專利名稱：用于治療冠狀動脈疾病或動脈粥樣硬化的abca-1提高化合物的制作方法
本申請要求以申請日為2000年12月7日的美國臨時申請序列號60/251916和申請日為2001年8月17日的60/313274為優(yōu)先權。
雖然膽固醇對哺乳動物的很多生物過程是關鍵性的，但高的血清LDL膽固醇水平是不需要的，因為它們引起全身動脈中的動脈粥樣硬化血塊是已知的，并導致，例如冠狀動脈疾病的發(fā)展。相反，高的高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平已經在人體臨床數據，和動物模型系統(tǒng)中被發(fā)現(xiàn)，可以預防冠狀動脈疾病的發(fā)展。
通常，過量的膽固醇通過包括高密度脂蛋白(HDLs)的路徑從體內清除。膽固醇是從細胞中通過兩個過程中的其中一個“被溢出”的，即通過被動轉移給成熟的HDL，或者主動轉移到載脂蛋白A-1。后一過程是通過已知為ATP結合盒式轉運蛋白1的蛋白(ABC-1，或另一稱作ABCA-1)介導的。在后一過程中，缺乏脂類的HDL前體獲得磷脂和膽固醇，導致成熟的HDL顆粒的血漿水平提高。HDL膽固醇在已知為“逆向膽固醇轉運”的過程中最后被轉運到肝臟，在肝臟再循環(huán)或分泌為膽汁。
一種目的在于降低動脈中動脈粥樣硬化血塊形成風險的治療方法涉及降低血漿脂類水平。這種方法包括飲食變化，和/或用下列藥物治療，例如纖維酸(fibric acid)的衍生物(氯貝特，吉非羅齊和非諾貝酸)，煙酸，和HMG-CoA還原酶抑制劑，如美維諾林，米法斯汀，萘維太定，斯伐他汀，氟伐他汀，和洛伐他汀，通過抑制細胞內膽固醇的合成、或抑制通過LDL受體的攝取來降低血漿LDL膽固醇水平。此外，膽汁酸-結合樹脂，如消膽胺(cholestyrine)，降膽寧和丙丁酚通過降低腸內攝取和增加LDL-膽固醇在肝臟的降解來降低LDL-膽固醇水平。
需要提供另一種治療方法的目的在于降低動脈中動脈粥樣硬化血塊形成的風險，特別是在人體內通過HDL路徑不足以從動脈壁除去膽固醇時。HDL水平通常與ABCA-1表達有關，增加HDL水平的一種方法是增加ABCA-1的表達。因此，需要提供哺乳動物中ABCA-1表達的有效刺激劑的化合物，因此增加了膽固醇溢出并提高HDL膽固醇在血液中的水平。這可以有效用于特征在于低HDL水平的各種疾病，特別是冠狀動脈疾病的治療。
有證據顯示，降低LDL膽固醇水平的藥物與增加HDL膽固醇的藥物的聯(lián)合用藥是有益的；參見，例如Marian C.Cheung等人的Arterioscler.，Throm，Vasc.Biol.(2001)21(8)，1320-1326。因此，也需要提供刺激ABCA-1表達的化合物與降低LDL膽固醇水平的化合物的聯(lián)合用藥。
應該注意的是，也有證據顯示提高ABCA-1在巨噬細胞中的產生可以局部地降低膽固醇在冠狀動脈中的沉積而不顯著地提高血漿HDL膽固醇。例如，提高ABCA-1表達甚至在沒有提高HDL膽固醇下也是有益的。
發(fā)明概述本發(fā)明的目的是提供提高細胞ABCA-1基因表達的化合物，因此提高高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)在血漿中的水平和降低哺乳動物脂類水平。因此，第一方面，本發(fā)明涉及式I化合物 式I其中R1是氫，任選取代的烷基，任選取代的鏈烯基，任選取代的炔基，任選取代的環(huán)烷基，任選取代的雜環(huán)基，任選取代的芳基，或任選取代的雜芳基；A是共價鍵、C(X1)-或-C(X1)-NH-，其中X1是氧或硫，R2，R3，R4和R5獨自為氫，任選取代的烷基、任選取代的烷氧基、鹵素或任選取代的環(huán)烷基；X是氧、硫、-C(X1)-或-NH-；當X是氧或硫時，Y是任選取代的低級亞烷基；或當X是-C(X1)-時Y是-NH-；或當X是-NH-時Y是-C(X1)-；條件是X和Y不能同時為-NH-；R6，R7，R8和R9獨自是氫、鹵素、任選取代的烷基、任選取代的鏈烯基、任選取代的炔基、任選取代的烷氧基、任選取代的環(huán)烷基、任選取代的雜環(huán)基、任選取代的芳基或任選取代的雜芳基；或R6和R7，或R7和R8，或R8和R9，或R9和R10與和它們相連的碳原子一起形成5或6員雜環(huán)基、雜芳基、環(huán)烷基或芳香或非-芳香碳環(huán)部分，全部可任選被鹵素、烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基或環(huán)烷基取代。
第二方面，本發(fā)明涉及一種用式I化合物治療可以用提高血清HDL膽固醇水平的化合物有效治療的哺乳動物中的疾病或狀態(tài)的方法，該方法包括給需要其的哺乳動物施用治療有效量的式I化合物。這類疾病包括但不限于，動脈疾病，特別是冠狀動脈疾病，和糖尿病。
第三個方面，本發(fā)明涉及一種用式I化合物治療可以用促進膽固醇從細胞溢出的化合物有效治療的哺乳動物中的疾病或狀態(tài)的方法，該方法包括給需要其的哺乳動物施用治療有效量的式I化合物。這類疾病包括但不限于動脈疾病，特別是冠狀動脈疾病，和糖尿病。
第四個方面，本發(fā)明涉及一種用式I化合物治療可以用提高血清HDL-C水平的化合物有效治療的哺乳動物中以特征在于低HDL-C水平的疾病或狀態(tài)的方法，該方法包括給需要其的哺乳動物施用治療有效量的式I化合物。這類疾病包括但不限于動脈疾病，特別是冠狀動脈疾病，和糖尿病。
本發(fā)明的第五方面涉及藥物組合物，其包括治療有效量的式I化合物和至少一種藥用賦形劑。
本發(fā)明的第六方面涉及制備式I化合物的方法。定義和一般參數術語“烷基”是指具有1至20個碳原子的一價的支鏈或非支鏈的飽和烴鏈。該術語通過下列基團舉例說明如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、正戊基、2-甲基丁基、正己基、正癸基、十四烷基等等。
術語“取代的烷基”是指1)具有1至5個取代基，優(yōu)選1至3個取代基的上述定義的烷基，取代基選自鏈烯基、炔基、烷氧基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、?；?、酰氨基、酰氧基、氨基、氨基羰基、烷氧基羰基氨基、疊氮基、氰基、鹵素、羥基、酮基、硫代羰基、羧基、羧基烷基、芳硫基、雜芳硫基、雜環(huán)硫基、巰基、烷硫基、芳基、芳氧基、雜芳基、氨基磺?；?、氨基羰基氨基、雜芳氧基、雜環(huán)基、雜環(huán)氧基、羥氨基、烷氧基氨基、硝基、-SO-烷基、-SO-芳基、-SO-雜芳基、-SO2-烷基、-SO2-芳基和-SO2雜芳基。除非有另有定義限定，所有取代基可以任選進一步被烷基、烷氧基、鹵素、CF3、氨基、取代的氨基、氰基、或-S(O)nR取代，其中R是烷基、芳基、或雜芳基且n是0，1或2；或2)被1-5個獨立選自氧，硫和-NRa-的原子或基團隔斷的上述定義的烷基，其中Ra選自鹵素、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、環(huán)烯基、芳基、雜芳基和雜環(huán)基。所有取代基可以任選進一步被烷基、烷氧基、鹵素、CF3、氨基、取代的氨基、氰基，或-S(O)nR取代，其中R是烷基、芳基、或雜芳基且n是0，1或2；或3)同時具有1-5個上述定義的取代基和也被1-5個上述定義的原子或基團隔斷的上述定義的烷基。
術語“低級烷基”是指具有1至6個碳原子的一價支鏈或非支鏈的飽和烴鏈。該術語通過下列基團舉例說明如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、正己基等等。
術語“取代的低級烷基”是指具有1至5個取代基，優(yōu)選1至3個取代基，其是在取代的烷基中定義的取代基的上述定義的低級烷基，或被1-5個在取代的烷基中定義的原子隔斷上述定義的低級烷基，或同時具有1至5個上述定義的取代基且被1至5個上述定義的原子隔斷的上述定義的低級烷基。
術語“亞烷基”是指優(yōu)選具有1至20個碳原子，優(yōu)選1-10個碳原子，更優(yōu)選1-6個碳原子的二價支鏈或非分支的飽和烴鏈，該術語通過下列基團舉例說明，如亞甲基(-CH2-)、亞乙基(-CH2CH2-)、亞丙基異構體(如-CH2CH2CH2-和-CH(CH3)CH2-)等等。
術語“低級亞烷基”是指二價支鏈或非支鏈的飽和烴鏈，優(yōu)選具有1至6個碳原子。
術語“取代的亞烷基”是指(1)具有1至5個選自下列基團的取代基的上述定義的亞烷基烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、酰基、酰氨基、酰氧基、氨基、氨基羰基、烷氧基羰基氨基、疊氮基、氰基、鹵素、羥基、酮基、硫代羰基、羧基、羧基烷基、芳硫基、雜芳硫基、雜環(huán)硫基、巰基、烷硫基、芳基、芳氧基、雜芳基、氨基磺?；被驶被?、雜芳氧基、雜環(huán)基、雜環(huán)氧基、羥氨基、烷氧基氨基、硝基、-SO-烷基、-SO-芳基、-SO-雜芳基、-SO2-烷基、-SO2-芳基和-SO2雜芳基。除非有另有定義限定，所有取代基可以任選進一步被烷基、烷氧基、鹵素、CF3、氨基、取代的氨基、氰基，或-S(O)nR取代，其中R是烷基、芳基、或雜芳基且n是0，1或2；或(2)被1-5個獨自選自氧、硫和NRa-的原子或基團，或者被選自羰基、羧基酯基、羧基酰氨基和磺?；幕鶊F隔斷的上述定義的亞烷基，其中Ra選自鹵素，任選取代的烷基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、芳基、雜芳基和雜環(huán)基，所有取代基可以任選進一步被烷基、烷氧基、鹵素、CF3、氨基、取代的氨基、氰基、或-S(O)nR取代，其中R是烷基、芳基、或雜芳基且n是0，1或2；或者(3)同時具有1至5個上述定義的取代基且被1-20個上述定義的原子隔斷的亞烷基。取代的亞烷基實例是氯代亞甲基、(-CH(Cl)-)、氨基亞乙基(-CH(NH2)CH2-)、甲基氨基亞乙基(-CH(NHMe)CH2-)、2-羧基亞丙基異構體(-CH2CH(CO2H)CH2-)、乙氧基乙基(-CH2CH2O-CH2CH2-)、乙基甲基氨基乙基(-CH2CH2N(CH3)CH2CH2-)、1-乙氧基-2-(2-乙氧基-乙氧基)乙烷(-CH2CH2O-CH2CH2-OCH2CH2-OCH2CH2-)，等等。
術語“芳烷基”是指芳基以共價鍵與亞烷基連接，其中芳基和亞烷基如本文所定義?！叭芜x取代的芳烷基”是指任選取代的芳基以共價鍵與任選取代的亞烷基連接。該芳烷基可以通過芐基、苯乙基、3-(4-甲氧基苯基)丙基等等舉例說明。
