一種熱致水凝膠降糖藥物制劑及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于高分子材料與醫(yī)療技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種熱致水凝膠降糖藥物制劑及其制備方法。該熱致水凝膠降糖制劑含有降糖多肽和熱致凝膠化的聚合物，通過下述制備方法：按原料配方，將藥物直接溶解于以溶液形式存在的聚合物熱致凝膠中，采用凝膠直接包裹多肽，通過多肽與聚合物之間的共組裝行為實現(xiàn)多肽藥物的緩慢釋放，制得能降低血糖的長效緩釋制劑。
【專利說明】
一種熱致水凝膠降糖藥物制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于高分子材料和醫(yī)療技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種具有熱致成膠特性的水凝 膠降糖藥物制劑及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 現(xiàn)有技術(shù)公開了糖尿?。╠iabetes mellitus，DM)是一種由遺傳和環(huán)境因素相互 作用而引起的代謝綜合癥。由于胰島素分泌不足或胰島素敏感性降低，引起糖尿病患者一 系列代謝紊亂，臨床上主要表現(xiàn)為高血糖，久之會引起多個器官系統(tǒng)受損，并引發(fā)嚴(yán)重的并 發(fā)癥等，該疾患已經(jīng)成為嚴(yán)重威脅人類健康的世界性公共衛(wèi)生問題。糖尿病主要分為I型 和II型糖尿病，其中II型糖尿病的發(fā)病率占糖尿病患者總數(shù)的90%以上，其發(fā)病機理是由 于胰島β細胞胰島素分泌缺陷和胰島素抵抗。糖尿病給患者的家庭和社會帶來嚴(yán)重的負 擔(dān)。近幾十年來，隨著人類科學(xué)技術(shù)的進步和醫(yī)療水平的飛速發(fā)展，糖尿病治療藥物的研發(fā) 取得了不少進展。
[0003] 利拉魯肽（Liraglutide)是由丹麥諾和諾德公司（Novo Nordisk Inc.)研發(fā)的 一種胰高血糖素樣肽-I (GLP-I)類似物，于2009年6月和2010年1月分別被EMA和FDA 批準(zhǔn)上市，用于成年人II型糖尿病的治療。利拉魯肽的分子式為C172H265N43O 51，分子量為 3751. 20。利拉魯肽與內(nèi)源性人GLP-I主要區(qū)別是在第34位上將人體內(nèi)天然的GLP-I的 精氨酸替換為賴氨酸，在第26位的賴氨酸上通過谷氨酸與一個16個碳的脂肪酸相連，C16 脂肪鏈的存在大大增加了利拉魯肽的疏水性，從而提高了藥物的穩(wěn)定性，C16脂肪鏈被認為 能夠增強利拉魯肽和白蛋白的非共價鍵結(jié)合，從而大大延長利拉魯肽在體內(nèi)的半衰期。與 GLP-I相似，利拉魯肽作用于GLP-I受體，激動該受體刺激胰島素按照葡萄糖濃度依賴性方 式釋放、降低血漿胰高血糖素水平，并可直接作用于β細胞促進其增殖與分化。利拉魯肽 具有延遲胃排空，增加飽腹感，降低食欲，減輕體重，降低收縮壓等功效。由于利拉魯肽與內(nèi) 源性人GLP-I具有97%氨基酸序列同源性，因而其抗體生成的發(fā)生率和抗體水平較低，具 有很高的安全性和較少的副作用。利拉魯肽的商品注射劑諾和力? (Victoza? )2011年10 月9日正式在中國上市。其規(guī)格為3毫升：18毫克預(yù)填充注射筆，適用于單用二甲雙胍或 磺脲類藥物最大可耐受劑量治療后血糖仍控制不佳的患者，可與二甲雙胍或磺脲類藥物聯(lián) 合應(yīng)用。利拉魯肽的3mg裝注射針劑Saxenda?·于2014年12月還被FDA批準(zhǔn)作為治療慢性 肥胖的藥物，作為飲食控制和體育鍛煉的補充。Saxenda?也是目前唯一被FDA批準(zhǔn)的減肥 針劑。其他的GLP-I類似物中，如阿必魯肽，利司那肽，杜拉魯肽，索瑪魯肽等近年來同樣被 廣泛研究，其中大部分已經(jīng)被批準(zhǔn)上市或處于臨床研究階段。
[0004] 然而，對于每日注射型的降糖多肽，如利拉魯肽注射劑需每日1次皮下注射才能 起到降糖作用，對于患者而言，這種注射給藥方式仍然顯得過于頻繁，同時復(fù)雜的給藥方案 給患者帶來較大痛苦和諸多不便。因此制備利拉魯肽等降糖多肽的長效緩釋制劑對增加藥 物的生物利用度，降低注射給藥的頻率，提高患者用藥的順應(yīng)性具有巨大的臨床價值和意 義。目前利拉魯肽等降糖多肽的長效緩釋制劑尚未見有報道。
[0005] 長效注射給藥系統(tǒng)載體的選擇一般有如下三種：（1)油性溶液或混懸型注射制 劑；（2)非生物降解埋植劑；(3)可生物降解注射劑。隨著聚合物材料科學(xué)的飛速發(fā)展，可生 物降解材料為骨架的給藥系統(tǒng)逐步成為長效注射給藥的主流載體，其中以聚酯類材料的應(yīng) 用最早也最為成熟。聚酯類可生物降解材料在生物體內(nèi)可逐漸降解為乳酸、乙醇酸等體內(nèi) 固有的小分子有機物，再經(jīng)體內(nèi)三羧酸循環(huán)排出。其中，以丙交脂（D，L-lactide，LA)，乙交 脂（glycolide，GA)和ε -己內(nèi)酯（ε -caprolactone，CL)為單體的聚合物或共聚物是聚酯 類材料中運用最多的可生物降解聚合物。
[0006] 近十年來，國內(nèi)外科研工作者通過在PEG親水嵌段上引入可降解的聚酯嵌段或聚 氨基酸嵌段，制備了各種各樣的PEG/聚酯（聚氨基酸）兩親性嵌段共聚物，并且發(fā)現(xiàn)在具 有適當(dāng)?shù)恼w親疏水平衡時，所合成的PEG/聚酯（聚氨基酸）嵌段共聚物可以在低溫時溶 解在水中，同時由于材料的兩親性，嵌段共聚物能夠通過自組裝形成膠束，隨著溫度升高， 這些膠束將會進一步發(fā)生聚集，形成"膠束-凝膠"的網(wǎng)絡(luò)。這種能夠隨溫度升高而發(fā)生 sol-gel轉(zhuǎn)變的聚合物水體系被稱為熱致水凝膠（thermogel)。
