈絡(luò)膜內(nèi)(intravitreal)、腹膜內(nèi)、鼻內(nèi)或眼內(nèi)注射。優(yōu)選的給藥途徑是口服和腸胃外。
作為替代選擇，可以將本發(fā)明晶體或其藥物組合物以局部方式而非全身方式給藥，例如將本發(fā)明晶體或其藥物組合物直接注射到實體腫瘤內(nèi)，經(jīng)常以藥庫或持續(xù)釋放制劑的形式。
此外，可以將藥物在靶向藥物釋放系統(tǒng)中給藥，例如包被有腫瘤特異性抗體的脂質(zhì)體。脂質(zhì)體將被定向至腫瘤，并且被腫瘤選擇性吸收。
本發(fā)明的藥物組合物可以借助本領(lǐng)域熟知的過程加以制備，例如借助常規(guī)的混合、溶解、制粒、糖衣錠劑制備、研磨、乳化、包封、包埋或凍干過程。
根據(jù)本發(fā)明所使用的藥物組合物可以按常規(guī)方式加以配制，使用一種或多種生理學(xué)上可接受的載體，包括賦形劑和助劑，它們有利于本發(fā)明晶體加工成為能夠藥用的制備物。適當(dāng)?shù)闹苿┮蕾囉谒x擇的給藥途徑。
關(guān)于注射，可以將本發(fā)明晶體或其藥物組合物配制成水性溶液，優(yōu)選地在生理學(xué)上可相容的緩沖液中，例如漢克氏溶液、林格氏溶液或生理鹽水緩沖液。關(guān)于透粘膜給藥，在制劑中使用適合于所要滲透的屏障的滲透劑。這類滲透劑是本領(lǐng)域公知的。
關(guān)于口服給藥，本發(fā)明晶體或其藥物組合物可以這樣配制，將本發(fā)明晶體與本領(lǐng)域熟知的藥學(xué)上可接受的載體混合而成。這類載體使本發(fā)明晶體能夠配制成片劑、丸劑、錠劑、糖錠劑(dragee)、膠囊劑、液體、凝膠劑、糖漿劑、漿液、混懸劑等，用于患者口服攝取?？谟盟幬镏苽湮锟梢赃@樣制備，使用固體賦形劑，可選地研磨所得混合物，如果需要的話加入其它適合的助劑，然后加工顆?；旌衔?，得到片劑或錠劑芯。有用的賦形劑特別是填充劑，例如糖類，包括乳糖、蔗糖、甘露糖醇或山梨糖醇，纖維素制備物，例如玉米淀粉、小麥淀粉、水稻淀粉和馬鈴薯淀粉，和其它材料，例如明膠、黃蓍膠、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需要的話，可以加入崩解劑，例如交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂或藻酸。還可以使用鹽，例如藻酸鈉。
為糖錠劑芯提供適合的包衣。為此，可以使用濃的糖溶液，其中可以可選地含有阿拉伯膠、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、卡波醇凝膠、聚乙二醇和/或二氧化鈦，漆溶液，和適合的有機溶劑或溶劑混合物?？梢韵蚱瑒┗蛱清V劑包衣加入染劑或色素，用于鑒別或區(qū)分不同的活性劑量組合。
可以口服使用的藥物組合物包括推入式(push-fit)膠囊劑，由明膠制成，以及軟密封膠囊劑，其由明膠和一種增塑劑制成，例如甘油或山梨糖醇。推入式膠囊劑可以含有活性成分與下列成分的混合物填充劑，例如乳糖，粘合劑，例如淀粉，和/或潤滑劑，例如滑石或硬脂酸鎂，和可選的穩(wěn)定劑。在軟膠囊劑中，可以將本發(fā)明晶體溶解或懸浮在適合的液體中，例如脂肪油、液體石蠟或液體聚乙二醇。還可以在這些制劑中加入穩(wěn)定劑。
可以將膠囊劑裝入褐色玻璃或塑料瓶內(nèi)，以保護本發(fā)明晶體或其藥物組合物避光。含有活性膠囊制劑的容器必須被貯存在受控制的室溫下(例如約15℃至約30℃)。
關(guān)于吸入給藥，本發(fā)明晶體或其藥物組合物可方便地以氣霧噴霧劑的形式輸送，使用加壓包裝或霧化器和一種適合的推進劑，非限制地例如二氯二氟甲烷、三氯氟代甲烷、二氯四氟乙烷或二氧化碳。在加壓氣霧劑的情況下，提供計量釋放的閥門可以確定劑量單元?？梢耘渲颇z囊和藥筒，例如由明膠制成，用在吸入器或吹入器內(nèi)，其中含有本發(fā)明晶體或其藥物組合物的粉末混合物以及適合的粉劑基質(zhì)，例如乳糖或淀粉。
本發(fā)明晶體或其藥物組合物也可以被配制成腸胃外給藥的形式，例如借助一次性注射或連續(xù)輸注。注射制劑可以以單位劑型存在，例如存在于安瓿或多劑量容器內(nèi)，加入有防腐劑。組合物可以采取諸如在油性或水性載體中的混懸劑、溶液或乳劑的形式，可以含有配制材料，例如懸浮劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑。