術語“烷氧基”是指基團R-O-，其中R是任選取代的烷基或任選取代的環(huán)烷基，或R是基團-Y-Z，其中Y是任選取代的亞烷基且Z是任選取代的鏈烯基、任選取代的炔基；或者任選取代的環(huán)烯基、其中烷基、鏈烯基、炔基、環(huán)烷基和環(huán)烯基如本文定義。優(yōu)選的烷氧基是任選取代的烷基-O-且包括作為一種舉例，甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、仲丁氧基、正戊氧基、正己氧基、1，2-二甲基丁氧基、三氟甲氧基等等。
術語“烷硫基”是指基團R-S-，其中R如上述烷氧基中定義。
術語“鏈烯基”是指具有2至20個碳原子，更優(yōu)選2至10個碳原子且進一步優(yōu)選2至6個碳原子并且具有1-6個優(yōu)選1個雙鍵(乙烯基)的支鏈或非支鏈不飽和烴鏈的一價基。優(yōu)選的鏈烯基包括乙烯基(-CH＝CH2)，1-丙烯或烯丙基(-CH2CH＝CH2)、異丙烯基(-C(CH3)＝CH2)、雙環(huán)[2.2.1]環(huán)庚烯等等。有時鏈烯基與氮連接，雙鍵不能在氮的α位。
術語“低級鏈烯基”是指具有2至6個碳原子的上述定義的鏈烯基。
術語“取代的鏈烯基”是指具有1至5個取代基，優(yōu)選1至3個選自下述取代基的上述定義的鏈烯基，取代基選自烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、?；?、酰氨基、酰氧基、氨基、氨基羰基、烷氧基羰基氨基、疊氮基、氰基、鹵素、羥基、酮基、硫代羰基、羧基、羧基烷基、芳硫基、雜芳硫基、雜環(huán)硫基、巰基、烷硫基、芳基、芳氧基、雜芳基、氨基磺?；被驶被?、雜芳氧基、雜環(huán)基、雜環(huán)氧基、羥氨基、烷氧基氨基、硝基、-SO-烷基、-SO-芳基、-SO-雜芳基、-SO2-烷基、-SO2-芳基和-SO2雜芳基。所有取代基可以任選進一步被烷基、烷氧基、鹵素、CF3、氨基、取代的氨基、氰基、或-S(O)nR取代，其中R是烷基、芳基、或雜芳基且n是0，1或2。
術語“炔基”是指優(yōu)選具有2至20個碳原子，更優(yōu)選具有2至10個碳原子和進一步優(yōu)選2至6個碳原子并且至少1個和優(yōu)選1-6個乙炔(三鍵)不飽和化合物位點的不飽和烴一價基。優(yōu)選的乙炔基包括乙炔基(-C≡CH)、丙炔基(或丙-1-炔-3-基，-CH2C≡CH)，等等。有時炔基與氮連接，三鍵不在氮的α位。
術語“取代的炔基”是指具有1至5個取代基，優(yōu)選1至3個取代基的上述定義的炔基，所述取代基選自烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、?；?、酰氨基、酰氧基、氨基、氨基羰基、烷氧基羰基氨基、疊氮基、氰基、鹵素、羥基、酮基、硫代羰基、羧基、羧基烷基、芳硫基、雜芳硫基、雜環(huán)硫基、巰基、烷硫基、芳基、芳氧基、雜芳基、氨基磺?；?、氨基羰基氨基、雜芳氧基、雜環(huán)基、雜環(huán)氧基、羥氨基、烷氧基氨基、硝基、-SO-烷基、-SO-芳基、-SO-雜芳基、-SO2-烷基、-SO2-芳基和-SO2雜芳基。所有取代基可以任選進一步被烷基、烷氧基、鹵素、CF3、氨基、取代的氨基、氰基、或-S(O)nR取代，其中R是烷基、芳基、或雜芳基且n是0，1或2。
術語“氨基羰基”是指基團-C(O)NRR，其中R分別是氫、烷基、芳基、雜芳基、雜環(huán)基或兩個R基相連形成雜環(huán)基(如嗎啉代)。所有取代基可以任選進一步被烷基、烷氧基、鹵素、CF3、氨基、取代的氨基、氰基、或-S(O)nR取代，其中R是烷基、芳基、或雜芳基且n是0，1或2。
術語“酰氨基”是指基團-NRC(O)R，其中每個R分別是氫、烷基、芳基、雜芳基、或雜環(huán)基。所有取代基可以任選進一步被烷基、烷氧基、鹵素、CF3、氨基、取代的氨基、氰基、或-S(O)nR取代，其中R是烷基、芳基、或雜芳基且n是0，1或2。
術語“酰氧基”是指基團-O(O)C-烷基、-O(O)C-環(huán)烷基、-O(O)C-芳基、-O(O)C-雜芳基、和-O(O)C-雜環(huán)基。所有取代基可以任選進一步被烷基、烷氧基、鹵素、CF3、氨基、取代的氨基、氰基、或-S(O)nR取代，其中R是烷基、芳基、或雜芳基且n是0，1或2。
術語“芳基”是指具有6至20個碳原子并具有單環(huán)(如苯基)或多環(huán)(如聯(lián)苯基)，或多個稠合(稠合)環(huán)(如萘基或蒽基)的芳香碳環(huán)基。優(yōu)選的芳基包括苯基，萘基等等。
除非對芳基取代基另有定義限定，該芳基可以任選被1至5個取代基，優(yōu)選1至3個取代基取代，所述取代基選自烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、?；?、酰氨基、酰氧基、氨基、氨基羰基、烷氧基羰基氨基、疊氮基、氰基、鹵素、羥基、酮基、硫代羰基、羧基、羧基烷基、芳硫基、雜芳硫基、雜環(huán)硫基、巰基、烷硫基、芳基、芳氧基、雜芳基、氨基磺酰基、氨基羰基氨基、雜芳氧基、雜環(huán)基、雜環(huán)氧基、羥氨基、烷氧基氨基、硝基、-SO-烷基、-SO-芳基、-SO-雜芳基、-SO2-烷基、-SO2-芳基和-SO2雜芳基。所有取代基可以任選進一步被烷基、烷氧基、鹵素、CF3、氨基、取代的氨基、氰基、或-S(O)nR取代，其中R是烷基、芳基、或雜芳基且n是0，1或2。
術語“芳氧基”是指基團芳基-O-，其中芳基定義如上，且包括上述定義的任選取代的芳基。
術語“芳硫基”是指基團R-S-，其中R為上述定義的芳基。
術語“氨基”是指基團-NH2。
術語“取代的氨基”是指基團-NRR，其中各R獨自選自氫、烷基、環(huán)烷基、羧基烷基(例如芐氧基羰基)、芳基、雜芳基和雜環(huán)基條件是兩個R基不同時為氫、或基團-Y-Z，其中Y是任選取代的亞烷基且Z是鏈烯基、環(huán)烯基、或炔基、所有取代基可以任選進一步被烷基、烷氧基、鹵素、CF3、氨基、取代的氨基、氰基、或-S(O)nR取代，其中R是烷基、芳基、或雜芳基且n是0，1或2。
術語“羧基烷基”是指基團-C(O)O-烷基、-C(O)O-環(huán)烷基，其中烷基和環(huán)烷基如本文定義，且可以任選進一步被烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基、鹵素、CF3、氨基、取代的氨基、氰基、或-S(O)nR取代，其中R是烷基、芳基、或雜芳基且n是0，1或2。
術語“環(huán)烷基”是指具有單環(huán)或多個稠合環(huán)的3至20個碳原子的環(huán)狀烷基。該環(huán)烷基包括，作為一種實例，單環(huán)結構如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)辛基、等等，或多環(huán)結構如金剛烷基，和雙環(huán)[2.2.1]環(huán)庚烷，或與芳基稠合的環(huán)烷基，例如茚基，等等。
術語“取代的環(huán)烷基”是指具有1至5個取代基，優(yōu)選1至3個取代基的環(huán)烷基，所述取代基選自烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、?；?、酰氨基、酰氧基、氨基、氨基羰基、烷氧基羰基氨基、疊氮基、氰基、鹵素、羥基、酮基、硫代羰基、羧基、羧基烷基、芳硫基、雜芳硫基、雜環(huán)硫基、巰基、烷硫基、芳基、芳氧基、雜芳基、氨基磺?；?、氨基羰基氨基、雜芳氧基、雜環(huán)基、雜環(huán)氧基、羥氨基、烷氧基氨基、硝基、-SO-烷基、-SO-芳基、-SO-雜芳基、-SO2-烷基、-SO2-芳基和-SO2雜芳基。所有取代基可以任選進一步被烷基、烷氧基、鹵素、CF3、氨基、取代的氨基、氰基、或-S(O)nR取代，其中R是烷基、芳基、或雜芳基且n是0，1或2。
本文所用術語“非-芳香碳環(huán)”是指5或6員由碳和氫組成的碳環(huán)并包括0-2個雙鍵。
術語“鹵素”或“鹵代”是指氟、溴、氯、和碘。
術語“?；笔侵富鶊F-C(O)R，其中R是氫，任選取代的烷基、任選取代的環(huán)烷基、任選取代的雜環(huán)基、任選取代的芳基和任選取代的雜芳基。
術語“雜芳基”是指包含1至15個碳原子和至少在一個環(huán)中具有1至4個選自氧，氮和硫的雜原子的芳香基(即不飽和的)。
除非對雜芳基取代基另有定義限定，該雜芳基可以任選被1至5個取代基，優(yōu)選1至3個取代基取代，所述取代基選自烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、?；?、酰氨基、酰氧基、氨基、氨基羰基、烷氧基羰基氨基、疊氮基、氰基、鹵素、羥基、酮基、硫代羰基、羧基、羧基烷基、芳硫基、雜芳硫基、雜環(huán)硫基、巰基、烷硫基、芳基、芳氧基、雜芳基、氨基磺?；?、氨基羰基氨基、雜芳氧基、雜環(huán)基、雜環(huán)氧基、羥氨基、烷氧基氨基、硝基、-SO-烷基、-SO-芳基、-SO-雜芳基、-SO2-烷基、-SO2-芳基和-SO2雜芳基。所有取代基可以任選進一步被烷基、烷氧基、鹵素、CF3、氨基、取代的氨基、氰基、或-S(O)nR取代，其中R是烷基、芳基、或雜芳基且n是0，1或2。該雜芳基可以具有單環(huán)(例如吡啶基或呋喃基)或多個稠合環(huán)(例如中氮茚基，苯并噻唑基，或苯并噻吩基)。氮雜環(huán)和雜芳基的實例包括但不限于，吡咯、咪唑、吡唑、吡啶、吡嗪、嘧啶、噠嗪、中氮茚、異吲哚、吲哚、吲唑、嘌呤、喹嗪、異喹啉、喹啉、2，3-二氮雜萘、1，5二氮雜萘(naphthylpridine)、喹喔啉、喹唑啉、噌啉、蝶啶、咔唑、咔啉、菲啶、吖啶、菲咯啉、異噻唑、吩嗪、異噁唑、吩噁嗪、吩噻嗪、咪唑烷、咪唑啉，等等以及含N-烷氧基-氮雜芳基化合物。
術語“雜芳氧基”是指基團-雜芳基-O-。
術語“雜環(huán)基”是指具有單環(huán)或多個稠合環(huán)，具有1至40個碳原子和在環(huán)中具有1至10個雜原子，優(yōu)選1至4個雜原子，雜原子選自氮、硫、磷和/或氧的飽和或部分不飽和的一價基團。
除非對雜環(huán)基取代基另有定義限定，該雜環(huán)基可以任選被1至5個，優(yōu)選1至3個選自下列的取代基取代烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基、環(huán)烷基、環(huán)烯基、酰基、酰氨基、酰氧基、氨基、氨基羰基、烷氧基羰基氨基、疊氮基、氰基、鹵素、羥基、酮基、硫代羰基、羧基、羧基烷基、芳硫基、雜芳硫基、雜環(huán)硫基、巰基、烷硫基、芳基、芳氧基、雜芳基、氨基磺?；?、氨基羰基氨基、雜芳氧基、雜環(huán)基、雜環(huán)氧基、羥氨基、烷氧基氨基、硝基、-SO-烷基、-SO-芳基、-SO-雜芳基、-SO2-烷基、-SO2-芳基和-SO2雜芳基。所有取代基可以任選進一步被烷基、烷氧基、鹵素、CF3、氨基、取代的氨基、氰基、或-S(O)nR取代，其中R是烷基、芳基、或雜芳基且n是0，1或2。雜環(huán)基可以具有單環(huán)或多個稠合環(huán)。優(yōu)選的雜環(huán)基包括四氫呋喃基、嗎啉代、哌啶基，等等。