[0007] 與其他注射給藥系統(tǒng)相比，PEG/可降解聚酯（聚氨基酸）熱致水凝膠具有諸多優(yōu) 點：（1)低溫下的溶液狀態(tài)使得其可以通過普通注射器注射即可植入體內(nèi)，操作方便，同時 材料良好的生物降解性和生物相容性，避免了后續(xù)的手術(shù)取出；(2)通過體溫自發(fā)物理交 聯(lián)形成凝膠，凝膠化和包埋過程均不易使包埋的活性物質(zhì)失活；（3) "低溫溶液、高溫凝膠" 的特點方便了制劑的制備，只需把聚合物溶液同藥物簡單混合即可，并且整個制備過程幾 乎不涉及任何有機溶劑；(4)在低溫溶液狀態(tài)下可直接過濾除菌，無需射線、高壓蒸汽滅菌 法等復(fù)雜的處理過程，保證了藥物的安全性和穩(wěn)定性；（5)藥物緩釋行為可以通過簡單地 改變材料組成、結(jié)構(gòu)性質(zhì)等進行調(diào)控。因此PEG/聚酯（聚氨基酸）熱致水凝膠是多肽、蛋 白長效注射給藥系統(tǒng)研究的理想載體之一。
[0008] 然而，多肽類藥物用水凝膠體系制備藥物緩釋制劑的過程中，由于多肽類藥物良 好的水溶性，使其往往面臨前期突釋和后期釋放不完全的問題。前期突釋使得其初期釋放 了大量的藥物，達不到緩釋的目的，而后期釋放不完全導(dǎo)致大量藥物存留在凝膠中，造成后 期藥量不足，無法達到平穩(wěn)持續(xù)給藥的效果。目前針對所述問題的解決方案之一是在藥物 制劑中加入各種輔料來調(diào)節(jié)藥物的釋放行為，如，中國專利申請?zhí)枮?01210305356. 7的專 利公開了一種溫敏凝膠藥物制劑及其制備方法。該溫敏凝膠藥物制劑原料配方含有藥物， 溫敏凝膠組合物，以及輔料C ;所述的輔料C為金屬鹽、糖類物質(zhì)、以及注射用的親水性聚合 物中的一種或多種；所述的金屬鹽為藥學(xué)上可接受的且水溶液中離解二價金屬陽離子的金 屬鹽；所述的藥物為水溶液中以陰離子形態(tài)存在的物質(zhì)A，所述的物質(zhì)A為蛋白質(zhì)藥物、多 肽類藥物和糖肽類抗生素中的一種或多種。該專利通過多種藥物輔料的協(xié)同作用，能夠有 效的改善蛋白質(zhì)藥物、多肽類藥物和糖肽類抗生素的突釋問題，但是其制備方案復(fù)雜，同時 一種或多種藥用輔料的引入還會極大的影響溫敏凝膠組合物本身凝膠的性質(zhì)，甚至影響所 制備制劑的可注射性。
[0009] 迄今為止通過藥物與水凝膠材料在分子層面的相互自組裝作用調(diào)節(jié)藥物的可控 水凝膠緩釋制劑很少見諸報道。鑒于現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本申請的發(fā)明人擬提供一種具 有熱致成膠特性的可皮下或肌肉注射的長效凝膠降糖緩釋制劑及其制備方法，以解決水凝 膠遞送多肽、蛋白藥物過程中的常見初期突釋和后期釋藥不完全的問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，提供一種具有熱致成膠特性的可皮下 或肌肉注射的長效凝膠降糖緩釋藥物制劑及其制備方法。
[0011] 本發(fā)明利用熱致水凝膠材料包載多肽類藥物，制得可皮下或肌肉注射的長效凝膠 緩釋制劑，通過藥物與水凝膠材料在分子層面的相互自組裝作用調(diào)節(jié)藥物的緩釋行為，解 決水凝膠遞送多肽、蛋白藥物過程中的常見初期突釋和后期釋藥不完全的問題。本發(fā)明的 緩釋制劑相比于GLP-1，利拉魯肽等降糖多肽的結(jié)構(gòu)修飾，特別是疏水組分的引入，能明顯 提高藥物的穩(wěn)定性，增強藥物和白蛋白的非共價鍵結(jié)合，從而能顯著延長多肽藥物在體內(nèi) 的半衰期；同時，本發(fā)明緩釋制劑中的結(jié)構(gòu)修飾，能為其與PEG/聚酯（聚氨基酸）兩親性熱 致水凝膠材料之間實現(xiàn)有效的分子間相互作用提供了可能。
[0012] 具體的，本發(fā)明公開了一種熱致水凝膠降糖藥物制劑，其含有降糖多肽和熱致凝 膠化的聚合物，通過下述方法制備：按原料配方，將藥物直接溶解于以溶液形式存在的聚合 物熱致凝膠中，采用凝膠直接包裹多肽，通過多肽與聚合物之間的共組裝行為實現(xiàn)多肽藥 物的緩慢釋放，制得能降低血糖的長效緩釋制劑。
[0013] 更具體的，本發(fā)明的熱致水凝膠降糖藥物制劑，其特征在于，其由藥物和可注射的 聚合物熱致水凝膠組成；所述的藥物為降糖多肽，所述的熱致水凝膠由兩親性嵌段聚合物 和溶媒組成，該凝膠體系在室溫或低溫下處于溶液狀態(tài)，在人體溫度下能夠自發(fā)轉(zhuǎn)變?yōu)槟?膠，其中兩親性嵌段共聚物的親水嵌段為聚乙二醇（PEG)，疏水嵌段為可降解聚酯或聚氨基 酸。
[0014] 本發(fā)明的熱致水凝膠藥物制劑中，藥物與聚合物載體材料之間能夠發(fā)生共組裝作 用。
[0015] 本發(fā)明的熱致水凝膠藥物制劑中，其載藥凝膠體系具有熱致凝膠化性能，藥物制 劑在室溫或低溫下處于溶液狀態(tài)，在人體溫度下能夠自發(fā)轉(zhuǎn)變?yōu)槟z。
[0016] 本發(fā)明中，熱致水凝膠藥物制劑其聚合物水體系的溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變溫度介于 4_40°C之間，本發(fā)明的一個實施例中，優(yōu)選聚合物水體系的溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變溫度介于 20-37Γ，本發(fā)明的另一個實施例中，更優(yōu)選聚合物水體系的溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變溫度介于 30-37 cC 〇
[0017] 本發(fā)明的熱致凝膠藥物制劑的嵌段共聚物中：
[0018] 1)所述親水性的聚乙二醇嵌段A的平均分子量為400-8000,含量為10-90wt% ;
[0019] 2)所述疏水性的聚酯嵌段或聚氨基酸嵌段B的平均分子量為500-40000,含量 為90-10wt % ;其中，疏水聚酯嵌段選自聚DL-丙交酯、聚D-丙交酯、聚L-丙交酯、聚乙交 酯、聚原酸酯、聚ε-己內(nèi)酯、聚ε-烷基取代己內(nèi)酯、聚δ-戊內(nèi)酯、聚1，4,8_三氧雜螺 [4. 6] -9-十一烷酮、聚對二氧六環(huán)酮、聚酰胺酯、聚碳酸酯、聚丙烯酸酯、聚醚酯或上述各聚 酯中的兩種以上的聚酯形成的共聚物；
[0020] 其中，疏水性的聚氨基酸嵌段選自聚丙氨酸、聚苯丙氨酸、聚亮氨酸、聚賴氨酸、聚 谷氨酸、聚天冬氨酸或上述各聚氨基酸中的兩種以上的聚氨基酸形成的共聚物；