用于腸胃外給藥的藥物組合物包括本發(fā)明晶體或其藥物組合物的水溶性形式的水溶液。另外，可以在親脂性載體中制備本發(fā)明晶體或其藥物組合物的混懸劑。適合的親脂性載體包括脂肪油，例如芝麻油，合成的脂肪酸酯，例如油酸乙酯和甘油三酯，或者諸如脂質(zhì)體等材料。水性注射混懸劑可以含有增加該混懸劑粘度的物質(zhì)，例如羧甲基纖維素鈉、山梨糖醇或葡聚糖?？蛇x地，混懸劑還可以含有適合的穩(wěn)定劑和/或增加本發(fā)明晶體或其藥物混合物溶解度的試劑，以便制備高濃縮溶液。
作為替代選擇，活性成分可以是粉末形式，用于在使用前與適合的載體構(gòu)建，例如無菌、無熱原的水。
本發(fā)明晶體或其藥物組合物還可以被配制成直腸組合物，例如栓劑或保留灌腸劑，例如使用常規(guī)的栓劑基質(zhì)，例如可可脂或其它甘油酯。
除了前述制劑以外，本發(fā)明晶體或其藥物組合物還可以被配制成藥庫制備物。這類長效制劑可以借助植入(例如皮下或肌內(nèi)方式)或者肌內(nèi)注射給藥?？梢詫⒈景l(fā)明晶體或其藥物組合物與適合的聚合性或疏水性材料(例如與藥理學(xué)上可接受的油配制成乳劑)、離子交換樹脂配制成用于這種給藥途徑的形式或者難溶性衍生物。
另外，本發(fā)明晶體或其藥物組合物可以利用持續(xù)釋放系統(tǒng)加以釋放，例如含有治療劑的固體疏水性聚合物的半滲透性基質(zhì)。各種持續(xù)釋放材料都已經(jīng)是成熟的，是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。根據(jù)它們的化學(xué)性質(zhì)，持續(xù)釋放膠囊劑可以釋放鹽或其藥物組合物長達幾周至100天以上。根據(jù)治療試劑的化學(xué)性質(zhì)和生物學(xué)穩(wěn)定性，可以采用另外的蛋白質(zhì)穩(wěn)定化方案。
本文的藥物組合物還可以包括適合的固體或凝膠相載體或賦形劑。這類載體或賦形劑的實例包括但不限于碳酸鈣、磷酸鈣、各種糖、淀粉、纖維素衍生物、明膠、和聚合物，例如聚乙二醇。
適合用在本發(fā)明中的藥物組合物包括這樣的組合物，其中含有足以達到預(yù)期目的的量的活性成分，例如PK活性的調(diào)制或者PK相關(guān)性障礙的治療或預(yù)防。
更具體地，治療有效量表示本發(fā)明晶體或其藥物組合物有效預(yù)防、減輕或改善疾病癥狀或者延長受治療者存活時間的量。
治療有效量的確定完全在本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力范圍內(nèi)，尤其按照由本文所提供的詳細公開內(nèi)容。
關(guān)于用在本發(fā)明方法中的任何本發(fā)明晶體或其藥物組合物，治療有效量或劑量可以是最初從細胞培養(yǎng)測定法來估計的。然后，可以制訂用于動物模型的劑量，以便達到一種循環(huán)中的濃度范圍，該范圍包括如在細胞培養(yǎng)中所測定的IC50(也就是本發(fā)明晶體或其藥物組合物達到PK活性的半數(shù)最大抑制作用的濃度)。這類信息然后可以用于更準確地確定可用于人類的劑量。
本發(fā)明晶體或其藥物組合物的毒性和治療功效可以在細胞培養(yǎng)物或?qū)嶒瀯游镏薪柚鷺?biāo)準的藥學(xué)工藝加以測定，例如測定本發(fā)明晶體或其藥物組合物的IC50和LD50(二者在本文另處有討論)。從這些細胞培養(yǎng)測定法和動物研究所得數(shù)據(jù)可以用于制訂人用劑量范圍。劑量可以因所采用的劑型和所利用的給藥途徑而異。鑒于患者的條件，可以由醫(yī)師個人選擇精確的制劑、給藥途徑和劑量(例如參見Fingl，etal.，1975，″The Pharmacological Basis of Therapeutics″，Ch.1p.1)。