術語“巰基”是指基團-SH。
術語“取代的烷硫基”是指基團-S-取代的烷基。
術語“雜芳硫基”是指基團-S-雜芳基，其中雜芳基定義如上并包括上述定義的任選取代的雜芳基。
術語“亞砜”是指基團-S(O)R，其中R是烷基、芳基、或雜芳基?！叭〈膩嗧俊笔侵富鶊F-S(O)R，其中R是取代的烷基、取代的芳基、或取代的雜芳基，如本文定義。
術語“砜”是指基團-S(O)2R，其中R是烷基、芳基、或雜芳基?！叭〈捻俊笔侵富鶊F-S(O)2R，其中R是取代的烷基、取代的芳基、或取代的雜芳基，如本文定義。
術語“酮基”是指基團-C(O)-。術語“硫代羰基”是指基團-C(S)-。術語“羧基”是指基團-C(O)-OH。
“任選的”或“任選地”是指隨后所描述的條件或環(huán)境可以存在或不存在，并且說明包括在所述條件或環(huán)境中出現(xiàn)的實例或在其中沒有的實例。
術語“式I化合物”包括本發(fā)明公開的化合物，該化合物的藥用鹽，藥用酯，和前藥。此外，本發(fā)明化合物可以具有1個或多個不對稱中心，且可以以外消旋混合物或單獨的對映異構體或非對映異構體形式生產。在任何所給出的式I化合物中存在的立體異構體的數量由所存在的不對稱中心的數量(當n是不對稱中心的數量時，可能具有2n個立體異構體)決定。單獨的立體異構體可以通過在合成中的適宜步驟拆分中間體的外消旋或非-外消旋混合物，或通過常規(guī)方法拆分式I化合物而得到。單獨的立體異構體(包括單獨的對映異構體和非對映異構體)和立體異構體的外消旋體和非-外消旋體混合物一樣包括在本發(fā)明范圍內，除非另有說明，它們全部可以通過本說明書中的結構式描述。
“異構體”是具有相同分子式的不同化合物。
“立體異構體”是僅僅是原子在空間的排列方式不同的異構體。
“對映異構體”是一對不重疊的互為鏡像的立體異構體。一對對映異構體的1∶1混合物是“外消旋”混合物。用術語“(±)”適當地表示外消旋混合物。
“非對映異構體”是具有至少2個不對稱原子，但它們并不互為鏡-像的立體異構體。
絕對立體化學根據Cahn-Ingold-Prelog R-S系統(tǒng)確定。當化合物是純對映異構體時，每個手性碳的立體化學可以由R或S確定。絕對構型是未知的已拆分的化合物根據其在鈉D系波長旋轉的偏振光水平的方向(右旋-或左旋)指定為(+)或(-)。
術語“治療有效量”是指如下所述，當給需要這種治療的哺乳動物施用時，式I化合物的量足夠影響治療。治療有效量可以根據受治療者和所治療的疾病狀態(tài)，受治療者的體重和年齡，疾病狀態(tài)的嚴重性，用藥方式等等來變化，這是本領域技術人員容易確定的。
術語“冠狀動脈疾病”是指具有冠狀動脈“硬化”(動脈粥樣硬化)的慢性疾病。
術語“動脈粥樣硬化”是指動脈粥樣硬化的形成其中含有膽固醇，脂類物質，的淺黃色血塊的沉積，并且在內膜和大量內部介質和中等動脈中形成脂類噬菌體。
術語“治療”是指哺乳動物疾病的任何治療，包括(i) 預防疾病，導致疾病的鄰床癥狀不發(fā)展；(ii) 抑制疾病，是指抑制鄰床癥狀的發(fā)展；和/或(iii) 減輕疾病，是指導致鄰床癥狀的減輕。
在很多情況下，本發(fā)明化合物由于氨基和/或羧基或類似基團的存在能夠形成酸/或堿鹽。術語“藥用鹽”是指保持生物活性和式I化合物特性的鹽，并且非生物活性的或其它的是不需要的。藥用堿加成鹽可以從無機和有機堿制備。從無機堿衍生的鹽，僅以舉例方式包括，鈉、鉀、鋰、銨、鈣和鎂鹽。從有機堿衍生的鹽包括，但不限于伯、仲和叔胺的鹽，如烷基胺、二烷基胺、三烷基胺、取代的烷基胺、二(取代的烷基)胺、三(取代的烷基)胺、鏈烯基胺、二鏈烯基胺、三鏈烯基胺、取代的鏈烯基胺、二(取代的鏈烯基)胺、三(取代的鏈烯基)胺、環(huán)烷基胺、二(環(huán)烷基)胺、三(環(huán)烷基)胺、取代的環(huán)烷基胺、二取代的環(huán)烷基胺、三取代的環(huán)烷基胺、環(huán)烯基胺、二(環(huán)烯基)胺、三(環(huán)烯基)胺、取代的環(huán)烯基胺、二取代的環(huán)烯基胺、三取代的環(huán)烯基胺、芳基胺、二芳基胺、三芳基胺、雜芳基胺、二雜芳基胺、三雜芳基胺、雜環(huán)基胺、二雜環(huán)基胺、三雜環(huán)基胺、混合的二和三胺，其中胺上至少有兩個取代基是不同的并且選自烷基、取代烷基、鏈烯基、環(huán)烷基、取代的環(huán)烷基、環(huán)烯基、取代的環(huán)烯基、芳基、雜芳基、雜環(huán)基、取代的鏈烯基等等。也包括其中兩個或三個取代基，與氨基的氮一起形成雜環(huán)基或雜芳基的胺。
適宜的胺的具體實例僅以舉例方式包括，異丙基胺、三甲基胺、二乙胺、三(異丙基)胺、三(正丙基)胺、乙醇胺、2-二甲基氨基乙醇、三甲胺(tromethamine)、賴氨酸、精氨酸、組氨酸、咖啡因、普魯卡因、羥胺(hydrabamine)、膽堿、甜菜堿、乙撐二胺、葡糖胺、N-烷基葡糖胺、可可堿、嘌呤、哌嗪、哌啶、嗎啉、N-乙基哌啶，等等。
也包括其中兩個或三個取代基與氨基的氮一起形成雜環(huán)基或雜芳基的胺。
公開包括下述定義“R6和R7，或R7和R8，或R8和R9，或R9和R10與和它們相連的碳原子一起形成5或6員雜環(huán)基、雜芳基、環(huán)烷基、或芳香或非-芳香碳環(huán)部分。因此，其中R6和R7與和它們相連的碳原子一起可形成6員雜環(huán)基的式I化合物如下所示 其它該部分包括，但不限于 藥用酸加成鹽可以從無機和有機酸制備。從無機酸衍生的鹽包括鹽酸、氫溴酸、硝酸、硫酸、磷酸，等等。從有機酸衍生的鹽包括乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、蘋果酸、丙二酸、琥珀酸、馬來酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、對-甲苯磺酸、水楊酸，等等。
本文所用“藥用載體”包括任何和所有溶劑、分散介質、包衣劑、抗菌劑和抗真菌劑，等滲和吸收延遲劑等等。該介質和藥學活性物質的藥劑的使用是本領域已知的。除任何常規(guī)介質或藥劑是與活性成分不相容的外，其在治療組合物中的使用是可以的。附加的活性成分也可以插入組合物中。命名本發(fā)明化合物的命名和序號可以用代表性的式I化合物舉例說明 式中A是C(X1)，其中X1是氧，R1是三氯甲基，R2、R3、R4、和R5均為氫。X是硫，Y是亞甲基，R6和R7與和它們相連的碳原子一起形成1，3-二噁烷，R8和R10是氫且R9是氯，其命名為2，2，2-三氯-N-{2-[6-氯(2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-8-基)甲硫基]苯基}乙酰胺。合成反應參數術語“溶劑”，“惰性有機溶劑”或“惰性溶劑”是指在與之相連的所述反應條件下惰性的溶劑，[包括，例如苯、甲苯、乙腈、四氫呋喃(“THF”)、二甲基甲酰胺(“DMF”)、氯仿、甲基氯(或二氯甲烷)、乙醚、甲醇、吡啶等等]。除非有相反的說明，本發(fā)明反應中使用的溶劑是惰性有機溶劑。
術語“q.s”是指加入足以獲得所述功能的量，例如使溶液到所需體積(即100％)。式I化合物的合成制備其中X是氧且Y是亞烷基的式I化合物方法的實例，如反應圖解I所示。
反應圖解I 式I中，A為共價鍵 式I和R1為氫步驟1-式(3)的制備式(3)化合物通過使式(1)化合物與式(2)化合物反應而制備，其中它們是可商購的或可以通過本領域熟知的方法制備。反應在惰性溶劑，例如丙酮或二甲基甲酰胺中，在約50-100℃進行約12-20小時。當反應基本完成后，無需純化就可進行下一步反應。步驟2-其中A是共價鍵且R1是氫的式I化合物的制備式I化合物可以通過對式(3)化合物的催化還原而制備。將式(3)化合物溶解在質子溶劑，例如乙醇中，在約室溫和氫氣氛下攪拌直至吸收理論量的氫氣，通常為約12-20小時。反應可以在PtO2催化劑存在下進行，當反應結束時催化劑可以通過過濾除去。式(I)產物可以通過常規(guī)方法分離，例如減壓下除去溶劑和將殘余物在硅膠上層析。步驟3-其中A是-C(X1)-且R1不是氫的式I化合物的制備其中A是-C(X1)-且R1不是氫的式I化合物通過將其中A是共價鍵且R1是氫的式I化合物與式R1C(X1)-Cl在叔胺，優(yōu)選N，N-二異丙基乙胺存在下反應而制備。反應在惰性溶劑，優(yōu)選在四氫呋喃中，在約0-40℃的溫度下，優(yōu)選在約室溫的溫度下進行約12-20小時。當反應基本結束時，產物通過常規(guī)方法分離，例如在硅膠上層析。
其中X是羰基且Y是-NH-的式I化合物的制備如反應圖解II所示。
反應圖解II 式I中，A為共價鍵和R1為氫 式I式(7)化合物的制備-步驟1式(7)化合物可以通過將式(5)化合物與式(6)化合物在叔胺，優(yōu)選N，N-二異丙基乙胺存在下反應而制備。反應在惰性溶劑，優(yōu)選THF中，在20-70℃的溫度下，優(yōu)選在約50℃進行約12-20小時。當反應基本完成時，產物無需純化就可進行下一步反應。
式(5)和(6)化合物可以商購或通過本領域熟知的方法制備。其中A是共價鍵且R1是氫的式I化合物的制備-步驟2式(I)化合物可以通過將式(7)化合物催化還原而制備。將式(7)化合物溶解在質子溶劑，例如乙醇中，在約室溫和氫氣氛下攪拌直至吸收理論量的氫氣，通常為約12-20小時。反應可以在PtO2催化劑存在下進行，當反應結束時催化劑通過過濾除去。式(I)產物可以通過常規(guī)方法分離，例如減壓下除去溶劑和將殘余物在硅膠上層析。其中A是-C(X1)-的式I化合物的制備-步驟3其中A是-C(X1)-的式I化合物可以通過將其中A是共價鍵且R1是氫的式I化合物與式R1C(X1)-Cl的化合物在叔胺，優(yōu)選N，N-二異丙基乙胺存在下反應而制備。反應在惰性溶劑，優(yōu)選在THF中，在約0-40℃的溫度，優(yōu)選在室溫的溫度下進行約12-20小時。當反應基本結束時，產物可以通過常規(guī)方法分離，例如在硅膠上層析。
其中X是-NH-且Y是-C(X1)-，其中X1是氧或硫的式I化合物的制備，如反應圖解III所示。
反應圖解III 式I反應用與反應圖解II相同的方法進行，從式9的1-氨基-2-硝基苯基化合物開始，使其與式(10)的苯甲酰氯或硫代苯甲?；苌锓磻⒃摶衔镛D變?yōu)槠渲蠥是-C(X1)-的式I化合物，如反應圖解II所示。