[0021] 3)所述嵌段共聚物可以為ABA或BAB型的三嵌段共聚物、AB型的兩嵌段共聚物、 A-g-B或B-g-A型的接枝共聚物、（A-B)nS (B-A) "的星形嵌段共聚物以及A(BA) "或B(AB) n構(gòu)型的多嵌段共聚物，其中η為2至10的整數(shù)；
[0022] 4)所述嵌段聚合物部分或全部末端接有功能端基，端基是親水的羥基、氨基、羧 基、咪唑基、醛基、氰基、硝基中的任何一種；或者是疏水的烷基、固醇、烷氧基、芳香基、芳雜 環(huán)基、酰胺酯基、鹵素原子、三氯甲基、酯基、巰基中的任何一種。
[0023] 本發(fā)明的熱致水凝膠藥物制劑中，其聚合物可以為單一的兩親性嵌段共聚物，也 可為兩種或兩種以上不同分子結(jié)構(gòu)的兩親性嵌段共聚物的組合物。
[0024] 本發(fā)明的熱致凝膠藥物制劑中包載的藥物為降糖多肽，包括利拉魯肽、阿必魯肽、 利司那肽、杜拉魯肽、索瑪魯肽中的一種或多種。
[0025] 本發(fā)明中，藥物的含量占熱致凝膠藥物制劑的0. 01-5%，較佳的為0. 1-2%。
[0026] 本發(fā)明中的熱致凝膠藥物制劑，聚合物在制劑中的含量為3_50wt %。
[0027] 本發(fā)明中的熱致凝膠藥物制劑，聚合物溶液中的溶媒是純水、生理鹽水、緩沖溶 液、組織培養(yǎng)液、細胞培養(yǎng)液、動植物或人體的體液、或者為其它水溶液和不以有機溶劑為 主體的介質(zhì)。
[0028] 本發(fā)明通過下述方法制備熱致凝膠制劑：首先在低溫溶解聚合物于水溶液中，然 后在-20°C或以下儲存?zhèn)溆?，使用前?fù)溶并直接加入所述的降糖多肽，混勻后成為溶液注射 劑。
[0029] 以上所述低溫指低于聚合物的溶液-凝膠轉(zhuǎn)變溫度；所制備的熱致凝膠藥物制劑 在溫度高于溶液-凝膠轉(zhuǎn)變溫度時能夠形成熱可逆水凝膠。
[0030] 本發(fā)明中的熱致凝膠藥物制劑，所述熱致凝膠藥物制劑通過注射針可在皮下或肌 肉等組織進行注射。
[0031] 上述方法中，嵌段共聚物通過PEG大分子和可降解聚酯單體或聚氨基酸單體的開 環(huán)聚合得到。
[0032] 本發(fā)明的熱致凝膠材料具有很好的生物相容性和可降解性，該材料可在一定時間 內(nèi)完全降解為無毒的α-醇酸和其他相應(yīng)單體。
[0033] 本發(fā)明的熱致凝膠藥物制劑可以控制降糖多肽緩慢持續(xù)地釋放。
[0034] 本發(fā)明的熱致凝膠藥物制劑不僅有長效降糖作用，還可作為長效減肥藥物制劑。
[0035] 本發(fā)明的優(yōu)點在于：利用熱致水凝膠材料直接包裹多肽類藥物，在不添加各種藥 用輔料或進行化學(xué)修飾的情況下，僅僅通過藥物與水凝膠材料在分子層面的相互自組裝作 用調(diào)節(jié)藥物的緩釋行為，解決水凝膠遞送多肽、蛋白藥物過程中的常見初期突釋和后期釋 藥不完全的問題。
[0036] 本發(fā)明對于利用多肽類藥物-材料相互作用制備藥物長效緩釋制劑具有很好的 參考價值和實用意義。
【附圖說明】
[0037] 圖1為實施例25配制的利拉魯肽水溶液、Copolymer-I以及Copolymer-I/利拉 魯肽混合物水溶液動態(tài)光散射圖。
[0038] 圖2為實施例26配制的利拉魯肽水溶液、Copolymer-4以及Copolymer-4/利拉 魯肽混合物水溶液動態(tài)光散射圖。
[0039] 圖3為實施例10制備的Copolymer-I熱致水凝膠和實施例18制備的熱致水凝膠 藥物制劑的儲能模量和粘度隨溫度變化圖。
[0040] 圖4為實施例11制備的Copolymer-4熱致水凝膠和實施例19制備的熱致水凝膠 藥物制劑的儲能模量和粘度隨溫度變化圖。
[0041] 圖5為實施例18制備的Copolymer-I熱致水凝膠藥物制劑體外釋放曲線圖。
[0042] 圖6為實施例19制備的Copolymer-4熱致水凝膠藥物制劑體外釋放曲線圖。
[0043] 圖7為實施例20制備的Copolymer-5熱致水凝膠藥物制劑體外釋放曲線圖。
[0044] 圖8為實施例18制備的熱致水凝膠藥物制劑與單一藥物水溶液對ICR小鼠血糖 的影響關(guān)系圖。
[0045] 圖9為實施例18制備的熱致水凝膠藥物制劑一次皮下注射對ICR小鼠第0天時 血糖的影響關(guān)系圖；"*"Φ < 0.05，"**" ：p < 0.01，"***" ：p <0· OOlvs NaCl。
[0046] 圖10為實施例18制備的熱致水凝膠藥物制劑一次注射對ICR小鼠第1天時血糖 的影響關(guān)系圖；"*"Φ < 0.05，"**" ：p < 0.01，"***" ：p <0· OOlvs NaCl。
[0047] 圖11為實施例18制備的熱致水凝膠藥物制劑一次注射對ICR小鼠第2天時血糖 的影響關(guān)系圖；"*"Φ < 0.05，"**" ：p < 0.01，"***" ：p <0· OOlvs NaCl。
[0048] 圖12為實施例18制備的熱致水凝膠藥物制劑一次注射對ICR小鼠第3天時血糖 的影響關(guān)系圖；"*"Φ < 0.05，"**" ：p < 0.01，"***" ：p <0· OOlvs NaCl。
[0049] 圖13為實施例18制備的熱致水凝膠藥物制劑一次注射對ICR小鼠第4天時血糖 的影響關(guān)系圖；"*"Φ < 0.05，"**" ：p < 0.01，"***" ：p <0· OOlvs NaCl。
[0050] 圖14為實施例18制備的熱致水凝膠藥物制劑一次注射對ICR小鼠第5天時血糖 的影響關(guān)系圖；"*"Φ < 0.05，"**" ：p < 0.01，"***" ：p <0· OOlvs NaCl。
[0051 ] 圖15為實施例18制備的熱致水凝膠藥物制劑一次注射對ICR小鼠第6天時血糖 的影響關(guān)系圖；"*"Φ < 0.05，"**" ：p < 0.01，"***" ：p <0· OOlvs NaCl。
[0052] 圖16為實施例18制備的熱致水凝膠藥物制劑一次注射對ICR小鼠第7天時血糖 的影響關(guān)系圖；"*"Φ < 0.05，"**" ：p < 0.01，"***" ：p <0· OOlvs NaCl。
[0053] 圖17為實施例18制備的熱致水凝膠藥物制劑一次注射對ICR小鼠第8天時血糖 的影響關(guān)系圖；"*"Φ < 0.05，"**" ：p < 0.01，"***" ：p <0· OOlvs NaCl。