可以個別調(diào)整劑量和間隔，以提供足以維持激酶調(diào)制效果的活性成分血漿水平。這些血漿水平被稱為最低有效濃度(MEC)。MEC將因每種本發(fā)明晶體或其藥物組合物而異，但是可以從體外數(shù)據(jù)估計出來，例如達到50-90％激酶抑制作用所必需的濃度可以利用本文所述測定法加以確定。達到MEC所必需的劑量將依賴于個體特征和給藥途徑。HPLC測定法或生物測定法可以用于測定血漿濃度。
劑量間隔也可以利用MEC值加以確定。本發(fā)明晶體或其藥物組合物應(yīng)當(dāng)利用這樣一種制度給藥，它維持血漿水平在MEC以上達10-90％的時間，優(yōu)選在30-90％之間，最優(yōu)選在50-90％之間。
在局部給藥或選擇性攝取的情況下，藥物的有效局部濃度可以與血漿濃度無關(guān)，可以采用本領(lǐng)域已知的其它工藝來確定正確的劑量和間隔。
所給藥的組合物量當(dāng)然將依賴于受治療者、病痛的嚴重性、給藥的方式、主治醫(yī)師的判斷等。
如果需要的話，組合物可以存在于包裝或分配裝置內(nèi)，例如經(jīng)過FDA批準的試劑盒，它可以含有一種或多種含有活性成分的單位劑型。包裝例如可以包括金屬箔或塑料箔，例如泡眼包裝。包裝或調(diào)劑裝置可以附有給藥指導(dǎo)。包裝或調(diào)劑器還可以附有貼于容器上的通告，該通告由管理藥物制造、使用或銷售的主管機構(gòu)發(fā)布，反映該機構(gòu)對組合物形式或者人或獸用的批準。這類通告例如可以是由美國食品與藥品管理局批準的標(biāo)簽用于指明藥品，或可以是經(jīng)過批準的產(chǎn)品插頁。配制在相容性藥物載體中的包括本發(fā)明晶體的組合物還可以被制備、放置在適當(dāng)?shù)娜萜鲀?nèi)，標(biāo)明適應(yīng)癥。標(biāo)簽上適合的適應(yīng)癥可以包括腫瘤的治療、血管生成的抑制、纖維變性、糖尿病的治療等。
本發(fā)明還有一個方面是本發(fā)明晶體或其藥物組合物可能與其它化療劑聯(lián)合治療上述疾病和障礙。例如，本發(fā)明晶體或其藥物組合物可能與下列治療劑聯(lián)合烷化劑，例如單獨的氟尿嘧啶(5-FU)或進一步與亞葉酸聯(lián)合；或其它烷化劑，非限制性地例如其它嘧啶類似物，例如UFT、卡培他濱(capecitabine)、吉西他濱和阿糖胞苷，烷基磺酸酯類，例如白消安(用于治療慢性粒細胞性白血病)、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶類，例如苯佐替哌、卡波醌、美妥替哌和烏瑞替哌；吖丙啶和甲基蜜胺類，例如六甲蜜胺、三亞乙基蜜胺、三亞乙基磷甲酰胺、三亞乙基硫代磷甲酰胺和三羥甲基蜜胺；和氮芥類，例如苯丁酸氮芥(用于治療慢性淋巴細胞性白血病、原發(fā)性巨球蛋白血癥和非何杰金氏淋巴瘤)、環(huán)磷甲酰胺(用于治療何杰金氏病、多發(fā)性骨髓瘤、成神經(jīng)細胞瘤、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、維耳姆斯氏瘤和橫紋肌肉瘤)、雌莫司汀、異環(huán)磷甲酰胺、新氮芥、潑尼莫司汀和尿嘧啶氮芥(用于治療原發(fā)性血小板增多癥、非何杰金氏淋巴瘤、何杰金氏病和卵巢癌)；和三嗪類，例如達卡巴嗪(用于治療軟組織肉瘤)。
本發(fā)明晶體或其藥物組合物還可以與其它抗代謝物化療劑聯(lián)合使用，非限制性地例如葉酸類似物，例如甲氨蝶呤(用于治療急性淋巴細胞性白血病、絨膜癌、蕈樣真菌病、乳腺癌、頭頸癌和骨原性肉瘤)和蝶羅呤；和嘌呤類似物，例如巰基嘌呤和硫代鳥嘌呤，它們用于治療急性粒細胞性、急性淋巴細胞性和慢性粒細胞性白血病。
本發(fā)明晶體或其藥物組合物還可以與天然產(chǎn)物類化療劑聯(lián)合使用，非限制性地例如長春花屬生物堿，例如長春花堿(用于治療乳腺癌和睪丸癌)、長春新堿和長春地辛；表鬼臼毒素，例如依托泊苷和替尼泊苷，二者都可用于治療睪丸癌和卡波濟氏肉瘤；抗生素化療劑，例如柔紅霉素、阿霉素、表阿霉素、絲裂霉素(用于治療胃、子宮頸、結(jié)腸、乳腺、膀胱和胰腺的癌癥)、放線菌素、泰莫佐羅、普卡霉素、博萊霉素(用于治療皮膚、食管和泌尿生殖道的癌癥)；和酶化療劑，例如L-天冬甲酰胺酶。