其中A是-C(X1)-NH-的式I化合物的制備如反應圖解IV所示反應圖解IV 式I中，A為共價鍵式I中，A為-C(X1)-NH-和R1為氫使其中A是共價鍵且R1是氫的式I化合物與式R1NCX1，其中X1是氧或硫的異氰酸酯或異硫氰酸酯，在催化量的4-二甲基氨基吡啶(DMAP)，和叔堿，優(yōu)選三乙胺存在下反應。反應在惰性溶劑，例如乙腈中，在約0-30℃的溫度，優(yōu)選約室溫的溫度下進行約4-24小時。當反應基本結束時，其中R4是R1NHC(X1)-的式I產物通過常規(guī)方法，例如減壓下除去溶劑，然后將殘余物在硅膠上層析而分離。
效用，試驗和給藥一般效用式I化合物刺激哺乳動物細胞中ABCA-1的表達，因此增加膽固醇溢出并提高HDL血漿水平。這樣，式I化合物可以用于治療哺乳動物與高膽固醇/低HDL水平有關的疾病，包括但不限于冠狀動脈疾病，包括糖尿病。試驗活性試驗參考上述專利和專利申請進行，在下列實施例中，和通過本領域技術人員顯而易見的方法進行。藥物組合物式I化合物通常以藥物組合物形式給藥。本發(fā)明因此提供藥物組合物，其含有作為活性成分的一種或多種式I化合物，或其藥用鹽，或酯，和一種或多種藥用賦形劑，載體，其包括惰性固體稀釋劑和填充劑，稀釋劑包括滅菌水溶液和各種有機溶劑，滲透增強劑，增溶劑和輔料。式I化合物可以單獨或與其他的治療劑聯(lián)合給藥。該組合物可以用藥物領域熟知的方法制備(參見，Remington’s Pharmaceutical Sciences，Mace Publishing Co.，Philadelphia，PA17thEd.(1985)and“Modem Pharmaceutics”，Marcel Dekker，Inc.3rdEd.(G.s.Banker & C.T.Rhodes，Eds.)等)給藥式I化合物可以通過具有類似效用的藥物的任何可接受的給藥方式單劑量或多劑量給藥，如上述引入本文作為參考的專利和專利申請所述，所述給藥包括直腸，口腔，鼻內，透皮途徑，通過動脈內注射，靜脈內的，腹膜內的，非腸道，肌內的，皮下的，口服的，局部的，作為吸入劑給藥，或通過灌裝或包衣裝置如斯坦特固定模，例如，或者動脈-插入柱狀聚合物給藥。
一種給藥模式是非腸道給藥，特別是注射。可以混合本發(fā)明的新組合物以注射給藥的形式包括與芝麻油，玉米油，棉籽油，或花生油的水或油懸浮液，或乳液，以及酏劑，甘露糖醇，葡萄糖，或滅菌水溶液，和類似的藥用載體。在鹽水中的水溶液也通?？梢杂糜谧⑸洌皇潜景l(fā)明的優(yōu)選內容。乙醇，甘油，丙二醇，液體聚乙二醇，等等(和其適宜的混合物)，環(huán)糊精衍生物，和植物油也可以使用。可以保持適宜的流動性，例如，通過使用包衣，如卵磷脂，通過在分散中保持所需的顆粒大小和通過使用表面活性劑。微生物作用的預防可以通過各種抗菌劑和抗真菌劑，例如對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、乙基汞硫代水楊酸鈉，等等獲得。
滅菌注射液通過將所需量的式I化合物在適宜的溶劑中與上述列舉的各種其它成分混合，如果需要，再通過過濾滅菌。通常，分散液可以通過將各種滅菌的活性成分混合到含有基本分散介質和所需的上述列舉的其它成分的滅菌載體中而制備。在用于制備滅菌注射液的滅菌粉末的情況下，優(yōu)選的制備方法是真空-干燥和冷凍-干燥技術，可以獲得活性成分加任何附加的從前述滅菌-過濾溶液獲得的所需成分的粉末。
口服是式I化合物的另一種給藥途徑。給藥可以通過膠囊或腸包衣片，等等進行。在制備包括至少一種式I化合物的藥物組合物中，通常將活性成分用賦形劑稀釋和/或封裝到載體中，該載體可以是膠囊、小袋、紙或其它容器形式。當用賦形劑作稀釋劑時，作為載體，活性成分的載體或介質的可以是固體，半-固體，或液體材料(如上述)。因此，組合物可以是片劑、丸劑、粉劑、錠劑、香囊、扁囊劑、酏劑、懸浮液、乳液、溶液、糖漿劑、氣霧劑(作為固體或液體介質)，含有例如以重量計至多10％的活性化合物的油膏、軟和硬膠囊、滅菌注射液、和滅菌封裝的粉末。
適宜的賦形劑包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、淀粉、阿拉伯樹膠、磷酸鈣、藻酸鹽、黃芪膠、明膠、硅酸鈣、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素、滅菌水、糖漿和甲基纖維素。該制劑還可以另外包括潤滑劑如滑石粉、硬脂酸鎂、和礦物油；潤濕劑；乳化和懸浮劑，防腐劑如甲基-和丙基羥基-苯甲酸酯；甜味劑；和調味劑。
本發(fā)明組合物可以用本領域已知的方法配制以提供活性成分在患者施用后的快速、持續(xù)或緩釋。用于口服的控釋藥物給藥系統(tǒng)包括滲透泵系統(tǒng)和包含聚合物包衣儲存器的溶解系統(tǒng)或藥物-聚合物基質制劑。控釋系統(tǒng)的實例在美國專利3,845,770；4,326,5254；4,902514；和5,616,345中給出。用于本發(fā)明方法的另一種制劑使用透皮給藥器(“貼劑”)。該透皮貼劑可以用于提供控制量的本發(fā)明化合物的連續(xù)或間斷灌輸。建立和使用透皮貼劑傳輸藥物是本領域熟知的。參見，美國專利5,023,252；4,992,445；和5,001,139。該貼劑可以用于藥劑連續(xù)的、脈動的或要求的傳輸。
組合物優(yōu)選配制成單位劑量形式。術語“單位劑量形式”是指適宜作為單一劑量給人和其它哺乳動物的物理分離的單位，各單位含有用于產生所需治療作用被計算的預定量的活性材料，以及適宜的藥物賦形劑(如，片劑、膠囊、安培)。式I化合物在很寬的劑量范圍內有效并通常以治療有效量給藥。優(yōu)選地，對于口服給藥，各劑量單位含有10mg至2g式I化合物，更優(yōu)選10至700mg，且對于非腸道給藥，優(yōu)選10至700mg式I化合物，更優(yōu)選50-200mg。然而可以理解，實際施用的式I化合物的量可以由醫(yī)生根據環(huán)境確定，包括受治療的疾病，選擇的給藥途徑，實際施用的化合物和其相關的活性、年齡、體重和患者個體的反應，患者癥狀的嚴重性，等等。
對于制備固體組合物例如片劑，將主要活性成分與藥物賦形劑混合形成含有本發(fā)明化合物的均一混合物的固體預制劑組合物。當這些預制劑組合物均一時，是指活性成分均勻地分散在整個組合物中以使組合物可以容易地細分成同樣有效的單位劑量形式如片劑，丸劑和膠囊。
本發(fā)明的片劑或丸劑可以包衣或以別的方式混合以提供便于利用延長作用，或便于在胃的酸性條件下保護的劑量形式。例如，片劑或丸劑可以包含內部制劑和外部制劑成分，后者是以包覆前者的形式。兩種成分可以通過腸衣層分離，以抵抗在胃中崩解并允許內部成分通過完整地進入十二指腸或延遲釋放。多種材料可以用作腸衣層或包衣材料，如包括大量聚合酸和聚合酸與如蟲膠，鯨蠟醇和纖維素乙酸酯材料的混合物的材料。
吸入劑或吹入劑組合物包括藥用水或有機溶劑，或其混合物的溶液和懸浮液，和粉末。液體或固體組合物可以含有適宜的如上所述的藥用賦形劑。優(yōu)選地，組合物是通過口服或鼻吸入途徑給藥，以產生局部或全身作用。優(yōu)選將藥用溶劑中的組合物通過使用惰性氣體制成霧狀。霧狀的溶液可以通過霧化器直接吸入，或霧化器可以與面罩，或間歇式正壓呼吸機連接。溶液、懸浮液、或粉末組合物可以施用，優(yōu)選口服或從以適宜方式傳輸制劑的儀器經鼻給藥。
下列實施例包括本發(fā)明優(yōu)選實施方案的說明?？梢岳斫獗绢I域技術人員可以將實施例公開的技術即本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)的代表性技術很好地用于發(fā)明實踐中，因此可以認為組成其實踐中優(yōu)選的方式。但是，本領域技術人員，根據本發(fā)明公開，可以理解在不背離本發(fā)明精神和范圍的情況下，可以在公開的具體實施方案中得到很多變化直至獲得相象的或類似的結果。
實施例1式(3)化合物的制備A.其中R6和R7與和它們相連的碳原子一起形成1，3-二噁烷，R2、R3、R4、R5、R6、R7，和R8是氫，R9是氯，X是氧且Y是亞甲基的式(3)化合物的制備 在2-硝基苯酚(1，27g，9.13mmol)的丙酮(100mL)溶液中加入固體碳酸鉀(1.27g，9.13mmol)，然后加入6-氯-8-(氯甲基)苯并-1，3-二噁烷(1.0g，4.57mmol)，并將溶液回流16小時。蒸發(fā)溶劑并將殘余物通過柱層析純化得到式(3)化合物，1-[(6-氯(2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-8-基)甲氧基)-2-硝基苯。
B.其中R6和R7與和它們相連的碳原子一起形成1，3-二噁烷，R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8是氫，R9是氯，X是硫，且Y亞甲基的式(3)化合物的制備類似地，根據上述1A的方法，但用2-硝基硫代苯酚代替2-硝基苯酚，制備1-[(6-氯(2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-8-基))甲基硫]-2-硝基苯。