[0054] 圖18為實施例18制備的熱致水凝膠藥物制劑一次注射對ICR小鼠第9天時血糖 的影響關(guān)系圖；"*"Φ < 0.05，"**" ：p < 0.01，"***" ：p <0· OOlvs NaCl。
[0055] 圖19為實施例18制備的熱致水凝膠藥物制劑一次注射對ICR小鼠體重變化影響 關(guān)系圖；"*'，：p < 0.05，"**'，：p <0· 01，"***'，：p <0· OOlvs NaCl。
【具體實施方式】
[0056] 下面通過實例進一步描述本發(fā)明，但不因此將本發(fā)明限制在這些實施例中。
[0057] 實施例1
[0058] 取30g PEG(1500)于在250mL三口燒瓶中，150°C攪拌下抽真空3h以除去PEG中 殘留的水分。然后，加入65. 6g ε -己內(nèi)酯（CL)、7. 4g乙交酯（GA)以及0.1 wt%辛酸亞錫， 在KKTC以下抽真空30min以將其中甲苯除去。升溫至160°C，待單體全部熔融后，在氬氣 氣氛下反應(yīng)12h。反應(yīng)結(jié)束后，真空抽濾3h以除去未反應(yīng)的單體和低沸點產(chǎn)物，趁熱將反應(yīng) 產(chǎn)物倒出，水洗數(shù)次后冷凍干燥，得到三嵌段共聚物，產(chǎn)率約為80 %。通過凝膠滲透色譜儀 (GPC)(采用聚苯乙烯作為標(biāo)樣）測定所述BAB嵌段共聚物（PCGA-PEG-PCGA，Copolymer-1) 的數(shù)均與重均分子量（Mn，Mw)分別為7530和10010,分子量分布系數(shù)（Mw/M n)為I. 33。此 共聚物的水體系具有熱致凝膠化的特性。
[0059] 實施例2
[0060] 取30g PEG(1500)于250mL三口燒瓶中，150°C攪拌下抽真空3h以除去PEG中殘 留的水分。然后，加入36. 7g DL-丙交酯（LA)、34. 5g乙交酯（GA)以及0. lwt%辛酸亞錫， 在150°C、氬氣氣氛下反應(yīng)12h。反應(yīng)結(jié)束后，真空抽濾3h以除去未反應(yīng)的單體和低沸點產(chǎn) 物。把粗產(chǎn)物溶于二氯甲烷溶液中，乙醚沉淀，產(chǎn)率約為85%。通過GPC測定所述BAB嵌段 共聚物（PLGA-PEG-PLGA，Copolymer-4)的數(shù)均與重均分子量（M n，Mw)分別為6650和8050， 分子量分布系數(shù)（Mw/M n)為1.21。此共聚物的水體系具有熱致凝膠化的特性。
[0061] 實施例3
[0062] 取30g PEG(1500)于250mL三口燒瓶中，150°C攪拌下抽真空3h以除去其中殘留 的水分。然后，加入75.6ge_己內(nèi)酯（CL)以及0. lwt%辛酸亞錫，在150°C、氬氣氣氛下反 應(yīng)12h。反應(yīng)結(jié)束后，真空抽濾3h以除去未反應(yīng)的單體和低沸點產(chǎn)物。趁熱將反應(yīng)產(chǎn)物倒 出，水洗數(shù)次后冷凍干燥，得到三嵌段共聚物，產(chǎn)率約為80%。通過凝膠滲透色譜儀（GPC) (采用聚苯乙烯作為標(biāo)樣）測定所述BAB嵌段共聚物（PCL-PEG-PCL，Copolymer-5)的數(shù)均 與重均分子量（M n，Mw)分別為8750和12090,分子量分布系數(shù)（Mw/Mn)為1. 38。此共聚物 的水體系具有熱致凝膠化的特性。
[0063] 實施例4
[0064] 取22. 5g單甲氧基封端的聚乙二醇（MPEG 750)于250mL三口燒瓶中，130°C攪拌 下抽真空3h以除去MPEG中殘留的水分。然后，加入45g DL-LA、6g GA以及0. lwt%辛酸亞 錫，在100°C以下抽真空30min以將其中甲苯除去。升溫至150°C，待單體全部熔融后，在氬 氣氣氛下反應(yīng)12h。反應(yīng)結(jié)束后，真空抽濾3h以除去未反應(yīng)的單體和低沸點產(chǎn)物，趁熱將 反應(yīng)產(chǎn)物倒出，水洗數(shù)次后冷凍干燥，得到兩嵌段共聚物材料，產(chǎn)率約為75 %。通過GPC測 定所述BA兩嵌段共聚物（MPEG-PLGA，Copolymer-6)的數(shù)均與重均分子量（Mn，M w)分別為 3580和4760,分子量分布系數(shù)（Mw/Mn)為1. 33。此共聚物的水體系具有熱致凝膠化的特性。
[0065] 實施例5
[0066] 取11. Og MPEG (550)溶于80mL甲苯，蒸餾至30mL已除去聚合物中殘余水分。加入 21.0g CL以及0. 3wt%辛酸亞錫，在120°C下回流24h。隨后加入HDMI 1.62mL，在60°C下反 應(yīng)7h。接著在上述溶液中加入乙醚，沉淀得到初產(chǎn)物。所得初產(chǎn)物溶于30mL二氯甲烷，緩 慢加入乙醚以使其沉淀，產(chǎn)物中殘余溶劑通過抽真空除去，得到PEG-PCL-PEG三嵌段共聚 物材料，產(chǎn)率約為65%。通過GPC測定所述ABA嵌段共聚物（PEG-PCL-PEG，Copolymer-10) 的數(shù)均與重均分子量（M n，Mw)分別為5260和6260,分子量分布系數(shù)（Mw/Mn)為1. 19。此共 聚物的水體系具有熱致凝膠化的特性。
[0067] 實施例6
[0068] 取8. 5g PEG(1000 )于250mL三口燒瓶中，130°C攪拌下抽真空3h以除去PEG中殘 留的水分。然后，加入CL 16.9g、三亞甲基碳酸酯7.6g以及0. lwt%辛酸亞錫，在120°C、 氬氣氣氛下反應(yīng)24h。反應(yīng)結(jié)束后，真空抽濾3h以除去未反應(yīng)的單體和低沸點產(chǎn)物。把初 產(chǎn)物溶于二氯甲烷溶液中，乙醚沉淀，產(chǎn)率約為85%。通過GPC測定所述BAB嵌段共聚物 (PCTC-PEG-PCTC，Copolymer-11)的數(shù)均與重均分子量（Mn，Mw)分別為4940和6520,分子 量分布系數(shù)（Mw/Mn)為1.32。此共聚物的水體系具有熱致凝膠化的特性。
[0069] 實施例7