除了上述以外，本發(fā)明晶體或其藥物組合物還能夠與下列治療劑聯(lián)合使用鉑配合物(順鉑等)；取代的脲，例如羥基脲；甲基肼衍生物，例如丙卡巴肼；腎上腺皮質(zhì)抑制劑，例如米托坦、氨魯米特；激素和激素拮抗劑，例如腎上腺皮質(zhì)類固醇(例如潑尼松)、孕激素類(例如羥孕酮己酸酯)、雌激素類(例如己烯雌酚)、抗雌激素類(例如他莫昔芬)、雄激素類(例如睪酮丙酸酯)；和芳化酶抑制劑，例如阿那曲唑。
最后，本發(fā)明晶體或其藥物組合物與米托蒽醌或紫杉醇的組合將有效地治療實體腫瘤癌癥或白血病，白血病非限制性地例如急性骨髓性(非淋巴細胞性)白血病。
下列實施例闡述本發(fā)明。應(yīng)當(dāng)理解，按照本文所述發(fā)明的范圍與精神對特定的實例、材料、用量和工藝加以廣泛的解釋。
實施例X-射線衍射(XRD)花樣是在Scintag X2衍射計(Thermo ARL，Ecublens，Switzerland)上測量的，后者裝有θ-θ角度計。熔點是利用TA Instruments 2920示差掃描量熱計(TA Instruments，NewCastle，DE)測定的，后者帶有卷曲的底盤，加熱速率為10℃/分鐘。吸濕性是借助動態(tài)水分吸收重量測定法(DMSG)評估的，利用一種受控大氣微量天平(Pharmacia Corp.，Kalamazoo，MI)。所有所用化學(xué)品都是從Aldrich Chemical Co.，Milwaukee，WI獲得的，另有指定除外。借助類似于PCT國際公報No.WO 01/60814(Tang et al.)實施例80所述的工藝制備N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺，為游離堿。
方法粉末X-射線衍射(XRD)。粉末X-射線衍射是利用Scintag X2高級衍射系統(tǒng)進行的，在Scintag DMS/NT 1.30a和Microsoft Windows NT4.0軟件下操作。該系統(tǒng)采用保持在45kV和40MA的銅X-射線源(以提供1.5406的CuK(α1發(fā)射)以及固態(tài)Peltier冷卻檢測器。利用歧管和2與4mm抗散射狹縫和0.5與0.2mm寬的檢測抗散射與接收狹縫控制光束孔。利用0.03°/點的分段掃描收集從2至35°2θ的數(shù)據(jù)，每步計數(shù)時間為一秒鐘。實驗采用Scintag圓形、頂部加載的不銹鋼樣品杯，內(nèi)徑12mm。將散裝藥物原樣取樣，置于樣品托盤內(nèi)，沒有任何加工。一些特定樣品也用研缽和研棒手工研磨，然后測試。數(shù)據(jù)分析是利用Origin 6.0(Microcal Software，Northampton MA)完成的。
動態(tài)水分吸收重量測定法(DMSG)。DMSG等溫線是在溫度可變的受控大氣微量天平上收集的。在天平中使用大約10mg樣品。收到樣品后原樣測試。濕度先后設(shè)置在0與90％相對濕度(RH)之間，步長3％RH。然后每兩分鐘測量一次質(zhì)量。當(dāng)樣品質(zhì)量在480秒內(nèi)穩(wěn)定在0.5微克以內(nèi)時，RH變?yōu)橄乱粩?shù)值。利用Visual Basic程序控制數(shù)據(jù)收集，輸出信息到Excel電子表格中。
熱分析。將粉碎的樣品卷入鋁制DSC盤內(nèi)，得到示差掃描量熱法(DSC)數(shù)據(jù)。收到樣品后原樣測試，大小約1mg。溫度通常掃描至320℃，掃描速率為10℃每分鐘。DSC是TA Instruments 2920量熱計。所用數(shù)據(jù)分析軟件是TA’s Universal Analysis V1.1 OB。
熱重量分析(TGA)數(shù)據(jù)是在TA Instruments TGA 2950上得到的。使樣品在25℃ TGA中平衡30分鐘，露點為20℃，然后開始溫度程序。溫度坡度為10℃/分鐘，但是是在TA專有的高分辨條件下掃描的。這種技術(shù)在發(fā)生躍遷時延緩掃描速率，提高了儀器分辨獨立的重量減輕事件的能力。