B.變化不同X、Y、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R10的式(3)化合物的制備類似地，根據上述1A的方法，但任選地用式(1)的其它化合物替代2-硝基苯酚，并且任選用其它式(2)化合物替代6-氯-8-(氯甲基)苯并-1，3-二噁烷，制備下列式(3)化合物1-[(6-氟(2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-8-基))甲氧基]-2-硝基苯；1-[5，6，7，8-四氫萘-1-基]甲氧基]-2-硝基苯；1-[3-氟萘-1-基)甲氧基]-2-硝基苯；1-[(3-甲氧基(5-異喹啉基)甲氧基)-2-硝基-3-甲基苯；1-(2H，3H-苯并[3，4-e]1，4-二噁烷-6-基))甲氧基]-2-硝基苯；1-{[4-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-2-硝基苯；1-(2-5，6-二氫萘甲氧基)-2-硝基苯；1-[(6-氯(2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-8-基))乙氧基]-2-硝基苯；1-[(6-氯(2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-7-基))丙氧基]-2-硝基苯；1-[5，6，7，8-四氫萘-1-基]甲硫基]-2-硝基苯；1-[3-氟萘-1-基)甲硫基]-2-硝基苯；1-[(3-甲氧基(5-異喹啉基)甲硫基)-2-硝基-3-甲基苯；1-(2H，3H-苯并[3，4-e]1，4-二噁烷-6-基))甲硫基]-2-硝基苯；1-{[4-(三氟甲基)苯基]甲硫基}-2-硝基苯；1-(2-5，6-二氫萘基甲硫基)-2-硝基苯；1-[(6-氯(2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-8-基))乙硫基]-2-硝基苯；和1-[(6-氯(2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-7-基))丙硫基]-2-硝基苯；實施例2式(I)化合物的制備A.其中R6和R7與和它們相連的碳原子一起形成1，3-二噁烷，R9是氯、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8是氫，A是共價鍵且R1是氫的式(I)化合物的制備 在式(3)化合物，1-[(6-氯(2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-8-基)甲氧基)-2-硝基苯的乙醇溶液中加入PtO2，將該混合物在氫氣氛下攪拌16小時。通過過濾除去氧化鉑，將該溶劑減壓蒸餾。將殘余物溶解在乙酸乙酯并用10％HCl洗滌。將水層用堿中和并用乙酸乙酯萃取。將有機層用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)，并通過柱層析純化得到2-[(6-氯-2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-8-基)甲氧基]苯胺。
B.其中A是共價鍵且R1是氫，變化R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9和R10的式(I)化合物的制備類似地，根據上述2A的方法，但是用其它式(3)化合物代替1-[(6-氯(2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-8-基)甲氧基)-2-硝基苯，制備下列式I化合物2-[(6-氟-2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-8-基)甲氧基]苯胺；1-[5，6，7，8-四氫萘-1-基]甲氧基]-2-苯胺；1-[3-氟萘-1-基)甲氧基]-2-苯胺；1-[(3-甲氧基(5-異喹啉基)甲氧基)-2-(3-甲基苯基)胺；1-(2H，3H-苯并[3，4-e]1，4-二噁烷-6-基))甲氧基]-2-苯胺；1-{[4-(三氟甲基)苯基]甲氧基}-2-苯胺；1-(2-5，6-二氫萘甲氧基)-2-苯胺；1-[(6-氯(2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-8-基))乙氧基]-2-苯胺；1-[(6-氯(2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-7-基))丙氧基]-2-苯胺；1-[5，6，7，8-四氫萘-1-基]甲硫基]-2-苯胺；
1-[3-氟萘-1-基)甲硫基]-2-苯胺；1-[(3-甲氧基(5-異喹啉基)甲硫基)-2-(3-甲基苯基)胺；1-(2H，3H-苯并[3，4-e]1，4-二噁烷-6-基))甲硫基]-2-苯胺；1-{[4-(三氟甲基)苯基]甲硫基}-2-苯胺；1-(2-5，6-二氫萘基甲硫基)-2-苯胺；1-[(6-氯(2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-8-基))乙硫基]-2-苯胺；和1-[(6-氯(2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-7-基))丙硫基]-2-苯胺。
實施例3A.其中R6和R7與和它們相連的碳原子一起形成1，3-二噁烷，R9是氯、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8是氫，A是-C(X1)-且R1是三氯甲基的式(I)化合物的合成 在2-[(6-氯-2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-8-基)甲氧基]苯胺(75mg，0.257mmol)的無水四氫呋喃(2mL)溶液中加入N，N-二異丙基乙基胺(0.090mL，0.514mmol)，然后加入三氯乙酰氯(0.058mL，0.514mmol)。將所得混合物于室溫下攪拌16小時。減壓蒸發(fā)溶劑并將殘余物通過柱層析純化得到2，2，2-三氯-N-{2-[(6-氯(2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-8-基))甲氧基]苯基}乙酰胺，M+1＝438.1。
B.不同A、X、Y和R1的式I化合物的合成類似地，用其中X1是氧或硫的式R1C(X1)Cl化合物代替三氯乙酰氯，制備下列式I化合物2，2，2-三氯-N-{2-[(6-氟(2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-8-基))甲氧基]苯基}乙酰胺；N-{2-[(6-氯-2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-8-基)甲氧基]苯基}乙酰胺；N-{2-[(6-氯(2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-8-基)甲氧基]苯基}-2，2-二甲基丙酰胺；N-{2-[(6-氯-2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-8-基)甲硫基]苯基}乙酰胺；和N-{2-[(6-氯(2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-8-基)甲硫基)苯基]-2，2-二甲基丙酰胺。
C.變化A、X、Y、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7，和R8、R9和R10的式I化合物的制備類似地，根據上述3A的方法，但用其中A是共價鍵且R1是氫的其它式I化合物代替2-[(6-氯-2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-8-基)甲氧基]苯胺，制備下列式I化合物2，2，2-三氯-N-{2-[(5，6，7，8-四氫萘-1-基)甲氧基]苯基}乙酰胺；2，2，2-三氯-N-{2-[(3-氟萘-1-基)甲氧基]苯基}乙酰胺；2，2，2-三氯-N-{2-[(3-甲氧基(5-異喹啉基)甲氧基)苯基]乙酰胺；2，2，2-三氯-N-{2-[(2H，3H-苯并[3，4-e]1，4-二噁烷-6-基)]甲氧基}苯基}乙酰胺；2，2，2-三氯-N-{2-[(4-三氟甲基)苯基]甲氧基}苯基}乙酰胺；2，2，2-三氯-N-{2-[(2-5，6-二氫萘基甲氧基)]苯基}乙酰胺；2，2，2-三氯-N-{2-[(6-氯(2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-8-基))乙氧基]苯基}乙酰胺；2，2，2-三氯-N-{2-[(6-氯(2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-8-基))丙氧基]苯基}乙酰胺；2，2，2-三氯-N-{2-[(5，6，7，8-四氫萘-1-基)甲硫基]苯基}乙酰胺；2，2，2-三氯-N-{2-[(3-氟萘-1-基)甲硫基]苯基}乙酰胺；2，2，2-三氯-N-{2-[(3-甲氧基(5-異喹啉基)甲硫基)苯基]乙酰胺；2，2，2-三氯-N-{2-[(2H，3H-苯并[3，4-e]1，4-二噁烷-6-基)]甲硫基}苯基}乙酰胺；2，2，2-三氯-N-{2-[(4-三氟甲基)苯基]甲硫基}苯基}乙酰胺；2，2，2-三氯-N-{2-[(2-5，6-二氫萘基甲硫基)]苯基}乙酰胺；2，2，2-三氯-N-{2-[(6-氯(2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-8-基))乙硫基]苯基}乙酰胺；2，2，2-三氯-N-{2-[(6-氯(2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-8-基))丙硫基]苯基}乙酰胺；
實施例4式(I)化合物的制備A.其中R6和R7與和它們相連的碳原子一起形成萘，R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9是氫，A是共價鍵，R1是氫，X是羰基，且Y是-NH-的式(I)化合物的制備 1)在2-硝基苯甲酰氯的無水THF(5mL)溶液中加入N，N二異丙基乙胺(0.235mL，1.35mmol)，然后加入1-氨基萘(192.9mg，1.35mmol)并將溶液在40℃下攪拌16小時。蒸發(fā)溶劑得到式(7)化合物，N-萘基(2-硝基苯基)甲酰胺，無需純化將其用于下一步驟。
2)在N-萘基(2-硝基苯基)甲酰胺的乙醇溶液中加入Pd/C，并將該混合物在氫氣氛下攪拌16小時。過濾除去Pd/C并蒸發(fā)溶劑。將所得油狀物溶于乙酸乙酯中并用HCl水溶液萃取。將該水層中和并用乙酸乙酯萃取。分離有機層，將其用無水硫酸鈉干燥，并濃縮得到式I化合物(2-氨基苯基)-N-萘基甲酰胺。
B.其中A是共價鍵，R1是氫，X是羰基，且Y是-NH-，變化R6、R7、R8、R9，和R10的式I化合物的制備類似地，根據上述4A的方法，但任選用其它式(5)化合物代替2-硝基苯甲酰氯，任選用其它式(6)化合物代替1-氨基萘，制備下列式I化合物(2-氨基苯基)-N-(5，6，7，8-四氫萘基)甲酰胺；(2-氨基苯基)-N-(5-喹啉基)甲酰胺；
(2-氨基苯基)-N-(5-異喹啉基)甲酰胺；(2-氨基苯基)-N-[2，2，2-三氟-1-羥基-1，1-雙(三氟甲基)乙基]苯基}甲酰胺；C.其中A是共價鍵，R1是氫，X是-C(X1)-，Y是-NH-，變化R6、R7、R8、R9，和R10的式I化合物的制備類似地，根據上述4A的方法，但任選用其它式(5)化合物代替2-硝基苯甲酰氯，任選用其它式(6)化合物代替1-氨基萘，制備下列式I化合物(2-氨基苯基)-N-(5，6，7，8-四氫萘-1-基)甲酰胺；(2-氨基苯基)-N-(3-氟萘-1-基)甲酰胺；(2-氨基苯基)-N-(3-甲氧基-異喹啉-5-基)甲酰胺；(2-氨基苯基)-N-(2H，3H-苯并[3，4-e]1，4-二噁烷-6-基)甲酰胺；(2-氨基苯基)-N-(4-三氟甲基)苯基)甲酰胺；(2-氨基苯基)-N-(6-氯(2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-8-基)甲酰胺；(2-氨基苯基)-N-(2-5，6-二氫萘基)甲酰胺；(2-氨基苯基)-N-(6-氯(2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-7-基)甲酰胺；(2-氨基苯基)-N-萘基甲酰胺；(2-氨基苯基)-N-(5，6，7，8-四氫萘-1-基)硫代甲酰胺；(2-氨基苯基)-N-(3-氟萘-1-基)硫代甲酰胺；