[0070] 取8. 8g MPEG (550)溶于80mL甲苯，蒸餾至30mL以除去聚合物中殘余水份。加入 48g三亞甲基碳酸酯以及0. lwt%辛酸亞錫，在120°C下回流24h。接著在上述溶液中加入 乙醚，沉淀得到初產(chǎn)物。所得初產(chǎn)物溶于30mL二氯甲烷，緩慢加入乙醚以使其沉淀，產(chǎn)物中 殘余溶劑通過抽真空除去，得到MPEG-PTMC兩嵌段共聚物材料，產(chǎn)率約為65 %。通過GPC測 定所述BA兩嵌段共聚物（MPEG-PTMC，Copolymer-12)的數(shù)均與重均分子量（Mn，M w)分別為 5610和7850,分子量分布系數(shù)（Mw/Mn)為1. 40。此共聚物的水體系具有熱致凝膠化的特性。
[0071] 實施例8
[0072] 取5g-端為甲氧基另外一端為氨基的PEG(1000 )溶于80mL甲苯，蒸餾至15mL已 除去聚合物中殘余水份。加入體積比為2/1的無水氯仿和DMF溶劑50mL以及4. 2g L-丙 氨酸-N-羧酸酐，在40°C下反應(yīng)24h。接著在上述溶液中加入乙醚，沉淀得到初產(chǎn)物。所得 初產(chǎn)物溶于30mL二氯甲烷，緩慢加入乙醚以使其沉淀，產(chǎn)物中殘余溶劑通過抽真空除去， 得到MPEG-L-PA兩嵌段共聚物材料，產(chǎn)率約為70 %。通過GPC測定所述BA兩嵌段共聚物 (MPEG-L-PA，Copolymer-16)的數(shù)均與重均分子量（Mn，M w)分別為1100和1320,分子量分 布系數(shù)（Mw/Mn)為1. 20。此共聚物的水體系具有熱致凝膠化的特性。
[0073] 實施例9
[0074] 按照實施例1給出的基本步驟，用不同分子量的PEG和不同單體合成其他各種嵌 段共聚物，其表征結(jié)果如表1和表2所示：
[0075] 表 1

[0078] 上述表1中嵌段共聚物均具有熱致凝膠化的性能，將共聚物Sd成一定濃度的水溶 液，其在溫度低于凝膠轉(zhuǎn)變溫度時為溶液狀態(tài)，隨溫度上升逐漸形成凝膠，且該過程為可逆 過程；
[0079] 表 2

[0085] 上述表3中嵌段共聚物均不具有熱致凝膠化的性能，共聚物均不能溶解于水中或 只能部分溶解于水中；
[0086] 本實施例進一步可以取表1所示的一種或多種嵌段共聚物按一定比例混合，在溫 度低于凝膠轉(zhuǎn)變溫度以下溶解于水，當(dāng)溫度高于凝膠轉(zhuǎn)變溫度時，聚合物混合物的溶液形 成凝膠；或，取表1所示的一種或多種嵌段共聚物和/或表2中的一種或多種嵌段共聚物和 /或表3中的一種或多種嵌段共聚物按一定比例混合，在溫度低于凝膠轉(zhuǎn)變溫度以下溶解 于水，當(dāng)溫度高于凝膠轉(zhuǎn)變溫度時，聚合物混合物的溶液形成凝膠；或，取表2中一種或多 種嵌段共聚物與表3中的一種或多種嵌段共聚物按一定比例混合，在溫度低于凝膠轉(zhuǎn)變溫 度以下溶解于水中，當(dāng)溫度高于凝膠轉(zhuǎn)變溫度時，聚合物混合物的溶液形成凝膠。
[0087] 實施例10
[0088] 稱取適量嵌段共聚物Copolymer-I，加入一定量的磷酸鹽緩沖溶液，配制得 25wt%的溶液，該溶液具有熱致凝膠化特性，當(dāng)溫度高于溶膠-凝膠相轉(zhuǎn)變溫度時，能夠自 發(fā)形成凝膠，通過試管倒置法測定其溶膠-凝膠相轉(zhuǎn)變溫度，即將載有樣品的試管在水浴 中平衡IOmin后180°倒置，若30s內(nèi)觀察不到樣品明顯流動，則判斷為凝膠狀態(tài)，結(jié)果顯示 其凝膠轉(zhuǎn)變溫度為32 °C。
[0089] 實施例11
[0090] 稱取適量嵌段共聚物Copolymer-4,加入一定量的生理鹽水，配制得25wt%的溶 液，該溶液具有熱致凝膠化特性，當(dāng)溫度高于溶膠-凝膠相轉(zhuǎn)變溫度時，能夠自發(fā)形成凝 膠，通過試管倒置法測定其溶膠-凝膠相轉(zhuǎn)變溫度，結(jié)果顯示其凝膠轉(zhuǎn)變溫度為34°C。
[0091] 實施例12
[0092] 稱取適量嵌段共聚物Copolymer-6,加入一定量的去離子水，配制得15wt%的溶 液，該溶液具有熱致凝膠化特性，當(dāng)溫度高于溶膠-凝膠相轉(zhuǎn)變溫度時，能夠自發(fā)形成凝 膠，通過試管倒置法測定其溶膠-凝膠相轉(zhuǎn)變溫度，結(jié)果顯示其凝膠轉(zhuǎn)變溫度為40°C。
[0093] 實施例13
[0094] 稱取等質(zhì)量的嵌段共聚物Copolymer-I和Copolymer-6,加入一定量的去離子水， 配制得30wt %的溶液，該溶液具有熱致凝膠化特性，當(dāng)溫度高于溶膠-凝膠相轉(zhuǎn)變溫度時， 能夠自發(fā)形成凝膠，通過試管倒置法測定其溶膠-凝膠相轉(zhuǎn)變溫度，結(jié)果顯示其凝膠轉(zhuǎn)變 溫度為36°C。
[0095] 實施例14
[0096] 稱取質(zhì)量比為3/1的嵌段共聚物Copolymer-16和Copolymer-19,加入一定量的細 胞培養(yǎng)液，配制得IOwt %的溶液，該溶液具有熱致凝膠化特性，當(dāng)溫度高于溶膠-凝膠相轉(zhuǎn) 變溫度時，能夠自發(fā)形成凝膠，通過試管倒置法測定其溶膠-凝膠相轉(zhuǎn)變溫度，結(jié)果顯示其 凝膠轉(zhuǎn)變溫度為25 °C。
[0097] 實施例15
[0098] 稱取質(zhì)量比為2/1的嵌段共聚物Copolymer-4和Copolymer-23,加入一定量的磷 酸鹽緩沖，配制得20wt %的溶液，該溶液具有熱致凝膠化特性，當(dāng)溫度高于溶膠-凝膠相轉(zhuǎn) 變溫度時，能夠自發(fā)形成凝膠，通過試管倒置法測定其溶膠-凝膠相轉(zhuǎn)變溫度，結(jié)果顯示其 凝膠轉(zhuǎn)變溫度為28 °C。
[0099] 實施例16
[0100] 稱取適量嵌段共聚物Copolymer-19和Copolymer-23按質(zhì)量比1/1混合，加入一 定量的生理鹽水，配制得25wt %的溶液，該溶液具有熱致凝膠化特性，當(dāng)溫度高于溶膠-凝 膠相轉(zhuǎn)變溫度時，能夠自發(fā)形成凝膠，通過試管倒置法測定其溶膠-凝膠相轉(zhuǎn)變溫度，結(jié)果 顯示其凝膠轉(zhuǎn)變溫度為30°C。
[0101] 實施例17
[0102] 稱取適量嵌段共聚物Copolymer-4、Copolymer-19和Copolymer-23按質(zhì)量比 1/1/1混合，加入一定量的去離子水，配制得25wt %的溶液，該溶液具有熱致凝膠化特性， 當(dāng)溫度高于溶膠-凝膠相轉(zhuǎn)變溫度時，能夠自發(fā)形成凝膠，通過試管倒置法測定其溶膠-凝 膠相轉(zhuǎn)變溫度，結(jié)果顯示其凝膠轉(zhuǎn)變溫度為33°C。