實施例1N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺L-蘋果酸鹽無水晶型I的制備制備A向20ml甲醇加入N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺(130mg，0.326mmol)，攪拌該混合物。加入L-蘋果酸(47.2mg，0.352mmol)，導(dǎo)致所有固體迅速溶解。在減壓下除去甲醇，得到弱結(jié)晶性橙色固體。加入乙腈(5ml)，將漿液攪拌并加熱約10分鐘。繼續(xù)攪拌，同時使?jié){液冷卻至室溫。過濾并干燥晶體，得到149mg晶型I固體(86％收率)。
制備B在L-蘋果酸鹽的生成之前，可以借助水性pH＝11洗滌純化N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺。在80℃下制備游離堿在80∶20正丁醇∶水(v∶v)混合物中的溶液。冷卻至20℃并攪拌1小時后，觀察到顯著的結(jié)晶。借助PXRD分析樣品，發(fā)現(xiàn)是晶型I。將晶體過濾、干燥和混磨，收率99％。
實施例2N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺L-蘋果酸鹽晶型II的制備向四氫呋喃(2ml)加入N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺L-蘋果酸鹽晶型I的晶體(25mg)，然后加入水(250μl)。加熱該混合物，使晶體溶解。使溶劑揮發(fā)過夜，得到晶型II的晶體。
實施例3從晶型II制備N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺L-蘋果酸鹽無水晶型I向晶型II(150mg)加入乙腈(大約5ml)。將該漿液攪拌并加熱約10分鐘。繼續(xù)攪拌，同時使?jié){液冷卻至室溫。過濾并干燥晶體，得到晶型I的晶體。
實施例4N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺L-蘋果酸鹽晶型I的溶解度在25℃下測定N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺L-蘋果酸鹽晶型I在水中的溶解度，為5mg/ml。這表明溶解度應(yīng)當(dāng)不是原料生物利用度的限制性因素。
所有專利、專利申請和出版物的完整公開和其中引用的電子材料(例如GenBank氨基酸與核苷酸序列提交和蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(pdb)提交)都結(jié)合在此作為參考。上述詳細說明和實施例僅僅為了理解清楚而提供。從中可以理解沒有不必要的限制。本發(fā)明不限于所揭示和描述的具體細節(jié)，對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言顯而易見的改變也將包括在由權(quán)利要求書所限定的發(fā)明范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.包含具有下列結(jié)構(gòu)的化合物的蘋果酸鹽的無水晶體
2.權(quán)利要求1的晶體，其中該蘋果酸是L-蘋果酸。
3.包含N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺蘋果酸鹽的無水晶體。
4.包含N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺蘋果酸鹽的晶體，其中該晶體在粉末X-射線衍射圖中的特征衍射峰在約13.2和24.2度2θ。
5.權(quán)利要求4的晶體，其在粉末X-射線衍射圖中的特征衍射峰在約13.2、19.4、24.2和25.5度2θ。
6.權(quán)利要求5的晶體，其在粉末X-射線衍射圖中的特征衍射峰是如表1關(guān)于晶型I所列的。
7.權(quán)利要求4的晶體，進一步包含至多約2重量％的水。
8.權(quán)利要求7的晶體，包含至多約0.5重量％的水。
9.權(quán)利要求8的晶體，包含至多約0.2重量％的水。
10.包含N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺蘋果酸鹽的晶體，其中該晶體的熔點為至少約190℃。
11.權(quán)利要求10的晶體，其熔點為至少約195℃。