(2-氨基苯基)-N-(3-甲氧基-異喹啉-5-基)硫代甲酰胺；(2-氨基苯基)-N-(2H，3H-苯并[3，4-e]1，4-二噁烷-6-基)硫代甲酰胺；(2-氨基苯基)-N-(4-三氟甲基)苯基)硫代甲酰胺；(2-氨基苯基)-N-(6-氯(2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-8-基)硫代甲酰胺；(2-氨基苯基)-N-(2-5，6-二氫萘基)硫代甲酰胺；(2-氨基苯基)-N-(6-氯(2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-7-基)硫代甲酰胺；和(2-氨基苯基)-N-萘基硫代甲酰胺下列實施例說明含有式I化合物的具有代表性藥物制劑的制備。
實施例8制備含有下列成分的硬明膠膠囊量成分(mg/膠囊)活性成分30.0淀粉305.0硬脂酸鎂5.0將上述成分混合并填充到硬明膠膠囊中。
實施例9用下列成分制備片劑量成分(mg/片)活性成分25.0纖維素，微晶200.0膠態(tài)二氧化硅10.0硬脂酸 5.0
將成分混合并壓成片。
實施例10制備含有下列成分的干粉吸入劑成分重量％活性成分 5乳糖 95將活性成分與乳糖混合并將混合物加入干粉吸入器。
實施例11制備每片含有30mg活性成分的片劑量成分(mg/片)活性成分 30.0mg淀粉 45.0mg微晶纖維素 35.0mg聚乙烯吡咯烷酮(為10％的滅菌水溶液) 4.0mg羧甲基淀粉鈉 4.5mg硬脂酸鎂 0.5mg滑石粉 1.0mg總量 120mg將活性成分，淀粉和纖維素通過20目U.S篩并充分混合。將聚乙烯吡咯烷酮溶液與所得粉末混合，然后通過16目U.S篩。將如此得到的顆粒在50℃至60℃下干燥，通過16目U.S篩。將羧甲基淀粉鈉、硬脂酸鎂、滑石粉預先通過30目U.S篩然后加入顆粒中，混合后，在壓片機上壓片得到每片重120mg的片劑。
實施例12制備每個栓劑含有25mg活性成分的栓劑成分量活性成分 25mg飽和脂肪酸甘油酯 2,000mg
將活性成分通過60目U.S篩并懸浮在預先用需要的最少熱量熔化的飽和脂肪酸甘油酯中。然后將混合物傾倒入最少2.0g容量栓模中并冷卻。
實施例13制備每5.0mL劑量各含50mg活性成分的懸浮液成分量活性成分 50.0mg黃原膠4.0mg羧甲基纖維素鈉(11％)微晶纖維素(89％) 50.0mg蔗糖 1.75g苯甲酸鈉 10.0mg調味劑和調色劑q.v純凈水5.0mL將活性成分，蔗糖和黃原膠混合，通過10目U.S篩，并與預先制備的微晶纖維素和羧甲基纖維素鈉的水溶液混合。將苯甲酸鈉，調味劑，和調色劑用一些水稀釋并在攪拌下加入。然后加入足夠量的水達到所需體積。
實施例14制備具有下列組成的皮下給藥制劑成分量活性成分 5.0mg玉米油 1.0mL實施例15制備具有下列組成的注射制劑成分量活性成分2.0mg甘露醇，USP 50mg/ml葡萄糖酸，USP q.s(pH5-6)水(蒸餾的，滅菌的) q.s至1.0ml氮氣，NFq.s
實施例16制備具有下列成分的局部制劑成分克活性成分 0.2-10山梨糖醇酯60 2.0Tween 60 2.0礦物油5.0石油醚0.10對羥基苯甲酸甲酯 0.15對羥基苯甲酸丙酯 0.05BHA(丁酯化的羥基茴香醚) 0.01水q.s至100將上述全部成分，除水外，混合并在攪拌下加熱至60℃。然后在劇烈攪拌下加入60℃的足量水以便乳化該成分，然后加入適當的水100g。
實施例17持續(xù)釋放組合物重量 優(yōu)選最優(yōu)選成分范圍(％)范圍(％)活性成分 50-9570-90 75微晶纖維素(填料) 1-35 5-15 10.6甲基丙烯酸共聚物 1-35 5-12.5 10.0氫氧化鈉 0.1-1.0 0.2-0.60.4羥丙基甲基纖維素 0.5-5.0 1-32.0硬脂酸鎂 0.5-5.0 1-32.0本發(fā)明持續(xù)釋放制劑可以制備如下將化合物pH-依賴粘合劑和任何任選的賦形劑立刻混合(干-混合)。將干-混合的混合物在強堿水溶液存在下制成顆粒，強堿是噴霧進入混合粉末中的。將顆粒干燥，過篩，與任選的潤滑劑混合(如滑石粉或硬脂酸鎂)，并壓成片。優(yōu)選的強堿水溶液是堿金屬氫氧化物溶液，如氫氧化鈉或鉀，優(yōu)選氫氧化鈉，在水(任選地含有至多25％水混溶性溶劑如低級醇)。
將所得片為識別，矯味的目的用任選的薄膜形成劑包衣以改進吞咽容易程度。膜形成劑典型地可以在片重量2％和4％之間的范圍內。適宜的膜形成劑是本領域熟知的并且包括羥基丙基甲基纖維素，陽離子甲基丙烯酸共聚物(二甲基氨基乙基甲基丙烯酸酯/甲基-丁基甲基丙烯酸酯共聚物-Eudragit_E-R_hm.Pharma)，等等。這些膜形成劑可以任選地含有調色劑、增塑劑和其它輔料成分。
壓制的片優(yōu)選具有的硬度足以耐受8Kp的壓縮。片的大小主要依賴于片中化合物的量。片可以包括300至1100mg游離堿化合物。優(yōu)選地，該片包括游離堿化合物的量在400-600mg，650-850mg，和900-1100mg的范圍內。
為了提高溶解速率，控制含有粉末的化合物潤濕混合的時間。優(yōu)選地總的粉末混合時間，即粉末暴露在氫氧化鈉溶液中的時間，其范圍可在1至10分鐘并且優(yōu)選2至5分鐘。隨后制成顆粒，將顆粒從造粒機上除去并固定在流化床干燥器在約60℃干燥。
實施例18pGL3熒光素酶試驗該實施例顯示本發(fā)明化合物對ABCA-1基因表達的作用，用pGL3熒光素酶報告載體系統(tǒng)(Promega，Madison，WI)生產重組質粒測定在ABCA-1啟動子控制下的報告基因表達。報告質粒的構建質粒pGL3-堿基(Promega，Madison，WI；Cat.#E1751)用作含有非啟動子熒光素酶基因的控制質粒。含有ABCA-1啟動子和熒光素酶基因的報告構建子是通過從ABCA-1基因(hAPR 15’啟動子，相應于SEQ ID NO3的核苷1080-1643)的5’側翼區(qū)的基因片段克隆到GL3-堿基質粒的SacI位以產生質粒GL-6a。然后，將質粒GL-6a用SpeI和Acc65I消化。將BsiWI-SpeI片段從λ亞克隆中切除，將相應于SEQ ID NO3的1-1534核苷的代表性的ABCA-1基因序列連接到剩余的載體/通過該消化產生的ABCA-1啟動子片段。所得質粒，pAPR1，以1.75kb人ABCA-1啟動子序列的轉錄為對照編碼熒光素酶報告基因。
報告構建子的轉染將上述對照或pAPR1質粒轉染到RAW264.7保持在含有10％胎牛血清的DMEM中的細胞的融合培養(yǎng)基中。將12孔盤的每個孔用pGL3--啟動子或pAPR1 DNA(1μg)，熒光素酶質粒DNA(1μg)，和12μlGeneporter試劑(Gene Therpy Systems，San Diego，CA，Cat.#T201007)轉染5小時。此外，加入0.1μg pCMVβ質粒DNA(Clontech，Palo Alto，CA，Cat#6177-1)作為有效轉染的對照。5小時后，將培養(yǎng)基用沒有血清的有或沒有乙酰化的LDL(100μg/ml)存在的DMEM/BSA置換并保溫24小時。
為了更加方便，在高通量篩選中，培養(yǎng)的細胞可以用下列方法穩(wěn)定用報告質粒轉染。首先，將5×106個RAW 264.7細胞在60mm盤中用9μg pAPR1質粒和pCMV正品(Stratagene，LaJolla，CA)在10ml不含血清的DMEM中用50μl Geneporter轉染劑(Gene Therapy System，San Diego，CA)轉染5小時。然后，將轉染介質用完全的培養(yǎng)基置換并將細胞在37℃保溫過夜。隨后，該細胞被轉染到分離的盤中并稀釋至1∶5至1∶1000的范圍內，在選擇含有800μg/ml G418(Life Technologies，Bethesda，MD)的培養(yǎng)基中保溫20天。收取展開可見的克隆系，并按如下所述測定熒光素酶活性。使用該方法，確定5種對熒光素酶陽性的克隆細胞系用于高通量試驗中。
熒光素酶試驗轉染之后，將在每個孔中的細胞溶解在70μl 1X細胞溶解劑中(Promega，Madison，WI，Cat.#E3971)，進行冷凍-熔化循環(huán)，使溶解液在12,000g離心5分鐘澄清。離心后，將100μl熒光素酶檢測劑(Promega，Madison，WI；Cat.#E1501)加入10μl溶解液中。每個溶解液的熒光素酶活性用光度劑測定為光單位。此外，每個溶解液的β-半乳糖苷酶活性用由Galacto-光試劑盒根據生產者的指導(Tropix Inc.，Bedford，MACat.#BL100G)提供的化學發(fā)光檢測劑測定。對每個溶解液的規(guī)格化熒光素酶活性通過將熒光素酶活性值除以測定的β-半乳糖苷酶活性值而測定并以相關的光單位報告。
在該試驗中證明本發(fā)明化合物增加ABCA-1基因表達。
實施例19
mRNA試驗本發(fā)明化合物對ABCA-1 mRNA水平的表達的調控由下列試驗確定。
定量PCR在用DMEM/BSA和指示的添加物置換24或48小時之前，將THP的培養(yǎng)物在DMEM/10％FBS下生長至分會合。RNA用標準方法。
定量PCR使用GeneAmp 5700 Sequence Dectection System(Perkin-ElmerApplied Biosystems，F(xiàn)oster City，CA)。簡單地，經500ng DNAse處理過的mRNA用2.5μM的隨機六聚體引物逆轉錄。約5％的該反應被PCR用SYBR綠芯試劑盒(PE Applied Biosystems，F(xiàn)oster City，CA；Cat.#4304886)放大，并且人ABCA-1引物LF5’-CCTCTCATTACACACAAAAACCAGAC(SEQID NO11)和LR5’-GCTTTCTTTCACTTCTCATCCTG(SEQ ID NO12)產生82bp的片段，相應于人ABCA-1的核苷7018-7099。PCR循環(huán)條件如下95℃下10分鐘；然后進行40個95℃循環(huán)，15秒；然后在60℃下，60秒。每個樣品中的mRNA通過檢測由SYBR綠結合到在每個PCR循環(huán)中產生的雙-鏈放大產物上的產生的熒光的增加而定量。所有樣品分為三份，并使用抗β-肌動蛋白mRNA標化，用引物肌動蛋白F5’-TCACCCACACTGTGCCATCTACGA(SEQ ID NO54)和肌動蛋白B5’-CAGCGGAACCGCTCATTGCC AATGG (SEQ ID NO55)在平行反應中放大。在同一PCR板上繪制ABCA-1和β-肌動蛋白的標準曲線。