[0103] 實施例18
[0104] 取適量聚合物Coplymer-I溶解于磷酸鹽緩沖溶液中，配制成25wt%的水溶液，過 0. 22 μ m濾膜滅菌備用，精密秤取利拉魯肽干粉10mg，溶解于5mL上述聚合物溶液中，攪拌 使藥物溶解，制備得到熱致水凝膠藥物制劑。
[0105] 實施例19
[0106] 取適量聚合物Coplymer-4溶解于磷酸鹽緩沖溶液中，配制成25wt%的水溶液，過 0. 22 μ m濾膜滅菌備用，精密秤取利拉魯肽干粉15mg，溶解于7. 5mL上述聚合物溶液中，攪 拌使藥物溶解，制備得熱致水凝膠藥物制劑。
[0107] 實施例20
[0108] 取適量聚合物Coplymer-5溶解于磷酸鹽緩沖溶液中，配制成25wt%的水溶液，滅 菌后備用，精密秤取利拉魯肽干粉20mg，溶解于IOmL上述聚合物溶液中，攪拌使藥物溶解， 制備得熱致水凝膠藥物制劑。
[0109] 實施例21
[0110] 取適量聚合物Coplymer-I溶解于磷酸鹽緩沖溶液中，配制成23wt%的水溶液，過 0. 22 μ m濾膜滅菌備用，精密秤取杜拉魯肽干粉15mg，溶解于5mL上述聚合物溶液中，攪拌 使藥物溶解，制備得熱致水凝膠藥物制劑。
[0111] 實施例22
[0112] 取質(zhì)量比為2/1的嵌段共聚物Copolymer-4和Copolymer-23溶解于磷酸鹽緩沖 溶液中，配制成20wt %的水溶液，過0. 22 μ m濾膜滅菌備用，精密秤取阿必魯肽干粉lOOmg， 溶解于5mL上述聚合物溶液中，攪拌使藥物溶解，制備得熱致水凝膠藥物制劑。
[0113] 實施例23
[0114] 取質(zhì)量比為3/1的嵌段共聚物Copolymer-16和Copolymer-19溶解于細胞培養(yǎng)液 中，配制成IOwt %的水溶液，過0. 22 μ m濾膜滅菌備用，精密秤取利司那肽干粉2. 5mg，溶解 于5mL上述聚合物溶液中，攪拌使藥物溶解，制備得熱致水凝膠藥物制劑。
[0115] 實施例24
[0116] 取質(zhì)量比1/1的嵌段共聚物Copolymer-19和Copolymer-23溶解于磷酸鹽緩沖溶 液中，配制成25wt %的水溶液，過0. 22 μ m濾膜滅菌備用。精密秤取索瑪魯肽干粉50mg，溶 解于5mL上述聚合物溶液中，攪拌使藥物溶解，制備得熱致水凝膠藥物制劑。
[0117] 實施例25
[0118] 稱取IOmg利拉魯肽干粉，溶解于磷酸鹽緩沖溶液中，配制成500 μ g/mL溶液，采 用動態(tài)光散射儀測定利拉魯肽的流體力學(xué)尺寸，稱取適量嵌段共聚物Copolymer-Ι和利 拉魯肽干粉，加入一定量的磷酸鹽緩沖溶液，配制成一系列聚合物濃度固定為0. 5wt %，藥 物濃度分別為〇、40、500、1000 μ g/mL的溶液，采用動態(tài)光散射儀測定上述體系的流體力 學(xué)尺寸，結(jié)果表明（如圖1所示），利拉魯肽在水溶液中呈現(xiàn)兩個流體力學(xué)尺寸分布，分別 為7nm和200nm左右的尺寸，分別對應(yīng)于利拉魯肽單鏈和利拉魯肽自組裝形成的膠束，而 Copolymer-I在水溶液中能自組裝形成膠束，膠束尺寸大約為40nm，當(dāng)Copolymer-I與利 拉魯肽混合之后，兩者發(fā)生了共組裝，表現(xiàn)為在利拉魯肽的加入下，Copolymer-Ι的強度峰 發(fā)生了變化，分裂為約25nm和150nm大小的兩個峰，且隨著利拉魯肽濃度從40 μ g/mL增 加至1000 μ g/mL，流體力學(xué)尺寸分布并未發(fā)生顯著變化；動態(tài)光散射結(jié)果表明利拉魯肽與 Copolymer-I水凝膠能在水溶液狀態(tài)下發(fā)生共組裝行為。
[0119] 實施例26
[0120] 稱取IOmg利拉魯肽干粉，溶解于磷酸鹽緩沖溶液中，配制成500 μ g/mL溶液，采 用動態(tài)光散射儀測定利拉魯肽的流體力學(xué)尺寸；稱取適量嵌段共聚物Copolymer-4和利 拉魯肽干粉，加入一定量的磷酸鹽緩沖溶液，配制成一系列聚合物濃度固定為0. 5wt %，藥 物濃度分別為〇、40、500、1000 μ g/mL的溶液，采用動態(tài)光散射儀測定上述體系的流體力 學(xué)尺寸，結(jié)果表明（如圖2所示），利拉魯肽在水溶液中呈現(xiàn)兩個流體力學(xué)尺寸分布，分別 為7nm和200nm左右的尺寸，分別對應(yīng)于利拉魯肽單鏈和利拉魯肽自組裝形成的膠束，而 Copolymer-4在水溶液中能自組裝形成膠束，膠束尺寸大約為50nm，當(dāng)Copolymer-4與利拉 魯肽混合之后，兩者發(fā)生了共組裝，表現(xiàn)為在利拉魯肽加入后與Copolymer-4融合成為一 個單峰，隨著利拉魯肽濃度從40 μ g/mL增加至1000 μ g/mL，流體力學(xué)尺寸分布并未發(fā)生顯 著變化；動態(tài)光散射結(jié)果表明利拉魯肽與Copolymer-4水凝膠能在水溶液狀態(tài)下發(fā)生共組 裝行為。
[0121] 實施例27
[0122] 取適量實施例10制備的嵌段共聚物溶液，采用旋轉(zhuǎn)流變儀測量聚合物水體系的 模量、粘度等流變學(xué)性質(zhì)隨溫度的變化，在固定剪切頻率（w = lOrad/s)下，以0. 5°C /min 的升溫速率進行溫度掃描，取適量實施例18制備的熱致水凝膠藥物制劑，采用旋轉(zhuǎn)流變儀 測量聚合物水體系的模量、粘度等流變學(xué)性質(zhì)隨溫度的變化，在固定剪切頻率（w = IOrad/ s)下，以0. 5°C /min的升溫速率進行溫度掃描；結(jié)果表明（如圖3所示），其中，圖3(a) 顯示，25wt %的Copolymer-I水凝膠溶液在室溫下儲能模量較小，體系具有很好的流動性， 而在30°C附近儲能模量急劇上升，溶液-凝膠的相轉(zhuǎn)變點為32°C，當(dāng)加入利拉魯肽之后， 體系相轉(zhuǎn)變后的最大儲能模量未發(fā)生顯著變化，相轉(zhuǎn)變溫度也未發(fā)生變化；圖3(b)顯示， 25wt%的Copolymer-Ι水凝膠溶液在室溫下具有較小的粘度，在相轉(zhuǎn)變點附近體系粘度急 劇上升，當(dāng)加入利拉魯肽之后，體系相轉(zhuǎn)變后的粘度發(fā)生顯著的增加；流變學(xué)性質(zhì)研究結(jié)果 表明，利拉魯肽的加入引起了 Copolymer-I熱致凝膠宏觀性質(zhì)上的變化，也驗證了在分子 層面上，利拉魯肽與聚合物發(fā)生了共組裝行為。