12.權(quán)利要求10的晶體，進一步包含至多約2重量％的水。
13.權(quán)利要求12的晶體，包含至多約0.5重量％的水。
14.權(quán)利要求13的晶體，包含至多約0.2重量％的水。
15.包含N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺蘋果酸鹽的晶體，其中該晶體在粉末X-射線衍射圖中的特征衍射峰在約3.0和27.7度2θ。
16.權(quán)利要求15的晶體，其在粉末X-射線衍射圖中的特征衍射峰在約3.0、12.1、14.5和27.7度2θ。
17.權(quán)利要求16的晶體，其在粉末X-射線衍射圖中的特征衍射峰是如表1關(guān)于晶型II所列的。
18.權(quán)利要求15的晶體，其中該晶體在暴露于80％相對濕度后吸收至少約5重量％的水。
19.包含N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺蘋果酸鹽的晶體，其中該晶體的熔點為至多約185℃。
20.權(quán)利要求19的晶體，其中該晶體在暴露于80％相對濕度后吸收至少約5重量％的水。
21.制備包含N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺蘋果酸鹽的無水晶體的方法，該方法包含混合蘋果酸；N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；和溶劑；并且在包含一種或多種因素的結(jié)晶條件下誘使鹽結(jié)晶，所述因素包含結(jié)晶溶液在最初與最終溫度之間至多約100℃的差異；至多約每小時50℃的冷卻速率；沒有加籽晶；至多約10的過飽和比；沒有沉淀劑；和/或它們的組合。
22.權(quán)利要求21的方法，其中該蘋果酸是L-蘋果酸。
23.權(quán)利要求21的方法，其中該一種或多種因素包含結(jié)晶溶液在最初與最終溫度之間至多約50℃的差異；至多約每小時20℃的冷卻速率；至多約5的過飽和比；和/或它們的組合。
24.權(quán)利要求23的方法，其中該一種或多種因素包含結(jié)晶溶液在最初與最終溫度之間至多約25℃的差異；至多約每小時2℃的冷卻速率；至多約1.5的過飽和比；和/或它們的組合。
25.權(quán)利要求24的方法，其中結(jié)晶溶液的最初與最終溫度是相同的。
26.權(quán)利要求21的方法，其中該溶劑選自由乙腈、甲醇、乙醇、異丙醇、甲苯、正丁醇、四氫呋喃、N，N-二甲基甲酰胺、丙酮、水和它們的組合組成的組。
27.權(quán)利要求21的方法，其中該無水晶體在粉末X-射線衍射圖中的特征衍射峰在約13.2和24.2度2θ。
28.權(quán)利要求27的晶體，其在粉末X-射線衍射圖中的特征衍射峰在約13.2、19.4、24.2和25.5度2θ。
29.權(quán)利要求28的晶體，其在粉末X-射線衍射圖中的特征衍射峰是如表1關(guān)于晶型I所列的。
30.制備包含N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二-甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺蘋果酸鹽的無水晶體的方法，該方法包括使包含N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺蘋果酸鹽的晶體與溶劑接觸，在該溶劑中接觸中的晶體具有相當(dāng)?shù)娜芙舛?，其中接觸中的晶體在粉末X-射線衍射圖中的特征衍射峰在約3.0和27.7度2θ。
31.權(quán)利要求30的方法，其中接觸中的晶體在粉末X-射線衍射圖中的特征衍射峰在約3.0、12.1、14.5和27.7度2θ。
32.權(quán)利要求3 1的方法，其中接觸中的晶體在粉末X-射線衍射圖中的特征衍射峰是如表1關(guān)于晶型II所列的。
33.權(quán)利要求30的方法，其中該溶劑選自由乙腈、乙醇、甲醇和它們的組合組成的組。
34.權(quán)利要求30的方法，其中使該晶體與溶劑接觸形成漿液。
35.權(quán)利要求34的方法，進一步包含攪拌該漿液。