mRNA水平的變化也可使用RAW 264.7細胞用從拜爾獲得的QuantiGene_Expression Kit測定。
在該試驗中，本發(fā)明化合物調控了ABCA-1mRNA水平的表達。
實施例20脂類溢出試驗該實施例證明增加的ABCA-1蛋白在質膜中的表達與脂類溢出有關。
在提高ABCA-1蛋白在質膜中的表達是否與膽固醇溢出增加有關的測定中使用細胞-表面標記免疫沉淀法。細胞表面上的ABCA-1的相關量通過交叉-連接表面蛋白在無作用細胞上用膜-不滲透性試劑硫代-NHS-生物素測定，然后通過膜溶解步驟、與ABCA-1抗體免疫沉淀、SDS-PAGE、并用鏈霉抗生物素檢測。
細胞培養(yǎng)將成纖維細胞在對照條件和已知的增加膽固醇溢出的條件下培養(yǎng)(Oram，等在J.Lip.Res.，401769-1781(1999))。對照細胞在沒有添加物(空白)的DMEM/10％FBS中成長至分會合，然后在DMEM/BSA中孵育18小時。cAMP處理過的細胞在DMEM/10％FBS中生長至分會合，然后在具有1mM8-Br-cAMP(cAMP)的DMEM/BSA中保溫18小時。含膽固醇的細胞在DMEM/10％FBS中成長至分會合，接著在具有30μg/ml膽固醇的DMEM/BSA中保溫48小時，然后在沒有添加物(膽固醇)下保溫18小時。用cAMP處理過的含膽固醇的細胞在DMEM/10％FBS中成長至分會合，接著在具有30μg/ml膽固醇的DMEM/BSA中保溫48小時，然后在1mM 8-Br-cAMP(膽固醇+cAMP)中保溫18小時。
細胞-表面的標記為了選擇性標記質膜ABCA-1，將細胞在0℃用含有1mg/ml硫代-NHS-生物素的PBS(Pierce，Rockford，IL；Cat.#21217)中孵育30分鐘，形成生物素化的細胞表面蛋白(參見Walker等，Biochemistry，5014009-14014(1993))。
免疫沉淀制備兔ABCA-1抗血清，該血清所針對的合成肽是人ABCA-1的C-末端的推定肽片段KNQTVVDAVLTSFLQDEKVDES。免疫沉淀通過將細胞溶解在含有1％Trion X-100(Sigma，St.Louis，MO)、蛋白酶抑制劑亮抑蛋白酶肽(1mM)、胃蛋白酶抑制劑(1mM)，和抑肽酶(1mM)的PBS中進行。將細胞萃取液用抗-ABCA-1抗血清以1∶200稀釋液，4℃保溫過夜，然后用5μl蛋白A-包衣的磁鐵珠(Dynal，Lake Success，NY；Cat.#1001.01)再保溫1小時。將抗體-抗原配合物用磁鐵沉淀，將磁鐵珠用1％Triton-X/PBS洗滌兩次，并將蛋白用1％乙酸洗脫。
ABCA-1蛋白的檢測將洗脫的生物素化的蛋白進行SDA-PAGE(6％膠；150V，5小時)并轉染到硝基纖維素膜上(200mA，18小時)。根據用戶手冊(Amersham Pharmacia，Piscataway，NJ)，將硝基纖維素用稀釋300-倍的鏈霉抗生物素-馬橫骨過氧化物酶(Amersham Pharmacia，Piscataway，NJ；Cat.#RPN1231)進行探查，并通過增加的化學發(fā)光標記(ECL)進行檢測。為試驗可能的細胞間蛋白的生物素化，將后-免疫沉淀上清液用鼠單克隆抗體處理至細胞間蛋白β-COP，并且免疫沉淀的生物素化的β-COP通過鏈霉抗生物素印跡(streptavidin blotting)測定。
實施例21本發(fā)明化合物刺激從細胞溢出的膽固醇的能力在下列試驗中測定。
按照Smith等人的J.Biol.Chem.，27130647-30655(1996)的所述方法將RAW264.7細胞用膽固醇負載。簡而言之，將半-流動細胞固定在48-孔盤中，在附加4.5g/L葡萄糖，0.1g/L丙酮酸鈉和0.584g/L谷胺酰胺，10％牛胎血清，50μg/ml乙酸酯化的低密度脂蛋白(AcLDL)和0.5μCi/ml[3H]膽固醇的0.2ml DEM中保溫。18小時后，將細胞用含有1％BSA的PBS洗滌兩次并在DMEM/1％BSA中保溫過夜(16-18小時)以保持膽固醇池的平衡。然后將細胞用PBS/BSA洗滌四次并在37℃用DMEM/BSA保溫1小時。加入僅含有清蛋白(對照)，清蛋白加HDL(40μg蛋白/ml)，或清蛋白加apoA-I(20μg/ml，Biodesign International，Kennebunk，ME)的溢出介質(DMEM/BSA)并將細胞保溫4、24或48小時。
膽固醇溢出物通過除去介質，洗滌細胞層和萃取細胞而測定。通過在0.5ml 0.2M NaOH溶解(Smith等，J.Biol.Chem.，27130647-30655(1996)之后，或在如Francis等J.Clin.Invest.，96，78-87(1995)所述的己烷∶異丙醇(3∶2v/v)中萃取，細胞的放射活性用閃式計數而測定。殘留在介質中的標記磷酸脂也可以通過液體閃式來計數而測定。膽固醇的溢出表示為介質中氚化的脂類數占從細胞和介質中回收的總的氚化的脂類數的百分數(cpm介質/cpm(介質+溶解液)×100).
膽固醇溢出物也可以在THP細胞中測定。THP細胞的復制培養(yǎng)物固定在48孔盤中用所述方法進行(參見Kritharides等ThromboVasc Biol 18，1589-1599，1998)。細胞以500,000個細胞/孔的初始密度固定。加入PMA(100ng/ml)后，將培養(yǎng)基在37℃(保溫48小時。將介質抽出并用含有2mg/mlFAFA，50μg/ml乙酸酯化的LDL和3μCi/ml放射性標記膽固醇的RPMI-1640介質置換。保溫過夜后，將介質抽出，將孔用PBS充分洗滌。在每個孔中加入含有2mg/ml FAFA的0.2ml RPMI-1640介質。將試驗化合物加入至終濃度為10μM。4小時后，在某些孔中加入載脂蛋白A1(10μg/ml)并將培養(yǎng)基保溫24小時。介質被得到并測定放射活性。細胞層中放射活性的量通過加入0.2ml2M NaOH并計數溶解的細胞而確定。膽固醇溢出物百分數計算如上。
本發(fā)明化合物在該試驗中刺激膽固醇溢出物。
實施例22ABCA-1表達和HDL水平之間的關系在下述體內試驗中測定。
通過腹膜內注射或者通過管飼法，給7周齡雄性C57B1/6大鼠每天給與預定劑量的在10％Cremaphore(BASF)/鹽水中的侯選化合物，該化合物能在體外增加ABCA-1的表達，并在體內具有藥理活性和有效。在最后注射后的3至4小時，收集快速的EDTA-血漿和適宜的組織進行分析。通過磷鎢酸沉淀(Sigma)和HDL膽固醇分離血漿HDL，使用試劑盒(Roche Diagnostics)酶法測定總的膽固醇和三酰甘油。HDL膽固醇變化和大小可通過FPLC用兩種Superose 6/30柱進一步分析，該柱與一系列在酶法測定的洗脫餾分中的膽固醇相連。ABCA-1基因表達的體內變化可進一步通過從侯選的組織中分離的RNA的RT-PCR分析而確定。
在該試驗中觀察到ABCA-1表達與HDL水平之間的關系。
權利要求
1.一種用于治療在哺乳動物中通過使用具有增加ABCA-1表達能力的藥物治療而減輕疾病的方法，該方法包括給需要治療的哺乳動物服用治療有效量的式I化合物 式I其中R1是氫、任選取代的烷基、任選取代的鏈烯基、任選取代的炔基、任選取代的環(huán)烷基、任選取代的雜環(huán)基、任選取代的芳基或任選取代的雜芳基；A是共價鍵C(X1)-或-C(X1)-NH-，其中X1是氧或硫，R2、R3、R4和R5分別為氫、任選取代的烷基、任選取代的烷氧基、鹵素或任選取代的環(huán)烷基；X是氧、硫、-C(X1)-或-NH-；當X是氧或硫時Y是任選取代的低級亞烷基；或當X是-C(X1)-時Y是-NH-；或當X是-NH-時Y是-C(X1)-；條件是X和Y不能同時為-NH-；R6、R7、R8和R9獨自是氫、鹵素、任選取代的烷基、任選取代的鏈烯基、任選取代的炔基、任選取代的烷氧基、任選取代的環(huán)烷基、任選取代的雜環(huán)基、任選取代的芳基或任選取代的雜芳基；或R6和R7，或R7和R8，或R8和R9，或R9和R10與和它們相連的碳原子一起形成5或6員雜環(huán)基、雜芳基、環(huán)烷基、或芳香或非一芳香碳環(huán)部分，全部可任選被鹵素、烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基或環(huán)烷基取代。
2.權利要求1的方法，其中X是氧且Y是亞甲基。
3.權利要求2的方法，R2、R3、R4、R5、R8和R10是氫。
4.權利要求3的方法，其中R6和R7與和它們相連的碳原子一起形成6員雜環(huán)基。
5.權利要求4的方法，其中雜環(huán)基是任選取代的1，3-二噁烷。
6.權利要求5的方法，其中A是共價鍵，R1是氫，且R9是氯，命名為2-[(6-氯-2H，4H-苯并[e]1，2-二氧芑-8-基)甲氧基]-苯胺。
7.權利要求5的方法，其中A是-C(X1)-且R1是任選取代的烷基。
8.權利要求7的方法，其中X1是氧，R1是三氯甲基，且R9是氯，命名為2，2，2-三氯-N-{2-[6-氯(2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-8-基)甲氧基]苯基}乙酰胺。
9.權利要求7的方法，其中X1是氧，R1是甲基，且R9是氯，命名為N-{2-[6-氯(2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-8-基)甲氧基]苯基}乙酰胺。
10.權利要求7的方法，其中X1是氧，R1是二甲基丙基，且R9是氯，命名為N-{2-[6-氯(2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-8-基)甲氧基]苯基}-2，2-二甲基丙酰胺。
11.權利要求1的方法，其中X是硫且Y是亞甲基。
12.權利要求11的方法，其中R2、R3、R4、R5、R8和R10是氫。
13.權利要求12的方法，其中R6和R7與和它們相連的碳原子一起形成6員雜環(huán)基。
14.權利要求13的方法，其中雜環(huán)基是任選取代的1，3-二噁烷。