[0123] 實施例28
[0124] 取適量實施例11制備的嵌段共聚物溶液，采用旋轉(zhuǎn)流變儀測量聚合物水體系的 模量、粘度等流變學(xué)性質(zhì)隨溫度的變化，在固定剪切頻率（w = lOrad/s)下，以0. 5°C /min 的升溫速率進行溫度掃描，取適量實施例19制備的熱致水凝膠藥物制劑，采用旋轉(zhuǎn)流變儀 測量聚合物水體系的模量、粘度等流變學(xué)性質(zhì)隨溫度的變化，在固定剪切頻率（w = IOrad/ s)下，以0.5°C/min的升溫速率進行溫度掃描。結(jié)果顯示（如圖4所示），其中，圖4(a) 顯示，25wt %的Copolymer-4水凝膠溶液在室溫下儲能模量較小，體系具有很好的流動性， 而在30°C附近儲能模量急劇上升，溶液-凝膠的相轉(zhuǎn)變點為34°C，當(dāng)加入利拉魯肽之后， 體系相轉(zhuǎn)變后的最大儲能模量未發(fā)生顯著變化，相轉(zhuǎn)變溫度也未發(fā)生變化；圖4(b)顯示， 25wt%的Copolymer-4水凝膠溶液在室溫下具有較小的粘度，在相轉(zhuǎn)變點附近體系粘度急 劇上升，當(dāng)加入利拉魯肽之后，體系相轉(zhuǎn)變后的粘度發(fā)生了顯著的增加；流變學(xué)性質(zhì)研究結(jié) 果表明，利拉魯肽的加入引起Copolymer-4熱致凝膠宏觀性質(zhì)上的變化，也驗證了在分子 層面上，利拉魯肽與聚合物發(fā)生了共組裝行為。
[0125] 實施例29
[0126] 取0. 5mL實施例18中制備的熱致水凝膠水溶液置于IOmL試管（內(nèi)徑14mm)底部， 于37°C恒溫水浴中放置15min使其形成凝膠后，上方加入5mL同溫的PBS緩沖溶液（pH = 7. 4)作為釋放介質(zhì)，釋放面積為I. 5cm2,放入恒溫水浴搖床，水浴搖床轉(zhuǎn)速為50rpm，每天定 時將凝膠上方PBS緩沖液全部置換，并采用HPLC檢測釋放介質(zhì)中利拉魯肽的釋放量，平行 操作3份，最后以累計藥物釋放量對時間作圖，制得釋放曲線（如圖5所示）；
[0127] 采用下述方法測定利拉魯肽的HPLC :高效液相色譜儀：Waters (e2695_2489)包括 四元栗、紫外檢測器、柱溫箱、自動進樣器和在線脫氣機；色譜柱：Phenomenex? C18(5 μπι IOOA 4. 6*150mm)流動相A :0.1 %三氟乙酸水溶液，流動相B :乙腈；采用梯度洗脫在0~ 2〇11^11:流動相4由52%降到48%;2〇1^11~3〇1^11 :流動相4從48%升至52%;檢測波長： 220nm，柱溫：30°C，流速：1.0mL/min，進樣量：50yL ;
[0128] 測定結(jié)果顯示（（如圖5所示），實施例18的熱致水凝膠藥物制劑對藥物具有很好 的緩釋效果，降糖藥物利拉魯肽在熱致凝膠藥物制劑中，首日突釋量僅為22. 13%，藥物有 效平穩(wěn)釋放長達9天，第9天累計有效釋放達87. 64%。
[0129] 實施例30
[0130] 取0. 5mL實施例19中制備的熱致水凝膠水溶液置于IOmL試管（內(nèi)徑14mm)底 部，于37°C恒溫水浴中放置15min使其形成凝膠后，上方加入5mL同溫的PBS緩沖溶液（pH =7. 4)作為釋放介質(zhì)，釋放面積為I. 5cm2,放入恒溫水浴搖床，水浴搖床轉(zhuǎn)速為50rpm，每 天定時將凝膠上方PBS緩沖液全部置換，并采用上述HPLC檢測釋放介質(zhì)中利拉魯肽的釋放 量，平行操作3份，最后以累計藥物釋放量對時間作圖，得到釋放曲線（如圖6所示），結(jié)果 顯示，本發(fā)明的實施例19的熱致水凝膠藥物制劑對藥物具有很好的緩釋效果，降糖藥物利 拉魯肽在熱致凝膠藥物制劑中，首日突釋量僅為16. 46 %，藥物有效平穩(wěn)釋放長達9天，第9 天累計有效釋放達55. 97%。
[0131] 實施例31
[0132] 取0. 5mL實施例20中制備的熱致水凝膠水溶液置于IOmL試管（內(nèi)徑14mm)底部， 于37°C恒溫水浴中放置15min使其形成凝膠后，上方加入5mL同溫的PBS緩沖溶液（pH = 7. 4)作為釋放介質(zhì)，釋放面積為I. 5cm2,放入恒溫水浴搖床，水浴搖床轉(zhuǎn)速為50rpm，每天定 時將凝膠上方PBS緩沖液全部置換，并采用上述HPLC檢測釋放介質(zhì)中利拉魯肽的釋放量， 平行操作3份，最后以累計藥物釋放量對時間作圖，得到釋放曲線（如圖7所示），
[0133] 結(jié)果顯示，本發(fā)明的實施例20的熱致水凝膠藥物制劑對藥物具有很好的緩釋效 果，降糖藥物利拉魯肽在熱致凝膠藥物制劑中，首日突釋量僅為19. 02%，藥物有效平穩(wěn)釋 放長達9天，第9天累計有效釋放達69. 66 %。
[0134] 實施例32
[0135] 基于GLP-I類似物降糖多肽具有顯著的葡萄糖濃度依賴性降糖的特點，本實施例 中采用ICR小鼠作為動物模型進行糖耐量測定，通過給藥后灌胃給予葡萄糖，動態(tài)檢測動 物血糖變化，考察熱致凝膠藥物制劑降低血糖的效果和持續(xù)時間；
[0136] 采用正常雄性ICR小鼠24只，體重30±2g，實驗動物隨機分為4組（n = 6):分別 為：Blank組（正常對照組，不注射任何溶液）；NaCl組（空白對照生理鹽水組）；S〇luti 〇n 組（陽性對照利拉魯肽溶液組）；Gel組（利拉魯肽凝膠組）；
[0137] Solution組：將利拉魯肽溶于PBS緩沖溶液中，配制成lmg/mL母液，使用前稀釋 10倍；
[0138] Gel組：實施例18制得的產(chǎn)品；
[0139] 將各組動物禁食4h(自由飲水），次日尾尖采血（20 μ L)測定血糖，之后皮下注射 給藥（7. 5mL/kg)，15min后灌胃給予葡萄糖（3g/10mL/kg)，并于糖負荷30min和60min后尾 尖采血（20 μ L)測定血糖（血糖測定采用葡萄糖氧化酶法，下同），實驗結(jié)果如圖8所示；
[0140] 之后，各組動物分別在給藥后第1、2、3、4、5、6、7、8和9天早晨9:00開始禁食（自 由飲水）4h，然后尾尖采血，并灌胃給予葡萄糖（同上），分別在糖負荷后30min、60min尾尖 采血，測定血糖，實驗結(jié)果如圖9至圖18所示；