36.權(quán)利要求34的方法，進一步包含加熱該漿液。
37.權(quán)利要求34的方法，進一步包含從該漿液中除去該無水晶體。
38.權(quán)利要求30的方法，其中該無水晶體在粉末X-射線衍射圖中的特征衍射峰在約13.2和24.2度2θ。
39.權(quán)利要求38的方法，其中該無水晶體在粉末X-射線衍射圖中的特征衍射峰在約13.2、19.4、24.2和25.5度2θ。
40.權(quán)利要求39的方法，其中該無水晶體在粉末X-射線衍射圖中的特征衍射峰是如表1關(guān)于晶型I所列的。
41.制備包含N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺蘋果酸鹽的晶體的方法，該方法包含混合蘋果酸；N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺；和溶劑；并且在包括一種或多種因素的結(jié)晶條件下誘使鹽結(jié)晶，所述因素包含結(jié)晶溶液在最初與最終溫度之間至少約25℃的差異；至少約每小時25℃的冷卻速率；有籽晶；至少約2的過飽和比；沉淀劑的存在；和/或它們的組合。
42.權(quán)利要求41的方法，其中該蘋果酸是L-蘋果酸。
43.權(quán)利要求41的方法，其中該一種或多種因素包含結(jié)晶溶液在最初與最終溫度之間至少約50℃的差異；至少約每小時100℃的冷卻速率；至少約5的過飽和比；和/或它們的組合。
44.權(quán)利要求43的方法，其中該一種或多種因素包含結(jié)晶溶液在最初與最終溫度之間至少約100℃的差異；至少約每小時300℃的冷卻速率；至少約10的過飽和比；和/或它們的組合。
45.權(quán)利要求41的方法，其中該溶劑選自由甲醇、水、四氫呋喃/水混合物和它們的組合組成的組。
46.權(quán)利要求41的方法，其中該晶體在粉末X-射線衍射圖中的特征衍射峰在約3.0和27.7度2θ。
47.權(quán)利要求46的方法，其中該晶體在粉末X-射線衍射圖中的特征衍射峰在約3.0、12.1、14.5和27.7度2θ。
48.權(quán)利要求47的方法，其中該晶體在粉末X-射線衍射圖中的特征衍射峰是如表1關(guān)于晶型II所列的。
49.包含無水晶體的組合物，該無水晶體包含N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺的蘋果酸鹽。
50.權(quán)利要求49的組合物，進一步包含賦形劑。
51.包含晶體的組合物，該晶體包含N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺的蘋果酸鹽，其中該晶體在粉末X-射線衍射圖中的特征衍射峰在約13.2和24.2度2θ。
52.包含晶體的組合物，該晶體包含N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺的蘋果酸鹽，其中該晶體的熔點為至少約190℃。
53.包含晶體的組合物，該晶體包含N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺的蘋果酸鹽，其中該晶體在粉末X-射線衍射圖中的特征衍射峰在約3.0和27.7度2θ。
54.包含晶體的組合物，該晶體包含N-[2-(二乙氨基)乙基]-5-[(5-氟-1，2-二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2，4-二甲基-1H-吡咯-3-甲酰胺的蘋果酸鹽，其中該晶體的熔點為至多約185℃。
全文摘要
本發(fā)明提供晶體及其組合物，其中該晶體包括N－[2－(二乙氨基)乙基]－5－[(5－氟－1，2－二氫－2－氧代－3H－吲哚－3－亞基)甲基]－2，4－二甲基－1H－吡咯－3－甲酰胺的蘋果酸鹽。還公開了制備這類晶體的方法。
文檔編號C07D403/06GK1543462SQ02815892
公開日2004年11月3日 申請日期2002年8月13日 優(yōu)先權(quán)日2001年8月15日
發(fā)明者M·霍利, T·J·弗萊克, S·P·普雷斯科特, M·T·馬洛尼, M 霍利, 弗萊克, 普雷斯科特, 馬洛尼 申請人:法瑪西雅厄普約翰美國公司