15.權利要求14的方法，其中A是共價鍵，R1是氫，且R9是氯，命名為2-[(6-氯-2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-8-基)甲硫基]苯胺。
16.權利要求14的方法，其中A是共價鍵，R1是氫，且R9是氟，命名為2-[(6-氟-2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-8-基)甲硫基]苯胺。
17.權利要求14的方法，其中A是-C(X1)且R1是任選取代的烷基。
18.權利要求17的方法，其中X1是氧，R1是甲基，且R9是氯，命名為N-{2-[6-氯(2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-8-基)甲硫基]苯基}乙酰胺。
19.權利要求17的方法，其中X1是氧，R1是二甲基丙基，且R9是氯，命名為N-{2-[6-氯(2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-8-基)甲硫基]苯基-2，2-二甲基丙酰胺。
20.權利要求17的方法，其中X1是氧，R1是三氯甲基，且R9是氯，命名為2，2，2-三氯-N-{2-[6-氯(2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-8-基)甲硫基]苯基}乙酰胺。
21.權利要求1的法方法，其中X是羰基且Y是-NH-。
22.權利要求21的方法，其中A是共價鍵且R1是氫。
22.權利要求22的方法，其中R2，R3，R4，R5，R8，R9和R10是氫。
23.權利要求22的方法，其中R6和R7與和它們相連的苯基-起形成萘-1-基，命名為2-氨基苯基-N-萘基甲酰胺。
24.權利要求22的方法，其中R6和R7與和它們相連的苯基一起形成1，2，3，4-四氫萘-5-基，命名為2-(2-氨基苯基)-N-(5，6，7，8-四氫萘基)甲酰胺。
25.權利要求22的方法，其中R6和R7與和它們相連的苯基一起形成5-喹啉基，命名為(2氨基苯基)-N-(5-喹啉基)甲酰胺。
26.權利要求22的方法，其中R6和R7與和它們相連的苯基一起形成5-異喹啉基，命名為(2氨基苯基)-N-(5-異喹啉基)甲酰胺。
27.權利要求21的方法，其中A是-C(X1)-且R1是取代的烷基。
28.權利要求27的方法，其中R2、R3、R4、R5、R6、R7、R9和R10是氫。
29.權利要求28的方法，其中X1是氧且R1是三氯甲基，命名為2，2，2-三氯-N-[2-[(N-萘基氨基甲酰基)苯基]乙酰胺。
30.權利要求28的方法，其中R8是1，1，1，3，3，3-六氟-2-苯基丙烷-2-醇，命名為2(2-氨基苯基)-N-{4-[2，2-三氟-1-羥基-1-(三氟甲基)乙基]苯基}甲酰胺。
31.一種用于治療在哺乳動物中可以使用提高血清HDL膽固醇水平的化合物有效治療的疾病或狀態(tài)的方法，該方法包括給需要治療的哺乳動物施用治療有效量的式I化合物。
32.權利要求31的方法，其中所述的疾病或狀態(tài)是冠狀動脈疾病或動脈粥樣硬化。
33.一種用于治療在哺乳動物中與低HDL膽固醇水平有關的疾病或狀態(tài)的方法，該方法包括給需要治療的哺乳動物施用治療有效量的式I化合物。
34.權利要求33的方法，其中疾病或狀態(tài)是冠狀動脈疾病或動脈粥樣硬化。
35.一種用于治療在哺乳動物中可以用促進膽固醇從細胞溢出的化合物有效治療的疾病或狀態(tài)的方法，該方法包括給需要治療的哺乳動物施用治療有效量的式I化合物。
36.權利要求35的方法，其中所述的疾病或狀態(tài)是冠狀動脈疾病或動脈粥樣硬化。
37.一種用于治療在哺乳動物中與冠狀動脈疾病有關、并可以用提高HDL膽固醇血清水平的化合物與降低LDL膽固醇的化合物相結合有效治療的疾病的方法，該方法包括給需要治療的哺乳動物施用治療有效量的式I化合物和降低LDL膽固醇化合物。
38.權利要求36的方法，其中所述的降低LDL膽固醇的化合物選自氯貝特、吉非羅齊、和非諾貝酸、煙酸、美維諾林、米法斯汀、萘維太定、斯伐他汀、氟伐他汀、和洛伐他汀、消膽胺、降膽寧和丙丁酚。
39.式I化合物 式I其中R1是氫、任選取代的烷基、任選取代的鏈烯基、任選取代的炔基、任選取代的環(huán)烷基、任選取代的雜環(huán)基、任選取代的芳基或任選取代的雜芳基；A是共價鍵C(X1)-或-C(X1)-NH-，其中X1是氧或硫，R2、R3、R4和R5獨自為氫、任選取代的烷基、任選取代的烷氧基、鹵素、或任選取代的環(huán)烷基；X是氧、硫、-C(X1)-或-NH-；當X是氧或硫時Y是任選取代的低級亞烷基；或當X是-C(X1)-時Y是-NH-；或當X是-NH-時Y是-C(X1)-；條件是X和Y不能同時為-NH-；R6、R7、R8和R9獨自是氫、鹵素、任選取代的烷基、任選取代的鏈烯基、任選取代的炔基、任選取代的烷氧基、任選取代的環(huán)烷基、任選取代的雜環(huán)基、任選取代的芳基或任選取代的雜芳基；或R6和R7，或R7和R8，或R8和R9，或R9和R10與和它們相連的碳原子一起形成5或6員雜環(huán)基、雜芳基、環(huán)烷基、或芳香或非-芳香碳環(huán)部分，全部可任選被鹵素、烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基或環(huán)烷基取代。
40.權利要求39的化合物，其中X是氧且Y是亞甲基。
41.權利要求40的化合物，其中R2，R3，R4，R5，R8和R10是氫。
42.權利要求42的化合物，其中R6和R7與和它們相連的碳原子一起形成6員雜環(huán)基。
43.權利要求42的化合物，其中雜環(huán)基是任選取代的1，3-二噁烷。
44.權利要求43的化合物，其中A是共價鍵，R1是氫，且R9是氯，命名為2-[(6-氯-2H，4H-苯并[e]1，2-二氧芑-8-基)甲氧基]-苯胺。
45.權利要求43的化合物，其中A是-C(X1)-且R1是任選取代的烷基。
46.權利要求45的化合物，其中X1是氧，R1是三氯甲基，且R9是氯，命名為2，2，2-三氯-N-{2-[6-氯(2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-8-基)甲氧基]苯基}乙酰胺。
47.權利要求45的化合物，其中X1是氧，R1是甲基，且R9是氯，命名為N-{2-[6-氯(2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-8-基)甲氧基]苯基}乙酰胺。
48.權利要求45的化合物，其中X1是氧，R1是二甲基丙基，且R9是氯，命名為N-{2-[6-氯(2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-8-基)甲氧基]苯基}-2，2-二甲基丙酰胺。
49.權利要求39的化合物，其中X是硫且Y是亞甲基。
50.權利要求49的化合物，其中R2，R3，R4，R5，R8和R10是氫。
51.權利要求50的化合物，其中R6和R7與和它們相連的碳原子一起形成6員雜環(huán)基。
52.權利要求51的化合物，其中雜環(huán)基是任選取代的1，3-二噁烷。
53.權利要求52的化合物，其中A是共價鍵，R1是氫，且R9是氯，命名為2-[(6-氯-2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-8-基)甲硫基]-苯胺。
54.權利要求53的化合物，其中A是共價鍵，R1是氫，且R9是氟，命名為2-[(6-氟-2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-8-基)甲硫基]-苯胺。
55.權利要求52的化合物，其中A是-C(X1)-且R1是任選取代的烷基。
56.權利要求55的化合物，其中X1是氧，R1是甲基，且R9是氯，命名為N-{2-[6-氯(2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-8-基)甲硫基]苯基}乙酰胺。
57.權利要求55的化合物，其中X1是氧，R1是二甲基丙基，且R9是氯，命名為N-{2-[6-氯(2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-8-基)甲硫基]苯基}-2，2-二甲基丙酰胺。
58.權利要求55的化合物，其中X1是氧，R1是三氯甲基，且R9是氯，命名為2，2，2-三氯-N-{2-[6-氯(2H，4H-苯并[e]1，3-二氧芑-8-基)甲硫基]苯基}乙酰胺。
59.權利要求39的化合物，其中X是羰基且Y是-NH-。
60.權利要求59的化合物，其中A是共價鍵，R1是氫。
61.權利要求60的化合物，其中R2、R3、R4、R5、R8、R9和R10是氫。
62.權利要求61的化合物，其中R6和R7與和它們相連的苯基一起形成萘-1-基，命名為2-氨基苯基-N-萘基甲酰胺。
63.權利要求62的化合物，其中R6和R7與和它們相連的苯基一起形成1，2，3，4-四氫萘-5-基，命名為2(2-氨基苯基)-N-(5，6，7，8-四氫萘基)甲酰胺。
64.權利要求62的化合物，其中R6和R7與和它們相連的苯基一起形成5-喹啉基，命名為(2氨基苯基)-N-(5-喹啉基)甲酰胺。
65.權利要求62的化合物，其中R6和R7與和它們相連的苯基一起形成5-異喹啉基，命名為(2氨基苯基)-N-(5-異喹啉基)甲酰胺。
66.權利要求59的化合物，其中A是-C(X1)-且R1是取代的烷基。
67.權利要求66的化合物，其中R2、R3、R4、R5、R6、R7、R9和R10是氫。
68.權利要求67的化合物，其中X1是氧且R1是三氯甲基，命名為2，2，2-三氯-N-[2-[(N-萘基氨基甲?；?苯基]乙酰胺。
69.權利要求68的化合物，其中R8是1，1，1，3，3，3-六氟-2-苯基丙烷-2-醇，命名為2(2-氨基苯基)-N-{4-[2，2-三氟-1-羥基-1-(三氟甲基)乙基]苯基}甲酰胺。
70.一種藥物組合物，其包括至少一種藥用賦形劑和治療有效量的權利要求39的化合物。
全文摘要
本發(fā)明提供了一類化合物，該類化合物可以提高哺乳動物，特別是人細胞中ABCA－1基因的表達，促進膽固醇從細胞溢出并增加HDL在血漿中的水平。該化合物可以用于治療冠狀動脈疾病。
文檔編號C07C323/40GK1478085SQ01820031
公開日2004年2月25日 申請日期2001年12月6日 優(yōu)先權日2000年12月7日
發(fā)明者邁克爾·康普貝爾, 卜拉布罕·N·易卜拉欣, 杰夫·A·扎布沃茨基, 理查德·朗, 朗, A 扎布沃茨基, 罕 N 易卜拉欣, 邁克爾 康普貝爾 申請人:Cv治療公司