[0141] 于第0~9天早晨測量小鼠體重并記錄，結(jié)果如圖19所示；
[0142] 實驗小鼠的口服糖耐量實驗結(jié)果顯示，各組小鼠皮下注射給藥15min后灌胃葡萄 糖的血糖隨時間的變化，與NaCl組相比，Solution組和Gel組在口服葡萄糖后30min和 60min各個時間點均能顯著降低小鼠血糖，由于利拉魯肽在動物體內(nèi)半衰期約為12h，在小 鼠體內(nèi)很快被降解，因此在注射給藥次日Solution組小鼠血糖明顯上升，與NaCl組小鼠的 血糖未見顯著性差異，而Gel組小鼠血糖在注射給藥后被有效降低，與NaCl組小鼠血糖呈 顯著性差異（P < 〇. 05);連續(xù)9天觀察各組小鼠每天糖負荷后血糖變化結(jié)果顯示，相比于 NaCl組，Gel組單次給藥后的ICR小鼠血糖在糖負荷后得到有效控制，血糖含量低于NaCl 組（P < 0. 05,有顯著性差異），體內(nèi)降糖作用可持續(xù)一周，證實實施例18的產(chǎn)品在體內(nèi)具 有很好的緩釋效果，達到了緩釋降糖一周的預(yù)期目標(biāo)，并且體內(nèi)藥效結(jié)果同體外釋放動力 學(xué)結(jié)果相一致；各組ICR小鼠在實驗期間的體重變化如圖18所示，與Blank組和NaCl組相 比，9天內(nèi)Gel組的ICR小鼠體重明顯下降，證實實施例18的產(chǎn)品具有減輕體重的功效，且 動物實驗期間小鼠無任何不良反應(yīng)，由此證明了本發(fā)明的熱致凝膠藥物制劑的安全性好。
【主權(quán)項】
1. 一種熱致水凝膠降糖藥物制劑，其特征在于，含有藥物和可注射的聚合物熱致水凝 膠； 所述的藥物為降糖多肽； 所述的熱致水凝膠由兩親性嵌段聚合物和溶媒組成，其中兩親性嵌段共聚物的親水嵌 段為聚乙二醇（PEG)，疏水嵌段為可降解聚酯或聚氨基酸；所述的熱致水凝膠其凝膠體系 在室溫或低溫下處于溶液狀態(tài)，在人體溫度下自發(fā)轉(zhuǎn)變?yōu)槟z。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的熱致水凝膠降糖藥物制劑，其特征在于，所述聚合物熱致水 凝膠其聚合物水體系的溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變溫度介于4-40°C之間。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的熱致水凝膠降糖藥物制劑，其特征在于，所述的兩親性嵌段 共聚物中： 1) 親水性的聚乙二醇嵌段A的平均分子量為400-8000,含量為10-90wt% ; 2) 疏水性的聚酯嵌段或聚氨基酸嵌段B的平均分子量為500-40000,含量為 90-10wt% ； 其中，疏水聚酯嵌段選自聚DL-丙交酯、聚D-丙交酯、聚L-丙交酯、聚乙交酯、 聚原酸酯、聚ε-己內(nèi)酯、聚ε-烷基取代己內(nèi)酯、聚δ-戊內(nèi)酯、聚1，4,8_三氧雜螺 [4. 6] -9-十一烷酮、聚對二氧六環(huán)酮、聚酰胺酯、聚碳酸酯、聚丙烯酸酯、聚醚酯或上述各聚 酯中的兩種以上的聚酯形成的共聚物； 其中，疏水性的聚氨基酸嵌段選自聚丙氨酸、聚苯丙氨酸、聚亮氨酸、聚賴氨酸、聚谷氨 酸、聚天冬氨酸或上述各聚氨基酸中的兩種以上的聚氨基酸形成的共聚物； 3) 所述嵌段共聚物為ΑΒΑ或ΒΑΒ型的三嵌段共聚物、ΑΒ型的兩嵌段共聚物、A-g-B或 B-g-A型的接枝共聚物、（A-B)j (B-A) "的星形嵌段共聚物以及A(BA) n構(gòu)型的 多嵌段共聚物，其中η為2至10的整數(shù)； 4) 所述嵌段聚合物部分或全部末端接有功能端基，端基是親水的羥基、氨基、羧基、咪 唑基、醛基、氰基、硝基中的任何一種；或者是疏水的烷基、固醇、烷氧基、芳香基、芳雜環(huán)基、 酰胺酯基、鹵素原子、三氯甲基、酯基、巰基中的任何一種。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的熱致水凝膠降糖藥物制劑，其特征在于，所述聚合物為單一 的兩親性嵌段共聚物，或為兩種或兩種以上不同分子結(jié)構(gòu)的兩親性嵌段共聚物的組合物。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的熱致水凝膠降糖藥物制劑，其特征在于，所述的降糖多肽選 自利拉魯肽，阿必魯肽，利司那肽，杜拉魯肽，索瑪魯肽中的一種或多種。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的熱致水凝膠降糖藥物制劑，其特征在于，所述的藥物的含量 占熱致水凝膠藥物制劑的0. 01~5%。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的熱致水凝膠降糖藥物制劑，其特征在于，所述聚合物在制劑 中的含量為3-50wt%。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的熱致水凝膠降糖藥物制劑，其特征在于，所述聚合物溶液中 的溶媒是純水、生理鹽水、緩沖溶液、組織培養(yǎng)液、細胞培養(yǎng)液、動植物或人體的體液、或者 為其它水溶液和不以有機溶劑為主體的介質(zhì)。9. 一種根據(jù)權(quán)利要求1-8所述的熱致水凝膠降糖藥物制劑的制備方法，其特征在于， 其包括：首先在低溫溶解聚合物于水溶液中，然后在_20°C或以下儲存?zhèn)溆?，使用前?fù)溶并 直接加入所述的降糖多肽，混勻后制成為溶液注射劑； 所制備的藥物制劑在溫度高于溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變溫度時形成熱可逆水凝膠； 所述低溫指低于聚合物的溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變溫度。10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的熱致水凝膠降糖藥物制劑，其特征在于，采用皮下或肌肉組 織注射方式使用。
【文檔編號】A61K38/26GK105982845SQ201510087571
【公開日】2016年10月5日
【申請日】2015年2月17日
【發(fā)明人】俞麟, 陳奕沛, 丁建東
【申請人】復(fù)旦大學(xué)